泻火平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

目的:通过观察泻火平突散对干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)刺激后人球后成纤维细胞的影响来探讨其治疗甲状腺相关眼病(Thyroid Associated Ophthalmopathy,TAO)的机制。方法:将人眼球后成纤维细胞(Retro-ocular Fibroblasts,RFs)作为靶细胞,用泻火平突散进行干预,通过体外培养RFs,观察各组RFs增殖,透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMP)-1、MMP-2、金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2活性及细胞间粘附分子-1(Intercellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1)、人类白细胞DR抗原(Human Leukocyte Antigen DR,HLA-DR)、CD40表达的情况,对实验数据进行统计分析,探讨泻火平突散治疗TAO的作用机制。结论:泻火平突散可通过抑制RFs的增殖和ICAM-1、HLA-DR、CD40的表达,调节MMPs/TIMPs平衡,减少HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成来治疗TAO。     

雷公藤甲素对球后成纤维细胞的影响

目的　研究雷公藤甲素 (TL)对γ -干扰素 (IFN -γ)刺激后人眼球后成纤维细胞(RFs)透明质酸 (HA)、I型胶原蛋白合成的影响。方法　体外培养的RFs分别与IFN -γ ,TL孵育后 ,放免法检测TL对RFs分泌HA和I型胶原蛋白的影响。结果　INF -γ(10 0U/L)能强烈刺激RFs分泌HA和I型胶原蛋白 (P均 <0 .0 5 ) ,分别是对照组的 1.6 4倍 (P <0 .0 5 )和 1.72倍 (P <0 .0 1) ;而TL能明显抑制IFN -γ的这种刺激作用 ,且随着剂量的增加 ,抑制作用更加明显。结论　TL能通过抑制HA、I型胶原蛋白的合成来减少Graves’眼病的免疫损伤。     

雷公藤甲素对BRL大鼠肝细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤甲素(TP)对BRL大鼠肝细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,经不同浓度TP处理细胞后,采用CCK-8法检测BRL大鼠肝细胞增殖能力;生化仪测定细胞上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;AV/PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子含量。结果与正常对照组比较,雷公藤甲素能明显抑制BRL大鼠肝细胞增殖,诱导细胞凋亡;雷公藤甲素1、10、100μmol/L能明显升高BRL大鼠肝细胞上清液中AST活性,100μmol/L能明显升高ALT活性并降低IL-10含量(P0.05,P0.01)。与雷公藤甲素100μmol/L组比较,雷公藤甲素1、10μmol/L组细胞上清液中ALT含量明显降低,雷公藤甲素10μmol/L组细胞上清液中IL-10含量明显升高,雷公藤甲素1μmol/L组细胞凋亡率明显降低且细胞上清液中TNF-α含量明显升高(P0.05,P0.01)。与雷公藤甲素10μmol/L组比较,雷公藤甲素1μmol/L组细胞凋亡率明显降低,细胞上清液中TNF-α含量明显升高(P0.01)。结论雷公藤甲素对BRL大鼠肝细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,该抑制作用可能与诱导BRL大鼠肝细胞凋亡有关。     

活血平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

目的:通过观察活血平突散对γ-干扰素(Inter Feron-γ,IFN-γ)刺激后人球后成纤维细胞(Retroocular Fibroblasts,RFs)的影响以探讨其治疗甲状腺相关眼病(Thyroid Associated Ophthalmopathy,TAO)的机制。方法:将RFs细胞作为靶细胞,用活血平突散进行干预,通过体外培养RFs细胞,观察各组RFs增殖,透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,基质金属蛋白酶(Matrix Metallo Proteinase, MMP-1)、MMP-2、金属蛋白酶组织抑制因子1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase,TIMP-1)、TIMP-2活性,CD54、人类白细胞DR抗原(Human Leukocyte Antigen DR,HLA-DR)、CD40表达的影响,统计分析实验数据,探讨活血平突散治疗TAO的作用机制。结论:活血平突散能够通过抑制RFs的增殖和HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的异常合成,逆转MMPs/TIMPs的失衡,抑制CD40、CD54、HLA-DR的高表达来起到治疗TAO的作用。     

