人α-防御素-1基因与J链基因的融合及其表达载体的构建

目的本研究旨在将α-防御素-1(HNP-1)基因与J链基因进行融合使其成为融合基因J-HNP-1。方法从pCH-J质粒中扩增出J链;从pBabeNeo-HNP-1质粒中扩增出HNP-1;然后以它们的自身产物为模板,进行重组PCR,获取J-HNP-1 DNA片段,并插入编码双重报告基因Myc和6个多聚组氨酸(His)的哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中,构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1。结果经过重组得到的融合基因J-HNP-1的目的片段为786 bp,与预测相符。结论杀菌分子J-HNP-1的重组和哺乳动物细胞表达载体的构建,为进一步进行抗菌肽的研究及制备奠定了基础。     

花色苷对THP-1细胞中ABCG1表达的影响及机制分析

目的研究花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(C3G)对人巨噬细胞THP-1中ABCG1表达的影响,并分析相关作用机制。方法以C3G干预培养诱导分化的THP-1细胞,荧光实时定量RT-PCR检测ATP结合盒式转运蛋白G1(ABCG1)以及其直接调节因子肝脏X受体α(liver X receptorα,LXRα)的mRNA表达,时间分辨荧光共振能量转移(time-resolved fluorescence resonance energy transfer,TR-FRET)方法检测C3G与LXRα配体结合域的结合能力。结果 100μmol/L C3G处理THP-1细胞16 h显著增加了ABCG1 mRNA的表达(为对照组的1.98倍,P<0.05);尽管在TR-FRET试验中,C3G并未呈现典型的配体结合曲线,而50μmol/L和100μmol/L C3G显著增加了THP-1细胞中LXRαmRNA的表达(分别为对照组的2.21倍和2.83倍,P<0.05)。结论 C3G促进了ABCG1表达,该机制可能通过增加核受体LXRαmRNA表达来实现。     

前列腺癌组织中Survivin和HIF-1α的表达及临床意义

目的通过检测前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和前列腺癌(prostatic cancer,PCa)组织中生存素(Survivin)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducod factor-1α,HIF-1α)的表达情况,分析Survivin和HIF-1α表达与前列腺癌组织Gleason评分、肿瘤转移的关系及二者间的相互关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测60例PCa和40例BPH组织中Survivin及HIF-1α表达情况,并分析两者与前列腺癌临床病理特征的关系及其两者之间的相关性。计数资料比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman等级相关分析,P0.05为差异有统计学意义。结果 PCa组织中Survivin及HIF-1α的表达情况分别为81.7%和76.6%,二者与BPH组织相比,差异均有统计学意义(均P0.05)。PCa组织中Survivin和HIF-1α的表达均与Gleason分级、癌穿透被膜、骨转移及淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(均P0.05)。PCa组织中,Survivin与HIF-1α的阳性表达率呈显著正相关(P0.05)。结论 Survivin和HIF-1α的阳性率越高,PCa的恶性度越高,浸润越深。Survivin和HIF-1α相互作用共同参与PCa的发生、发展。     

PGRMC1在胎膜早破患者外周血中的表达及其与HBD-2、HIF-1α水平的相关性

目的探讨孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)在胎膜早破(preterm premature rupture of membranes,PPROM)患者外周血中的表达及其与人β2防御素(humanβdefensin 2,HBD-2)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)的相关性。方法选取113例PPROM患者为研究对象,根据胎盘胎膜病理检测结果将PPROM患者分为绒毛膜羊膜炎(histological chorioamnionitis,HCA)组(65例)和非HCA组(48例)。另选取50例同时期接受产检并分娩的健康孕妇为对照组。酶联免疫吸附法检测三组患者血清PGRMC1、HBD-2和HIF-1α水平。Pearson相关性分析PPROM患者血清PGRMC1表达与HBD-2、HIF-1α的相关性。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清PGRMC1、HBD-2和HIF-1α对PPROM合并HCA的诊断价值。结果与对照组比较,PPROM组患者血清PGRMC1表达水平降低(P<0.05),HBD-2和HIF-1α表达水平升高(P<0.05)。与非HCA组比较,HCA组患者血清PGRMC1表达水平降低(P<0.05),HBD-2和HIF-1α表达水平升高(P<0.05)。PPROM患者血清中PGRMC1表达水平与HBD-2、HIF-1α均呈负相关(P<0.05)。血清PPROM、HBD-2和HIF-1α联合检测可提高PPROM合并HCA诊断的灵敏度和特异度(P<0.05)。结论PPROM患者血清PGRMC1水平降低,与HBD-2和HIF-1α均呈负相关,联合检测PGRMC1与HBD-2、HIF-1α对PPROM合并HCA早期诊断具有重要价值。     

