低剂量伽玛刀对致痫大鼠皮层及海马神经元Fos表达的影响

目的通过观察低剂量伽玛刀照射对致痫大鼠大脑皮质及海马神经元cfos表达的影响,初步探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制,为临床治疗提供理论依据。方法以青霉素致痫模型为对象,应用免疫组化方法,检测低剂量伽玛刀照射(周边剂量12Gy)后,大脑皮质及海马神经元cfos表达的变化。实验组和对照组大鼠各22只,正常对照组大鼠4只。结果无论是皮层还是海马,伽玛刀照射后cfos在实验组动物和对照组动物中,表达均有明显的差别,并随时间呈现一定的规律性。结论cfos在伽玛刀治疗癫痫的机理中发挥重要作用。     

低剂量伽玛刀照射对癫痫模型大鼠癫痫发作及认知功能的影响

目的观察低剂量伽玛刀照射对癫痫大鼠的抗癫痫作用及对认知功能的影响。方法根据动物是否致痫及接受伽玛刀照射,将60只大鼠分为4组:①正常对照组;②伽玛刀对照组;③戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)组;④PTZ+伽玛刀组。腹腔连续注射PTZ制备癫痫大鼠模型,以双侧额叶为照射靶区对大鼠进行低剂量伽玛刀照射,边缘剂量为15Gy。观察并记录各组大鼠伽玛刀照射前、后的癫痫发作情况及脑电图变化,并于伽玛刀照射后12周,应用Morris水迷宫评测各组大鼠学习和记忆功能。结果与PTZ组大鼠比较,PTZ+伽玛刀组大鼠经低剂量伽玛刀照射后,于8～12周时,发作程度明显减轻,癫痫波发放的潜伏期延长,频率显著减少(P0.05)。在Morris水迷宫试验中,与正常对照组比较,PTZ组大鼠搜索策略变差,寻找平台逃避潜伏期时间显著延长,游泳距离增加,穿越平台的次数及在原平台象限的游泳时间的百分率减少(P0.05);而与PTZ组相比,PTZ+伽玛刀组搜索策略明显改善,寻找平台逃避潜伏期时间缩短,游泳距离减少,穿越平台的次数及在原平台象限的游泳时间的百分率明显增加(P0.05)。结论 PTZ致痫大鼠认知功能明显受损,低剂量伽玛刀照射在控制大鼠癫痫发作的同时,可改善认知功能。     

癫痫持续发作时间与大鼠海马苔藓纤维发芽程度及自发性痫性发作的关系

目的探讨癫痫持续状态(SE)发作时间与致痫大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)程度及自发性痫性发作的关系。方法 104只雄性成年SD大鼠,随机分为对照组和3个SE实验组,建立氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型;诱发SE30min(A组)、60min(B组)、90min(C组)后注射水合氯醛终止发作。各组大鼠自SE终止发作后于相同实验条件下普通饲养45d,观察大鼠行为及脑电图(EEG)的变化,记录自发性痫性发作的发生率。通过苏木精-伊红染色、Nissl染色和Timm硫化银组织化学染色方法观察各实验组海马MFS情况。结果氯化锂-重复低剂量匹罗卡品成功诱导大鼠SE的发生,发作程度均达Ⅳ级以上,EEG类似人类颞叶癫痫。80%的大鼠癫痫持续状态均发展为自发痫性发作,与SE时间无关。与对照组相比,实验A、B、C三组双侧海马CA3区均表现MFS(P0.05)。实验B组与A、C组相比,CA3区MFS明显增加(P0.05)。结论氯化锂-重复低剂量匹罗卡品可诱导SE,癫痫持续发作60min后终止的大鼠海马CA3区MFS明显增加,SE发作时间与海马MFS程度并不一定呈正相关。     

伽玛刀对癫痫大鼠模型的治疗作用及机制研究

目的 研究伽玛刀照射对癫痫大鼠的放射生物学作用,探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制.方法 制备海人酸大鼠癫痫模型,利用自行设计的伽玛刀动物定向头架,分别应用100Gy和20Gy的伽玛射线对癫痫大鼠海马组织进行照射,观察大鼠行为学、脑电图、MRI及超微结构、脑组织氨基酸含量及GABA能神经元表达变化.结果 伽玛刀照射后大鼠癫痫发作次数明显减少.100Gy组照射后2个月MRI表现为靶区高信号,20Gy组5个月MRI未见改变.伽玛刀照射后兴奋性氨基酸含量显著低于癫痫组,GABA能神经元表达低于正常,但高于癫痫组.结论 伽玛刀照射对癫痫大鼠具有治疗作用,高剂量伽玛射线(100Gy)对致痫灶有毁损作用.低剂量伽玛射线(20Gy)通过抑制兴奋性神经元释放兴奋性氨基酸使癫痫发作减少.     

