Preliminary Study on the Cooperation of IL-6 and mB7-1 in the Induction of Effective Antitumor Immunity In Vitro

Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＢ７ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｎｇａｎｄｉｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ａｔｔｈｅ...     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...     

小鼠B7-1和B7-2基因转染EL4细胞瘤苗抗肿瘤免疫作用的比较研究

目的：研究冠状动脉分流（CABG）术后冠状动脉竞争血流对左乳房内动脉（LIMA）桥血流中内皮素（ET）、一氧化氮（NO）含量的影响，探讨动脉桥血管早期衰坏的分子机制。方法：建立猪CABG术后桥血管竞争血流动物模型，利用血流闭塞器造成冠状动脉不同程度狭窄，测量桥血管血流量及方向变化，并采用放射免疫分析法及硝酸还原酶法分别检测LIMA桥血流中ET、NO含量并进行对比分析。结果：冠状动脉左前降支（LAD）近端狭窄程度越轻，LIMA桥血流量越少；LAD近端未完全闭塞时，LIMA桥均出现双向血流。CABG术后LIMA桥血流ET含量明显高于移植前(P＜0.05)，NO含量明显低于移植前(P＜0.05)。LAD近端冠脉竞争血流越大，LIMA桥血流NO含量越低。LIMA桥血流NO含量与LIMA桥血流量呈正相关（r=0.957,P＜0.05）。LAD近端30％狭窄时，NO含量明显低于LAD近端90％狭窄及全部闭塞时(P＜0.05)，LAD近端50％狭窄时，NO含量明显低于LAD近端全部闭塞时(P＜0.05)。LIMA桥血流ET含量有随LAD近端冠脉竞争血流增加而升高的趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：来自未完全闭塞冠状动脉的竞争血流可引起LIMA桥血流量下降，产生双向血流，并导致桥血流中NO含量显著下降。     

双表达B7-1、B7-2基因肿瘤疫苗治疗小鼠肝癌优于单表达疫苗的研究

目的:研究B7-1、B7-2基因对肿瘤的免疫治疗作用。方法:应用转染有B7-1、B7-2基因的肝癌细胞株H22/B7-1、H22/B7-2,建立小鼠肝癌模型,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小。结果:各实验组动物都发生肿瘤,接种H22/B7-1 H22/B7-2组成瘤率低,对照组动物肿瘤呈进行性生长;组间成瘤潜伏期不同,与对照组相比,凡接种有H22/B7-2的小鼠肿瘤形成有迟发性;接种转B7基因细胞的小鼠肿瘤生长都较对照组慢;同时接种H22/B7-1和H22/B7-的小鼠能负载大于107的肿瘤细胞。转基因细胞在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显增强。结论:B7-1、B7-2都能增强肝癌细胞的免疫原性。B7-2在抗肿瘤早期发挥作用,B7-1随后起放大和调节作用。B7-1与B7-2联用效果优于单一应用。     

共刺激分子B7.1和葡萄球菌肠毒素A膜表面共修饰瘤苗抗肿瘤作用的研究

目的 观察跨膜型葡萄球菌肠毒素A(SEA-TM)和糖基化磷脂酰肌醇锚定型mB7．1(mB7．1-GPI)二种免疫分子膜表面修饰瘤苗的抗肿瘤作用是否优于单种免疫分子膜表面修饰的瘤苗。方法构建pcDNA3．1( )／mB7．1-GPI真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)中,表达和纯化mB7．1-GPI。通过蛋白转染法将SEA-TM、mB7．1-GPI单独或共同锚定到EL-4肿瘤细胞膜上,制成瘤苗,观察这些瘤苗刺激小鼠脾细胞的增殖和分泌白细胞介素(IL)-2和γ干扰素(IFN)-γ的量及抗肿瘤作用。结果mB7．1-GPI。和SEA-TM能单独或共同锚定在肿瘤细胞膜上,具有相当的稳定性;在体外有刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ的功能。mB7．1-GPI、SEA-TM、mB7,1-GPI SEA-TM锚定肿瘤细胞,制成的瘤苗,能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长和延长荷瘤小鼠的存活时间。mB7．1-GPI和SEA-TM双锚定瘤苗,显示出比单一蛋白锚定瘤苗更强的抗肿瘤作用。结论用蛋白转染法将SEA和mB7.1二种免疫分子同时锚定到肿瘤细胞膜上所制成的瘤苗,其抗肿瘤作用优于单种免疫分子锚定的瘤苗。     