SDF-1α和HIF-1α在上皮性卵巢癌组织中表达的相关性

目的 观察基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在上皮性卵巢癌患者组织中的表达及其相关性分析. 方法 采用免疫组织化学SP法检测97例上皮性卵巢癌患者及9名正常卵巢组织SDF-1α和HIF-1α的表达. 结果 上皮性卵巢癌组织中SDF-1α与HIF-1α呈高表达,阳性率分别为70.1％和67.1％,明显高于正常卵巢组织;在上皮性卵巢癌组织中二者表达呈正相关(r=0.475). 结论 SDF-1α和HIF-1α在卵巢上皮性癌组织中联合表达增强,二者在上皮性卵巢癌的发生、发展中起到重要作用,有望探究在卵巢癌侵袭中是否存在HIF-1α-SDF-1α通路.     

抗血管紧张素Ⅱ受体1型和α_1-肾上腺素受体自身抗体在妊娠期高血压发病中的作用

目的:探讨抗血管紧张素Ⅱ受体1型(ATR-1)和α1-肾上腺素受体自身抗体在妊娠期高血压发病中的作用。方法:以合成的ATR-1受体和α1-肾上腺素受体多肽片段为抗原,采用酶联免疫吸附法检测35例妊娠期高血压患者和40例正常孕妇血清抗ATR-1和α1-肾上腺素受体自身抗体,同时检测血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度。结果:妊娠期高血压患者ATR-1和α1-肾上腺素受体自身抗体的阳性率分别为31.4%(11/35)和28.6%(10/35),明显高于正常孕妇的7.5%(3/40)和5.0%(2/40),两者相比较差异有显著性(P<0.01)。观察组血浆血管紧张素Ⅱ浓度为(80.56±48.43)pmo/L,血压正常组浓度为(31.22±27.65)pmol/L,两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:妊娠期高血压患者血清中血管紧张素Ⅱ浓度升高,并且存在ATR-1和α-肾上腺素受体的自身抗体,两者可能在妊娠期高血压的发病中起重要作用。     

C反应蛋白和可溶性细胞间粘附分子-1在冠心病患者的表达及其意义

[目的]通过检测69例冠心病患者外周血可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)和C反应蛋白(CRP)水平,探讨其临床意义.[方法]入选诊断明确的冠心病患者69例,通过冠状动脉造影检查,分为单支病变组18例和多支病变组51例,分别应用放射免疫法测定患者血清中sICAM-1和CRP浓度,并与30例年龄和性别相当的健康体检者进行比较.[结果]冠心病组的sICAM-1和CRP浓度显著高于对照组(P<0.05);冠状动脉粥样硬化范围越大、狭窄程度越重sICAM-1和CRP活性浓度越高(P<0.05).[结论]sICAM-1和CRP活性浓度与冠状动脉粥样硬化的范围和狭窄程度相关,为判断冠状动脉病变严重程度提供了相应的临床参考指标.     

缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1在子宫内膜癌中的表达及其与预后的关系

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在子宫内膜癌中的表达及其与预后的关系.方法:选取2010年7月～2013年8月在该院行手术切除的子宫内膜腺癌存档蜡块标本74例,另选取同期进行手术切除或门诊刮取的子宫内膜不典型增生病例23例、复杂性增生病例18例及正常子宫内膜15例.采用免疫组化SP二步法检测不同组织中HIF-1α和GLUT-1的表达情况,分析其与临床病理特征之间的关系.结果:HIF-1α在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、复杂性增生和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为79.7％、52.2％、25.0％和6.7％,差异均有统计学意义(P＜0.05);GLUT-1在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、复杂性增生和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为75.7％、43.5％、11.1％和0.0％,差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α和GLUT-1表达与病理分期、组织学分级、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05),病理分期越高、组织分级越低、浸润深度越深、有淋巴结转移,HIF-1α和GLUT-1的阳性表达率越高;HIF-1α与GLUT-1表达呈正相关(r=0.654,P＜0.05).结论:HIF-1α和GLUT-1在子宫内膜癌病理进程中发挥重要作用,可以作为判定子宫内膜癌恶性程度及预后的敏感指标.     