小剂量伽玛刀照射对致癎大鼠脑神经元nNOS表达的影响

目的 通过观察低剂量伽玛刀照射对致痫大鼠大脑皮质及海马神经元nNOS表达的影响，初步探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制。方法 将44只青霉素致痫大鼠模型等分为实验组和实验对照组，对实验组进行伽玛刀照射（周边剂量12Gy），应用免疫组化方法检测两组大脑皮质及海马神经元nNOS表达的变化。结果 nNOS在两组动物的皮质和海马表达均有显著性差别．实验组显著性低于实验对照组；实验对照组表达呈双高峰现象。结论 nNOS在伽玛刀治疗癫痫的机制中具有重要作用。     

自由基清除剂对癫痫大鼠海马组织Fyn的亚硝基化影响

目的研究自由基清除剂对癫痫大鼠海马组织Fyn的亚硝基化影响,并探讨其变化的可能机制。方法 SD大鼠随机分为癫痫对照组(saline组)、癫痫组(KA组)和药物对照组(KA+saline组)及MCI-186组(KA+MCI-186组)。采用脑室注射海人酸制作大鼠癫痫模型。海马组织匀浆,取蛋白样品用抗Fyn抗体作免疫沉淀,然后用抗-SNO-Cys抗体做免疫印迹,检测Fyn巯基亚硝基化。结果 Fyn的亚硝基化水平癫痫组和药物对照组增加(P0.05),MCI-186组较药物对照组降低(P0.05),Fyn的蛋白表达各组间差异无显著性(P0.05)。结论自由基清除剂可能通过抑制癫痫诱导海马组织Fyn的巯基亚硝基化,调节NMDA受体NR2B亚基磷酸化,进而调节NMDA受体通道功能,对神经元起保护作用。     

A型钾通道Kv1.4在致痫大鼠海马区的表达

目的 通过检测A型钾通道Kv1.4在戊四唑(PTZ)致痈大鼠海马CA1、CA3及齿状同区的表达变化,探讨A型钾通道与癫痫发病的关系.方法 SD大鼠40只,随机分为对照组、致痫后1h、24h、72h组,每组各10只.腹腔注射PTZ制备大鼠癫痫模型,应用免疫组化及Western Blot技术检测Kv1.4在各时间段海马CA1、CA3及齿状回区的蛋白表达.结果 致痫组大鼠海马区Kv1.4蛋白水平在致痫后1h、24h、72h 3个时间段均明显低于正常组(P<0.05);各致痫组之间Kv1.4蛋白水平均无明显差异(P>0.05).结论 (1)A型钾通道Kv1.4在SD大鼠海马中广泛分布.表达丰富,以轴突处最为明显.(2)大鼠癫痫模型海马区A型钾通道Kv1.4蛋白表达减少,提示Kv1.4的表达下调可能与癫痫的发病相关.     

A型钾通道Kv4.1在戊四唑致痫大鼠海马区的表达

目的通过检测A型钾通道Kv4.1在戊四唑(PTZ)致痫大鼠海马CA1、CA3及齿状回区的表达变化,探讨A型钾通道在癫痫发病机制中的作用。方法 SD大鼠40只,随机分为正常组、致痫后1 h、24 h、72 h组。腹腔注射PTZ制备大鼠癫痫模型,应用免疫组化及Western Blot技术检测Kv4.1在各时间段海马CA1、CA3及齿状回区的蛋白表达情况。结果致痫组大鼠海马区Kv4.1蛋白表达水平在致痫后1 h、24 h、72 h三个时间段均明显高于正常组(P<0.05);各致痫组之间Kv4.1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。结论大鼠癫痫模型海马区A型钾通道Kv4.1蛋白表达增多,Kv4.1的表达上调可能在癫痫的发生中起作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NMDA受体亚单位NR2B及突触素表达的影响

