MG患者外周血Th17细胞与AChR抗体产生的关系研究

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血中Th17细胞及相关细胞因子白细胞介素17(IL-17)在MG发病中的作用。方法收集40例MG患者和10名健康人(对照组)外周血标本,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测PBMCs中维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA水平,ELISA检测血清中IL-17水平,放射免疫沉淀法检测血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度;分离PBMCs中CD4~+T细胞和CD19~+B细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)进行共培养,培养系统中加入人IL-17和(或)IL-21中和抗体,放射免疫测定法检测培养液中AChR-Ab滴度。采用MG评分(quantitative MG scoring system,QMGs)对MG的严重程度进行评估,并对MG患者的Th17细胞比例、RORγt mRNA和IL-17水平与病情QMGs的相关性,以及MG患者抗AChR-Ab滴度与PBMCs中Th17细胞比例的相关性进行分析。结果 MG患者PBMCs中Th17细胞比例[1.11%(0.90%,1.34%)]高于健康对照组Th17细胞比例[0.26%(0.08%,0.36%)](z=5.494,P0.001),且与疾病严重程度呈正相关(r=0.4394,P=0.0046);血清中IL-17水平和PBMCs中RORγt mRNA相对表达[分别71.46(53.91,104.76)pg/mL、2.63(1.94,3.12)]均较健康对照组[分别18.82(12.73,29.80)pg/mL、1.13(0.98,1.28)]显著增高(均P0.001);MG患者血清中抗AChR-Ab滴度[2.34(1.19,3.60)nmol/L]较健康对照组[-0.08(-0.24,-0.03)nmol/L]显著增高(z=4.662,P0.001),且与Th17细胞比例呈正相关(r=0.7066,P=0.0001)。MG患者外周血T、B细胞与SEB共培养后抗AChR-Ab水平高于未加入SEB时及健康对照(均P0.01);加入抗人IL-21或IL-17中和抗体后,两者AChR-Ab滴度与未加入抗体时AChR-Ab滴度比较均降低(均P0.05),且均仍高于MG患者未加入SEB时及健康对照(P0.01);在培养上清中同时加入抗人IL-21和IL-17中和抗体时AChR-Ab滴度明显低于加入单种抗体时,而与未加入SEB时及健康对照差异无统计学意义(均P0.05)。结论 MG患者外周血中Th17细胞可能通过IL-17促进AChR-Ab产生,参与疾病的病理过程。     

重症肌无力患者血清铁水平与AChR-Ab、IL-6的关系

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血清铁(serum iron,SI)的水平变化及其与乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)、白细胞介素6(IL-6)的相关性。方法选取德阳市人民医院2015-07-2018-03期间收治的重症肌无力MG患者76例(MG组),另选取同期健康体检者50例名作为健康对照组。采用比色法检测所有纳入者外周血清中SI水平(以SI水平8.95μmol/L作为SI缺乏的标准);分别采用酶联免疫吸附法及放射免疫法检测所有纳入者外周血清中IL-6、AChR-Ab的阳性率及表达水平。比较MG患者与正常健康者血清中IL-6、AChR-Ab的阳性率及表达水平,观察MG患者SI水平正常者与SI水平缺乏者血清中IL-6AChAb的表达水平并进行相关分析。结果 MG组患者SI缺乏率、AChR-Ab阳性率、AChR-Ab水平、IL-6水平明显高于健康对照组[分别为73.68%vs.26.00%、81.58%vs.0.00%、(1.05±0.40)nmol/L vs.(0.21±0.09)nmol/L、(183.54±35.26)ng/mL vs.(121.43±28.45)ng/mL),均P0.01)]。MG患者中SI缺乏组患者AChR-Ab、IL-6水平明显高于SI正常组[分别为(1.15±0.34)nmol/L vs.(0.81±0.45)nmol/L、(193.12±31.70)ng/mL vs.156.74±31.19)ng/mL,均P0.01];相关性分析表明MG患者SI水平与AChR-Ab、IL-6水平呈显著负相关(分别r=-0.776,r=-0.663,均P0.01)。结论 MG患者存在着铁缺乏,且MG患者SI水平与AChR-Ab、IL-6水平呈负相关。     

