无细胞短棒状杆菌制剂联合瘤内缓释化疗对鼠黑色素瘤的抑制效应

 目的  探讨无细胞短棒状杆菌制剂（NCPP）联合瘤内缓释化疗对小鼠黑色素瘤的影响。    方法 给小鼠皮下接种B16肿瘤细胞后建立荷瘤小鼠,随机分成4组,①生理盐水(NS)对照组：瘤内和腹腔注射NS;② 缓释治疗组：瘤内注射含Ara-C缓释液;③ NCPP治疗组：腹腔注射NCPP;④ 联合治疗组：腹腔注射NCPP+瘤内注射含Ara-C缓释液。7d后重复治疗1次,期间观察各组小鼠肿瘤的生长情况;治疗2周处死小鼠,称瘤重量,光镜下观察瘤组织病理变化,采用流式细胞术检测脾内CD4+ T细胞、CD8+ T细胞数量变化。  结果  联合治疗能够明显抑制肿瘤的生长,疗效明显优于其他3组(P＜0．05);联合治疗组瘤内出现大片坏死区域(P＜0．05),联合治疗组的CD8+ T细胞数量明显增多(P＜0．01)。  结论 将NCPP和瘤内缓释化疗技术联合应用能有效地抑制肿瘤的生长。     

肺癌模型小鼠肿瘤和主要免疫器官组织中调节性T细胞和NK细胞的数量变化及其意义

目的：探讨肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）和自然杀伤细胞（NK）在外周免疫器官和肿瘤组织中数量的变化,阐明其对肿瘤发展的影响。方法：C57BL/6小鼠分为Lewis肺癌细胞系（LLC）注射组和正常对照组,LLC注射组小鼠采用LLC腋窝注射制备皮下肿瘤模型,正常对照组小鼠采用生理盐水等量注射。采用细胞表面和细胞内特异荧光抗体染色和流式细胞术检测肺癌小鼠脾脏、淋巴结和肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺T细胞、Treg细胞及脾脏组织中NK细胞数量。结果：与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏和淋巴结中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显升高（P < 0.05）,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg细胞数量也明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。LLC接种组小鼠肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显高于脾脏和淋巴结（P < 0.05）。与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏组织中NK细胞比例明显降低（P < 0.05）。结论：肺癌小鼠主要免疫脏器官组织中Treg细胞比例和数量升高,NK细胞比例降低,其可促进肿瘤发展,抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答。     

融合基因重组卡介苗对肿瘤的抑制作用

目的 研究EB病毒基因BZLF1 和LMP2 融合基因重组卡介苗(recombinant BCG, rBCG)对肿瘤的抑制作用。方法 建立EB病毒阳性肿瘤(NPRC18)荷瘤小鼠(C57BL/6J)模型,根据注射的药物不同,分为rBCG组、BCG组、转pMV261载体BCG组(pMV261+ BCG)、PBS组。采取颈背部皮下多点注射方式进行免疫,对荷瘤小鼠肿瘤重量、成瘤时间、存活情况进行分析,C57BL/6J小鼠肿瘤抑瘤实验结束后,将小鼠的肿瘤裂解后用流式检测CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况,HE染色分析小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况;使用统计学软件SPSS 19.0对rBCG抑瘤效果进行单因素方差分析(One-way ANOVA)。结果 重组BCG组分别用BZLF1和LMP2一抗杂交后,出现杂交目的蛋白,其蛋白质分子量约为70 KD,与对照相比,重组卡介苗对肿瘤抑制作用明显,小鼠成瘤时间延迟,平均成瘤时间约22 d,与对照PBS注射组8 d相比,其差异均有统计学意义(P ≤0.01);PBS组肿瘤重量为6.8 g,重组BCG组肿瘤重量为1.01 g,抑瘤率约为81%。经流式分析,重组BCG组产生的CD4⁺T、CD8⁺T细胞高于对照组。与对照组相比,rBCG延长了小鼠的生存时间,延缓了肿瘤生长和形成时间。结论 重组卡介苗在小鼠体内对肿瘤细胞具有抑制作用。     