目的 观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚单位(NR2B)及突触素表达的影响.方法 采用免疫组化方法观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NR2B及突触素表达的影响.结果 B组与A组比较,海马CA1区、CA3区及齿状回NR2B及突触素的表达明显减少(P＜0.05),C、D组大鼠海马各区NR2B及突触素的表达与单纯缺血组比较均不同程度增加(P＜0.05);D组与C组比较,NR2B及突触素的表达增加更明显(P＜0.05).结论 慢性缺血3个月后,大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回中NR2B 及突触素的表达明显减少,而丁基苯酞能改善这种缺血改变,增加NR2B 及突触素的表达.     

外源性GM1对癫痫大鼠脑损伤的保护作用

目的　探讨外源性神经节苷脂GM1对癫痫大鼠脑损伤有无保护作用。方法　采用硫代氨基脲 (7.5mg/kg)诱导大鼠癫痫发作模型 ,用免疫组化方法动态观察致痫组大鼠和GM 1干预组大鼠在癫痫发作 2 4小时、4 8小时、72小时及 7天时 ,以及正常对照组、生理盐水组大鼠 72小时时神经生长因子 (NGF)在实验大鼠海马及额叶神经细胞表达情况。同时应用电镜技术观察受损海马神经细胞形态及结构变化。结果　正常对照组和生理盐水组大鼠无癫痫发作 ,致痫组和GM1干预组大鼠有Ⅰ Ⅴ级癫痫发作。免疫组化结果显示 ,癫痫鼠在其海马、额叶有较多的NGF阳性神经细胞表达 ,而未致痫鼠偶有NGF阳性细胞表达 (P <0 .0 5 )。在致痫鼠中 ,GM1干预后NGF表达明显高于未干预组 (P <0 .0 5 ) ,且以 72小时NGF表达为最高(P <0 .0 5 )。电镜显示癫痫鼠神经细胞损伤 ,但GM1干预后损伤减轻 ,而正常对照组和生理盐水组神经细胞形态和结构正常。结论　癫痫发作可引起脑细胞损伤 ;GM1对癫痫大鼠脑损伤具有一定保护作用 ,其保护作用可能通过诱导NGF表达增多来实现。     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马结构中CLC-2、CLC-3氯通道表达变化的研究

目的 研究ClC-2、ClC-3氯通道在氯化锂-匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型中分布和表达的变化,探讨其在癫痫发作病理机制中的作用.方法 Wistar大鼠采用随机数字表法分成致痫组(60只)与对照组(20只),其中致痫组根据处死及处理时间又分为24h组、14d组与30d组,每组20只.致痫组复制氯化锂-匹罗卡品大鼠慢性癫痫模型,在发作后24h、14d、30d时,分别予以:(1)免疫组化染色,观察ClC-2、ClC-3氯通道蛋白在海马表达的分布情况及其致病后不同时点的吸光度(A)值的变化;(2)RT-PCR,观察ClC-2、ClC-3氯通道mRNA在致痫后不同时点的变化.结果 (1)与对照组比较,致痫后14d至30d,致痫组免疫反应阳性神经元数和A值明显减少和降低,差异有统计学意义(P<0.05);ClC-2 mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).(2)与对照组比较,致痫组致痫后24 h,海马CA1、CA3及齿状回各层ClC-3免疫反应阳性神经元数和A值明显增加和升高,差异有统计学意义(P<0.05);ClC-3氯通道mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 癫痫慢性期的发作和ClC-2氯通道的减少有关.     

红藻氨酸诱导癫痫大鼠前脑CX32的表达及辛醇干预的影响

目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导癫痫大鼠前脑缝隙连接蛋白32(connexin 32,CX32)的表达及辛醇干预的影响.方法 用免疫荧光法检测癫痫发作后各时间点大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达.同时观察致痫前给予辛醇干预对大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达的影响.结果 KA致痫组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各时程明显高于正常对照组(P<0.05),并且随时程延长呈增加趋势,7d达高峰,在海马中的变化比皮层明显,但无统计学意义(P>0.05).辛醇干预组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各相应时程明显低于KA致痫组(P<0.01).结论 CX32组成缝隙连接(gap junction,GJ)在癫痫的发生发展过程中起重要作用,辛醇可以减少癫痫大鼠CX32表达,降低癫痫敏感性,实现脑保护作用.     

戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆改变及海马NR2B表达

目的观察戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆功能变化及海马NMDA2型受体(NR2)B亚单位(NR2B)表达,探讨二者的关系及PTZ致癎大鼠认知障碍发生的分子机制。方法采用戊四氮(PTZ)慢性癫癎(CE)模型,Y-迷宫对两组大鼠进行行为学检测,免疫组织化学方法观察两组大鼠海马CA3区NR2B表达的变化,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马NR2B mRNA的表达。结果癫癎组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马CA3区NR2B阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01),同时伴有海马NR2B mRNA表达下降(P<0.01)。结论戊四氮点燃癫癎大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元NR2B的表达减少有关。     

神经肽Y对海人酸致痫大鼠中NR1、NR2A受体的影响

目的探讨重组腺相关病毒载体神经肽Y(r AAV2/1-NPY-EGF-P)干预前后海人酸致痫大鼠海马中NR1、NR2A表达的变化。方法将36只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组、海人酸致痫大鼠组(KA组)以及神经肽Y(NPY)干预组(NPY组)各12只。KA组和NPY组均在海马CA3区注射海人酸建立为慢性癫痫模型,造模成功后,NPY组向脑室注射10l滴度为5×10~(11)μg·mL~(-1)的r AAV2/1-NPYEGFP进行基因转染,KA组不注射病毒,对照组海马CA3区注射等量的生理盐水。各组动物分别于基因转染后2w、4w,取海马保存于液氮。每组动物选取12只,每个时间点6只大鼠,用免疫组化方法检测各组NR1,NR2A的表达情况。对试验结果采用双盲法进行统计,应用半定量积分的方法,把每个时间点的大鼠CA3区NPY的阳性细胞率和阳性细胞着色强度进行分级记分,最后依据两项之积计算其阳性强度(IHS)。结果 2w及4w时KA组和NPY组NR1、NR2A阳性细胞数量、染色强度和IHS分数均高于对照组,(P<0.05);4w时NPY组阳性细胞比例、染色强度和IHS评分均低于KA组,(P<0.05)。结论 NR1、NR2A受体的低表达可能参与了NPY抑制癫痫发作的发病机制。     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S1OOB蛋白的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响.方法 采用戊四氮(PTZ)腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res(15 mg/kg·d)灌胃干预10 d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CA1、CA3区神经元有保护作用(P＜0.05),而对齿状回保护作用不明显(P＞0.05).Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).结论 Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用.     

低剂量伽玛刀照射对致大鼠皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的影响

目的 通过观察低剂量伽玛刀照射对致痫大鼠大脑皮质及海马神经元c—fos和脑型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响，探讨伽玛刀治疗癫痫的作用机制。方法将44只青霉素致痫大鼠模型等分为实验组和实验对照组大鼠各22只，另取4只正常大鼠作为正常对照组。实验组行伽玛刀照射（周边剂量12Gy）后，应用免疫组化方法，观察大脑皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的变化。结果无论是皮质还是海马，c—fos和nNOS在实验组与实验对照组动物之间，表达均有明显的差别，实验组表达明显少于实验对照组，而后者呈现双高峰现象。结论c—fos和nNOS在伽玛刀治疗癫痫的机制中发挥了重要作用。     

氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑皮质及海马腺苷激酶表达的影响

目的 观察氯喹对戊四氮致痫大鼠皮质和海马区腺苷激酶(ADK)表达的影响,探讨ADK与癫痫发作的关系及氯喹在癫痫发生过程中的作用. 方法 30只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、戊四氮(PTZ)致痫组和氯喹干预组,每组10只.观察大鼠行为学表现,记录其脑电改变,采用免疫组化法检测3组大鼠皮质和海马区ADK的表达. 结果 对照组大鼠无癫痫发作,PTZ致痫组大鼠出现Racine评分中Ⅳ～Ⅴ级严重发作,氯喹干预组大鼠出现Ⅰ～Ⅲ级发作,差异有统计学意义(P＜0.05).PTZ致痫组大鼠脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组大鼠脑电记录显示慢波、小棘波.PTZ致痫组大鼠脑内ADK表达明显增强,以海马区最为显著,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).氯喹干预组大鼠脑内ADK表达降低,但距离正常水平仍有较大差距,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 癫痫脑组织中存在ADK的表达异常,氯喹可以抑制这种表达,有效控制癫痫发作.     

