视网膜铺片小胶质细胞2种染色计数方法的比较

目的 比较2种视神经损伤后行视网膜铺片小胶质细胞染色计数方法的准确性.方法 取Long Evans大鼠6只,荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs),7d后制作视神经钳夹伤模型.钳夹伤后2周麻醉处死大鼠,将大鼠灌注固定后取眼球剥离完整视网膜,置于4％多聚甲醛中后固定2h,3只大鼠行视网膜铺片对荧光金标记的小胶质细胞进行计数,其余3只在视网膜固定后运用CD11b单克隆抗体免疫组化双重标记小胶质细胞后再行铺片计数.结果 视神经损伤后,活化的小胶质细胞吞噬了死亡RGCs碎屑而被荧光金着色,联合小胶质细胞免疫组化的染色方法能够更加清楚地在视网膜铺片上分辨出活化的小胶质细胞和存活的RGCs,荧光金标记与双重标记小胶质细胞的计数分别为(240.0±7.9)、(406.0±9.1)个/mm2.结论 运用荧光金联合免疫组化双重标记小胶质细胞能够较为准确地对视神经损伤后活化的小胶质细胞进行计数,是研究小胶质细胞更准确有效的染色方法.     

荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的实验研究

目的建立荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的方法。方法选取出生1 d的SD大鼠乳鼠,腹腔注射水合氯醛麻醉后,剪开头部皮肤,向双侧上丘各注射4%荧光金注射液1μl,缝合皮肤,4 d后处死,提取视网膜,胰酶消化后培养,显微镜下观察被标记的视网膜神经节细胞。结果混合培养的视网膜细胞中,可见被荧光金标记的视网膜神经节细胞,大约占细胞总数的0.34%,视网膜神经节细胞可存活3周。结论荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞是一种可行的方法,可用于视网膜神经节细胞的鉴定。     

DiI染色方法观察视网膜神经节细胞形态

目的 寻求一种简单易行的观察视网膜神经节细胞形态学的染色方法.方法 取30 d(P30)Long Even's大鼠6只,雌雄不限,麻醉处死,取眼球后剥离完整视网膜,置于4%多聚甲醛溶液中固定12 h,取固定好的视网膜行全视网膜铺片后DiI荧光染色,将视网膜再次置于4%多聚甲醛溶液中避光37 ℃固定,6 d后观察神经节细胞形态.结果 染色可见神经节细胞胞体清晰,树突及轴突均匀着色,形态清晰.结论 视网膜铺片行DiI染色可以较好的观察神经节细胞形态.     

荧光标记法检测神经节细胞轴突再生

目的：检测神经节细胞轴突在坐骨神经移植到视网膜后的再生。方法：荧光染料粒兰施于移植坐骨神经逆行荧光标记后，在荧光显微镜下观察视网膜神经节细胞。结果：在移植坐骨神经的诱导下，视网膜神经节细胞受损的轴突可以再生长入到该移植段内。结论：荧光标记法对检测神经再生，是一种有价值的方法     

共聚物-1对高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:观察共聚物-1(COP-1)对高眼压(EIOP)模型SD大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响.方法:(1)将SD大鼠随机分为空白对照组、安慰剂注射EIOP组和COP-1注射EIOP组.应用大鼠眼前房注入甲基纤维素的方法制作大鼠的EIOP模型.(2) COP-1注射EIOP组动物的后足皮下注射COP-1,安慰剂注射EIOP组动物注射生理盐水,空白对照组动物不做任何处理.(3)在手术显微镜下充分暴露视神经眶内段,以显微剪剪断视神经,眶侧断端留置荧光金海绵.利用荧光金逆行示踪技术检测各组视网膜神经节细胞.(4)在荧光显微镜下,划定样本区,计数每张视网膜铺片中视网膜神经节细胞的平均密度.结果:安慰剂组、COP-1组RGC平均密度均小于对照组(P＜0.05);安慰剂组的RGC平均密度较COP-1组显著减少(P＜0.05).结论:COP-1对EIOP状态下RGC具有保护作用.     

激肽释放酶结合蛋白对大鼠视神经不完全损伤后视网膜神经细胞的保护作用及轴突再生的研究

目的 探讨激肽释放酶结合蛋白(KBP)是否对体内视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存在保护和促进其轴突再生的作用.方法 在距SD大鼠视神经球侧端0.5～1.0mm的地方夹持视神经,造成大鼠视神经不完全性损伤;在大鼠视神经损伤的模型中,行玻璃体腔分别注入KBP作为实验组和PBS为对照组;分别于损伤后7d,14d和21d取材,HE染色观察视网膜结构、测量视网膜厚度及RGCs的存活数量;提取术眼视神经行蛋白免疫印迹.根据统计学分析结果,明确KBP是否有视网膜神经节细胞保护和促进其轴突再生作用.结果 ①大鼠不完全视神经损伤模型建立成功.②通过HE染色,我们观察了视网膜各层结构变化,通过双肓法计数RGCs,和视网膜厚度测量,经统计学分析,组间差异具有统计学意义.③对神经再生的标记蛋白GAP-43进行Western-blot,统计学分析,组间GAP-43表达差异具有统计学意义.结论 ①KBP对视神经损伤后的RGCs具有保护作用.②KBP在视神经损伤后可能促进了视神经的轴突再生.     

