发光二极管荧光显微镜检测结核分枝杆菌在基层实验室的应用评价

目的 评价发光二极管（light-emitting diodes,LED）荧光显微镜在基层实验室痰涂片中检测结核分枝杆菌的应用效果。 方法 收集2011年7月至2011年9月在青海省西宁市7个县（区）级结核病防治机构（简称“结防机构”）就诊的所有肺结核可疑症状者592例（1738份痰标本）。对每份痰标本涂片2张,分别进行萋-尼（Ziehl-Neelsen, Z-N）抗酸染色和金胺O（auramine O）荧光染色,然后以盲法用传统光学显微镜和LED荧光显微镜进行检测,以简单法固体罗氏培养（L-J）结果为金标准,比较两种显微镜阳性检出率的差异、诊断的准确性及检出时间的差异。 结果 LED荧光显微镜痰涂片阳性检出率为14.90%（259/1738）,比传统光学显微镜13.75%（239/1738）提高1.15%,差异有统计学意义（Z=5.88,P〈0.05）。以简单法固体罗氏培养结果为金标准,传统光学显微镜的敏感度为79.60%（199/250;95%CI=74.60％～84.60%）,特异度为97.31%（1446/1486;95%CI=96.49％～98.13%）;ROC曲线下面积为0.8878（95%CI=0.8623～0.9133）。LED荧光显微镜的敏感度为84.80%（212/250;95%CI=80.30%～89.25%）,特异度为96.84%（1439/1486;95%CI=95.95%～97.73%）,ROC曲线下面积为0.9118（95%CI=0.8890～0.9347）。传统光学显微镜的平均读片时间为（185.600±79.271）s,LED荧光显微镜的平均读片时间为（144.19±62.173）s,时间差异有统计学意义（t=15.32, P〈0.01）。 结论 应用LED荧光显微镜可明显提高痰涂片中结核分枝杆菌的阳性检出率,较传统光学显微镜有更高的敏感度,但特异度相当,诊断肺结核患者的价值更高,且能明显缩短读片时间。     

荧光染色发光二极管显微镜检测结核分枝杆菌的效果分析

目的： 探讨荧光染色发光二极管（LED）显微镜镜检对结核分枝杆菌的检出效果。方法： 收集232例可疑结核病患者的痰标本,每位患者收集3份痰（即时痰、清晨痰和夜间痰）,共696份痰标本。分为萋-尼染色(Z-N)法镜检组（简称Z-N组）,荧光染色发光二极管显微镜镜检组（简称LED组）。对每份痰标本同时采用上述两种镜检法进行检测。比较两者的检查结果,分析两种方法检查结核分枝杆菌的阳性率差异情况。结果： LED组检出率为37.9%（88/232）,Z-N组检出率为26.7%（62/232）,经检验, χ²=6.66,P＜0.01,差异有统计学意义。结论： LED显微镜镜检具有阳性检出率高等优点。     

发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价

目的评估发光二极管荧光显微镜实验室诊断结核分枝杆菌的能力。方法收集409痰标本,以固体罗氏培养为金标准,比较发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜在敏感性、特异性及检出时间上的差异,并比较技术人员对几种方法的评价。结果罗氏培养阳性的175份痰标本中,普通光学显微镜法112份为阳性,普通荧光显微镜法121份为阳性,发光二极管荧光显微镜法130份为阳性,敏感性分别为64.0%,69.1%,74.3%;罗氏培养阴性的234份痰标本中,普通光学显微镜法233份为阴性,荧光显微镜法227份为阴性,发光二极管荧光显微镜法227份为阴性,特异性分别为99.6%,97.0%,97.0%。χ2检验统计结果表明,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜检测结果差异有统计学意义(P0.001)。普通光学显微镜、普通荧光显微镜和发光二极管荧光显微镜读片所用的读阳性片时间分别为186.7 s、75.1 s、72.2 s,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜在读阳性片时间上差异有统计学意义(P0.05),与普通荧光显微镜差异无统计学意义。参与研究的技术员评价发光二极管荧光显微镜较其他2种方法易接受。结论发光二极管荧光显微镜较普通光学显微镜及普通荧光显微镜在检查效果及检出时间上存在明显优势,对技术人员的亲和性好,具有推广使用的价值。     