全身型重症肌无力的临床和电生理特点分析

目的 探讨不同亚型全身型重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)临床和电生理特点之间的区别,并分析电生理结果与疾病严重程度的相关性。方法 回顾性分析2016年7月至2020年7月在香港大学深圳医院神经内科就诊或住院的101例全身型MG患者的临床和电生理资料,按照其临床特点,分为早发乙酰胆碱受体(Acetylcholine receptor,AchR)抗体阳性全身型MG组(52例)、晚发AchR抗体阳性全身型MG组(23例)、胸腺瘤型MG组(22例)和肌肉特异性受体酪氨酸激酶(Muscle-specific receptor tyrosine kinase,MuSK)抗体阳性型MG组(4例),比较不同亚组MG患者的人口学特点、重症肌无力评分(Quantitative Myasthenia Gravis score,QMGs)、美国重症肌无力协会(MG Foundation America,MGFA)临床分级、重复神经电刺激(Repetitive nerve stimulation,RNS)结果,分析RNS结果与QMGs之间的相关性。结果 非MuSK抗体阳性全身型MG中,早发AchR抗体阳性全身型MG女性患者所占比率最高(71. 2%vs 65. 2%vs 36. 4%,P 0. 05),胸腺瘤型MG呼吸肌/球部肌肉受累为主患者所占比率最高(28. 8%vs 43. 5%vs 63. 6%,P 0. 05),早发AchR抗体阳性全身型MG被检肌肉RNS均为阳性患者所占比率最高(44. 2%vs 17. 4%vs 22. 7%,P 0. 05),QMGs与RNS最大波幅下降比率、RNS总波幅下降比率呈明显正相关关系(P 0. 01); MuSK抗体阳性全身型MG,其中重度受累患者所占比率、呼吸肌/球部肌肉受累为主患者所占比率均较高(均为75%),而被检肌肉RNS均为阳性患者所占比率较低(0%)。结论 不同亚型全身型MG的人群分布、性别占比、主要受累肌肉、受累肌肉受累程度及分布范围均具有显著的差别,这在全身型MG的分型诊断方面具有很大的参考价值;其RNS结果与疾病严重程度具有高度相关性,提示RNS在全身型MG的病情评估方面具有重要临床价值。     

重症肌无力患者Foxp3~+CD4~+CD25~+调节性T细胞与AChRAb、Titin-Ab的相关研究

目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者Foxp3~+CD4~+CD25~+调节性T细胞(Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg)与乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)及连接素抗体(Titin-Ab)之间的关系,进一步揭示MG的发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测22例MG患者以及20名健康对照者血清AChRAb和Titin-Ab水平;采用流式细胞术(FCM)检测两组外周血中CD4~+CD25~+Treg的比例及其表达Foxp3的比例。结果 MG患者外周血CD4~+CD25~+Treg比例[(2.9±0.52)%]与健康对照组[(3.12±0.51)%]比较无统计学差异(P0.05);CD4~+CD25~+Treg细胞Foxp3表达比例为(37.24±9.57)%,低于健康对照组[(58.60±4.91)%](P0.01)。MG组CD4~+CD25~+Treg表达Foxp3比例与AChRAb、Titin-Ab水平[分别为(0.232±0.060)和(0.170±0.035)pg/mL]均呈负相关(r=-0.449,P0.05;r=-0.691,P0.01)。结论 Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞数目减少导致机体免疫功能缺陷是MG发病的重要环节。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞中microRNA-23b表达的初步探究

