SOCS1siRNA和IL-12基因共同修饰树突状细胞体外抗喉癌的免疫反应

目的:探讨腺病毒负载SOCS1siRNA和IL-12基因共同修饰人喉癌细胞(Hep-2)抗原致敏的树突状细胞(DC)在体外诱导﹑激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫杀伤Hep-2的效能及相关免疫机制。方法:采用重组腺病毒介导SOCS1siRNA基因和重组腺病毒介导IL-12基因共同修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的DC;采用反复冻融法提取Hep-2粗体抗原(Ag)致敏的基因修饰的DC;用ELISA法检测各组DC及CTL分泌IL-12和IFN-γ的水平;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖能力及CTL免疫杀伤Hep-2的效能;统计学分析各组间的差异。结果:DC体外诱导培养成功,Ad-GFP转染可见荧光表达率在90%以上。经SOCS1siRNA和IL-12基因共同修饰能有效下调DC中SOCS1蛋白的表达和上调IL-12蛋白的表达。IL-12因子的分泌率也明显高于SOCS1siRNA或IL-12的单基因转染,并能促使T细胞显著增殖和活化。DC和CTL持续高分泌IFN-γ,因此产生对Hep-2的特异性细胞免疫。结论:SOCS1siRNA和IL-12基因共同修饰喉癌抗原致敏的DC分泌的IL-12和IFN-γ的能力增强。双基因共同修饰喉癌抗原致敏的DC与T细胞混合反应能有效的促进T细胞增殖,促进其分泌IFN-γ和IL-12,从而诱导CTL更强的特异性杀伤喉癌细胞的能力。     

鼻咽癌可溶性抗原负载DC诱导CTL杀伤鼻咽癌细胞的体外研究

目的用负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的树突状细胞(dendritic cells, DC)诱导自身淋巴细胞,使之活化为鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL),观察其对鼻咽癌细胞的体外特异性杀伤作用. 方法用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康成人外周血单核细胞,使其分化为高纯度DC.用鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原负载成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征,MLR检测负载前后DC对同种异体T淋巴细胞增殖的能力.在白细胞介素-2(IL-2)的作用下,用负载鼻咽癌细胞可溶性抗原的DC诱导自身淋巴细胞成NPC特异性CTL,通过杀伤活性实验观察它对鼻咽癌细胞(CNE)的特异性杀伤效应. 结果人外周血单核细胞体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得具典型表型特征的成熟DC.负载CNE可溶性抗原对成熟DC表面共刺激分子及特异性表面标志无影响,仍有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,所诱导的CTL对鼻咽癌细胞(CNE)有明显的特异性杀伤作用.结论负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,对NPC的临床治疗有潜在的应用价值.     

RNA干扰DJ-1基因抑制喉癌细胞的增殖

目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制喉癌Hep-2细胞DJ-1基因的表达及观察其细胞效应.方法 设计合成3对特异性针对人DJ-1基因的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染Hep-2细胞,实验分为4组:瞬时转染非特异性siRNA对照组及转染特异性siRNA 3组(siRNA1、siRNA2、siRNA3).采用RT-PCR检测DJ-1 mRNA,蛋白免疫印迹法检测DJ-1蛋白,流式细胞仪检测细胞凋亡及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测特异性siRNA1组对Hep-2细胞效应.结果 本实验设计合成的3对特异性siRNA均不同程度地抑制DJ-1基因表达,其中特异性siRNA1组抑制效果最佳.M1Tr比色法结果显示特异性siRNAl组(终浓度50 nmo~L、100 nmolZL)对Hep-2细胞增殖具有抑制作用.流式细胞仪检测结果最示特异性siRNA1组能诱导Hep-2细胞凋亡,转染特异性siRNA1组凋亡率为(15.7±4.8)%,非特异性siRNA对照组凋亡率为(4.5±0.4)%,非特异性siRNA对照组与特异性siRNA1组凋亡率比较差异有统计学意义(t=4.736,P<0.01).结论 转染特异性siRNA组能有效抑制Hep-2细胞增殖,诱导Hep-2细胞凋亡.     