发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价

目的评估发光二极管荧光显微镜实验室诊断结核分枝杆菌的能力。方法收集409份痰标本,以固体罗氏培养为金标准,比较发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜在敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及检出时间上的差异,并比较技术人员对几种方法的评价。结果罗氏培养阳性的175份痰标本中,普通光学显微镜法112份为阳性,普通荧光显微镜法121份为阳性,发光二极管荧光显微镜法130份为阳性,敏感性分别为64．0％、69．1％、74．3％;罗氏培养阴性的234份痰标本中,普通光学显微镜法233份为阴性,荧光显微镜法227份为阴性,发光二极管荧光显微镜法227份为阴性,特异性分别为99．6％、97．0％,97．0％。χ^2检验统计结果表明,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜检测结果差异显著（P〈0．001）。普通光学显微镜、普通荧光显微镜和发光二极管荧光显微镜读片所用的平均时间分别为186．7秒、75．1秒、72,2秒,发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜在读片时间上显著差异,与普通荧光显微镜差异不明显（P〈0．05）。参与研究的技术员评价发光二极管荧光显微镜较其他两种方法易接受。结论发光二极管荧光显微镜法较普通光学显微镜法及普通荧光显微镜在检查效果及检出时间上存在明显优势,对技术人员的亲和性最好,具有推广使用的价值。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan荧光PCR检测的建立

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。     

显微镜观察药物敏感性技术检测结核分枝杆菌应用效果观察

目的 探讨显微镜观察药物敏感性检测（MODS）方法用于结核分枝杆菌（MTB）分离培养和耐药检测的应用效果.方法 收集276份肺结核临床疑似患者的痰标本,用MGIT 960 TB、罗氏法、MODS法检测MTB.用MODS法对80株MTB临床分离株进行药敏检测,并将结果与传统罗氏法进行比较.结果 MODS技术直接检测痰标本的阳性率为46％,阳性检出时间中位数为9 d（7～12 d）.MODS检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与传统罗氏法符合率分别为95.0％、96.25％、97.5％、85.0％,检测敏感度分别为83.3％、95.65％、96.15％、70.83％,特异度分别为98.3％、96.50％、98.15％、91.07％.结论 MODS方法是一种快速简便、费用低、准确的诊断和药敏检测方法,具有广泛的应用前景.     

显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性

目的评价显微镜观察药敏法(microscopic observation drug susceptibility,MODS)检测结核分枝杆菌临床分离株异烟肼(INH)和利福平(RFP)耐药性的可行性。方法使用MODS技术对本医院的共201株结核菌临床分离株分别进行INH、RFP的耐药性检测,并与罗氏比例法作比较。结果 MODS法检测平均时间为8d,以罗氏比例法为金标准,INH的灵敏度和特异性分别为98.5%和100.0%,RFP的灵敏度和特异性分别为99.3%和100%。结论 MODS法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法 。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan(R)荧光PCR检测的建立

目的 对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法 .结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果 呈典型阳性反应,牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果 呈典型阳性反应,对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应.两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝,对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞.对临床样品的检测结果 显示,荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞.所建立的方法 ,全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测,可在5～6h内完成.采用上述荧光PCR方法 从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品.     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

发光二极管荧光显微镜在基层应用的多中心研究

目的 评价荧光染色发光二极管荧光显微镜涂片镜检（简称LED）在基层实验室的应用情况。方法 对研究期间到6个县(区)级结核病防治机构（简称结防机构）就诊的肺结核可疑症状者3691例和随访患者2509例,以及8例没有记录初诊随访患者的共11 288份痰标本进行涂片镜检,每份标本涂2张片,分别使用萋尼（简称Z-N）和LED法进行染色、镜检,比较两种方法在阳性检出率及读片时间等方面的差异。结果 LED法的阳性涂片检出率为11.20%（1264/11 288）,较Z-N法（8.59%,970/11 288）提高2.61%（χ²=8086.74,P=0.000）。读片时间LED ［（120.03±38.88）s］明显短于Z-N法［（206.31±75.86）s］（t=28.12,P=0.00）。结论 基层实验室使用LED较Z-N能够提高涂片镜检的阳性检出率,且读片时间明显缩短,在我国基层实验室应用具有较好前景。     

抗酸杆菌自动荧光染色和显微镜扫描技术在结核病诊断中的临床评价

目的 观察自动荧光染色和显微镜扫描技术检测结核分枝杆菌的临床价值。 方法 2016年9—12月,在临沂市人民医院门诊连续纳入了748例疑似肺结核患者,收集2243份痰标本。每份痰标本制作2张涂片,一张采用传统荧光染色法,并用传统荧光显微镜(fluorescence microscopy, FM)人工阅片。另一张用自动荧光染色和显微镜扫描技术(AFSS)进行染色和扫描。所有样品经4% NaOH消化处理,然后接种到罗氏培养基中进行分离培养。与培养结果相比,分析AFSS的效能。所有AFSS和传统FM检测结果有差异的涂片采用萋-尼染色显微镜检查方法进行复核。 结果 AFSS检测的阳性率为32.1%(720/2243),常规FM检测的阳性率为31.92%(716/2243),两者比较差异无统计学意义(χ ²=0.016,P>0.05)。与罗氏培养相比,AFSS检测分枝杆菌的敏感度和特异度分别为83.4%(657/788)和95.9%(1386/1446)。阳性预测值和阴性预测值分别为91.6%(657/717)和91.4%(1386/1517)。 结论 AFSS检测分枝杆菌的敏感度和特异度较高,自动化程度高,值得推广应用该技术。     