芡茎多糖通过诱导CD4+T、CD8+T和NK细胞的浸润促进小鼠肺癌LLC细胞凋亡

目的 探究芡茎多糖(EFPP)对肺癌LLC细胞异位移植瘤模型的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为空白对照组(Control)、芡茎多糖低、高剂量组(100、200 mg·kg^-1)、5-氟脲嘧啶组(5-Fu 20 mg·kg^-1),每组10只;建立异位移植瘤模型后,空白对照组灌胃PBS,每日1次,给药组灌胃芡茎多糖,每日1次,阳性药3 d注射1次,总共给药15 d,最后1次给药第2天处死全部小鼠。取各组肿瘤样品,称量体积与瘤质量;采用苏木精-伊红(HE)染色、流式细胞术、TUNEL凋亡染色以及Western blot法对芡茎多糖进行药效学检测。结果 与空白对照相比,芡茎多糖可以抑制LLC细胞的体内增殖,增加CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T和CD3^-NK1.1⁺细胞水平。同时,芡茎多糖上调活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、B细胞白血病-淋巴瘤-2相关...     

S180腹水癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤逃逸中的作用

目的：研究肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中CD4⁺CD25⁺Treg细胞及免疫监视功能的变化,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法：建立小鼠S180腹水癌模型,采集S180腹水癌小鼠TIL、脾脏细胞及对照组小鼠脾脏细胞,采用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Treg细胞、CD8⁺T细胞、NK细胞的数量及NKG2D的表达水平,采用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA的表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH) 释放法检测CD8⁺T细胞的杀伤功能。结果：与对照组小鼠比较,S180腹水癌小鼠脾脏、TIL中CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05),并且肿瘤组小鼠TIL中CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达较肿瘤组小鼠脾脏均明显增高(P<0.05);TIL中CD8⁺T细胞数量明显增高(P<0.05),其杀伤功能却有所下降;TIL中NK细胞数量及NKG2D表达均明显增高 (P<0.05)。结论：肿瘤局部CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量增加、功能增强,可能是肿瘤逃避免疫监视的机制之一。     

活动性肺结核患者LAG-3的表达及其对CD4+T细胞的影响

目的 探讨淋巴细胞活化基因3(LAG-3)在活动性肺结核患者CD4⁺T细胞中的表达情况及其对CD4⁺T细胞功能的影响。方法 纳入2020年5月-2021年5月就诊于苏州大学附属传染病医院的25例初治活动性肺结核患者作为病例组,20名健康体检者作为对照组,流式细胞术检测外周血和支气管肺泡灌洗液中LAG-3⁺CD4⁺T细胞的比例;体外用结核分枝杆菌特异性抗原早期分泌靶抗原6 000 Mr与培养滤过蛋白10 000 Mr(ESAT-6/CFP10)刺激结核患者的外周血单个核细胞(PBMC),分为ESAT-6/CFP组和不加ESAT-6/CFP蛋白的Control组,探究LAG-3在结核特异性CD4⁺T细胞上的表达;用可溶性LAG-3(sLAG-3)蛋白抑制LAG-3分子信号通路,作为sLAG-3组,探究LAG-3对CD4⁺T细胞功能的影响。结果 病例组患者PBMC和支气管肺泡灌洗液(BALF)中LAG-3+CD4⁺T细胞比例升高,治疗后下降...     

恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞的检测及临床意义

目的：研究CD4⁺CD25^high Foxp3⁺调节性T细胞(Tregs)在恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在肿瘤发病中的作用及临床意义。方法：采用流式细胞术检测61例不同分期恶性肿瘤患者PBMC中CD4⁺CD25⁺/CD4⁺CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞百分比,进一步分析CD4⁺CD25⁺及CD4⁺CD25^highT细胞中表达Foxp3⁺T细胞的百分比,并与正常对照组(n=32)进行比较。结果：与正常对照组比较,Ⅰ及Ⅱ期恶性肿瘤患者PBMC中CD4⁺CD25⁺/CD4⁺及CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞百分比均无明显变化(P>0.05),Ⅲ及Ⅳ期恶性肿瘤患者均明显增高(P<0.05),随肿瘤恶性程度增高,CD4⁺CD25⁺/CD4⁺及CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞的百分比也逐渐增高;恶性肿瘤患者CD4⁺CD25⁺ 及CD4⁺CD25^high Foxp3⁺T细胞表达水平较正常对照组均增高,组间比较差异均有显著性(P< 0.01)。结论:恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞增高可能是恶性肿瘤发病及免疫机制异常的主要原因之一,定期检测外周血中上述指标的变化,有利于了解恶性肿瘤患者的病情变化及预后判断。     

胶质瘤患者T淋巴细胞表面CTLA-4的表达及其临床意义

目的: 探讨胶质瘤患者外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达与胶质瘤WHO分级及手术的关系,阐明CTLA-4的临床意义。方法: 选择本院胶质瘤患者60例作为胶质瘤组,健康志愿者46名作为健康对照组。流式细胞术检测胶质瘤组和健康对照组研究对象外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达,分析其与胶质瘤WHO分级及手术的关系。结果: 胶质瘤组患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平明显高于对照组(P<0.01);Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平最高,Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅲ级胶质瘤(P<0.01),Ⅲ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅱ级胶质瘤(P<0.01);术后胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平低于术前(P<0.01)。结论: 胶质瘤患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的升高而升高,并在胶质瘤发生发展过程中发挥促进作用。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

外周血淋巴细胞亚群、NK细胞检测在诊断儿童传染性单核细胞增多症中的临床价值

目的 分析传染性单核细胞增多症(IM)患儿外周血中淋巴细胞亚群及NK细胞计数及比例的变化,探讨淋巴细胞亚群及NK细胞检测对IM患儿的临床意义。方法 选择2020年3月—2021年7月本院儿科收治的IM患儿21例作为IM组,同时选择同期在本院儿科就诊的其他疾病患儿20例作为对照组。比较两组患者之间CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B细胞及CD16⁺CD56⁺NK细胞计数和百分比的变化,并比较他们之间的差异。结果 IM组患儿CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞及CD16⁺56⁺NK细胞计数值均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),并且IM组CD4⁺T细胞/CD8⁺T细胞比值倒置;两组患儿之间CD19B+细...     

西地那非对胃癌移植瘤小鼠髓源抑制细胞免疫活性的调节作用

目的: 探讨西地那非对胃癌移植瘤小鼠外周血髓源抑制细胞（myeloid derived suppressor cells, MDSCs）的比例以及免疫功能的调节机制。方法： 建立胃癌MFC荷瘤小鼠模型,6周龄雌性615小鼠18只随机分为正常对照组、荷瘤PBS组和荷瘤西地那非组。接种移植瘤24 h后荷瘤西地那非组每天给予西地那非灌胃,荷瘤PBS组每天给予等体积的PBS灌胃。通过计算抑瘤率观察西地那非的体内抗肿瘤活性,应用流式细胞术检测外周血MDSC、T细胞亚群比例。结果: 与正常对照组比较,胃癌移植瘤小鼠外周血MDSC的比例升高（P<0.05）,外周血CD4+/CD8+的比值降低（P<0.05）。外周血MDSC比例与CD4+/CD8+比值呈显著负相关（r=-0.858,P<0.01）。与荷瘤PBS组相比,西地那非可抑制胃癌移植瘤小鼠肿瘤生长,28 d后抑瘤率为41.2%,且可以降低荷瘤小鼠外周血MDSC的比例（P<0.05）,提高外周血CD4+/CD8+的比值（P<0.05）。结论：胃癌移植瘤小鼠外周血MDSC比例升高,导致免疫功能紊乱。西地那非可能通过抑制MDSC数量,调节T细胞亚群的比例,增强抗肿瘤免疫,抑制肿瘤生长。     