高功率微波致视网膜神经节细胞损伤的研究

目的观察2450 MHz微波对视网膜神经节细胞的损伤作用，为视网膜损伤的研究提供一定的实验依据。方法体外培养鼠视网膜神经节细胞，微波理疗机于微波屏蔽室内按微波强度分3组进行微波辐射1h，光镜下观察其形态变化，测细胞存活率。结果微波辐照后，光镜下细胞即有聚集现象，部分细胞轴突消失，个别细胞凋亡，改变随着微波强度而增加。结论2450 MHz微波可诱导视网膜神经节细胞凋亡，损伤程度与微波辐射强度呈正相关。     

地塞米松对兔视神经钳夹伤治疗作用的实验研究

目的：观察地塞米松对家兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活的影响及损伤视神经、视网膜Nogo-A表达的变化。方法：建立兔球后视神经钳夹伤模型，将健康成年家兔分为正常对照组、损伤组、治疗组。分别于损伤后3、7、14d天处死动物，观察单位面积视网膜神经节细胞存活数量及损伤后Nogo-A在视神经与视网膜中的表达变化。结果：视神经损伤后，治疗组视网膜神经节细胞的存活数量高于损伤组及对照组（P〈0.01）；对照组及损伤组损伤后3、7、14d视神经与视网膜中Nogo-A表达增强，至损伤后7d达高峰；治疗组视神经与视网膜Nogo-A表达亦增强，各时间点均弱于损伤组、对照组，差异有非常显著性（P〈0.01）。结论：视神经损伤后，地塞米松能够增加视网膜神经节细胞的存活数量，并下调Nogo基因的表达，这可能是地塞米松的药理作用机制之一。     

睫状神经营养因子对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的:探讨玻璃体腔内注射外源性睫状神经营养因子(CNTF)是否对大鼠视神经中度不全损伤视网膜神经节细胞(RGCs)具有保护作用。方法:采用无创血管钳对成年大鼠造成视神经中度不全损伤,实验组伤后即时1、2、4周分别向玻璃体腔内注射CNTF溶液2μl;同实验组操作,对照组在每个时间点向玻璃体腔内注射2μl双蒸水。在伤后1、2、4、8周时分别做生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)免疫组织化学检测和光镜的组织学观察。结果:①伤后1周对照组和实验组视网膜均有水肿,RGCs肿胀。伤后2周2组视网膜神经节细胞层(GCL)均变稀疏,实验组水肿明显减轻。伤后4周水肿消退,GCL层细胞数明显下降。8周实验组视网膜厚度正常,对照组各层变薄。②伤后1周对照组和实验组GAP-43在GCL层表达呈阳性。伤后2、4、8周GAP-43在GCL层表达至高峰。实验组明显强于对照组(P<0.01)。结论:CNTF对大鼠视神经损伤后RGCs具有明显的保护作用。     

糖尿病大鼠视网膜超微结构的改变

目的:观察7个月病程的糖尿病大鼠视网膜毛细血管及视网膜神经节细胞的组织病理学改变.方法:链脲佐菌素诱导实验性糖尿病大鼠模型,在模型建立7个月后摘取大鼠眼球,制作视网膜病理切片和视网膜消化铺片,在光镜和透射电镜下观察视网膜毛细血管及视网膜神经节细胞的形态改变.结果:光镜下大鼠视网膜各层组织排列极度紊乱,毛细血管极度扩张,周细胞核固缩,内皮细胞增生,出现无细胞毛细血管、影周细胞及内皮细胞凋亡等糖尿病视网膜病变的特征性改变,视网膜神经纤维层明显水肿.神经节细胞数目减少,胞核固缩,染色质边缘聚集,内外颗粒层排列紊乱.电镜下视网膜毛细血管内皮细胞明显肿胀,胞体变圆,突向管腔,线粒体肿胀,空泡化,基底膜增厚,视网膜神经节细胞胞体变形,核明显同缩,核膜消失,胞浆空泡化,线粒体肿胀,细胞表面突起减少,多聚核糖体及粗面内质网显著减少.结论:糖尿病大鼠在视网膜微血管病变的同时,视网膜神经节细胞也发生损害.     