Bmi-1基因RNAi对喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对喉癌细胞Hep-2增殖、侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL2GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1。实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后喉癌细胞中Bmi-1mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验及小室侵袭实验检测喉癌细胞增殖和侵袭能力的变化。结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后Hep-2细胞Bmi-1mRNA表达均明显下降,Hep-2细胞中Bmi-1蛋白表达明显下降。抑制率分别为79%及88%。Bmi-1干扰后Hep-2细胞增殖减慢、侵袭能力减弱。结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1mRNA和蛋白在喉癌细胞Hep-2中的表达。Bmi-1基因的RNAi能抑制喉癌细胞Hep-2的增殖和侵袭能力。     

肺腺癌转移相关转录本-1沉默对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的　探讨RNA干扰技术（RNAi）沉默肺腺癌转移相关转录本-1（MALAT-1）基因对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路影响。方法  体外培养人喉癌细胞Hep-2、正常永生化表皮细胞Hacat,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中MALAT-1mRNA表达水平。采用RNAi技术将MALAT-1阴性对照质粒、si-MALAT1分别转染至Hep-2细胞,命名为si-NC组、si-MALAT1组,未处理组作为空白对照组,分别检测三组Hep-2细胞中MALAT-1及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bax、caspase-3 mRNA表达水平、Bcl-2、Bax、caspase-3、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）及其磷酸化蛋白（p-PI3K）、Akt及其磷酸化蛋白（p-Akt）蛋白表达情况以及细胞增殖及凋亡情况。结果　与正常细胞相比,喉癌Hep-2细胞中MALAT-1 mRNA表达水平（3.24±1.02）升高（P＜0.05）;与空白对照组、si-NC组相比,si-MALAT-1组Hep-2细胞中MALAT-1 mRNA表达水平（0.47±0.08）及Bcl-2 mRNA（0.56±0.09）及蛋白（0.31±0.05）表达降低,细胞增殖抑制率及凋亡率[（20.48±3.41）%]均升高,Bax、caspase-3mRNA（3.02±0.50、2.58±0.43）及蛋白表达（0.86±0.14、0.94±0.16）均升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达（0.57±0.10、0.51±0.08）均降低（P 均＜0.05）。结论　MALAT-1沉默可抑制人喉癌细胞系Hep-2细胞增殖并提高其凋亡率,推测可能通过影响Akt信号通路诱导癌细胞凋亡。     

EGFL7基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制

目的:构建类表皮生长因子域7(EGFL7)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌体外侵袭的抑制作用。方法:筛选确定的EGFL7基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的pLV载体连接产生LV-sh EGFL7慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Western blot法检测喉癌细胞EGFL7蛋白表达。Boyden侵袭小室法实验观察转导shRNA后的喉癌细胞侵袭能力的变化。利用克隆形成实验检测EGFL7基因沉默对Hep-2细胞集落形成能力的影响。结果:成功构建EGFL7的慢病毒载体LV-sh EGFL7,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×108 TU/L。转导siRNA的喉癌细胞EGFL7蛋白表达阴性。EGFL7siRNA转导后喉癌胞体外侵袭能力下降。EGFL7基因沉默组细胞克隆集落形成率与Hep-2组细胞及空载体组细胞比较,细胞克隆集落形成率显著减低。结论:成功构建人EGFL7基因RNAi慢病毒载体,EGFL7基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用。沉默EGFL7后,Hep-2细胞集落形成能力显著减低,...     

RNA干扰技术沉默上皮型钙黏蛋白表达对体外培养的喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的　通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术沉默喉癌He p - 2 细胞上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,探讨E-cadherin对Hep-2细胞增殖能力的影响。方法　设计、合成特异性小干扰RNA（siRNA）和无基因沉默功能的阴性siRNA转染Hep-2细胞,获得下调E-cadherin基因表达的体外培养的Hep-2细胞;荧光定量PCR检测E-cadherin基因的沉默效果;体外细胞增殖实验（MTT）检测Hep-2细胞体外增殖能力的变化。结果　①重组质粒和脂质体质量体积按1：1转染时,转染效率最高组siRNA-3达65%。②荧光定量PCR：重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-siRNA1、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA2、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA3使E-cadherin mRNA的表达下调。以空白对照组为基准（设为1）,E-cadherin相对于β-actin的改变倍数siRNA-1组=0.00092,siRNA-2组=0.00143,siRNA-3组=0.00045,阴性对照组=3.44898,差异有统计学意义。③MTT：经特异性siRNA处理的Hep-2细胞生长速度较对照组增快,差异有统计学意义。结论　有效抑制Hep-2细胞E-cadherin mRNA的表达使Hep-2细胞的增殖能力增强。     