雷公藤甲素致大鼠颗粒细胞凋亡及雌激素保护作用研究

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,雷公藤甲素)致雌性大鼠生殖系统损害及防治方法。方法:采用体外卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GCs)培养,分别给予不同浓度雷公藤甲素干预及不同浓度β-雌二醇与雷公藤甲素共同孵育,观察卵巢GCs的生长情况,采用MTT检测细胞增殖程度,TUNEL检测细胞凋亡程度。结果:细胞培养48小时后观察各组细胞形态,雷公藤甲素浓度大于100ug/L时,贴壁细胞数量明显减少;MTT检测显示,与对照组相比,当浓度100ug/L的雷公藤甲素组均存在显著差异。TUNEL检测细胞凋亡提示β-雌二醇(10-7mol/L)与雷公藤甲素(2.78×10-7mol/L)共同孵育组,细胞凋亡程度明显减少,数量增多。结论:随着雷公藤甲素浓度增加,颗粒细胞生长及增殖受到显著抑制;β-雌二醇可以预防和修复雷公藤甲素对大鼠颗粒细胞造成的伤害,增强细胞活性,抑制细胞凋亡。     

雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞增殖凋亡作用及对Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的增殖诱导作用及其相关机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ (FBS),100 mg·L-1青霉素链霉素的DMEM培养液中,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测C6胶质瘤细胞凋亡情况,用逆转录-聚合酶链反应(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),免疫印迹法(Western blotting,WB)检测细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax) mRNA及蛋白的表达变化情况.结果:1.2 mg·L-1浓度的雷公藤甲素溶液对C6胶质瘤细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性;雷公藤甲素作用C6胶质瘤细胞24 h后,1.2 mg·L-1浓度对其凋亡诱导作用最为明显;雷公藤甲素可明显下调细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质表达,且该作用呈剂量-时间依赖性,而Bax mRNA及蛋白质表达呈上调趋势.结论:雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞具有较好的生长抑制和凋亡诱导作用,两其作用机制可能与Bcl-2,Bax mRNA及蛋白质表达有关.     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

雷公藤甲素对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用及其机制

目的观察雷公藤甲素对激素依赖性人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用,并初步探讨可能的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测雷公藤甲素对SGC-7901细胞周期的影响,Western blotting法观察雷公藤甲素对SGC-7901细胞内雌激素受体(ER-α)蛋白表达的影响。结果雷公藤甲素对SGC-7901细胞增殖有显著的抑制作用,并呈现良好的量-效关系。雷公藤甲素还能有效地使SGC-7901的细胞周期阻滞在S期,同时明显下调ER-α蛋白的表达。结论雷公藤甲素能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖并且使细胞周期阻滞在S期,其对SGC-7901细胞增殖的抑制作用和周期阻滞作用的机制可能与其下调ER-α的表达有关。     

缺氧诱导因子-1抑制剂细胞筛选模型的 建立及抑制剂研究

目的:建立并应用2种缺氧诱导因子-1(HIF-1)抑制剂细胞筛选模型对雷公藤甲素和三白脂素-8活性进行评价,为HIF-1靶点抑制剂的研发提供基础。方法:建立基于报告基因的HIF-1抑制剂细胞筛选模型,U251-HRE和T47D-HRE细胞模型,分别对雷公藤甲素与三白脂素-8活性进行检测,观察其对下游关键调控基因VEGF表达的影响,并用MTT法比较2类抑制剂对多种实体瘤细胞的增殖抑制活性。结果:2种细胞模型在1%O2缺氧20 h,由HIF-1诱导的荧光素酶高表达,可用于抑制剂的活性评价。雷公藤甲素对U251-HRE细胞模型敏感,其HIF-1抑制活性IC50(3.4±0.5)×10-8mol.L-1,而三白脂素-8对T47D-HRE细胞模型敏感,其IC50(2.4±0.6)×10-8mol.L-1;雷公藤甲素和三白脂素-8在1×10-7mol.L-1都可对T47D细胞因缺氧所致的VEGF表达升高产生明显抑制作用,其抑制率分别为85.2%,62.6%;雷公藤甲素对所测肿瘤细胞株都有明显的增殖抑制活性,而三白脂素-8对乳腺癌、胰腺癌细胞株较为敏感。结论:针对不同类别的HIF-1抑制剂建立相应敏感的特异性细胞筛选模型至关重要。     

