硫酸软骨素A对NIH—353鼠成纤维细胞及人皮肤成纤维细胞增…

用ＭＴＴ法检测了硫酸软骨素Ａ（４－硫酸软骨素，ＣＳ－Ａ）对ＮＩＨ－３５３鼠成纤维细胞和人皮肤成纤维细胞存活与增殖的影响。发现所测ＯＤ值随ＣＳ－Ａ浓度的增高而增大，两者呈正相关（３Ｔ３鼠成纤维细胞；ｒ＝０．８１５４，Ｐ＜０．０５；人皮肤成纤维细胞；ｒ＝０．９１５，Ｐ＜０．０１），表明ＣＳ－Ａ对这两类成纤维细胞的存活和增殖有促进作用。采用ＰＡＰ和ＡＢＣ免疫细胞化学染色，观察到两类细胞的胞膜上有ＣＳ分布     

苦参素对NIH/3T3成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的 观察苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及其细胞外基质(ECM)合成的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的可能作用机制。方法 采用噻唑蓝比色法、流式细胞技术检测苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及细胞周期的影响,采用放射免疫方法检测苦参素对其合成透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)等ECM的影响。结果 苦参素可抑制NIH／3T3成纤维细胞的增殖,减少S期细胞,降低细胞增殖指数,抑制ECM的合成,并呈剂量依赖关系。结论 苦参素可能通过影响成纤维细胞的增殖、抑制成纤维细胞的分裂和ECM的合成发挥其抗肝纤维化作用。     

硫酸软骨素对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力影响

目的探讨硫酸软骨素（CS）对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法常规方法培养人肺癌A549细胞,并给予含不同剂量CS的培养液培养,采用噻唑盐（MTT）法检测CS对A549细胞增殖的影响;采用流式细胞术（FCM）碘化丙啶染色法检测CS对A549细胞周期的影响;采用Transwell侵袭实验检测CS对A549细胞侵袭能力的影响。结果CS各浓度组干预A549细胞后,与对照组相比细胞生长均受到限制,差异具有显著性（F=10．39,q=6．45～17．48,P〈0．05）。24h细胞被抑制25％和50％时CS的浓度为6．6和28．4g／L。以7和30g／L的CS干预A549细胞24h后,FCM检测结果显示,与对照组相比,G0／G1期和G2／M期比例明显降低,S期比例明显升高,差异有显著性（F=16．29～38．01,q=6．15～16．38,P〈0．05）。Transwell侵袭实验显示,实验组A549细胞穿膜细胞数明显少于对照组,差异有显著性（F=3．19,q=4．89、15．38,P〈0．01）。结论CS对人肺癌A549细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关。     

丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的　研究天然药物丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗增生性瘢痕的有效药物。方法　以四甲基偶氮唑 (MTT)法和特异性荧光染色及原位末端标记技术检测丹参酮ⅡA对成纤维细胞增殖及凋亡的影响。结果　丹参酮ⅡA对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,且呈浓度和时间依赖性。采用荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数 ,均呈剂量依赖性增高 (P <0 0 1)。结论　丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,并且能够诱导其发生凋亡 ,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物提供了新的思路。     

桂皮醛对NIH3T3细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察肉桂主要成分桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响,并采用流式细胞仪检测桂皮醛对NIH3T3细胞周期的影响。结果桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度较对照组明显增加,增殖率为15%(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G2/M期比例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。结论桂皮醛可促进NIH3T3的增殖,这种促增殖作用可能是通过调节细胞周期使更多细胞进入S期而实现的。     

生长抑素对人球后成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To elucidate the possible mechanism of Somatostatin 14 in the treatment of Graves' ophthalmopathy, thus providing laboratory data with the intent to underpin therapeutic developments. METHODS: The human retro-ocular fibroblasts (HROFb) was cultured and MTT colorimetry assay was used to determine the proliferation of HROFb. RESULTS: MTT colorimetry assay could precisely reflect the proliferation of HROFb. The absorbance was directly proportional to the numbers of the cells (r = 0.996, P < 0.001). Somatostatin 14 could enhance the cell proliferation percentage at lower levels (< 25 nmol/L) and inhibit that at higher levels (> 25 nmol/L). The cell proliferation correlated positively to Somatostatin 14 levels significantly (r = -0.9054, P < 0.001). CONCLUSION: Somatostatin 14 has a dual effect on HROFb.     