KOD DNA聚合酶荧光PCR技术在肺结核诊断中的应用评价

目的 评估基于KOD DNA聚合酶的荧光PCR技术在肺结核诊断中的临床应用价值。方法 采集2019年10月至2020年4月疑似肺结核的住院患者痰标本,进行涂片抗酸染色、MGIT960液体培养、KOD DNA聚合酶荧光PCR和Taq DNA聚合酶荧光PCR检测。以临床诊断结果为参照,MGIT960液体培养法为金标准,荧光PCR与Taq DNA聚合酶荧光PCR法比较,评价KOD DNA聚合酶荧光PCR法检测MTB的效能。结果 共对337例临床样本进行检测,MGIT960液体培养法、Taq DNA聚合酶荧光PCR和KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度分别为71.56% (156/218)、76.15% (166/218) 和76.61% (167/218)。KOD DNA聚合酶荧光PCR与MGIT960液体培养检测敏感度差异无统计学意义 (χ²=1.445,P=0.229>0.05)。KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度和特异度分别为92.31% (144/156)和86.39% (146/169),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别84.21% (64/76)和88.48% (146/165)。结论 KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB敏感度和特异度较高,能够为临床诊断肺结核提供依据,操作简便、快速,适合在我国各级结核病实验室推广。     

荧光染色发光二极管荧光显微镜痰涂片镜检方法成本分析

目的 对比分析萋尔-尼尔逊涂片镜检方法（简称"Z-N”）与荧光染色发光二极管荧光显微镜（LED）涂片镜检2种方法的实验室成本。 方法 收集6个县（区）级结核实验室使用Z-N和LED进行痰涂片镜检的直接和间接投入,比较分析6个实验室分别使用2种方法进行3次涂片镜检的平均成本。两样本间均数差别显著性检验采用t检验,多样本间均数差别显著性检验采用F检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 Z-N法和LED方法检测1份痰标本的成本分别为人民币（14.98±3.94）元和（13.27±4.83）元(t=5.084, P=0.001)。6个实验室采用Z-N法进行1个痰涂片镜检的成本范围为人民币9.44～17.82元,LED法进行1个痰涂片镜检的成本范围为人民币7.80～18.93元。结论 LED进行痰涂片镜检的成本比Z-N法低,从成本角度LED更值得推广。     

四种方法检测结核分枝杆菌耐药性结果的比较及方法评价

目的：比较噬菌体生物扩增法（PhaB）及分枝杆菌快速侦测系统（BacT—ALERT）测定结核杆菌（MTB）药物敏感度结果，研究其临床应用价值。方法：应用PhaB、BacT-ALERT检测200株MTB对异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）和利福平（RFP）的耐药性，并以传统的耐药性测定方法作为金标准，评价其敏感度、特异度和准确度。结果：以绝对浓度法结果为判断标准：PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为95．2％、88．3％和89．0％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为95．1％、97．5％和98．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、94、4％和94．5％，检测RFP的敏感度、特异度和准确度分别为95．7％、97．4％和97．0％；BacT—ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、97．2％和97．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为92．7％、94．3％和94．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、99．4％和99．5％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为87．0％、93．5％和92．5％。以比例法结果为判断标准：PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为58．3％、99．4％和94．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88．1％、96．8％和95．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、94．4％和94．5％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为88．0％、96．7％和94．5％。BacT—ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为83．3％、97．7％和95．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88．1％、94．9％和93．5％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、98．8％和99．0％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为78．0％、96．0％和91．5％。结论：PhaB法和BacT—ALERT法检测MTB耐药性均具有较高的敏感度、特异度和准确度，可作为MTB耐药性的快速检测方法。     

血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的研究血清抗结核分支杆菌抗体在活动性结核病诊断和病情变化的意义。方法观察血清抗结核分支杆菌抗体在各类结核患者中的敏感性和特异性，与痰涂片及ＰＰＤ皮试的一致性，以及与疾病转归的关系。结果血清抗结核分支杆菌抗体诊断结核病的敏感性为７１．９％，特异性为９１．９％，与痰涂片阳性和ＰＰＤ皮肤试验阳性的一致率分别为８０．２％和６１．６％。抗结核分支杆菌抗体水平与病情变化有一定的相关性。结论血清抗结核分支杆菌抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。