雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COC1/DDP细胞凋亡的影响及其对PI3K/AKT/GSK3β信号通路的调控

目的：通过研究雷公藤内酯醇（TP）联合紫杉醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞（COC1/DDP细胞）凋亡的影响,以探讨两药联合对COC1/DDP细胞作用的机制。方法：将对数生长期COC1/DDP细胞随机分为6组：空白对照组、紫杉醇组（3.13μg/ml）、LY294002组（10μmol/ml）、TP组（10ng/ml）、LY294002＋紫杉醇组（10μmol/ml LY294002＋3.13μg/ml紫杉醇）、TP＋紫杉醇组（10ng/ml TP＋3.13μg/ml紫杉醇）。采用MTT法检测各组的细胞增殖活性;普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞中Akt、pAkt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。结果：（1）细胞增殖抑制率：TP＋紫杉醇组显著高于TP、紫杉醇组（P〈0.05）;LY294002＋紫杉醇组显著高于LY294002、紫杉醇组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单用药组中,TP组〉紫杉醇组〉LY294002组（P〈0.05）。各组抑制率均呈时间依赖性（P〈0.05）。（2）普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜下观察,除空白组外,各用药组的细胞形态均有凋亡样改变。两联合用药组的细胞凋亡数显著高于各自单药组,TP＋紫杉醇组高于LY294002＋紫杉醇组;单用药组的细胞凋亡数：TP组〉紫杉醇组〉LY294002组。（3）流式细胞仪检测发现,两联合用药组的细胞凋亡率大于各自单药组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组凋亡率显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单药组的细胞凋亡率为：TP〉紫杉醇〉LY294002（P〈0.05）。（4）p-Akt蛋白和p-GSK3β蛋白的表达从空白对照组→紫杉醇组→LY294002组→TP组→LY294002＋紫杉醇组→TP＋紫杉醇组,呈逐渐减少的趋势,而总Akt、GSK3β蛋白的表达不变。结论：TP可协同紫杉醇促进COC1/DDP细胞凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路,从而下调了耐药相关蛋白p-Akt、p-GSK3β的表达。     

阻断PI3K/PKB通路对卵巢癌OVACA-3细胞株增殖和凋亡的影响

目的采用PI3K/PKB信号传导通路特异性抑制剂LY294002作用于人卵巢癌OVACA-3细胞,观察阻断PI3K/PKB信号传导通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响,揭示阻断PI3K/PKB信号传导通路治疗卵巢癌的机理和可行性。方法不同浓度的PI3K抑制剂LY294002作用于人卵巢癌OVACA-3细胞后,运用Western Blotting检测P-AKT及细胞核内NF-κBp65表达情况;MTT法、Annexin V-FITC流式细胞技术检测不同浓度的LY294002对卵巢癌OVACA-3细胞增殖及凋亡的影响。结果 LY294002可抑制人卵巢癌OVACA-3细胞中通路效应蛋白AKT、NF-κBp65的激活,且呈浓度及剂量依赖性。LY294002对细胞增殖抑制作用具有时间依赖性(F=10.398,P=0.001)和剂量依赖性(F=9.801,P=0.002)。LY294002可使卵巢癌细胞S期比例显著减少,G0/G1期比例增多,提示LY294002促使细胞在细胞周期G0-G1期受到阻滞。最终,抑制卵巢癌细胞增殖,促使其发生细胞凋亡,使细胞周期停滞在G1期。结论 PI3K/PKB信号传导通路阻断剂LY294002有可能成为治疗卵巢癌的新药,阻断PI3K/AKT信号传导通路可作为治疗卵巢癌的新切入点。     