Protective Effect of Paeoniflorin against Optic Nerve Crush

In order to evaluate the efficacy of traditional paeonia extract paeoniflorin against optic nerve crush, 16 Brown Norway rats were divided into two groups at random, with 8 rats in each group. In paeoniaflorin-treated group, 2 mg paeoniaflorin （total volum： 1 mL） was injected into rat＇s peritoneum one time a day for a period of 8 days. Rats in untreated group were given a single dose of vehicle. The optic nerve was crushed by a special forceps for 30 s in the left eye and a sham procedure was performed in the right eye on the 2nd day after the first injection. The retrograde fluorogold labeling of ganglion cells was conducted 5 days after optic nerve crush. The whole retina was flat-mounted thereafter. The ganglion cells that survived the crush were counted under fluorescent microscope by using an automatic counting software. As compared with the contralateral eye, the survival rate of ganglion cells in the left eye increased from 40.22% to 64.53% with a significant difference found between them （t=2.55, P=0.023）. The results suggested that the paeonia extract paeoniflorin possessed a protective effect against optic nerve crush.     

Protective effect of paeoniflorin against optic nerve crush

Summary In order to evaluate the efficacy of traditional paeonia extract paeoniflorin against optic nerve crush, 16 Brown Norway rats were divided into two groups at random, with 8 rats in each group. In paeoniaflorin-treated group, 2 mg paeoniaflorin (total volum: 1 mL) was injected into rat’s peritoneum one time a day for a period of 8 days. Rats in untreated group were given a single dose of vehicle. The optic nerve was crushed by a special forceps for 30 s in the left eye and a sham procedure was performed in the right eye on the 2nd day after the first injection. The retrograde fluorogold labeling of ganglion cells was conducted 5 days after optic nerve crush. The whole retina was flat-mounted thereafter. The ganglion cells that survived the crush were counted under fluorescent microscope by using an automatic counting software. As compared with the contralateral eye, the survival rate of ganglion cells in the left eye increased from 40.22% to 64.53% with a significant difference found between them (t=2.55, P=0.023). The results suggested that the paeonia extract paeoniflorin possessed a protective effect against optic nerve crush. This project was supported by the Natural Sciences Foundation of Hubei Province (No. 2007ABA135).     

睫状神经生长因子对视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的研究睫状神经营养因子(CNTF)对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响。方法取雌性SD大鼠36只,随机分为两组,每组各18只。麻醉后于眶内距视神经根部1.5 mm处切断左侧视神经,眶侧残端留置浸有荧光金的明胶海绵以逆行标记RGC。术前30 min及术后每天腹腔注射CNTF和生理盐水(对照组),分别于术后2 d、7 d及14 d各处死6只大鼠。动物处死后,将视网膜平铺,计数每只动物荧光金标记的存活RGC并得出存活RGC的平均密度。比较各组RGC密度。结果睫状神经营养因子(CNTF)组视神经切断后7 d RGC平均密度为1 727 mm±71 mm,显著高于同一时间点对照组RGC密度1 086 mm±91 mm。结论睫状神经营养因子(CNTF)在大鼠视神经切断后7 d,可促进RGC的存活。     

荧光金逆行追踪法研究大鼠屏状核的传入投射纤维联系

目的研究荧光金（FG）逆行追踪法研究大鼠屏状核的传入神经纤维联系。方法健康成年SD大鼠20只,通过立体定位,插入吸有荧光金的微玻管,用微电流将荧光金导入屏状核以追踪传入神经元的分布。结果在大脑嗅球、前嗅核、躯体感觉皮质、运动皮质、额叶联络皮质、眶外侧、内侧皮质及扣带皮质、边缘皮质、丘脑、岛叶皮质等区域发现有阳性标记FG细胞。结论屏状核与大脑各部有广泛的纤维联系,接受来自嗅球、大脑皮质、丘脑及边缘系统等处的神经纤维传入。     

神经生长因子对兔视神经挫伤修复的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对成年兔视神经(ON)挫伤后修复的影响。方法:通过逐级暴露钝性分离钳夹视神经法建立兔视神经挫伤模型,并向玻璃体腔内注入NGF-β1μg(右眼,治疗组),或磷酸盐缓冲液(PBS)0.1m l(左眼,对照组)。挫伤后2周、4周时分别用光镜、电镜和TUNEL技术观察视网膜神经节细胞(RGC s)、视网膜神经纤维层和视神经的改变并作视神经纤维计数。结果:兔视神经挫伤可使RGC s数量减少,表现出细胞坏死、凋亡的特征。视神经病理改变主要是轴突较正常稀疏,部分轴突明显肿胀、空泡变性,轴突与髓鞘间有腔隙形成,髓鞘结构紊乱,出现板层分离。NGF治疗组与对照组相比,前者RGC s、视神经纤维的退变较轻,数量较多,神经纤维有再生现象。同时发现治疗组4周比2周的神经纤维计数明显减少。结论:NGF能够在一定程度上防止轴突的变性坏死,从而阻断因轴突变性而激发RGC s死亡,并促进视神经纤维的再生。     

