CD3AK细胞抗肿瘤作用的实验研究

ＣＤ_３ＡＫ细胞抗肿瘤作用的实验研究福建省肿瘤医院微生物研究室宋墨琴，芦林，郑秋红，陈晖自１９８０年Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等人首次提出用ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗恶性肿瘤以后，引起国内外学者浓厚兴趣，近年来临床应用已取得十分可喜成果。但由于ＩＬ－２／ＬＡＫ?..     

CD3AK细胞生物疗法在肿瘤治疗中的应用

肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一,二十世纪中叶以来,人类在肿瘤防治方面投入巨大,在肿瘤的基础研究、临床防治方面取得重大进展,但肿瘤的危害仍未能被遏制,肿瘤的发病一直呈上升趋势,肿瘤的死亡率仍在上升。美国NCI权威机构公布,美国从1973～1992年的20年间癌症的死亡率,从16％增长到23％。我国恶性肿瘤的病死率,在这20年中也增     

抗人CD3单抗在体外诱导LAK和TIL增殖的实验研究

目的 观察抗人ＣＤ３单抗（ａＣＤ３ＭｃＡｂ）对单核细胞（ＰＢＭＣ）和肿瘤组织中提取的浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）增殖的影响。方法 将外周血中分离出的ＰＢＭＣ和ＴＩＬ进行扩增培养,同时测定其活性。结果 ａＣＤ３ＭｃＡｂ和白细胞介素－２（ＩＬ－２）的浓度是包被法制备ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）的主要影响因素。经选择ａＣＤ３ＭｃＡｂ的最适蛋白浓度为０．１ｕｇ／ｍｌ,ＩＬ－２为２０Ｕ／ｍｌ。结论     

IL-2基因转移对CD3AK细胞生物学功能的影响研究

白细胞介素 2 (ＩＬ 2 )是Ｔ细胞活化分泌 ,能与Ｔ细胞上ＩＬ 2Ｒ结合后 ,增强Ｔ细胞增殖的一种重要的细胞因子。ＣＤ3ＡＫ细胞是利用抗ＣＤ3单克隆抗体与ＴＣＲ/ＣＤ3 复合体的结合 ,同时提供少量外源ＩＬ 2 ,激活产生的具有细胞毒效应的杀伤细胞 ,常用于过继免疫治疗。临床资料表明体内使用外源性ＩＬ 2常导致毒副作用。能否利用基因转移技术将ＩＬ 2基因导入ＣＤ3ＡＫ细胞 ,使其表达并维持ＣＤ3ＡＫ的活化状态呢 ?抗ＣＤ3ＭｃＡｂ活化的Ｔ细胞作为逆转录病毒载体的受体细胞 ,已有应用于ＩＬ 1 β基因转移研究的报道。本实验利用逆转录病…     

逆转录病毒载体介导iNOS基因转染人CD3AK细胞的初步研究

目的　构建免疫细胞性一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞。方法　用脂质体介导重组逆转录病毒质粒 pLNC iNOS转染入包装细胞PA317中 ,经G4 18筛选出抗性克隆。用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度。用病毒上清感染人CD3AK细胞。测定CD3AK/iNOS细胞培养上清中iNOS活性及NO含量。结果　脂质体转染后G4 18筛选出 38个抗性克隆 ,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3T3细胞测定病毒滴度为 1 2× 10 5cfu/ml。CD3AK/iNOS细胞合成并分泌的NO含量及iNOS活性比CD3AK细胞明显增高。结论　成功构建CD3AK/iNOS细胞 ,并能分泌高浓度NO。     

CD3AK三种制备物对神经胶质瘤的作用

CD3AK细胞是由小剂量CD3单抗交联CD3分子活化的T型淋巴细胞,其细胞激活及产量显著提高,且在增殖速度、激活频率等方面优于 LAK细胞[1]。近期发现 CD3AK细胞不仅可直接杀伤靶细胞,还能分泌杀伤因子共同介导其杀瘤作用[2]。我们观察其对靶细胞的杀伤作用,结果报告如下。 材料与方法 1.细胞与试剂人脑胶质瘤细胞系TJ-905购自天津医科大学总医院神经外科研究所。CD3单抗购自北京邦定公司, rIL-2购自北京中化合通药业有限公司。 2.CD3AK细胞的制备采用正常供血者的柠檬酸钠抗凝静脉血,用淋巴细胞分离液(比重1.077)分离出外周血单个核…     

LAK细胞的体外实验及其抗肿瘤治疗的临床研究

在体外观察了不同时间内三种细胞的杀伤活性。结果正常人与已缓解(CR)病例比较,P>0.05,无显著差异。而与未缓解(NR)病例相比,P<0.01～<0.001,差异非常显著。用 LAK 细胞治疗22例晚期肿瘤病人,总有效率为77.7%;CR 占13.6％PR 或 MR 占63.6％,CR 中有1例加用大剂量环磷酰胺化疗,6个月后完全缓解,并恢复了家务劳动。     