GOLPH3通过PI3K/Akt信号通路调控上皮性卵巢癌细胞增殖与凋亡的研究

目的:探讨GOLPH3基因对上皮性卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响及作用机制。方法:siRNA干扰技术沉默SKOV3细胞株中GOLPH3基因表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PI3K/Akt信号通路相关基因Akt、p-Akt 473、p-Akt 308及Bcl-2表达。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理卵巢癌SKOV3细胞后,检测SKOV3细胞的增殖能力及凋亡情况。结果:siRNA干扰SKOV3细胞株中GOLPH3基因,GOLPH3表达下调,细胞增殖减少,凋亡增多;PI3K/Akt信号通路相关基因p-Akt 473、p-Akt 308、抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平均下降,Akt蛋白水平表达无显著变化。LY294002处理SKOV3细胞后,细胞增殖率降低,凋亡率升高。结论:GOLPH3基因可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌细胞增殖,并抑制其凋亡的作用。     

磷脂酰肌醇3激酶在卵巢上皮性癌组织中的表达及其抑制剂对卵巢上皮性癌细胞生长抑制作用的研究

目的 探讨细胞信号转导信使磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其意义;并探讨PI3K抑制剂LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞株的生长抑制作用.方法 应用蛋白印迹法和RT-PCR技术检测正常卵巢组织(正常组,20份)、卵巢良性上皮性肿瘤组织(良性组,6份)、卵巢交界性上皮性肿瘤组织(交界性组,6份)和卵巢癌组织(卵巢癌组,39份)中PI3K p85亚单位蛋白和mRNA的表达.将SKOV3细胞分为对照组(只加培养液)、LY294002组(加1、10、30、50、100 μmol/L LY294002)、顺铂组(加0.33、1.25、2.5、5、10 μmol/L顺铂)和联合组(加50 μmol/L LY294002+10 μmol/L顺铂),四甲基偶氮唑蓝还原法测定不同浓度的LY294002及顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用.结果 (1)PI3K p85亚单位蛋白的表达阳性率:正常组和良性组均为0,交界性组为2/6,卵巢癌组为85%(33/39),正常组、良性组、交界性组分别与卵巢癌组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)PI3K p85亚单位mRNA的表达水平:正常组为0.178±0.102,良性组为0.643±0.112,交界性组为0.847±0.058,卵巢癌组为1.689±0.423,正常组、良性组、交界性组分别与卵巢癌组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).卵巢癌组织中,PI3K p85亚单位蛋白表达阳性率及mRNA的表达水平,不同年龄、病理类型间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);而不同病理分化程度、手术病理分期间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)LY294002及顺铂呈剂量依赖性地抑制SKOV3细胞的生长.LY294002组(50 μmol/L)、顺铂组(10 μmol/L)、联合组SKOV3细胞的抑制率分别为(46.0±2.0)%、(44.4±3.2)%、(57.1±4.1)%,联合组SKOV3细胞的抑制率高于LY294002组及顺铂组(P＜0.01).结论 PI3K p85亚单位在卵巢癌组织中呈高表达,与病理分化程度、手术病理分期有关.LY294002与顺铂联合用药对卵巢癌细胞生长的抑制具有协同效应.     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡信号传导通路的影响

目的:研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;研究VEGF-C受体KDR、信号通路PI3K、MAPK在VEGF-C对宫颈癌增殖和凋亡调控中的作用。方法:应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达;应用KDR-Ab、信号通路PI3K抑制剂LY294002、信号通路MAPK抑制剂PD98059预处理HeLa细胞,再进行VEGF-C刺激,观察上述指标的变化。结果:重组VEGF-C(50ng/μl)刺激HeLa细胞后增殖指数增加(2.13 vs 1),细胞周期S期比率增多[(64.26±0.20)%vs(30.91±0.09)%,P<0.05],细胞凋亡率降低(3.29±0.35 vs 7.44±0.55,P<0.05);Bcl-2、Cyclin D1表达增加(P<0.05)。KDR-Ab、LY294002预处理后与VEGF-C组相比增殖指数降低,细胞周期S期比率下降,凋亡指数升高,Bcl-2、Cyclin D1表达降低。PD98059预处理后,与VEGF-C组相比增殖指数降低、细胞周期S期比率下降、Bcl-2、Cyclin D1表达降低,但对VEGF-C诱导的凋亡无明显影响。结论:外源性VEGF-C作用于肿瘤细胞自身的KDR受体,激活细胞内信号传导通路MAPK途径和(或)PI3K途径诱导Cyclin D1表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,进而促进He-La细胞增殖;通过PI3K途径诱导Bcl-2表达,抑制凋亡。     