质粒载体介导CD基因对喉癌细胞的杀伤作用研究

目的构建含酵母菌自杀基因CD的质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,并利用该载体进行喉癌Hep-2细胞株转染研究,体外实验观察前体药物5-FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep-2细胞株的杀伤作用.方法通过RT-PCR从酵母菌RNA内扩增出CD基因全长CDS序列,将其定向克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV中,重组体质粒经XhoI/HindⅢ双酶切鉴定,并对重组体中的CD基因片段进行序列分析,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD运用电穿孔法转入喉癌Hep-2细胞中.经300～600 μg/mlG418正筛选14 d和10 μg/ml前体药物5-FC负筛选,获得稳定表达CD基因的喉癌Hep-2细胞株,提取该细胞株细胞的总RNA,经RT-PCR鉴定CD基因的表达.MTT法观察不同浓度5-FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep-2细胞及转染空白载体pcDNA3.1(-)CMV的对照组喉癌Hep-2细胞的杀伤作用.结果阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD经XhoI/HindⅢ双酶切后获得5353 bp的片段及496 bp的插入片段,DNA自动序列分析证明重组体质粒含完整的477 bp长的CD基因CDS序列.RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出453 bp的预期片段.当添加不同浓度的5-FC时,表达CD基因的Hep-2细胞不同程度地被杀死,而对照组的细胞几乎未受到影响,两组细胞的相对生存率具有显著差异性(P<0.05).结论成功构建了质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,建立了稳定表达酵母菌CD基因的喉癌表达CD基因的Hep-2细胞株,表达CD基因的Hep-2细胞可以被5-FC杀死.     

微小RNA-106a-5p/E2F3/β-catenin轴增加NK细胞对喉癌细胞的杀伤作用

目的　分析微小RNA-106a-5p（miR-106a-5p）/E2F3/β-catenin轴对喉癌细胞恶性发展的影响及其可能的作用机制。方法　通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测喉癌组织和癌旁组织中miR-106a-5p和E2F3的基因表达量。生物信息学软件及其双荧光素酶实验检测miR-106a-5p和E2F3之间的关系。下调miR-106a-5p和E2F3表达,CCK-8试剂盒检测喉癌Hep-2细胞的增殖能力,Western blot实验检测Hep-2细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）能力,检测NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测γ干扰素（interferon-γ,IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的分泌。estern blot分析miR-106a-5p通过E2F3对β-catenin通路的影响。进一步检测抑制β-catenin通路对Hep-2细胞恶性发展及NK细胞杀伤作用的影响。结果　喉癌组织中miR-106a-5p表达（0.62±0.08）低于癌旁组织（1.53±0.24）,E2F3表达（2.65±0.86）高于癌旁组织（1.48±0.74）。miR-106a-5p与E2F3特异性结合。下调miR-106a-5p促进Hep-2细胞增殖和EMT,抑制NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性,而下调E2F3表达抑制Hep-2细胞增殖和EMT,上调NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性。下调miR-106a-5p通过E2F3激活β-catenin通路。XAV939干扰β-catenin通路后显著逆转了下调miR-106a-5p通对Hep-2细胞恶性发展以及NK细胞杀伤作用的影响。结论 miR-106a-5p靶向E2F3激活β-catenin通路调控喉癌细胞的恶性发展。     