非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖活性的影响

目的研究观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和N端缺失27个氨基酸残基的非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfactor,nm-haFGF)对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞增殖活性的影响。方法用不同浓度(0.01～100ng/ml)的人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及nm-haFGF分别刺激鼻咽癌细胞及血管内皮细胞,作用48h后采用MTT法测定haFGF和nm-haFGF对两种细胞的增殖活性。结果在各浓度(>0.01ng/ml)下,nm-haFGF组对鼻咽癌细胞(除浓度为50ng/ml外)和血管内皮细胞的促增殖作用都显著低于haFGF组。结论nm-haFGF对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞的促分裂活性下降。     

碘化钾对人体皮肤成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度的碘化钾（KI）对人体皮肤成纤维细胞(HSF)增殖活性的影响。方法将体外培养的ＨＳＦ分成7组含不同浓度的KI（0、1?000、3?000、5?000、7?000、9?000、11?000?μg/L）,每组含8个平行样本。完全培养基分别培养24?h后,观察HSF形态变化,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HSF增殖活性。结果KI的浓度在1?000、3?000、5?000?μg/L时成纤维的增殖活性随着碘浓度的增加而升高（P＜0.05）;5?000、7?000?μg/L组细胞增殖活性最高,两组间增殖活性差异无统计学意义（P＞0.05）;7?000、9?000、11?000?μg/L?时HSF增殖活性随着KI浓度的增加而降低（P＜0.05）。结论KI浓度在5?000?μg/L以下会促进HSF增殖活性,高于7?000?μg/L时反而会抑制HSF增殖活性。     

乙醇对NIH 3T3成纤维细胞成脂分化的影响

目的观察乙醇对NIH 3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用,及其对成脂转录因子PPARγ表达的影响.方法以不同浓度乙醇作为诱导剂处理NIH 3T3成纤维细胞14 d,苏丹Ⅳ染色,采用电子计算机图像分析软件Image Pro Plus 4.1,确定脂肪细胞百分比.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测细胞PPARγ mRNA的表达.结果以递增浓度(0.03 mol/L、0.06 mol/L、0.09 mol/L、0.15 mol/L、0.21 mol/L)乙醇处理NIH 3T3成纤维细胞14 d,在0.06 mol/L、0.09 mol/L、0.15 mol/L、0.21 mol/L乙醇组中,脂肪细胞百分比和PPARγ mRNA表达均比对照组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.001).0.03 mol/L乙醇组与对照组间的脂肪细胞百分比和PPARγ mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论乙醇能够直接诱导NIH 3T3成纤维细胞大量分化为脂肪细胞,这可能是乙醇性骨坏死时骨髓内脂肪增多的原因之一.     

几类常用外用中药成分对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的体外观察珍珠粉、血竭、乳香、鹿茸、砒石的主要成分(水溶性珍珠粉、血竭素高氯酸盐、乳香水提物、鹿茸多肽、三氧化二砷)对人皮肤成纤维细胞(HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响,初步探讨其治疗慢性皮肤溃疡的机制。方法组织块法体外培养HSFb;MTT法检测细胞增殖活性;羟脯胺酸比色法测定细胞胶原合成含量。结果药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在1.25×102~1×103mg/L,血竭素在5.0×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在6.25×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb具有促增殖作用,与对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05),三氧化二砷在1.6×10-1~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb增殖具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.01)。药物分别作用于HSFb 48 h后,水溶性珍珠粉在2.5×102~1×103mg/L,血竭素高氯酸盐在2.5×100~2.0×101mg/L,乳香水提物在6.4×10-1~2.0×103mg/L,鹿茸多肽在1.6×10-3~4.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有促进作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01),三氧化二砷在3.2×10-2~8.0×10-1mg/L浓度范围内对HSFb胶原蛋白合成具有抑制作用,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论敛口生肌药珍珠粉(水溶性珍珠粉)、活血生肌药血竭(血竭素高氯酸盐)、活血生肌药乳香(乳香水提物)、温阳生肌药鹿茸(鹿茸多肽)可促进人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,蚀疮化腐药砒石(三氧化二砷)抑制人皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成。     