雷公藤甲素通过PTEN表达调控Wnt/β-catenin通路抑制黑色素瘤的机制研究

目的:探讨雷公藤甲素的抗黑色素瘤作用是否与PTEN表达及Wnt/β-catenin通路相关。方法:实验分为5组:空白对照组、雷公藤甲素(20 nmol/L)组、β-catenin抑制剂(5μmol/L IWR-1-endo)组、雷公藤甲素+β-catenin抑制剂组、ATRA(100μmol/L)组。分别采用CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法、实时定量PCR法和Western blot法检测各组A375细胞活力、凋亡率及PTEN、β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、PCNA mRNA及蛋白的表达。结果:雷公藤甲素、β-catenin抑制剂和ARTA处理能抑制A375细胞的增殖并诱导其凋亡,在增强Caspase-3和PTEN表达的同时抑制β-catenin、Bcl-2、PCNA的表达。结论:雷公藤甲素能抑制黑色素瘤细胞A375的增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过增加PTEN的表达进而抑制Wnt/β-catenin通路的激活来实现。     

补肾活血法复方解除雷公藤甲素抑制人卵巢颗粒细胞分泌功能的研究

目的探讨雷公藤甲素对体外培养人卵巢颗粒细胞增殖的影响及补肾活血中药复方对此影响的解除作用。方法 MTT法检测雷公藤甲素6种不同浓度对人卵巢颗粒细胞原代培养细胞增殖的影响,并计算出细胞半数抑制浓度值(IC50);放免法分别检测颗粒细胞正常组(正常组)、雷公藤甲素抑制组(TL组)、中药含药血清组(TL+中药组)的雌二醇(E2)、孕酮(P)水平。结果雷公藤甲素浓度≥1μg/m L时对人卵巢颗粒细胞的增殖有明显抑制作用,且呈剂量依耐性;当IC50为5.33μg/m L时,TL组的E2、P水平明显低于正常组(P均0.05),而TL+中药组E2、P水平均明显高于TL组(P均0.05)。结论雷公藤甲素能抑制体外培养的人卵巢颗粒细胞的分泌功能,补肾活血中药复方能解除其抑制作用,提高体外培养的人卵巢颗粒细胞的分泌功能。     