Therapeutic antitumor response to cervical cancer in mice immunized with U14 v accines transfected with costimulatory B7 gene

Objective To investigate the effect of U14 vaccine transfected with the B7 gene in inducin g antitumor immune response to murine cervical carcinoma in Chinese 615-strain mice.Methods A recombinant retroviral plasmid vector expressing mouse B7-1 gene (pLNSX-mB7) was transfected into 615-strain mouse cervical carcinoma cell line No. 14 (U1 4) by electroporation to set up a highly-expressed mB7-1 U14 cell clonal strai n (B7(+)U14). In vivo experiments: (1) B7(+)U14 vaccine was primed to protect t he 615-strain mice against U14 re-challenge. (2) B7(+)U14 vaccine was injecte d into tumor-bearing mice with different tumor sizes. Lifetimes and tumor s izes were recorded. In vitro cytotoxicity assay: Mice were immunized with B 7(+)U14 or U14 vaccine and 2 weeks later, spleen cells of those mice were cultur ed for 2 days. The cytotoxicity of these cells against U14 was detected by 5-d iphenyl tetrazolium bromide assay.Results We obtained several B7-1 high expression clonal U14 lines. In vivo experiment, we did not find tumor growing in 3 of the 6 mice primed by B7(+)U14 vaccine during their entire life after re-challenge with U14. The other 3 mice develo ped tumors and their average survival time was longer than that of the control g roup (P<0.01). All 6 mice grew tumors in the control group. When the transplanted tumors became palpable, the mice were randomly divided into 3 group s to be injected with B7(+)U14 vaccine. It was effective for tumor-bearing mic e only when the tumor diameters were <3 mm. When the diameters were ≥3 mm, it was not efficacious to inject B7(+)U14 vaccine (P<0.05). In vitro cytotoxicity assay, cytotoxic T lymphocytes induced by B7(+)U14 vaccine h ad a high er cytotoxicity against U14 than that induced by U14 vaccine (F=310.8, P <0.001).Conclusions Vaccines of cervical cancer cells transfected with the costimulatory molecule B7 gene can induce antitumor immune protection in host mice against U14 re-challe nge. This treatment may cure part of the tumor-bearing mice but be restricted by tumor size. The results suggest that transfecting the B7 gene into cervical cancer as a cell vaccine may be an efficient supplementary method to treat cervi cal cancer after operation.     

黏蛋白1(MUC1)致敏的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤实验研究

目的 研究以CpG作为免疫佐剂,应用黏蛋白1（MUC1）致敏树突状细胞（DC）制备疫苗在体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法 健康人外周血采用密度梯度离心法,分离外周血单核细胞（PBMC）,应用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子体外培养诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测成熟DC细胞标志物CD80、CD86。再应用CpG作为免疫佐剂,MUC1作为抗原致敏DC制备疫苗,致敏的DC与T细胞混合培养,观察其诱导T淋巴细胞增殖能力。诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）与肿瘤靶细胞以5：1、10：1、20：1的效靶比共孵育,MTT法检测CTL杀伤活性。结果 DC表型检测结果为CD80+细胞占70.4％,CD86⁺细胞占72.0％,呈现成熟DC表型。MUC1致敏的DC疫苗与淋巴细胞混合培养显示,DC疫苗具有刺激T细胞增殖活化的作用,其中DC+CpG+MUC1组明显高于MUC1+DC或CpG+DC组,差异有统计学意义（P<0.01）。DC疫苗诱导产生的特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用较单独T细胞组或DC组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）。并随着效靶比增大,其杀伤作用呈逐渐增强。结论 经CpG和MUC1致敏的DC疫苗在体外可诱导产生特异性抗肿瘤免疫效应。     