TFF3激活PI3K/Akt通路参与宫颈腺癌的发病机制

目的:探讨TFF3通过激活PI3K/Akt信号通路调控宫颈腺癌发生发展的机制。方法:TFF3细胞因子和PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)或两者共同处理Hela细胞,CCK-8法检测Hela细胞增殖能力,Transwell小室观察细胞迁移能力,流式细胞学方法检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白Akt及其激活状态蛋白p-Akt的表达。结果:与对照组相比,TFF3处理后Hela细胞的增殖和迁移能力明显提高,细胞凋亡减弱,差异有统计学意义(P0.05);LY294002处理后Hela细胞的增殖及迁移能力明显降低,细胞凋亡增多,差异有统计学意义(P0.05);TFF3+LY294002处理后Hela细胞的增殖、迁移能力及细胞凋亡与TFF3和LY294002处理组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot结果表明,TFF3能激活p-Akt基因表达。结论:TFF3能通过提高p-Akt蛋白表达激活PI3K/Akt信号通路,从而参与调节宫颈腺癌细胞的恶性行为。     

PI3K抑制剂拮抗雌激素介导的子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖的研究

目的:探讨磷脂肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对雌激素(E2)介导下的子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响。方法:CCK-8法检测E2对Ishikawa细胞的增殖作用,以及LY294002对Ishikawa细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测Ishikawa细胞在E2与LY294002作用下的细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移能力。结果:E2促进Ishikawa细胞增殖,LY294002抑制E2介导下的Ishikawa细胞增殖,且呈时间浓度依赖性。LY294002作用下,Ishikawa细胞失去了迁移侵袭能力,细胞大量凋亡。结论:E2促进Ishikawa细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,LY294002对E2介导下的Ishikawa细胞增殖具有抑制作用。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂联合顺铂对卵巢上皮性癌细胞体外抑制作用的研究

卵巢上皮性癌（卵巢癌）的死亡率居妇科恶性肿瘤的首位，但目前对其分子病因学却知之甚少。由于卵巢癌长期隐匿在腹腔内，早期诊断困难，多数患者诊断时已为晚期，除用顺铂、紫杉醇等少数化疗药物可稍延长患者存活时间外，这些晚期、复发性卵巢癌患者的生存率和预后在近40年几乎无变化，明显低于其他妇科恶性肿瘤患者。近年来研究表明，磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）在多种人类恶性肿瘤组织中表达水平异常增高，PI3K催化亚单位P110α（PDKCA）在80％原发性卵巢癌细胞内mRNA拷贝数增加约40％。在癌细胞内，P13K通过磷脂酰肌醇依赖性激酶（PDK1）、蛋白激酶B（PKB）形成P13K／PDK1／PKB信号通道，抑制细胞凋亡，刺激细胞增殖。顺铂是治疗卵巢癌的主要化疗药物，本研究观察了P13K抑制剂——LY294002及其联合顺铂对卵巢癌细胞株H08910PM和OVCAR3细胞生长的抑制作用，以期为中晚期卵巢癌的临床治疗提供理论依据。     