目的探讨microRNA-23b与MG发病的相关性。方法 31例MG患者,31例健康人,取其外周血分离外周血单个核细胞(PBMCs),提取RNA并逆转录,实时定量PCR检测microRNA-23b的表达,以小分子RNAU6为内参,计算标准化后的2-ΔCt值表示microRNA-23b相对表达量。结果 MG患者PBMCs中microRNA-23b的表达水平高于健康对照组(P=0.0266),但其在MG不同临床特征亚组中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。MicroRNA-23b表达水平与肌无力严重程度之间的相关性无统计学意义(r=-0.0308,P=0.8695)。结论 MG患者PBMCs中microRNA-23b异常高表达,但与性别、发病年龄、类型、胸腺状态、甲状腺功能及肌无力严重程度无关。     

白介素-12、23亚单位在重症肌无力发病中的作用

目的 探讨白介素(IL)-12、23亚单位在重症肌无力(MG)发病中的作用.方法 采用RT-PCR及ELISA法分别测定22例MG患者(全身型12例,眼肌型10例)和22名健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-12p35、IL-23p19及p40(IL-12/23)mRNA的表达及血清抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体、干扰素(IFN)-γ和IL-17水平,并进行相关性分析.结果 (1)MG组PBMCs中IL-12p35、IL-23p19和p40(IL-12/23)mRNA表达及其血清IFN-γ和IL-17水平明显高于正常对照组(P＜0.05～0.01);但MG全身型亚组和眼肌型亚组间差异无统计学意义.(2)MG组血清抗AChR-IgC阳性17例,抗AChR-IgG水平与其IL-12p35、IL-23p19和p40(IL-12/23)mRNA表达及血清IFN-γ和IL-17水平均呈正相关(r=0.502、0.649、0.817、0.652、0.484,P＜0.05～0.01).(3)MG组IL-12p35 mRNA与IFN-γ、IL-23p19 mRNA与IL-17均呈正相关(r=0.906、0.725,均P＜0.01).结论 IL-12和IL-23可能分别通过促进IFN-γ和IL-17的分泌参与了MG的发病,但与MG类型无关.     

重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体α同型与激素疗效的关系

目的观察重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体α同型(hGRα)含量或核转位率与激素疗效的关系。方法收集MG患者51例、其他神经免疫性疾病(ONID)患者16例及健康对照者11名,分别提取外周血单个核细胞(PBMC)细胞核和细胞质蛋白质,采用生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)定量测定经体外地塞米松(DEX)作用前、后PBMC细胞质和细胞核内hGRα含量,并计算hGRα核转位率。应用临床相对记分法评价激素疗效。结果未经DEX处理时MG和ONID组PBMC细胞质hGRα含量均低于健康对照组(P<0.05),经DEX处理后MG组其hGRα含量明显低于健康对照组(P<0.01)。MG患者的性别、年龄、伴发胸腺疾病情况和hGRα含量以及hGRα核转位率间均无明显相关(P>0.05)。Osserman分型Ⅳ型MG患者hGRα核转位率低于其他分型者(P<0.05)。病程≥2年的MG患者hGRα核转位率明显低于病程≤6个月和病程6个月~2年的MG患者(均P<0.01)。MG患者PBMC的细胞核内hGRα含量和hGRα核转位率与激素治疗2周(n=51,r=0.913,r=0.907,P<0.05)和4周(n=47,r=0.929,r=0.911,P<0.05)的临床相对评分间均呈正相关。结论经DEX作用后PBMC细胞核内hGRα含量和激素诱导的hGRα核转位率与MG患者对激素的敏感性间呈正相关,两者可作为预测激素疗效的实验室指标。     