siRNA下调β-catenin基因对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响CSCD

目的应用siRNA干扰β-catenin基因在喉癌Hep-2细胞中的表达,探讨下调β-catenin基因后对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 RNA干扰技术干扰喉癌Hep-2细胞β-catenin基因的表达,实时荧光定量PCR和Western-blot方法进行干扰效果鉴定;采用MTT法检测细胞增殖能力、流式细胞仪AnnexinPI法检测细胞凋亡率、transwell法观察细胞的迁移侵袭能力。结果实时荧光定量PCR检测表明β-catenin-siRNA干扰组mRNA相对表达量较空白对照组下降达70%,Western blot结果显示干扰组β-catenin蛋白相对表达量为(0.545±0.111),较空白对照组(1.507±0.139)和阴性对照组(1.429±0.089)明显下降(F=21.859,P<0.05)。细胞增殖实验证实靶向干扰β-catenin表达导致喉癌细胞增殖明显受抑制。流式细胞仪AnnexinPI法检测说明,β-catenin-siRNA干扰组凋亡率(18.80±0.81)%与空白对照组(8.6±0.68)%和阴性对照组(9.03±0.26)%相比明显增加(F=253.93,P<0.01)。Transwell侵袭实验表明β-catenin-siRNA干扰组穿过Matrigel到达下室的平均细胞数较空白对照组和阴性对照组均明显减少(F=136.20,P<0.01)。结论干扰β-catenin基因在喉癌Hep-2中的表达可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,促进喉癌Hep-2细胞的凋亡。     

树突状细胞表型抗原在喉咽癌颈部淋巴结中的表达

目的：探讨喉咽癌颈部淋巴结中树突状细胞（Dc）表型抗原的表达与喉咽癌转移及预后的关系。方法：对37例喉咽癌144枚淋巴结DC的表型抗原S-100、CD1a、CD83的表达用Envision HIS的方法检测,并观察CD45RO^＋T细胞与DC的关系。结果：S-100^＋DC、CD1a^＋DC、CD83^＋DC在转移组淋巴结中的数目较非转移组淋巴结中减少,差异有统计学意义。CD83^＋DC在转移淋巴结的癌巢中的数目较癌旁中的少,差异有统计学意义。在生存组淋巴结中的浸润数目较死亡组多,差异有统计学意义。CD45RO^＋T细胞主要分布在CD83^＋DC的周围。结论：表达不同表型抗原的DC具有不同的功能,CD83^＋DCs被认为是成熟DC分布在癌旁与其激活T细胞的抗原提呈功能有关,对于肿瘤免疫防御机制的建立起着重要作用。DC在淋巴结中的浸润程度及表型抗原的表达情况是反映宿主肿瘤免疫状况的重要指标,也是预测喉咽癌转移和预后的一项重要指标。     

喉咽癌树突状细胞表型抗原表达

目的对喉咽癌中树突状细胞(Dendriticcells,DCs)的表型抗原的表达进行研究,探讨DC表型抗原的表达与喉咽癌各临床因素尤其是转移和预后的关系。方法对45例喉咽癌标本,用EnvisionHIS的方法检测DC的表型抗原S-100、CD1a、CD83的表达,并观察CD45RO T细胞与DC的关系。结果S-100 DCs在高分化组以及生存组中的数目明显多于中低分化组及死亡组,具有显著性差异。CD83 DCs的表达与喉咽癌的分化程度、远处转移、生存以及是否复发有关,差异具有显著性;CD83 DCs在癌巢中的数目较癌旁中的少,差异具有显著性。CD1a DCs的表达与喉咽癌的各临床因素间未发现明显相关性。CD45RO T细胞主要分布在CD83 DCs的周围。结论表达不同表型抗原的DC具有不同的功能,CD83 DCs被认为是成熟DC分布在癌旁与其激活T细胞的抗原提呈功能有关,对于肿瘤免疫防御机制的建立起着重要作用。DC在喉咽癌中的浸润程度及表型抗原的表达情况是反映宿主肿瘤免疫状况的重要指标,也是预测喉咽癌转移和预后的一项重要指标。     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