小檗碱对人卵巢癌细胞SKOV3抑制作用的研究

目的 研究小檗碱对人卵巢癌细胞的抑制作用,并探讨其调控机制。方法 培养人卵巢癌细胞SKOV3,给予不同浓度的小檗碱,通过CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western-Blot检测细胞中CyclinD1、Bcl-2、Bax、Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果 小檗碱剂量依赖性地抑制卵巢癌细胞增殖;通过下调Cyclin D1表达调控细胞周期;小檗碱可明显诱导SKOV3细胞凋亡,下调Bcl-2并上调Bax表达;此外,小檗碱通过调节Vimentin和E-cadherin的表达抑制细胞迁移。结论 小檗碱剂量依赖性地抑制SKOV3细胞增殖和迁移,促进细胞周期停滞,诱导细胞凋亡,达到抗肿瘤效果。     

顺铂与姜黄素联用抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖作用的研究

目的:研究顺铂（cDDP）对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响。方法:采用MTT法计算细胞存活率,Giemsa染色观察细胞形态变化及细胞凋亡情况,用流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:姜黄素可明显抑制3AO细胞的生长,其半数生长抑制率（IC_50）约为27.8μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2/M期并可诱导细胞凋亡。cDDP与各种浓度姜黄素联合可显著抑制3AO细胞增殖（P<0.01）。姜黄素和cDDP均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:姜黄素可与cDDP协同抑制人卵巢癌细胞株3AO的增殖。其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

CyclinD1、C-erbB2及bcl-2基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义

目的 :检测癌基因CyclinD1、C erbB2及bcl 2在卵巢上皮肿瘤中的表达 ,探讨它们在卵巢肿瘤发生、发展中的作用及临床、病理意义。方法 :应用免疫组化SP法检测72例恶性卵巢肿瘤、12例交界性卵巢肿瘤、2 1例良性肿瘤及 10例正常卵巢组织中Cy clinD1、C erbB2及bcl 2基因的表达情况。结果 :1.卵巢恶性、交界性及良性肿瘤中Cy clinD1阳性率依次为 2 7.78%、33.3%、9.5 2 %。恶性及交界性肿瘤阳性率明显高于良性肿瘤 ,其阳性率与组织学分级呈负相关 ,而与患者年龄、临床分期、组织学类型无关 ;2 .卵巢恶性、交界性及良性肿瘤中C erbB2的阳性率依次为 5 6 .9%、4 1.6 7%、14.2 8%。恶性及交界性肿瘤阳性率明显高于良性肿瘤 ,差异有显著性。C erbB2阳性表达在组织分化差及期别晚的肿瘤中较分化好、期别早者高 ;3.卵巢恶性、交界性、良性肿瘤中bcl 2的阳性表达率依次为 6 3.89%、5 0 %、2 8.5 %。恶性及交界性肿瘤与良性肿瘤之间的表达差异有显著性。组织分化差、期别早的肿瘤中bcl 2的阳性率较分化好、期别晚者高 ;4 .两种及两种以上基因同时表达率 (5 1.4 % )显著高于单基因表达 (2 7.79% )。CyclinD1与C erbB2基因表达呈负相关。结论 :CyclinD1、C erbB2及bcl 2基因在卵巢癌发生、发展中起重要作用 ,表明细胞?     

顺铂诱导人卵巢癌AO 10/17细胞凋亡的实验研究

目的探讨顺铂是否通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长,以及细胞凋亡和细胞周期、细胞内外钙离子浓度的关系。方法应用顺铂处理ＡＯ１０／１７细胞,ＨＥ染色观察细胞形态学改变;琼脂糖凝胶电泳观察ＤＮＡ降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的改变及细胞内钙离子的变化。结果在顺铂作用下,ＡＯ１０／１７细胞呈凋亡改变,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时细胞周期发生特定的改变,细胞内钙离子升高,但用ＣａＣｌ２与顺铂同时处理细胞,没有促进顺铂的作用。结论顺铂通过细胞内钙离子变化,诱导人卵巢癌细胞凋亡,是顺铂抑制卵巢肿瘤生长的机理之一;顺铂诱导的细胞凋亡与细胞周期有关     

UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3中的表达及意义

目的:探讨针对UHRF1基因的小干扰RNA(siRNA)转染人卵巢癌细胞株OVCAR-3后UHRF1表达的变化及细胞的增殖和凋亡,为UHRF1基因作为新的靶点治疗卵巢癌提供依据。方法:用siRNA基因沉默技术,将体外化学合成的针对UHRF1基因的siRNA转染至OVCAR-3细胞(转染组),并以转染阴性对照siRNA序列的细胞作为阴性对照组,未经转染的细胞作为空白组;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染前后细胞UHRF1 mRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8实验和流式细胞术分别检测沉默UHRF1基因后对细胞增殖和凋亡的影响。结果:实时荧光定量PCR结果显示,siRNA转染后UHRF1基因在卵巢癌细胞株OVCAR-3中表达显著降低(P<0.01)。Western blot结果显示,转染组、阴性对照组和空白组细胞UHRF1蛋白相对表达量分别为0.16±0.04、0.33±0.03、0.35±0.07;转染组细胞UHRF1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白组(P<0.05),而阴性对照组和空白组之间无显著差异(P>0.05)。CCK-8实验结果显示,转染后48,72,96h,转染组细胞增殖率均显著低于空白组(P<0.01)。流式细胞术结果显示,转染组、阴性对照组细胞凋亡率分别为(15.83±2.22)%、(7.46±2.93)%,差异显著(P<0.01)。结论:UHRF1基因沉默后可显著抑制卵巢癌OVCAR-3细胞UHRF1的表达,并抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

新生大鼠卵母细胞凋亡信号通路SCF-FOXO3a的体外实验研究

目的:研究FOXO3a(forkhead box group O)转录因子是否参与调控哺乳动物卵巢中裸露卵母细胞和原始卵泡内卵母细胞的凋亡。方法:体外分离培养新生大鼠卵母细胞巢和原始卵泡内的卵母细胞,干细胞因子(stem cell factor,SCF)单独或与磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂LY 294002联合作用于卵母细胞,TUNEL法凋亡染色观察卵母细胞凋亡状况;RT-PCR、Western blotting检测FOXO3a及其下游靶分子与卵母细胞凋亡的关系。结果:SCF不影响卵母细胞FOXO3a总蛋白表达水平,但使其磷酸化水平增加,从而抑制了卵母细胞凋亡;LY 294002可完全阻断上述效果。SCF使FOXO3a的靶基因Bim和p27kip1表达下调,此作用同样可被LY 294002逆转。结论:FOXO3a和其下游靶基因Bim及p27kip1可能参与了SCF信号通路对新生大鼠卵母细胞的凋亡调控。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌细胞及移植瘤干预作用

目的检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞及移植瘤的干预作用。方法应用流式细胞仪和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测flavopiridol作用后卵巢癌细胞系AO的细胞凋亡率和细胞周期,应用实时荧光定量PCR技术检测flavopiridol作用前、后AO细胞中细胞周期蛋白（cyclin）D和活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3的表达情况。建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol干预后裸鼠的生存情况及肿瘤体积的变化,TUNEL和免疫组化方法分别检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况和微血管密度（MVD）。结果AO细胞在150、300、500nmol／L浓度的flavopiridol作用下,凋亡率分别为4．1％、10．7％和7．6％;G1期细胞比例显著增加,S期比例显著降低（P〈0．05）。flavopiridol作用后AO细胞cyclin D的表达量（0．25）显著下降,活性caspase-3的表达量（2．55）轻度升高,高于flavopiridol作用前的0．69（P〈0．05）、2．49（P〉0．05）。flavopiridol干预后裸鼠的累积生存率显著提高（P〈0．05）;裸鼠的平均生存时间为（141±14）d,显著高于磷酸盐缓冲液（PBS）作用后的（106±11）d,两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;在flavopiridol干预后53d时抑瘤率为40％。flavopiridol干预后裸鼠的肿瘤组织中有细胞凋亡发生,MVD为（12±5）个,显著高于PBS作用后的（35±10）个,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论flavopiridol能显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期。     