Th22细胞及相关因子在重症肌无力患者外周血中的表达

目的研究重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血辅助性T细胞22(T helper 22cells,Th22)和白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)的表达以及两者间的相关性。方法收集25例MG患者和24例健康对照者,其中眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者14例,全身型重症肌无力(general myasthenia gravis,GMG)患者11例。采用流式细胞仪检测MG患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th22细胞的比例,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆IL-22的表达。比较各组间Th22细胞比例和IL-22表达水平差异,以及Th22细胞比例和IL-22表达间的相关性。结果 MG患者PBMC中Th22细胞比例、血浆IL-22表达水平均显著低于健康对照组[(0.60±0.07)%比(0.92±0.09)%,P0.01;(18.65±1.38)pg/mL比(24.54±1.85)pg/mL,P0.05];OMG与GMG患者间Th22细胞比例、IL-22表达水平均无统计学差异(均P0.05);MG患者PBMC中Th22细胞比例与IL-22表达水平间呈中度正相关(r=0.59,P0.01)。结论 MG患者体内Th22细胞比例及血浆IL-22表达水平减低可能导致免疫功能紊乱进而影响MG的发病。     

α2巨球蛋白在脑梗死后精神病性障碍患者脑脊液中的表达及临床意义

目的探究α2巨球蛋白(α2MG)在脑梗死后精神病性障碍患者脑脊液中的表达及临床意义。方法选取本院2015年3月-2019年3月脑部疾病所致精神病性障碍患者136例,其中脑梗死患者53例(脑梗精神病组),非脑梗死患者83例(非脑梗精神病组)。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组患者脑脊液中α2MG、白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白M(Ig M)、补体C3水平,并分析α2MG与IL-6、CRP、Ig M、C3相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清α2MG水平对脑梗死后精神病性障碍的诊断价值。结果与非脑梗精神病组相比,脑梗精神病组患者脑脊液中α2MG、IL-6、CRP、C3、Ig M水平较高(P 0. 05)。Pearson分析显示脑梗精神病组患者脑脊液中α2MG水平与IL-6、CRP、C3、Ig M水平均呈正相关(r=0. 413,P=0. 002; r=0. 553,P=0. 000; r=0. 613,P=0. 000; r=0. 512,P=0. 000)。ROC曲线结果显示,脑脊液中α2MG水平对脑梗死后精神病性障碍诊断的曲线下面积为0. 897,截断值1. 968μg/ml,灵敏度为83. 0%,特异度为94. 0%,95%CI为0. 828～0. 967。结论α2MG在脑梗死后精神病性障碍患者脑脊液中水平上升,对脑梗死后易发生精神病性障碍具有一定临床意义。     

左侧颞叶癫痫患者执行功能损害与钩束弥散张量成像参数的相关性

目的 应用神经心理学方法和磁共振弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)技术研究左侧颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)患者执行功能损害的特点及与其双侧钩束(uncinate fasciculus,UF)DTI参数的关系.方法 对14例成人左侧TLE患者(患者组)和15名健康对照者(对照组)进行执行功能的神经心理检查(包括stroop、数字广度、数字符号、连线试验及词语流畅性)评分,并对两组受试者均进行DTI扫描.结果 患者组stroop错误数[(7.20±3.60)vs.(1.60±0.60)]高于对照组(P＜0.05),数字广度[(12.30±6.20)vs.(17.60±2.10)]、数字符号[(50.33±16.10)vs.(66.04±10.12)]及词语流畅性[(12.05±5.36) vs.(19.33±2.55)]均低于对照组(P＜0.05),stroop反应时[(23.86±10.91)vs.(16.36±6.13)]及连线试验的时间[(56.11±20.12)vs.(40.43±15.07)]均长于对照组(P＜0.05).与对照组相比,患者组左侧钩束各向异性(Fractional Anisotrophy,FA)值降低[(0.332±0.043)vs.(0.379±0.014)],差异具有统计学意义(P＜0.05).相关分析示,患者组左侧钩束FA值与词语流畅性(r=0.56,P=0.025)及数字广度(r=0.58,P=0.028)呈正相关.结论 左侧TLE患者存在广泛的执行功能损害,部分执行功能的损害与左侧钩束的损害相关,左侧钩束的损害可能是部分执行功能损害的病理生理基础.     