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人胚胎成纤维细胞的影响

目的研究积雪草甙（asiaticoside,Ad）和羟基积雪草甙（madecassoside,Md）对体外培养人胚胎成纤维细胞（Human embryonic skin fibroblasts,HESFb）增殖过程的影响。方法在不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）Ad和Md的环境下对人胚胎细胞进行体外培养,用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测不同培养时间（0、1、2、3、4、5d）HESFb的OD值,用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果在实验时间内Ad和Md在10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度时均对人胚胎成纤维细胞的增殖有促进作用,200μg/ml浓度时最明显,且Ad比Md作用强。两组在400μg/ml浓度时均有抑制作用。结论在一定浓度和培养时间内一定剂量的Ad和Md对体外培养的HESFb增殖有促进作用,同剂量相比Ad比Md明显。而较高剂量的时候均可出现抑制作用。     

硫酸软硫骨素对3T3-L1细胞增殖和分化的影响

目的 研究硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 噻唑蓝法观察0、5、10、25、50、100、200 mg/L浓度的硫酸软骨素对3T3-L1细胞增殖能力的影响;3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,实验组加入硫酸软骨素干预,诱导分化第8天油红O染色观察脂肪细胞分化程度;荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4) mRNA表达水平;Western blot检测脂肪细胞分化过程中PPARγ、C/EBPα和Smad3蛋白表达.结果 硫酸软骨素对3T3-L1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中25 mg/L的硫酸软骨素作用24 h后对3T3-L1细胞的促增殖作用最大.硫酸软骨素能够抑制3T3-L1细胞成脂分化,减少脂滴聚集.并且硫酸软骨素能够下调PPARγ、C/EBPα和FABP4 mRNA,抑制PPARγ和C/EBPα、上调Smad3蛋白表达水平.结论 在适当浓度范围内硫酸软骨素具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过激活Smad3、下调PPARγ和C/EBPα抑制成脂.     

骨髓成纤维细胞无血清培养体系的建立及R蛋白对其生长的影响

R蛋白是一种存在于巨噬细胞膜上的受体蛋白，在调节吞噬作用过程中起着重要作用。除巨噬细胞外，骨髓基质细胞也可分泌R蛋白。本文建立了小鼠骨髓成纤维细胞无血清培养体系，并调查了无血清培养条件下R蛋白对小鼠成纤维祖细胞生长的影响。结果发现：多聚赖氨酸能增强成纤维细胞贴壁能力；成纤维细胞生长在无血清培养体系及含血清培养体系中无显著差异（P＞0．05）；R蛋白对成纤维细胞生长有一定的促进作用（P＜0．05）。     

MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 MTT法探讨改良五黄油对人皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用,为烧伤创面外用药物五黄油的改良目的之一--抑制瘢痕增生,寻求确切有效的实验依据.方法 倒置显微镜下观察细胞形态学变化.MTT比色法检测不同终浓度(0.10、0.15、0.20、0.25、0.30g/ml)改良五黄油作用下增殖状态下成纤维细胞72h后对细胞增殖的抑制程度,主要指标,细胞形态,吸光度(A)值.结果 倒置显微镜下可见空白对照组成纤维细胞大小均匀,生长密集,改良五黄油实验组和五黄油对照组细胞生长及形态明显改变,增殖缓慢,生长差,贴壁能力减弱.MTT比色法结果表示:0.10～0.30g/ml浓度药物作用人成纤维细胞,其增殖抑制程度与改良五黄油的浓度存在正相关性;与五黄油相对照,改良五黄油增殖抑制率以0.30g/ml浓度最显著(P＜0.01).结论 体外抑制人成纤维细胞增殖,改良五黄油比五黄油更有效.     