CPD4光动力学治疗诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨叶绿素衍生物CPD4光动力学治疗杀伤体外培养卵巢癌细胞的作用机制。方法 :应用不同浓度CPD4、不同能量激光对人卵巢癌细胞株 3AO进行光动力学治疗 ,在光镜和电镜下观察其形态变化 ;做DNA片段分析 ;并用流式细胞仪分析细胞DNA含量的改变和细胞凋亡率。结果 :CPD4光动力学治疗明显抑制体外培养人卵巢癌细胞株 3AO的生长 ,细胞分裂阻滞于G0 ～G1期 ,并诱导细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,染色质聚集或断裂 ;DNA凝胶电泳显示梯形条带。结论 :凋亡为叶绿素衍生物CPD4光动力学治疗杀伤体外培养细胞的主要作用机制。     

全反式维甲酸与顺铂联合在体外对卵巢癌细胞株3AO增殖、分化、凋亡的影响及其机制的探讨

目的 观察全反式维甲酸（ATRA）和顺铂（CDDP）在体外对人卵巢癌细胞株3AO的增殖、分化和凋亡的影响，探讨全反式维甲酸提高3AO细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法 ATRA，CDDP以及两药联合分别处理卵巢癌3AO细胞株，MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色后高倍镜下计数凋亡细胞数，细胞免疫化学测定bcl-2，p53的表达。显微镜下观察细胞形态变化。结果 细胞存活率在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，且低于同剂量单用组（P〈0．01）；细胞凋亡率在联用组中随ATRA剂量的增加而增加，且高于同剂量单用组（P〈0．01）；bcl-2在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，p53在联用组中随ATRA剂量的增加而增加。细胞形态随ATRA剂量的增加而趋向下成熟细胞。结论 全反式维甲酸能抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖，诱导其分化，提高其对顺铂促凋亡效应的敏感性。其作用机制可能与bcl-2的表达下降有关，p53作用尚不清楚。     

Effect of tamoxifen, methoxyprogesterone acetate and combined treatment on cellular proliferation and apoptosis in SKOV3/DDP cells via the regulation of vascular endothelial growth factor

Purpose

The aim of this study was to investigate the effect of tamoxifen (TAM), methoxyprogesterone acetate (MPA) and their combined treatment on cisplatin-resistant ovarian cancer SKOV3/DDP cells, as well as the potential mechanisms.

Methods

MTT assay was used to investigate the effect of different concentrations (0.01, 0.1, 1, 10 and 100 μM) of TAM, MPA and their combined treatment on the proliferation of cisplatin-resistant ovarian cancer SKOV3/DDP cells. Flow cytometry was employed to analyze the cell cycle and apoptosis rate of SKOV3/DDP cells treated with medium concentration (10 μM) of TAM, MPA and their combined treatment. Change in the protein level of vascular endothelial growth factor (VEGF) in response to drug treatments was measured using Western-blot.

Results

The proliferation of SKOV3/DDP cells was inhibited by 1, 10 and 100 μM of TAM or MPA in a dose-dependent manner. Compared to the control group, 10 μM TAM could significantly arrest SKOV3/DDP cells in the G0/G1 stage and induce apoptosis (p < 0.01). However, 10 μM MPA only promoted cell apoptosis, while exhibited little effect on the cell cycle. We further found that 10 μM TAM could remarkably reduce the protein expression of VEGF, while 10 μM MPA only induce a slight reduction. Strikingly, the combined treatment of TAM and MPA exhibited additive effect on the proliferation, cell cycle, apoptosis rate and VEGF expression of SKOV3/DDP cells.

Conclusions

We found that TAM, MPA and their combined treatment exhibited significant inhibitory effect on the cisplatin-resistant ovarian cancer SKOV3/DDP cells. Hence, TAM and MPA could be potential cytotoxic drugs to treat cisplatin-resistant patients with advanced ovarian cancer.