HIF-1α、VEGF在高血压脑出血灶周的表达和意义

目的观察血肿周边脑组织中HIF-lα和VEGF的表达情况并探讨二者表达的相关性。方法应用免疫组织化学技术、RT-PCR和Western蛋白印迹技术检测39例脑出血灶周脑组织中HIF-lα和VEGF的表达。结果脑出血灶周脑组织中HIF-lα、VEGF蛋白和mRNA的表达均随时间进行性增加,与正常脑组织组比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。脑出血后不同时间HIF-lα、VEGF蛋白表达阳性率和mRNA分别比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);脑出血后HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA的表达均呈正相关。结论 HIF-lα与VEGF在血肿周边脑组织中均有表达并具有一致性,可能与脑出血后微循环的重建有关。     

水通道蛋白1和细胞角蛋白7在卵巢肿瘤中表达的研究

目的通过探究在卵巢肿瘤中细胞角蛋白7(CK7)及水通道蛋白1(AQP1)两者的表达状况,分析AQP1和CK7的相对应的关系以及探究两种相应的蛋白对发生与发展在卵巢肿瘤中的一系列作用。对在早期诊断以及治疗卵巢癌的新靶点以及防治后的评价给予了一定程度的依据。方法取住院接受手术治疗并确诊为卵巢癌57例作为研究组;从卵巢交界性上皮性肿瘤患者、转移性卵巢癌患者、卵巢良性上皮性肿瘤患者以及正常卵巢组织中分别选取12、8、15、10例作为对照组患者。检查以上这些患者的肿瘤组织(如:卵巢癌、卵巢良性上皮性肿瘤组织、卵巢交界性上皮性肿瘤)中的AQP1、CK7的表达状况和在正常卵巢组织中AQP1、CK7的表达状况。结果在不同种类卵巢肿瘤组织中AQP1及CK7在表达上呈阳性机率之间的比较差异都具有统计学意义(P<0.05)。卵巢上皮性癌中APQ1与CK7的表达成正比例关系。结论 CK7和AQP1都共同配合与参与了卵巢肿瘤的引发和发展这些过程。     

结核分支杆菌抗原ESAT-6真核表达质粒在COS-7中的表达

目的 探讨结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT—6基因真核表达重组质粒在真核细胞(COS—7)中的表达。方法 用LipofectAMINE^TM2000介导真核表达重组质粒pcDNA3．1( )—ESAT—6转染真核细胞COS—7，72h后，通过RT—PCR和Western Blotting试验鉴定ESAT—6基因在COS—7中的表达。结果 通过RT—PCR从转染了pcDNA3．1( )—ESAT—6的006—7中检测到目的基因mRNA的转录；Western Blotting试验鉴定在转染pcDNA3．1( )—ESAT—6的COS—7的细胞裂解上清液中有ESAT—6基因的表达蛋白。结论 结核杆菌早期分泌性蛋白ES—AT—6真核表达重组质粒能够在真核细胞COS—7中表达ESAT—6蛋白，为进一步研究其特性及为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下了基础。     

应用基因芯片技术筛选转染NOR1基因后HepG2细胞差异表达基因

目的研究转染NOR1基因后肝癌细胞系HepG2基因表达谱的改变。方法应用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1( )/NOR1真核表达载体和pcDNA3.1( )空白载体分别转染入肝癌细胞系HepG2,再分别提取转染pcD-NA3.1( )/NOR1和空载体pcDNA3.1( )的HepG2细胞总RNA,应用基因芯片技术进行芯片分析。结果芯片分析结果显示差异表达基因中上调的基因有59个,下调的基因有103个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论应用基因芯片技术成功筛选了NOR1基因转染细胞后差异表达基因,为阐明NOR1基因与肝癌发生发展的关系提供了实验依据。     