生物治疗与化疗序贯应用对晚期非小细胞肺癌的疗效研究

为进一步提高非手术方法对晚期肿瘤的疗效，本文探讨联合应用化疗和ＬＡＫ（淋巴因子激活的杀伤细胞）／ＩＬ－２（白细胞介素－２）晚期肺癌进行序贯治疗，并同单独化疗或单独生活治疗进行对比，观察综合治疗后疗效是否优于单纯治疗，结果显示：综合治疗疗效好于单纯或单独生物治疗组。     

CD＿3AK细胞腹腔输注治疗晚期癌性腹水

应用ＣＤ＿３单克隆抗体（ＣＤ＿３ＭｃＡｂ）激活的淋巴细胞──ＣＤ＿３ＡＫ细胞，腹腔输注治疗晚期癌性腹水３２例。发现ＣＤ＿３ＡＫ细胞的扩增快，杀伤力强。每疗程输入９．０×１０￣９～１．２×１０￣（１０）（平均９．６×１０￣９）的ＣＤ＿３ＡＫ细胞数，能有效地消除晚期癌性腹水，减轻疼痛，增强局部免疫机制，提高晚期癌症病人的生存质量。认为：作为一种新的抗肿瘤生物过继免疫疗法，ＣＤ＿３ＡＫ细胞腹腔输注治疗晚期癌性腹水有着独到之功。     

Basic fibroblast growth factor enhanced LAK cell cytotoxicities against human bladder neoplasm cells 1

目的：探讨白细胞介素Ⅱ（ＩＬ２）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对膀胱癌患者淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用．方法：用细胞计数观察不同浓度ｂＦＧＦ对ＬＡＫ细胞增殖的影响．以膀胱癌细胞系ＥＪ及新鲜分离患者自体肿瘤细胞（ＢＴＣ）为靶细胞,用ＭＴＴ法测定ＬＡＫ细胞对膀胱癌细胞的细胞毒作用．结果：虽然外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）的增殖可被ｂＦＧＦ５μｇ·Ｌ－１所抑制,ＩＬ２所诱导的ＬＡＫ细胞的增殖却不受ｂＦＧＦ的影响,ｂＦＧＦ明显加强ＬＡＫ对ＥＪ细胞和ＢＴＣ的细胞毒作用．结论：虽然ｂＦＧＦ抑制ＰＢＭＣ的增殖,但ｂＦＧＦ又增强膀胱癌患者ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的细胞毒性．     

Modulating effect of mitomycin or cisplatin on lymphokine-activated killer cell proliferation and antitumor activity to bladder cancer cell lines in vitro

Ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｅｆｅｃｔｏｆｍｉｔｏｍｙｃｉｎｏｒｃｉｓｐｌａｔｉｎｏｎｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｅｒｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅｓｉｎ...     

小细胞肺癌细胞系H446肿瘤细胞球培养方法的优化

目的:探讨优化体外培养小细胞肺癌细胞株H446肿瘤细胞球的方法。方法:利用干细胞无血清培养技术,观察H446细胞在下述不同培养条件下肿瘤细胞球的生长情况,并接种于超低吸附及非超低吸附培养板,调整细胞密度至1×104/mL、1×105/mL、1×106/mL和1×107/mL,采用针头吹打法和移液器吹打法将肿瘤细胞球制成单细胞悬液用以进一步传代。结果:(1)超低吸附培养板第2天形成明显肿瘤细胞球,非超低吸附培养板第10天出现肿瘤细胞球。(2)1×106/mL组每个高倍视野下约有7个肿瘤细胞球,每个细胞球约由几十个甚至上百个细胞组成。(3)针头吹打法传代后肿瘤细胞球活性和增殖能力明显优于移液器吹打法。结论:选择超低吸附培养板、1×106/mL密度接种和针头吹打法可有效分离肿瘤细胞球。     