Activation of systemic immune effectors and induction of cytokine production by direct intratumoral injection of IL-2 DNA liposome

ourpreviousstudiesreportedaprotocolwhichreliedonthedirecttransmissionoflL-2geneintoB16F1Otumorsinvivotogeneticallymodifythetumorsastheygrewinsitu.WhenIL-2DNAliposomewasdirectlyinjectedintothetumormassintratumorallyinthemurinemodels,adra-maticinhibitionoftumorgrowthwasobserved-Thesurvivaltimeofthetumor-bearingmicewereprolongedsignificantly.Byanalyzingthefunctionofthetumorcellsand'tumorinfiltratinglympho-cytes(TIL),G418-resistanttumorcellscouldbeseparatedfromthetumormassandhighlevelofIL-2c…     

小鼠B7-H4重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用AdEasyTM XL system构建携带小鼠B 7-H4基因的重组腺病毒,并鉴定其生物学活性.方法:以RT-PCR方法从C5 7小鼠肺组织中扩增B7-H4全长基因并克隆到T载体,然后测序鉴定.经Xhol Ⅰ和EcoR Ⅴ双 酶切后接入pshuttle-CMV穿梭载体(简称PSC),构建重组腺病毒的穿梭质粒PSC-mB7-H4 ,并电转化至BJ5183-AD-1感受态细菌,经筛选获得携带mB7-H4的重组腺病毒的质粒pmB7 -H4/Ad.将此质粒转化人胚肾细胞(AD-293)产生复制缺陷的重组腺病毒mB7-H4/Ad .以RT-PCR及Western blot方法检测被mB7-H4/Ad感染的AD-293细胞中B7-H4 mRNA和蛋 白的表达,并观察重组腺病毒感染的小鼠成纤维细胞(L929)对T细胞增殖和细胞因子表达的影响. 结果:获得序列准确的mB7-H4基因并成功构建重组腺病毒表达质 粒,转化AD-293细胞获得重组腺病毒;细胞生物学实验证实,该重组腺病毒具有抑制CD3单抗诱导的T淋巴细胞的增殖和细胞因子的分泌. 结论:成功构建具有免疫抑制功能的mB7-H4重组腺病毒.     

共刺激分子B7-2对小鼠肝癌治疗作用的实验研究

目的 :应用转染有小鼠B7- 2基因片段的肝癌细胞 ,建立小鼠肝癌模型 ,观察小鼠肿瘤生长和消退情况 ,研究共刺激分子B7- 2对肿瘤的免疫治疗作用。方法 :建立BALB/c小鼠转B7- 2基因肝癌细胞株H2 2 /B7- 2 ,细胞计数法测定肿瘤细胞体外增殖能力 ;BALB/c鼠皮下接种H2 2 /B7- 2及野生型H2 2细胞H2 2 /Wt,以空载体转染细胞H2 2 /neo为对照 ,建立小鼠肝癌模型 ,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小 ;同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养 (MTLCs)后测定淋巴细胞增殖指数和CTLs活性 ,同时测定培养上清IL -2、IFNγ ,研究B7- 2分子的抗肿瘤免疫效果。结果 :细胞在体外增殖能力一致 (P =0 .782 ) ;当接种不同肿瘤细胞后 ,三组动物都发生肿瘤 ,接种H2 2 /B7- 2组肿瘤形成有迟发性 ,并在接种 18d后肿瘤都开始缩小 ,但最终不会完全消失 ;接种H2 2 /Wt和H2 2 /neo组动物肿瘤呈进行性生长。H2 2 /B7- 2在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显强于对照细胞 (P <0 .0 5 )。结论 :共刺激分子B7- 2能增强肝癌细胞的免疫原性 ,它在抗肿瘤早期发挥作用。用其治疗肝癌是有效的 ,但不能介导完全和长期的抗肿瘤效应。     