大鼠生精相关基因TSARG1原核表达载体的构建和表达

目的构建大鼠生精相关基因pGEX-KG/TSARG1重组载体并进行原核表达。方法应用RT-PCR技术从大鼠睾丸组织mRNA中扩增TSARG1的开放阅读框（ORF）,T-A克隆后将TSARG1插入到原核表达载体pGEX-KG中,经测序鉴定后将重组质粒转入宿主菌E.coliBL21,IPTG诱导表达GST/TSARG1融合蛋白。结果成功构建pGEX-KG/TSARG1重组质粒;转化重组质粒的E.coli BL21经IPTG 37℃诱导高效表达GST/TSARG1融合蛋白。结论 pGEX-KG/TSARG1原核表达载体的成功构建为进一步研究TSARG1的生物学功能奠定了基础。     

HBV S基因与HCV C基因嵌合真核表达质粒的构建及鉴定

目的：构建含HBV S基因及HCV C基因的嵌合基因真核表达质粒，为HBV和HCV嵌合基因疫苗研究奠定基础。方法：PCR扩增分别获得HBV preS1 preS2、preS2 S、S基因片段及HCV C基因片段，以pcDNA3．1( )为载体，构建同时含HBV preSl preS2 S、preS2 S或S基因与HCV C区基因的嵌合真核表达质粒S1S2SCpcDNA3．1、S2SCpcDNA3．1、SCpcDNA3．1。结果：经酶切鉴定及测序分析，所构建的嵌合表达质粒均连接正确，与预计一致。结论：嵌合基因真核表达质粒的成功构建，将为观察嵌合基因免疫及HBV、HCV基因疫苗的研究提供实验基础。     

齐墩果酸对白血病HL-60细胞cav-1表达的影响

目的：研究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）对白血病HL-60细胞窖蛋白-1（Caveolin-1,CAV-1）表达的影响。方法：OA作用HL-60细胞后,倒置显电镜观察细胞形态;RT-PCR检测HL-60细胞cav-1的mRNA表达;Western blot检测CAV-1蛋白水平。结果：OA作用HL-60细胞后,RT-PCR检测cav-1mRNA表达上调（P〈0.01）;Western blot检测CAV-1蛋白水平升高（P〈0.01）。结论：OA通过上调CAV-1的表达,抑制HL-60细胞增殖。     

自噬基因Beclin-1在子宫腺肌病中的表达及意义

目的探讨子宫腺肌病中细胞自噬基因Beclin-1的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测82例子宫腺肌病、40例子宫内膜样腺癌、及20例正常子宫内膜组织中自噬基因Beclin-1蛋白及细胞凋亡的标记物Ki-67蛋白的表达水平。结果子宫腺肌病中异位子宫内膜及子宫内膜样腺癌中Beclin-1表达水平低于正常子宫内膜组织(P<0.05);Beclin-1表达随着临床症状严重程度而下调(P<0.05)。在正常子宫内膜组织中Ki-67微弱表达,在子宫腺肌病及子宫内膜腺癌中的Ki-67表达均显著上调。结论子宫腺肌病与子宫内膜样腺癌类似,其发生、发展中自噬基因Beclin-1起到一定的作用。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

亚砷酸钠对HaCaT细胞中DNMT1、HDAC1基因mRNA转录及蛋白表达的影响

目的 了解不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响.方法 分别以0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24...     

小鼠 Tox3 基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达

目的：构建重组慢病毒载体pCDH—Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况。方法：利用DNA重组技术将小鼠Tox3~N克隆人慢病毒表达载体pCDH—MCS—T2A—copGFP—MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH—Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2．G共转染HEK293FF细胞,包装重组慢病毒LV—Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测Tox3mRNA的转录水平,蛋白质印迹（Westernblot）法检测T0x3-Flag蛋白的表达情况。结果：经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV—Tox3;RT—PCR及Westernblot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白。结论：成功建立Tox3基因慢病毒表达载体LV—Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础。