重症肌无力患者糖皮质激素疗效与其受体α和β表达水平的关系

目的分析重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMC)胞质和胞核中糖皮质激素受体(GR)α和β表达与糖皮质激素(GC)疗效的关系,并探讨GC治疗MG疗效不同的机制。方法 收集24例MG患者和8名健康对照,根据GC疗效将MG患者分为GC敏感组、GC依赖组和GC抵抗组,每组各8例,应用Westernblot法检测MG患者GC治疗前后PBMC胞质和胞核蛋白GRtα和GRβ表达水平,并分析其与GC疗效的关系。结果正常情况下GRα主要表达于PBMC胞质中,GRβ主要表达于PBMC胞核中;GC抵抗组MG患者PBMC胞质中GRα表达水平降低(P0.05),而GC依赖组MG患者PMBC胞核中GRβ表达增高(P0.01)。GC治疗后,GC依赖组MG患者GRα的核移位率明显低于GC敏感组和GC抵抗组(P0.01)。结论 GC抵抗型MG与其PBMC胞质中GRα低表达相关,GC依赖型MG与其PBMC胞核GRβ高表达相关,并可能与由此所致的GRα核转位降低有关。     

褪黑素对母婴分离新生鼠行为发育及海马糖皮质激素受体的调节

目的 探讨外源性褪黑素(MT)对母婴分离(MS)新生大鼠行为发育及海马糖皮质激素受体(GR)表达的调节作用.方法 按随机数字表法将新生同窝雄性SD大鼠随机分为母婴分离(MS)组、母婴分离+褪黑素干预(MT)组和对照组,每组12只.MT组和MS组于出生后第1～14天进行母婴分离实验;MT组于出生后第7～20天腹腔注射MT 10 mg/(kg·d),注射容积10 ml/kg,MS组和对照组分别腹腔注射相同容积的生理盐水.于出生后第28天,采用水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力;于出生后第30天,取3组大鼠海马组织,采用二步法免疫组织化学染色检测GR阳性细胞表达,采用逆转录聚合酶链式反应法检测GR mRNA表达.结果 (1)MS组大鼠水迷宫测试学会正确上台所需的训练次数[(13.3±3.7)次],较对照组[(8.9±2.1)次]明显增加(P＜0.01),MT组大鼠学会正确上台所需的训练次数[(9.2±2.6)次],较MT组明显减少(P＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);(2)MS组海马GR蛋白(78.56±4.05)及mRNA表达(0.65±0.28)较对照组[(136.04±5.16)、(0.95±0.34)]均明显下降,差异有统计学意义,MT组大鼠海马GR蛋白( 129.11±5.03)及mRNA (0.94±0.32)表达明显升高(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外源性MT可能通过上调海马GR水平减轻早期母婴分离对远期行为发育的损伤.     

NMOSD患者外周血滤泡辅助性T细胞及其亚群的表达研究

目的通过研究视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者外周血中滤泡辅助性T(Tfh)细胞的表达,探讨Tfh细胞与NMOSD发病的关系。方法采用流式细胞术分别检测53例NMOSD急性发作期患者(NMOSD组)和20名健康对照(对照组)的外周血中不同表型的Tfh细胞占CD4+T细胞的比例及其三个亚群Tfh1、Tfh2、Tfh17占CD4+CXCR5+T细胞的比例。结果 NMOSD组CD4+CXCR5+Tfh细胞、CD4+CXCR5+PD-1+Tfh细胞占CD4+T细胞的比例均高于健康对照组[分别(22.80±6.78)%vs.(18.94±3.84)%,t=3.042,P=0.003;(9.54±3.29)%vs.(4.21±1.31)%,t=9.914,P=0.000]。在CD4+CXCR5+T细胞中,NMOSD患者组Tfh17细胞所占比例高于对照组[(30.70±4.56)%vs.(27.33±2.89)%,t=3.071,P=0.003],Tfh1细胞比例低于对照组[(26.41±4.42)%vs.(30.26±3.66)%,t=-3.474,P=0.001],Tfh2细胞比例与对照组差异无统计学意义(P=0.127);(Tfh2细胞比例+Tfh17细胞比例)/Tfh1细胞比例的比值高于对照组(2.41±0.65vs.1.88±0.39,t=4.264,P=0.000)。结论 NMOSD急性发作期患者外周血中Tfh细胞比例增高,同时存在着Tfh细胞的三个亚群的比例失调,尤其是Tfh17细胞比例显著增高,推测Tfh细胞与NMOSD的发病存在一定关系。     