B7特异性siRNA对树突状细胞功能的影响

目的探讨体外合成的B7特异性小干扰RNA（siRNA）对树突状细胞（DC）功能的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达,用ELISPOT检测DC与淋巴细胞共培养后T细胞分泌IFN-γ,用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应和CTL特异性杀伤率。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为（80．9±5．23）％;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为（74．7±4．63）％。经转染B7-1、B7-2分子特异性siRNA的DC激活后,T淋巴细胞分泌IFN-γ分别为（84．6±23．1）10^3／L和（76．7±19．7）10．3U／L明显低于对照组（204．5±46．2）10^3U／L;各组DC刺激淋巴细胞增殖指数（PI）分别为1．73±0．32和1．53士0．25,也低于对照组4．23±0．74。CTL杀伤实验结果表明：对照组的特异性杀伤率为（76．4±7．6）％,siRNA1和siRNA2组的特异性杀伤率分别为（14．4±3。6）％和（18．6士4．7）％,低于对照组。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,并可降低DC激活T淋巴细胞增殖和CTL的细胞毒性,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受和治疗自身免疫性疾病提供了新思路和方法。     

黄芪多糖调节黑色素瘤小鼠PD-1/PD-Ls分子表达的研究

目的:研究中药黄芪提取物黄芪多糖在黑色素瘤B16-F10细胞荷瘤小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子PD-1/PD-Ls通路的调节作用,阐明相关的抗肿瘤免疫调节机制。方法:对荷瘤小鼠进行黄芪多糖干预,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;CCK-8法检测荷瘤小鼠外周T淋巴细胞增殖活性;ELISA法检测荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平;Real-time PCR法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在mRNA水平的表达;Western Blot法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在蛋白水平的表达。结果:黄芪多糖可显著抑制B16-F10细胞在C57BL/6小鼠腋部皮下移植形成肿瘤的生长(P0.01);促进荷瘤小鼠外周T淋巴细胞的增殖(P0.01);升高荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平(P0.01);抑制荷瘤小鼠脾组织PD-1mRNA和蛋白的表达(P0.05,P0.01);抑制小鼠肿瘤组织中PD-L2的mRNA表达和PD-L1、PD-L2的蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪多糖能抑制荷瘤小鼠皮下黑色素瘤的生长,其机制可能与黄芪多糖调节PD-1、PD-Ls分子的表达及相互作用,进而增强小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫活性有关。     

可溶性mB7-H4对ConA诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的: 探讨可溶性mB7-H4蛋白对肝脏的免疫性损伤的保护作用,阐明其作用机制。 方法: 采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET/mB7-H4表达,通过纯化、复性以及去除内毒素,获得具有生物活性的可溶性mB7-H4蛋白。小鼠随机分为对照(生理盐水)组、Con A组和mB7-H4蛋白100、200及400 μg组,除对照组外其余各组小鼠通过尾静脉注射Con A建立肝损伤模型(mB7-H4蛋白组小鼠在注射Con A前2 h和注射后8 h分2次给予mB7-H4蛋白),并于注射Con A后24和48 h,摘取各组小鼠眼球取血及引颈处死取肝脏,分离血清,检测天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平,并检测肝脏组织病理学变化。 结果: 与对照组比较,其他各组小鼠血清ALT、AST、IL-4和IFN-γ水平较均明显升高(P<0.05);与Con A组比较,mB7-H4蛋白组小鼠血清ALT、AST、IL-4和IFN-γ水平均明显降低(P<0.05或 P<0.01)。HE染色,mB7-H4蛋白组小鼠肝脏损伤均较Con A组有不同程度的减轻。 结论: 可溶性mB7-H4蛋白对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,可能是通过抑制IL-4和IFN-γ的产生和(或)分泌而发挥作用。     