雷公藤甲素治疗类风湿关节炎的作用机制及安全性分析

目的探讨雷公藤甲素治疗类风湿关节炎的作用机制,并分析安全性。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤(0.4mg/kg)组和雷公藤甲素低、中、高剂量(0.1、0.2、0.4mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠以II型胶原诱导类风湿关节炎模型。待造模成功后,从第3周开始,各组分别ig给药,每天1次,连续4周。比较各组大鼠足爪肿胀情况,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+和CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)百分比,检测血清中白细胞介素-10(IL-10)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,镜下观察踝关节组织病理形态,并采用免疫组化法检测组织IL-10、IL-17、TNF-α、VEGF、IFN-γ、TGF-β表达水平。结果病理切片显示模型组大鼠踝关节内滑膜细胞显著增生,有单核细胞、淋巴细胞等大量炎性细胞浸润、新生毛细血管,骨小梁变细,软骨表面侵蚀严重。其余各组组织内病变程度较模型组明显减轻。给药后,甲氨蝶呤组、雷公藤甲素各剂量组大鼠关节肿胀度和关节炎指数较给药前明显减少(P0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组、雷公藤甲素各剂量组CD4+Foxp3+Treg和CD4+CD25+Treg均升高(P0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组、雷公藤甲素各剂量组大鼠血清IL-10、TGF-β水平升高,IL-17、TNF-α、VEGF、IFN-γ水平降低(P0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组、雷公藤甲素各剂量组大鼠踝关节组织IL-10、TGF-β表达明显增多,IL-17、TNF-α、VEGF、IFN-γ表达明显减少(P0.05)。与对照组或模型组比较,甲氨蝶呤组、雷公藤甲素各剂量组血清ALT、AST水平差异均无统计学意义(P0.05)。甲氨蝶呤组与雷公藤甲素高剂量组比较前述各项指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论雷公藤甲素能够明显改善II型胶原诱导类风湿关节炎大鼠的关节肿胀情况,作用机制与促进IL-10、TGF-β表达,增加Treg细胞比例,抑制IL-17、TNF-α、VEGF、IFN-γ表达有关,并且无明显肝毒性。     

雷公藤甲素诱导H22细胞凋亡作用研究

目的研究雷公藤甲素对H22细胞的诱导凋亡作用。方法MTT法测定雷公藤甲素对H22肿瘤细胞的抑制率,并通过细胞形态学观测及DNA凝胶电泳分析检测雷公藤甲素对H22细胞的诱导凋亡作用。结果雷公藤甲素80μg/L抑制率达41.6%,与浓度成正相关,IC50为85.79μg/L;电镜结果表明,40μg/L以上浓度可明显诱导H22细胞出现凋亡特征;DNA电泳显示明显的梯状条带。结论雷公藤甲素能诱导H22细胞凋亡,表明其具有一定的抗肝癌作用。     

雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响

目的探讨雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响。方法 MTT法检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞周期的影响,Western blot检测PI3Kp85、p-AkT、AkT、 p-mTOR、mTOR蛋白表达,荧光定量PCR检测PI3Kp85、AkT、mTOR、LC3ⅡmRNA表达。结果雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖有明显抑制作用,可显著减低PI3Kp85、p-AkT、p-mTOR蛋白和mRNA表达(P0.05,P0.01),显著升高Ishikawa细胞S期和G2/M期比例、LC3ⅡmRNA表达(P0.05,P0.01)。结论雷公藤甲素可能基于PI3K-AkT-mTOR通路阻滞子宫内膜癌Ishikawa细胞周期,从而抑制肿瘤细胞生长。     

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响

目的研究雷公藤甲素对CIA小鼠免疫功能的影响.方法分离和培养原代小鼠脾T、B淋巴细胞测定细胞增殖活性(MTT法);流式细胞技术(FCM)检测外周血中CD4 、CD8 T细胞亚群含量;放射免疫分析法(RIA)测定脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量.结果雷公藤甲素能抑制ConA、LPS诱导刺激的脾T、B淋巴细胞增殖活性;抑制CD3 、CD4 T细胞和降低CD4 /CD8 比值,但对CD8 T细胞有增强作用;降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6水平.结论雷公藤甲素能抑制CIA小鼠的免疫功能,其作用机制可能是通过调节CD4 /CD8 比值平衡失调、抑制T、B细胞的增殖活性和内源性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的水平而实现的.     

木犀草素和异荭草素对Caco-2细胞中α-葡萄糖苷酶及葡萄糖吸收的影响

目的:研究木犀草素和异荭草素对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对葡萄糖吸收的影响。方法:取对数生长期的Caco-2细胞,分别加入不同浓度的木犀草素和异荭草素孵育,CCK-8法检测细胞的存活率,酶标仪检测α-葡萄糖苷酶抑制率,RT-PCR法和Western blot法检测Caco-2细胞钠依赖性葡萄糖转运蛋白1(SGLT1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA和蛋白表达。结果:100μmol/L木犀草素和异荭草素对α葡萄糖苷酶的抑制作用与阿卡波糖差异无统计学意义(P0.05);50、100μmol/L木犀草素和100μmol/L异荭草素能显著抑制SGLT1、GLUT2 mRNA及蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论:木犀草素和异荭草素通过抑制Caco-2细胞的α-葡萄糖苷酶和SGLT1、GLUT2的mRNA和蛋白表达来延缓对碳水化合物水解和影响葡萄糖吸收,具有潜在的降血糖作用。在相同浓度下,木犀草素的效果要优于异荭草素。     

冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用原理及caspase途径在凋亡过程中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法,形态学观察,RT-PCR及流式细胞法.结果 冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.形态学观察可见MDA-MB-231的增殖受明显抑制.冬凌草甲素可诱导细胞内抑制凋亡基因Bc1-xl表达量时间依赖性减少,促凋亡基因Bid表达量增加,caspase-3 的表达增加.40 μmol/L药物处理48 h后,流式法检测细胞凋亡率为75%.结论 冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡,这种作用可能是通过改变Bc1-xl/Bid的表达比率、激活caspase-3 而实现的.     

黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素和氢化考的松体外免疫抑制作用的比较研究

目的:比较黄芪糖蛋白与雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松的体外免疫抑制作用。方法:不同浓度黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松作用于小鼠脾细胞,MTT法测定4种药物对ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪测定4种药物对脾细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-6含量的影响。结果:4种药物对体外培养的脾细胞增殖均表现出显著的抑制活性(P<0.05),药效强度依次为雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松、黄芪糖蛋白。但黄芪糖蛋白主要表现为对T细胞的抑制作用。黄芪糖蛋白促进淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6,而其它3种药物却抑制IFN-γ、IL-6的分泌(P<0.05)。结论:黄芪糖蛋白对于淋巴细胞体外增殖的抑制作用不同于雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松,推测其具有独特的作用机制。     

雷公藤甲素抗骨肉瘤细胞的实验研究

目的 观察雷公藤甲素体内、外抗骨肉瘤效应,探索相关分子机制。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测雷公藤甲素对骨肉瘤细胞的生长抑制效应,流式细胞异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（FITC/PI）双染法检测细胞凋亡,Western blot检测相关信号蛋白表达情况,裸鼠荷骨肉瘤模型验证雷公藤甲素抗骨肉瘤的体内效应,免疫组织化学法（IHC）检测瘤体内相关蛋白表达情况。结果 雷公藤甲素能够显著抑制多种骨肉瘤细胞的增殖,并且能够诱导其发生凋亡;激活线粒体相关信号通路;显著抑制骨肉瘤在裸鼠体内生长,并检测到细胞凋亡现象。结论 雷公藤甲素通过激活线粒体相关凋亡信号通路,诱导骨肉瘤细胞发生凋亡,并且抑制其在裸鼠体内生长。     

雷公藤甲素诱发大鼠急性肾损伤的机制

目的:观察雷公藤甲素对大鼠肾脏的急性毒性作用,并探讨其发生机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为1个对照组和2个实验组,对2个实验组大鼠给予腹腔注射剂量分别为1,2 mg· kg-1的雷公藤甲素,对照组大鼠则给予相当量的空白对照液.注射后48 h将所有大鼠处死,采集心脏血液并取出双侧肾脏,检测血清尿素氮(BUN)与肌酐(Cr)含量,观察HE染色切片上肾组织形态学改变情况;应用原位末端标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡情况;测定肾组织内SOD,GSH-Px活性以及MDA含量.结果:一次性大剂量注射雷公藤甲素可在短时间内对大鼠肾脏造成严重损伤,剂量越大越显著;经雷公藤甲素处理后,肾组织中SOD与GSH-Px活性明显降低,而MDA含量则明显升高,且均与肾脏的损伤程度密切相关.结论:肾脏是雷公藤甲素急性毒性作用重要的靶器官,氧化应激在雷公藤甲素对肾脏造成的毒性损害中发挥了重要作用.