下调孕烷X受体表达对谷氨酸诱导的小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达和功能的影响

目的探索下调孕烷X受体(PXR)表达对谷氨酸(GLU)模拟癫痫发作环境下小鼠脑微血管内皮细胞(m BMEC) P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的影响。方法体外培养小鼠脑微血管内皮b End. 3细胞,分为不同浓度GLU处理组(以0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L GLU处理细胞30 min),GLU不同时间处理组(以100μmol/L GLU处理细胞0 min、15 min、30 min);使用siRNA-PXR特异性抑制PXR表达,分为对照siRNA(NC siRNA)+GLU组、siRNA-PXR+GLU组。Western blotting检测细胞PXR和P-gp蛋白表达,细胞免疫荧光法检测细胞核内PXR蛋白表达,RT-qPCR检测细胞P-gp mRNA表达,罗丹明123(Rh123)细胞蓄积实验检测P-gp外排功能。结果与空白组相比,50μmol/L和100μmol/L GLU组PXR和P-gp蛋白表达均增高(均P 0. 05),尤以100μmol/L组PXR和P-gp蛋白表达最明显。与空白组相比,15 min和30 min组PXR蛋白表达均增加(均P 0. 05),30 min组P-gp蛋白表达增加(P 0. 05)。与空白组相比,100μmol/L GLU组胞核内PXR表达增加(P 0. 05)。与NC siRNA+GLU组相比,siRNA-PXR+GLU组PXR蛋白表达下调了37%[(1. 00±0. 00) vs (0. 63±0. 18); t=3. 41,P=0. 02],P-gp蛋白表达下调了43%[(1. 00±0. 00) vs(0. 57±0. 09); t=7. 94,P=0. 00],P-gp mRNA表达下调了52%[(1. 00±0. 04) vs (0. 48±0. 08); t=10. 98,P=0. 00]。GLU组细胞内Rh123荧光强度(0. 72±0. 01)较空白组降低[(1. 00±0. 03); t=9. 66,P=0. 00];GLU+维拉帕米(P-gp抑制剂)组(1. 07±0. 04)较GLU组增高(t=-11. 93,P=0. 00); siRNA-PXR+GLU组(0. 91±0. 03)较NC siRNA+GLU组增高[(0. 69±0. 05); t=-7. 52,P=0. 00]。结论下调PXR表达能够抑制m BMEC在GLU模拟癫痫发作环境下的P-gp表达及其功能,提示PXR参与调控癫痫发作诱导血-脑屏障P-gp表达及其功能。     

重症肌无力患者对糖皮质激素的敏感性与糖皮质激素受体的关系

目的　了解重症肌无力(MG)患者对糖皮质激素(GC)敏感性与糖皮质激素受体(GR)的关系。 方法　观察10例MG患者及10名健康对照。采用 3　H-地塞米松( 3　H-DEX)放射配体法测定外周血单个核细胞(PBMC)GR。分别用植物血凝素(PHA)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、乙酰胆碱受体(AChR)刺激PBMC， 3　H-TdR掺入法检测体外淋巴细胞增殖反应，地塞米松(DEX)抑制淋巴细胞增殖反应。 结果　正常对照及MG患者PBMC对PHA及MBP刺激的增殖反应差别不显著(P>,0 .05)。而MG患者PBMC对AChR的反应明显高于正常对照者(P<,0 .01)。DEX对MG患者PBMC特异性增殖反应的抑制率为42 .14%, 而对正常对照PBMC的增殖反应的抑制率为21 .62％，两组间有很显著区别(P<,0 .01)。GR数与DEX抑制率间有很良好的相关关系(r=0 .943, P<,0 .01)。 结论　MG PBMC GR数与体外DEX对PBMC 特异性增殖反应的抑制效应有良好的一致性。DEX对抗原特异性淋巴细胞增殖反应的抑制性可作为了解MG患者对GC敏感性的一项指标。     