经α-半乳糖酰基鞘氨醇体外扩增Vα24自然杀伤T细胞的生物学特性

目的建立α-半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)诱导Vα24自然杀伤T(NKT)细胞体外扩增方法,评价其生物学特性.方法将26份脐带血或外周血标本分为3组:A1组(n=5):脐带血单个核细胞(MNC)在负载α-GalCer的脐带血前体细胞源性树突状细胞(DC)刺激下诱导扩增Vα24 NKT细胞;A2组(n=5):外周血MNC在负载α-GalCer的外周血单核细胞来源DC(Mo-DC)刺激下诱导扩增Vα24 NKT细胞;B组(n=16):在外周血MNC中直接添加α-GalCer,诱导扩增其中的Vα24 NKT细胞.采用MTT法检测NKT细胞增殖能力、肿瘤细胞杀伤活性和混合淋巴细胞反应抑制能力,ELISA法测定IL-4和干扰素(IFN)-γ生成.结果A1、A2和B组NKT细胞扩增倍数分别为128(95～207)、250.5(179.6～790.6)和326(101～2 136)倍,B组扩增效果明显优于A1组(P=0.038).NKT细胞在佛波酯刺激下,3 d刺激指数为1.80±0.41;脐血或外周血NKT细胞24h分泌IL-4/IFN-γ比值为0.30±0.13和0.28±0.18;能杀伤HL60、KGla和Raji细胞,对K562细胞无效;NKT细胞及其培养上清均能抑制混合淋巴细胞反应.结论α-GalCer能在短期内大量扩增Vα24 NKT细胞.扩增细胞能大量分泌IL-4和IFN-γ,杀伤肿瘤细胞系,并抑制T细胞同种免疫应答.     

超抗原葡萄球菌肠毒素A在体外激活淋巴细胞抗成骨肉瘤的作用

目的：探讨超抗原葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）对成骨肉瘤患者外周血淋 寺殖及伤活性的调节作用。方法：分离成骨肉瘤患者外周血淋巴细胞,体外分别经ＰＨＡ,ＳＥＡ和ＳＥＡ加ＩＬ－２刺激后,＾３Ｈ－ＴdＲ参入法检测淋巴细胞对人成骨肉增殖水平,ＭＴＴ间接比色法检测活化的淋巴细胞对人成骨肉瘤细胞（ＳＯＳＰ－９６０７）的杀伤活性。结果：淋巴细胞经ＳＥＡ刺激２４h后增殖和钉伤活笥明显增强且呈剂量信依赖性（Ｐ〈０．０５     

转B7-1基因的人多发性骨髓瘤细胞XG-7在激发杀肿瘤细胞CTL中的作用

为调查B7－1分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的CD8 的CTL，我们用含B7－1基因逆转录病毒载体PTG5192的包装细胞293E的培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系XG－7（不表达B7－1分子），用新霉素G418选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达B7－1分子的XG－7细胞（命名为XG－7－B7细胞）。在体外增殖实验中，XG－7－B7细胞显示出比母系细胞XG-7对外周血淋巴细胞（PBL）具有更大的刺激活性。表型分析证实XG-7-B7细胞所刺激的PBL是一群T细胞，其表型特征为CD3，CD8阳性，CD25、CD28也高表达，而CD4和CD16几乎不表达。这群细胞可在体外长期培养扩增，并可用作效应细胞。细胞毒实验结果表明：CD8 T细胞可杀死XG－7－B7细胞、母系细胞XG－7和其它肿瘤细胞如K562与Daudi细胞。结果提示，这群肿瘤持异的CD8 CTL细胞对肿瘤的过继免疫治疗具有潜在的应用价值。     