地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨地塞米松、氨甲喋呤对人眼球后成纤维细胞增殖的影响。方法：采用体外培养人眼球后成纤维细胞（ＨＲＯＦｂ）,用ＭＴＴ比色法测定ＨＲＯＦｂ增殖程度,并观察了不同浓度地塞米松、氨甲喋呤单独及联合使用对ＨＲＯＦｂ生长、增殖的影响。结果和结论：ＭＴＴ比色法能精确反映ＨＲＯＦｂ的增殖程度,所测定吸收值与细胞数目成正相关（ｒ＝０．９９６,Ｐ＜０．００１）,地塞米松、氨甲喋呤均可抑制ＨＲＯＦｂ的增殖,且随剂     

mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响

目的 探讨mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响.方法 运用电穿孔法将pcDNA3-mTOR质粒转染NIH3T3成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆,RT-PCR和Western印迹分析检测转染组和对照组细胞mTOR mRNA与蛋白的表达,MTT方法检测细胞增生.结果 转染组细胞mTOR mRNA和蛋白质的表达显著增强(P＜0.01);MTT法检测转染组光吸收值显著大于对照组(P＜0.01);结论 mTOR基因转染成纤维细胞可获稳定表达,并明显促进成纤维细胞增生.     

生长抑素对人球后成纤维细胞增殖的影响

目的　探讨生长抑素 1 4 (SS1 4 )治疗 Graves眼病的机理 ,为临床应用提供实验依据。方法　培养人球后成纤维细胞 (hum an retro- ocular fibroblast,HROFb) ,用 MTT比色法测定细胞增殖状况 ,并观察 SS1 4 对HROFb的生长、增殖的影响。结果　所测光吸收值与成纤维细胞的数目呈正相关 (r=0 .996,P<0 .0 0 1)。SS1 4 在低浓度下 (<0 .2 5 nmol/ L)可促进 HROFb 增殖 ,当浓度 >2 5 nm ol/ L 时则可抑制 HROFb的增殖 ,且具剂量效应关系。HROFb的增殖率与 SS1 4 浓度呈负相关 (r=- 0 .90 5 4,P<0 .0 0 1)。结论　生长抑素对人成纤维细胞增殖有双相作用。     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞数量及细胞周期的影响

目的观察经补益营卫方药物血清作用后,衰老人皮肤成纤维细胞数量和细胞周期的变化。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,将细胞分为年轻对照组、老龄对照组、补益营卫高剂量组、补益营卫中剂量组、补益营卫低剂量组。年轻对照组和老龄对照组用10%胎牛血清常规培养;补益营卫高、中、低剂量组分别用10%补益营卫方高、中、低剂量大鼠血清培养,五组细胞连续培养8d。通过细胞计数法观察细胞数量的变化;流式细胞术观察细胞周期。结果补益营卫高、中、低药物血清组的细胞数量和S期细胞比例均增高,且均高于年轻对照组和老龄对照组(P<0.05),以高剂量组增高比例明显。结论补益营卫方可促进衰老人皮肤成纤维细胞增殖(S期细胞比例增高),此作用有剂量依赖性。     

低氧对人胚肺成纤维细胞表型与增生的影响

采用单层细胞超薄切片技术和免疫细胞化学方法， 观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ 和ＨＥＣＣＭ） 等不同条件， 对肺血管外膜成纤维细胞的表型与增殖的影响。结果表明： （１） 仅ＨＥＣＣＭ 组成纤维细胞显示表型转变，胞浆内出现微肌丝、致密体、基膜等平滑肌细胞超微结构，粗面内质网明显减少；且此组细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ） 表达较其余３ 组明显增高（Ｐ＜ ０． ０１）； （２） Ｈ 和ＨＥＣＣＭ 组增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 表达较Ｎ 和ＮＥＣＣＭ 组明显升高（Ｐ＜ ０． ０１）。结果提示： （１） 低氧可经肺动脉内皮细胞介导， 引起人胚肺成纤维细胞向平滑肌样细胞转化，而单纯低氧无此作用；（２） 低氧可直接或经内皮细胞介导，刺激人胚肺成纤维细胞增殖。