自杀基因质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD的构建及进行喉癌Hep-2细胞株转染研究

目的:构建含酵母菌自杀基因CD的质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,并利用该载体进行喉癌Hep2细胞株转染研究,体外实验观察前体药物5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株的杀伤作用。方法:通过RTPCR从酵母菌RNA内扩增出CD基因全长CDS序列,将其定向克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV中,重组体质粒经XhoI/HindⅢ双酶切鉴定,并对重组体中的CD基因片段进行序列分析,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD运用电穿孔法转入喉癌Hep2细胞中。经300～600mg/LG418正筛选14d和10mg/L前体药物5FC负筛选,获得稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株,提取该细胞株细胞的总RNA,经RTPCR鉴定CD基因的表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察不同浓度5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞及转染空白载体pcDNA3.1(-)CMV的对照组喉癌Hep2细胞的杀伤作用。结果:阳性重组质粒pcDNA3.1(-)CMV.CD经XhoI/HindⅢ双酶切后获得5353bp的片段及496bp的插入片段,DNA自动序列分析证明重组体质粒含完整的477bp长的CD基因CDS序列。RTPCR从转染细胞总RNA中扩出453bp的预期片段。当添加不同浓度的5FC时,表达CD基因的Hep2细胞不同程度地被杀死,而对照组的细胞几乎未受到影响,两组细胞的相对生存率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CD,建立了稳定表达酵母菌CD基因的喉癌Hep2细胞株,表达CD基因的Hep2细胞可以被5FC杀死。     

Anti-tumor immunity against nasopharyngeal carcinoma by means of LMP2A-specific cytotoxic T lymphocytes induced by dendritic cells

OBJECTIVE: Adoptive immunotherapy with specific cytotoxicity T lymphocytes (CTLs) induced by dendritic cells (DCs) pulsed with tumor antigens plays a crucial role in the immunity against tumor. The purpose of this study was to assess the feasibility and efficacy of latent membrane protein 2A (LMP2A)-specific CTLs immunity against nasopharyngeal carcinoma (NPC) in vitro and in vivo. METHODS: DCs were generated by culturing the monocytes purified from human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in cytokine cocktail containing granulocyte/macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), interleukin-4 (IL-4), and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha). The phenotype of mature DCs was analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS). Mature DCs transfected with EBV-LMP2A recombinant adenovirus were co-cultured with autologous PBMCs to induce LMP2A-specific CTLs. The expression of the surface antigens such as CD3, CD4, CD8 and CD56 on CTLs were detected by FACS. The specific cytotoxicity of CTLs on target CNE cells expressing EBV-LMP2A was confirmed using cytotoxicity assay. The anti-tumor effect of LMP2A-specific CTLs in vivo was assessed in the mice tumor models implanted with CNE cells expressing EBV-LMP2A. RESULTS: Mature DCs expressed typically morphologic characteristics and high level of surface markers (CD1a, CD83, CD86, CD80 and HLA-DR). LMP2A-transfected DCs could induce LMP2A-specific CTLs consisting of a majority of CD4+ and CD8+ T cells. Cytotoxicity assay confirmed that the LMP2A-specific CTLs displayed significant cytotoxicity on target CNE cells compared with the controls. The study in vivo demonstrated that the treatment using these specific CTLs retarded the growth of established tumor in the treated mice. CONCLUSION: These findings suggest that DCs transfected with EBV-LMP2A recombinant adenovirus can elicit LMP2A-specific CTLs that have a specific killing effect on NPC in vitro and in vivo. The results provide experimental basis for the further immunotherapy of NPC in clinical trails.     

鼻咽癌患者外周血树突状细胞体外扩增及生物学特性的研究

目的：观察鼻咽癌（NPC）患者外周血单核细胞来源的树突状细胞（DC）的形态、表型和功能与健康者DC的差别。方法：从12例NPC患者（NPC组）和9例健康者（对照组）的外周血中分离和培养DC，观察DC的形态，用流式细胞仪检测DC的表型CD83、CD1a、CD86和HLA-DR，用4，二甲基噻唑2，5二苯基四唑溴化物（MTT）比色法检测DC诱导混合淋巴细胞反应（MLR）的能力。结果：对照组的DC形态较NPC组成熟，NPC组CD83、CD1a的表达率较对照组低，差异有统计学意义（均P〈0.05），但CD86、HLA-DR表达率2组差异无统计学意义（均P〉0.05）；NPC组CD83、CD1a、CD86和HLA-DR表达的平均荧光指数（MFI）均低于对照组，但差异无统计学意义（均P〉0.05）；对照组和NPC组外周血单核细胞均能诱导出DC，前者有较强的MLR诱导能力（P〈0.05），而后者能力低下（P〉0.05）。结论：NPC患者外周静脉血单核细胞来源的DC转化率较健康者低，且分化成熟能力也较低。