染料木黄酮对卵巢癌HO-8910PM裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察植物雌激素染料木黄酮（GEN）与顺铂（DDP）联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制．方法：建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,随机分成4组,分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN＋DDP组．4wk后处死裸鼠,计算抑瘤率,用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度（MVD）,用细胞增殖指数（PI）反映细胞增殖状态,并进行形态学观察．结果：DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长,二者联合应用有协同作用．GEN＋DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组（P〈0．01）,3组均显著低于对照组（P〈0．01）．形态学观察可见GEN组和GEN＋DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多,而对照组少见．结论：GEN对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用,且与DDP有协同作用;GEN对肿瘤细胞的作用,与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关．     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞对黑色素瘤特异性CD8+T细胞的影响

目的：探讨联合应用棕榈酰化肽与聚肌胞（poly IC ）对肿瘤特异性CD8＋ T 细胞的影响。方法15只C57BL／6小鼠随机分为5组（每组3只）：对照组（仅给予PBS ）、线性肽（g p10025‐33,黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞表位）组、线性肽＋poly IC组、棕榈酰化肽组、棕榈酰化肽＋poly IC组。经肌内注射免疫小鼠后,取得外周血及脾组织,通过流式细胞仪分析黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞数量,通过Elisa及Elispot法分析疫苗活化的CD8＋ T细胞体外对黑色素瘤细胞的识别。取15只荷黑色素瘤C57BL／6小鼠,监测不同方法免疫后皮下肿瘤的大小。结果与线性肽＋poly IC组比较,棕榈酰化肽与poly IC联合应用显著增加外周血gp10025‐33特异性CD8＋ T 细胞的数量[（23．53±5．398）％ v s（1．158±0．239）％,P＝0．014],且内源性CD8＋ T 细胞可以识别黑色素瘤细胞并显著抑制皮下肿瘤生长（P＜0．001）。结论联合应用棕榈酰化肽与poly IC可促进黑色素瘤特异性CD8＋ T细胞的免疫应答,从而显著抑制肿瘤生长。     

CAG方案对U937细胞株作用的体外研究

目的研究CAG方案,即重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）＋阿糖胞苷（Ara-C）＋阿柔比星（ACR）对U937细胞株的作用。方法以rhG-CSF（50ng/mL）、Ara-C（10nmol/L）和ACR（10nmol/L）单用或联用分别处理白血病细胞株U937,分别设为对照组（未加任何药物）、Ara-C组、rhG-CSF组、ACR组、rhG-CSF＋ACR组、Ara-C＋ACR组、Ara-C＋rhG-CSF组及Ara-C＋rhG-CSF＋ACR（CAG）组。采用细胞计数仪计数并计算各组细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD11B表达、细胞凋亡率及细胞周期的改变情况。结果在含Ara-C各组（Ara-C组、Ara-C＋ACR组、Ara-C＋rhG-CSF组和CAG组）,加药后第1天,S期细胞百分比低于对照组。加药后第2天,细胞生长受到明显抑制,CD11B表达显著上调,其中CAG组显著高于Ara-C组（P〈0.05）;加药后第6天,细胞形态呈现部分分化,CAG组细胞分化特征尤为明显。各组细胞凋亡率比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 CAG方案可诱导U937细胞分化,而且随着加药时间的延长,细胞的分化更加明显。     