CIK细胞体外诱导培养及对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用

目的体外诱导培养细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）,研究其增殖、免疫表型变化及对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。方法从外周血中分离单个核细胞,多种细胞因子进行诱导,扩增培养CIK细胞,细胞计数检测其增殖能力,流式细胞仪检测细胞免疫表型,MTT法检测CIK细胞对人红白血病细胞系K562、人B淋巴瘤细胞系BJAB、人肺癌细胞系A549、人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞系HepG2的细胞毒性作用。结果 CIK细胞在第5天开始进入快速增殖阶段,20 d后增殖为原种植细胞数的182倍,免疫表型为CD3+（97.83±1.03）%、CD3+CD8+（77.12±1.60）%、CD3+CD56+（27.58±2.02）%。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+的比例随着培养时间的延长增殖迅速（P＜0.01）;培养第13天,细胞杀伤效靶比为40∶1的情况下对细胞系进行杀伤,K562为（88.89±7.22）%、BJAB为（75.42±9.52）%、A549为（63.19±5.67）%、MCF-7为（43.53±6.31）%、HepG2为（42.63±7.69）%,CIK细胞对以上细胞系均有明显的杀伤活性。结论通过细胞因子的诱导培养,可以在体外大量增殖CIK细胞,CIK细胞对不同肿瘤细胞株有很强的杀伤作用,具有很高的临床应用价值。     

血液CD3＋CD4＋／CD3＋CD8＋T细胞水平对肺部真菌感染的影响

目的探讨血液CD3＋CD4＋／CD3＋CD8＋T淋巴细胞水平对非HIV感染患者发生侵袭性肺部真菌感染的影响。方法根据入选标准及诊治规范,入选IPFI组患者61例,非IPFI肺炎组患者47例及同期健康对照组体检者30例。收集记录上述患者的临床资料,观察3组病例CD3CD;T淋巴细胞百分比,CD3＋CD8＋T淋巴细胞百分比及CD3＋CD4＋／CD3＋CD8＋T淋巴细胞比值情况。结果白色念珠菌仍是最常见的致病真菌,占总检出菌株数的46．03％,同时本研究曲霉菌（30．16％）感染也占有相当高的比例。CD3＋CD4＋T淋巴细胞百分比及CD3＋CD4＋／CD3＋CD8＋T细胞比值水平,IPFI组较非IPFI肺炎组（t=5．910,P〈0．05;t=7．395,P〈0．05）及健康对照组（t=6．443,P〈0．05;t=7．428,P〈0．05）均明显下降。结论血液CD4＋／CD8＋T淋巴细胞水平测定有助于早期发现肺部真菌感染的发生。     

人参二醇组皂苷对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨人参二醇组皂苷对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制.方法:在小细胞肺癌细胞的培养液中加入不同浓度(50～250mg/L)的人参二醇组皂苷,培养一定时间后,通过测定其中氚标胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺入量(3H-TdR),及以MTT法来评定小细胞肺癌细胞增殖程度.同时,测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(S0D)、脂质过氧化物水平,以反映细胞氧化还原状态.结果:随着人参二醇组皂苷浓度的增加,3H-TdR及MTT测定的0D值逐渐减少,细胞增殖率逐渐增加,SOD水平逐渐增加,丙二醛(MDA)水平逐渐减少.当人参二醇组皂苷浓度为150,200,250mg/L时,各指标与对照组(未用药)相比均具有显著性差异(P＜0.05).结论:人参二醇组皂苷可增加S0D水平,减少活性氧自由基的产生,抑制小细胞肺癌细胞的增殖.     

BCG激活的淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞株TBC-1杀伤作用的实验研究

目的研究BCG激活的淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞株TBC-1的杀伤作用。方法分离人外周血中的淋巴细胞,分别经BCG和IL-2刺激,检测淋巴细胞的增殖及其对TBC-1的杀伤活性。结果BCG刺激的淋巴细胞于不同效靶比40∶1、20∶1、10∶1对TBC-1的杀伤活性分别为(42·36±3·86)%、(29·19±2·39)%、(14·36±1·68)%。结论BCG刺激的淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞株TBC-1有杀伤作用。     

Tretinoin or retinol enhancement of lymphokine-activated killer cell proliferation and cytotoxicity against human bladder cancer cells in vitro

目的：研究维Ａ酸（Ｔｒｅ）或维生素Ａ（Ｒｅｔ）对膀胱肿瘤患者淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的增殖和对膀胱肿瘤细胞的细胞毒作用．方法：分别用细胞计数和ＭＴＴ法测定ＬＡＫ细胞的增殖和细胞毒作用．结果：Ｔｒｅ或Ｒｅｔ１０－１００ｎｍｏｌ·Ｌ－１加强由白细胞介素２（ＩＬ２）诱导的ＬＡＫ细胞的增殖和对膀胱肿瘤细胞的杀伤作用．结论：Ｔｒｅ或Ｒｅｔ增强膀胱肿瘤患者ＬＡＫ细胞增殖及对膀胱肿瘤的细胞毒作用．     

绵毛胡桐内酯对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶的影响

目的:探讨绵毛胡桐内酯(Calanolide)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Calanolide对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测在Calanolide作用后KB细胞端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:Calanolide在10~50mg/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);Calanolide作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随Calanolide浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:Calanolide对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。