大鼠端脑内核团向黑质的传入纤维联系

目的 研究大鼠端脑内核团向黑质的传入纤维联系。方法 应用荧光金（nuorogold,FG）逆行标记法技术将FG泳入一侧黑质,观察双侧端脑内的FG标记细胞分布。结果在泳入区同侧的额叶、颞叶、顶叶、岛叶、伏謦、终纹床核、杏仁中央核、隔核、尾壳核、苍白球、腹侧苍白球、脚内核见到FG逆行标记细胞。结论 大鼠端脑内存在丰富核团向黑质投射。     

血小板源性生长因子B在损伤周围神经再生中的作用

目的：观察血小板源性生长因子B（PDGF-B）在损伤大鼠坐骨神经中的表达,旨在阐明其在末梢神经再生中的作用。 方法：分别构建大鼠坐骨神经切割伤和碾压伤模型,应用免疫组织化学S-P法检测PDGF-B的表达。结果：两类损伤模型中,损伤近端神经和再生轴突PDGF-B的表达均增强。两类损伤模型均可见损伤神经远端的雪旺氏细胞PDGF-B表达量明显增加,在碾压伤模型中,随着轴突-雪旺氏细胞关系的恢复,PDGF-B表达水平下降,并最终恢复正常;在切割伤模型中,二者关系不能恢复,PDGF-B减至极低水平。 结论：坐骨神经损伤后PDGF-B的表达增强在末梢神经再生中发挥重要作用。     

荧光金逆行标记评价视神经切断后视网膜节细胞存活率

目的：利用荧光金逆行标记评价视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）的存活率。方法：将SD大鼠20只随机均分为4组，正常对照组和视神经切断后5d、7d和1dd组。用荧光金逆行标记和定量解剖学技术观察正常对照组和视神经切断后5d、7d和14d组RGCs的密度。结果：正常对照组RGCs呈放射状分布，边界清晰，可见明显细胞突起，无渗漏现象；视神经切断组RGCs随时间延长而减少，细胞分布不均匀，并且可见吞噬死亡细胞碎片和从死亡细胞渗漏的荧光金的小胶质细胞。正常对照组左眼与右眼RGCs密度差异无统计学意义（P〉0．05）；视神经切断后RGCs进行性减少，切断后5d、7d和14d组左眼RGCs密度均明显低于正常对照组（P〈0．01），视神经切断后5d、7d和14d存活率分别为53％、38％和13％。结论：荧光金逆行标记是评价视神经切断后RGCs存活率有效的方法。     

豚鼠耳蜗血管交感神经支配的逆行追踪与免疫组化相结合的双标

目的:研究豚鼠耳蜗螺旋蜗轴动脉接受交感神经支配的具体来源情况及与该交感神经纤维调节功能相关的神经递质. 方法:在正常豚鼠单侧耳蜗螺旋蜗轴动脉局部滴加逆行追踪剂辣根过氧化物酶(HRP)或荧光金(FG),观察双侧交感颈上神经节、星状神经节内HRP或FG逆标神经元的分布;采用逆标与免疫组化相结合的双重标记方法观察追踪阳性神经元是否表达酪氨酸羟化酶(TH)、神经肽Y(NPY)、钙基因相关肽(CGRP)或P物质(SP). 结果:同侧颈上神经节内可见逆行追踪阳性神经元胞体,对侧颈上及双侧星状神经节内却未见阳性细胞;阳性神经元多同时呈TH, NPY阳性,但未见CGRP或SP双标的阳性神经元. 结论:豚鼠颈上神经节内存在TH及NPY阳性神经元支配同侧耳蜗血管,去甲肾上腺素和神经肽Y可能是交感神经节后纤维调节耳蜗血流的递质或调质.     

Effect of the artificial somato-autonomic neuroanastomosis on defecation after spinal cord injury and its underlying mechanisms

A new artificial somatic-autonomic neuroanastomosis has been established in male rats with spinal cord injury (SCI). Anorectal manometry and neural retrograde tracing were conducted in this animal model to analyze the mechanisms and the effects on recovery of anorectal function. The left L4 ventral root (L4VR) was intradurally micro-anastomosed to the L6 ventral root (L6VR) to establish the new regenerated neural pathway. Three months later the spinal cord was completely transected at the T9-10 level. Eight...