七叶灵方诱导裸鼠人肺腺癌A549移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究中药复方七叶灵方诱导人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用.方法:皮下接种人肺腺癌A549细胞,建立裸鼠移植瘤模型,随机分为不用任何治疗的对照组(A组)、化疗组(B组)、化疗加七叶灵治疗组(C组)和七叶灵治疗组(D组),每组12只,分别给予相应处理.治疗开始后每周测量肿瘤体积并换算成瘤重.采用原位细胞凋亡检测试剂盒,检测瘤组织凋亡细胞数.结果:A组瘤重显著高于其他各组(P＜0.05),C组、D组与B组比较亦有显著差异(P＜0.05).凋亡细胞数各组间具有显著差异(P＜0.05),D组瘤组织中的凋亡细胞数显著高于B组和C组(P＜0.05).A组则表现出早期细胞为高分化,到后期肿瘤组织坏死及部分细胞凋亡.结论:在裸鼠体内中药七叶灵方具有诱导A549细胞凋亡的作用.     

人内皮抑素对卵巢癌细胞A2780体内外生长的影响及机制

目的 探讨人内皮抑素(human endostatin,hES)对人卵巢癌细胞株A2780体内、外生长的影响,并探讨其可能机制.方法 高保真PCR从含有人内皮抑素基因的人肝脏组织中扩增出人内皮抑素编码区,将其克隆人pcDNA3.1载体中,构建pcDNA3.1-ES重组质粒;将此重组质粒转染人卵巢癌细胞A2780,观察A2780细胞生长.20只BalB/C-nu 品系裸鼠随机分为2组:hES转染组(10只)、对照组(10只),建立人卵巢癌裸鼠模型.1个月后,测量瘤体积,计算抑瘤率;标本行苏木精-伊红染色分析组织学形态;同时用Western blot检测hES、凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达;流式细胞仪检测转染对裸鼠移植瘤组织细胞凋亡率影响.结果 hES转染A2780细胞后,细胞生长速率减慢.转染hES的裸鼠肿瘤生长较对照组明显减慢(P<0.01),抑瘤率为74%;转染组肿瘤组织较对照组的肿瘤坏死有所增多,胞核嗜碱性染色明显低于对照组;转染组hES蛋白水平明显高于对照组,而Bcl-2蛋白水平明显低于对照组;流式结果 显示转染使肿瘤细胞的凋亡显著增加(P<0.05).结论 转染hES可抑制卵巢癌A2780细胞体内、外的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关.     

食道通结方对食管癌裸鼠移植瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:通过体内实验观察食道通结方对食管癌裸鼠移植瘤增殖、凋亡相关蛋白表达的影响,进一步明确该方治疗食管癌的作用机制。方法:裸鼠皮下接种食管癌TE-1瘤株,造模成功后随机分为模型组、中药组、顺铂组、中药+顺铂组,各组分别予0.9%Na Cl溶液、中药食道通结方、顺铂、中药食道通结方+顺铂干预,共28 d。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况,检测肿瘤细胞增殖指数、凋亡指数的变化以及移植瘤细胞内增殖、凋亡相关蛋白Stat3、P53、Bcl-2、Bax、Caspase3表达情况。结果:与模型组比较,各药物组的平均移植瘤体积及瘤重均明显降低(P0.01),其中中药+顺铂组显著低于中药组及顺铂组(P0.01)。各药物组的皮下移植瘤细胞增殖指数均显著降低(P0.01),其中顺铂组明显低于中药组(P0.01),而中药+顺铂组降低更显著(P0.01);各药物组的皮下移植瘤细胞凋亡指数均明显升高(P0.01),其中中药+顺铂组显著高于中药组及顺铂组(P0.01)。各药物组的肿瘤组织中Stat3、Bcl-2表达均明显下降,P53、Bax、Caspase3表达均显著增加,其中中药+顺铂组变化更为明显。结论:食道通结方具有抑制食管癌细胞株TE-1皮下移植瘤细胞增殖、促进其凋亡的作用,并能增强顺铂抑制肿瘤细胞生长的作用,其可能与下调食管癌细胞株TE-1中Stat3、Bcl-2的表达,上调P53、Bax、Caspase3的表达相关。     

E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究

目的：探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。 方法：取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105 /0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10): PBS组, Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A＋放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。 结果：Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间, Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降（P＜0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论：E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。