新发病重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体水平与糖皮质激素疗效的研究

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体(GR)水平对预测糖皮质激素(GC)治疗(但未经其他免疫治疗)新发病重症肌无力(新发病MG)患者疗效的价值。方法收集100例新发病MG患者,用3H-地塞米松放射配体法测定PBMC中的GR数量,用ELISA法检测血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)水平。肌无力严重程度和临床疗效判定采用临床绝对和相对记分法。结果(1)100例新发病MG患者,免疫治疗前PBMC GR数量[(3633±1711.2)位点/细胞]明显低于健康对照组[(5563±1232.6)位点/细胞],其血清AChR-Ab水平[(3.79±0.74)nmol/L]明显高于健康对照组(<2.996 nmol/L)(均P<0.01)。(2)20例新发病MG患者仅经GC治疗,治疗至少1个月后其PBMC GR水平和血清AChR-Ab水平均下调,分别为(1928.97±1025.47)位点/细胞和(3.05±0.78)nmol/L。(3)治疗前GR数量与临床相对评分呈正相关(r=0.41,P<0.05),GR数量下调与AChR-Ab下调呈正相关(r=0.478,P<0.05)。结论(1)新发病MG患者PBMC GR数量低于正常。(2)可用MG患者治疗前PBMC GR数量预测GC疗效,且治疗前PBMC GR数量高者疗效好。     

多发性硬化患者糖皮质激素受体蛋白和mRNA表达与激素疗效的相关性

目的 检测多发性硬化(MS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中糖皮质激素受体(GR)蛋白与mRNA亚型:GRα mRNA、GRβ mRNA的表达,探讨GR蛋白和GRα mRNA、GRβ mRNA的表达与甲泼尼龙静脉冲击治疗(IVMP)疗效间的关系.方法 采用放射配体结合法测定20例缓解复发型MS(RRMS)、6例继发进展型MS(SPMS)及26名健康对照GR蛋白数量;采用半定量逆转录聚合酶链反应法测定GRα mRNA、GRβ mRNA的表达,使用扩展残疾状态量表(EDSS)评价IVMP疗效.结果 (1)IVMP前RRMS和SPMS患者GR蛋白数量分别为(3.8±0.2)×103位点/细胞和(1.6±0.2)×103位点/细胞,均显著低于健康对照组[(4.2±0.8)×103位点/细胞,P＜0.05].RRMS患者IVMP前GR蛋白数量与EDSS呈线性负相关(r=-0.441,P=0.015).(2)以磷酸甘油醛脱氢酶的表达作为内参照,RRMS患者GRα mRNA的表达水平(0.792±0.177)与健康对照组(0.805±0.158)差异无统计学意义,而SPMS患者的表达水平(0.315±0.129)明显低于健康对照(P＜0.05).(3)RRMS和SPMS患者PBMC中均有GRβ mRNA的表达,健康对照组未检出GRβ mRNA表达.(4)RRMS、SPMS患者GRβ mRNA的表达分别占各自GRα mRNA的43.98%±2.40%和140.01%±78.75%.结论 RRMS患者GRβ mRNA的低水平表达不影响IVMP疗效.SPMS患者GRα mRNA表达水平显著降低和(或)GRβ mRNA表达水平显著升高导致GC抵抗.     