孕期酒精暴露对子代大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响

目的 研究孕期酒精暴露对子代大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的影响.方法 按照随机数字表法,将雌性SD大鼠随机分为正常对照组、饮酒对照组和孕期酒精暴露组,每组各8只;饮酒法建立大鼠孕期酒精暴露模型,子代成年后,采用Y-型迷宫测试子鼠学习记忆成绩;采用聚合酶链反应分析子鼠海马组织NR2B mRNA的表达;采用免疫荧光法检测子鼠海马区NR2B蛋白表达.结果 (1)各组子鼠成年后学习记忆成绩的差异有统计学意义(F=4.566,P＜0.05),孕期酒精暴露组子鼠学习记忆成绩[(43.00±15.33)次]比正常对照组[ (25.13±12.35)次]和饮酒对照组[(26.12±11.95)次]明显下降(P均＜0.05);(2)各组子鼠成年后海马组织中NR2B mRNA表达差异有统计学意义(F=29.795,P＜0.01),孕期酒精暴露组子鼠海马区NR2B mRNA表达(0.97±0.14)较正常对照组(0.52±0.10)和饮酒对照组(0.62±0.12)明显上升(P均＜0.01);孕期酒精暴露组子鼠海马区NR2B蛋白表达明显增加.结论 孕期酒精暴露对子代大鼠的神经损伤可能与NMDA受体亚基NR2B蛋白表达的上调有关.     

转化生长因子β受体Ⅰ在红藻氨酸致癫痫大鼠额叶和海马的表达

目的研究转化生长因子β受体Ⅰ(TβRⅠ)蛋白在红藻氨酸(KA)致癫痫大鼠额叶及海马组织的表达,以探讨TβRⅠ与癫痫的关系。方法雄性SD大鼠随机分成对照组(10只)和模型组(50只),模型组再分为致痫后6h、12h、24h、72h、1w共5个亚组;采用红藻氨酸侧脑室注射建立颞叶癫痫动物模型,用Western Bloting技术在不同时间点检测致痫大鼠额叶及海马组织中TβRⅠ蛋白的表达情况。结果模型组大鼠致痫后额叶及海马组织中TβRⅠ蛋白表达较对照组明显增高,于72h达高峰,1w后逐渐降低;海马组织中TβRⅠ蛋白表达比额叶更明显(P<0.05)。结论 TβRⅠ蛋白在致痫后的额叶和海马组织中大量表达,表明TβRⅠ参与了癫痫早期的发病机制。     

戊四氮致痫大鼠不同脑区神经肽Y的表达及意义

目的研究神经肽Y(neuropeptideY,NPY)在戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致痫大鼠不同脑区中的变化,以探讨NPY与癫痫的关系。方法清洁级近交系雄性SD大鼠50只,分为对照组(A组,n=10)及实验组(40只)。实验组按体重50mg/kg经腹腔注射PTZ1次,对照组腹腔注射同等容量的生理盐水。根据癫痫发作分级,0~1级7只为B组,立即取脑;2级以上发作33只,随机于癫痫发作后0(C组,n=10)、6(D组,n=11)、24(E组,n=10)、72h(F组,n=2)取脑。采用放射免疫方法动态观察脑组织中海马、中脑、纹状体和额叶中NPY的改变;SP免疫组化染色法染色,观察各组大鼠海马CA1区NPY的表达。结果B组中脑、纹状体及额叶NPY含量较A组升高(P<005),而两组间海马NPY含量差异无显著性;癫痫发作组(C组、D组、E组)各部位NPY含量均明显高于A组。动态观察结果显示,癫痫发作后在中脑、海马、纹状体和额叶的NPY含量明显增高随后呈逐步下降,在癫痫发作后24h其含量与未发生惊厥的B组NPY含量差异无显著性(P>005);免疫组化染色显示癫痫大发作后海马NPY的表达明显增加,但随着时间的推移而降低。结论NPY与大鼠癫痫的发生、发展有密切关系。