DIABETOGENIC T CELLS INDUCE AUTOIMMUNE DIABETES IN BALB/c MICE

Objective To investigate the role of T cell and its subsets in the induction of insulifis and type 1 diabetes mellitus （T1DM） in BALB/c mice. Methods Autoimmune diabetes mellitus was developed by intraperitoneal injection of 40 mg/kg streptozotocin （STZ） daily for 5 consecutive days in BALB/c mice as sources of donor cells. Spleen cells from diabetic mice were then cultured for 7 days in the stimulation of interleukin-2 （IL-2） to harvest diabetogenic T cells, which were subse-quently transferred into normal BALB/c mice recipients. MTT, ELISA, and HE staining were used to analyze the lym- phocyte proliferation, cytokine （ IL-2, interferon-γ, IL-4, and IL-10） levels, and pathological changes in pancreatic is- lets. Results As few as 3×10^6 diabetogenic T cells successfully induced diabetes mellitus in recipients pretreated with STZ twice, whereas transfer of equal amount of normal splenocytes, T cell-depleted diabetogenic splenocytes, or diabe-togenic CD4^＋ T cells alone in recipients receiving STZ twice pretreatment was proved not to induce diabetes mellitus either. A markedly increased lymphocyte proliferation, high levels of interferon-γ/and IL-2 in the supernatants of diabeto-genic T cells were observed. In addition, a markedly enhanced lymphocyte proliferation, a high level of interferon-γ/secretion in serum, and numerous lymphocytes infiltration in pancreatic islets were detected in the diabetic mice induced by diabetogenic T cells transfer. Conclusions A novel T1DM murine model is established in STZ-pretreated BALB/c mice by adoptive transfer of diabetogenic T cells. CD4^＋ T cells with interferon-γ/may promote the onset of diabetes mellitus.     

腺病毒介导多基因对大鼠脾淋巴细胞毒作用的影响

目的 研究含多基因（p53、GM-GSF、B7-1、IL-2）的重组腺病毒载体Ad-multigenes,对大鼠脾脏淋巴细胞毒作用的影响及对淋巴细胞分泌IL-2的刺激作用。方法 应用人外周血淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养,分析导入目的基因的肝癌细胞系体外刺激人T淋巴细胞分泌IL-2的作用;利用大鼠脾淋巴细胞杀伤活性试验,分析导入目的基因的大鼠癌肉瘤Walker256细胞,其名疫原性的变化。结果 导入Ad-multigenes的肝癌细胞系体外刺激人外周血T淋巴细胞分泌IL-2的水平增加,导入Ad-multigenes的大鼠Walker256细胞,能增加大鼠脾脏淋巴细胞的杀辛本瘤细胞活性。结论 腺病毒介导多基因Ad-multigenes、能增加大鼠癌肉瘤Walk-er256细胞的免疫原性,和T细胞分泌IL-2的水平增加。     

人食管癌Eca-109细胞膜肿瘤抗原的筛选

目的:从人食管癌Eca109细胞入手,筛选出食管癌高效细胞膜肿瘤抗原的大致范围。方法:采用敏感的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)来确定Eca109细胞人主要组织相容性复合体(HLA)基因分型,用HLA血清学分型技术筛选健康志愿者;改良的Neville法结合超滤法纯化膜蛋白并分组:<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000、总膜蛋白共7个组,各组抗原负载树突状细胞(DC),以DC激活的T淋巴细胞为效应细胞,Eca109细胞为靶细胞,设效靶比为81、161、321,用MTT法检测效应细胞杀伤率。结果:Eca109细胞HLA的基因分型为A03,A24;B35,B37;DRB101,DRB112;DR52;DRB3;筛选到1例表型为A03杂合子的健康志愿者。根据MTT检测,在效靶比为81、161和321时,膜蛋白相对分子质量小于10000组的肿瘤细胞杀伤率与未使用去垢剂的总膜蛋白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而相对分子质量小于3000组的杀伤率最高,与各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Eca109细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞免疫反应的肿瘤抗原,相对分子质量小于3000的膜蛋白成分中可能存在人食管癌的高效肿瘤抗原。     

中西医结合治疗膀胱肿瘤的基础研究

目的：探讨转基因肿瘤疫苗与大蒜素联合治疗膀胱肿瘤的效果与机理.方法：脂质体转染法将B7.1基因导入鼠膀胱肿瘤（MBT-2）细胞.免疫荧光染色测定B7.1分子的表达.混合淋巴细胞培养MTT法和LDH释放法观察对免疫系统的影响.MTT法测定大蒜素对肿瘤细胞生长的影响.动物实验测定联合治疗效果.结果：B7.1转基因肿瘤疫苗能有效刺激淋巴细胞增殖.与大蒜素能产生协同抗癌效果.这种协同抗癌效果与淋巴细胞的特异性杀伤活性有关.结论：转基因肿瘤疫苗与大蒜素合用有更好的抗肿瘤效果.