酸枣仁汤对失眠症疗效及血浆褪黑素水平的影响

目的探讨酸枣仁汤对失眠症的疗效及对血浆褪黑素水平的影响。方法选用酸枣仁汤治疗失眠症,采用匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）量表评定睡眠状况,采用放射免疫法测定血浆褪黑素水平,观察其治疗前后的变化,并与正常对照进行比较,统计分析分别采用t检验、F检验和直线相关分析。结果治疗前患者PSQI总分明显高于正常对照组（f=3．282,P=0．002）,治疗后患者PSQI总分下降（r=2．371,P=0．007）;患者组治疗前、治疗后和正常对照组血浆MT水平分别为（45．81±13．23）pg／ml、（49．01±16．53）pg／ml和（54．86±18．35）pg／ml,组间比较有差异显著意义（F=5．004．P=0．009）,治疗前明显低于正常对照组和治疗后MT水平;治疗前MT水平与PSQI总分、睡眠质量因子分、入睡时间因子分分剐呈负相关关系（P〈0．05或P〈0．01）。结论酸枣仁汤治疗失眠有明显的疗效,其作用机制可能与MT水平调节有关。     

帕金森病扩大的血管周围间隙增加及类淋巴系统功能障碍的机制研究北大核心CSCD

目的 评估帕金森病(Parkinson disease,PD)患者扩大血管周围间腔数量,并通过动物实验研究其可能的机制。方法 临床研究部分:纳入30例帕金森病患者和35名健康对照参与研究,通过MRI对扩大的血管周围间隙(enlarged perivascular spaces,EPVS)进行显像并计数。动物实验部分:将90只C57BL/6J小鼠随机分成对照组、模型组与实验组(每组n=30),模型组与实验组纹状体注射α-突触核蛋白预制纤维(α-synuclein preformed fibrils,α-syn PFFs)构建PD模型,实验组用舒尼替尼灌胃抑制脑膜淋巴管增生,采用免疫荧光检测脑膜中淋巴管内皮透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial receptor-1,LYVE-1)、大脑中水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)表达,量化伊文思蓝(Evans blue,EB)在脑实质的分布评估类淋巴功能,免疫组织化学染色检测脑内磷酸化α-syn(phosphorylated α-syn,pα-syn)表达。结果 临床研究中,PD患者脑内基底节区[10(7,12)vs. 7(5,9),P<0.001]及半卵圆中心[2(1,3)vs. 1(0,2),P<0.001] EPVS数量均多于健康对照。动物研究中:与对照组相比,造模4个月后模型组小鼠脑膜LYVE-1阳性区域面积减少[(8.36%±0.74%)vs.(11.12%±1.32%),P<0.01],类淋巴系统引流[(10.78%±0.02%)vs.(14.25%±0.01%),P<0.001]降低,清除功能降低[(8.02%±0.01%)vs.(5.46%±0.01%),P<0.001],伴随pα-syn的聚集及AQP4极性下降[(0.44±0.04)vs.(0.51±0.04),P<0.01];实验组小鼠脑膜LYVE-1阳性面积[(2.50%±0.54%)vs.(11.12%±1.32%),P<0.001]、类淋巴引流[(3.55%±0.01%)vs.(14.25%±0.01%),P<0.001]、清除功能[(15.31%±0.01%)vs.(5.46%±0.01%),P<0.001]进一步受损,AQP4极性明显降低[(0.28±0.02)vs.(0.51±0.04),P<0.001],皮层[(8.12%±0.38%) vs.(2.85%±0.43%),P<0.001]、纹状体[(7.84%±0.32%) vs.(3.62%±0.31%),P<0.001]及黑质[(8.71%±0.34%)vs.(2.38%±0.15%),P<0.001] α-syn表达量均较模型组增加,差异均具有统计学意义。结论 PD患者EPVS数目增多提示类淋巴系统功能障碍,这可能是脑膜淋巴管受损通过介导病理性α-syn沉积破坏AQP4极性引起的。