电针结合重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠海马突触后致密物-95的影响

目的探讨电针结合重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠海马突触后致密物-95（PSD-95）的影响。 方法60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组（EA组）、重复经颅磁刺激组（rTMS组）和电针结合重复经颅磁刺激组（EA+rTMS组）,每组又根据观察时间点分为7 d、14 d和28 d 3个亚组,每个亚组4只大鼠。大鼠复制大脑中动脉栓塞模型后,分别给予电针、重复经颅磁刺激和电针结合重复经颅磁刺激干预,免疫组织化学法检测缺血侧海马齿状回和CA3区的PSD-95蛋白表达变化。 结果观察第7天,模型组、EA组、rTMS组和EA+rTMS组大鼠海马的PSD-95表达均下降;治疗14 d后,各治疗组PSD-95表达上调;至28 d时各治疗组与模型组比较差异有统计学意义,尤其是EA+rTMS组PSD-95在海马CA3区表达增加更明显,与EA组和rTMS组比较差异有统计学意义。 结论电针结合重复经颅磁刺激能明显增强脑缺血大鼠海马PSD-95的表达,这可能是其改善脑缺血大鼠学习记忆功能的机制之一。     

电针结合经颅磁刺激对脑缺血大鼠学习记忆功能的影响*

目的：研究电针结合重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠学习记忆功能的影响并从突触形态结构可塑性角度探讨其机制。方法：40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、磁刺激组和电针结合磁刺激组,复制大脑中动脉栓塞模型,3个组别分别给予电针、经颅磁刺激和电针结合经颅磁刺激干预,评估学习记忆功能的变化并观察缺血侧海马CA3区突触形态结构的变化。结果：各治疗组大鼠的学习记忆功能明显提高,海马CA3区突触界面曲率、突触后致密物质厚度和穿孔性突触百分率明显增加,尤其是电针结合经颅磁刺激组改善更加明显。结论：三种干预方法都     

电针结合经颅磁刺激对脑缺血大鼠碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素及其受体表达的影响

目的:观察电针结合经颅磁刺激对急性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法:将25只雄性Wistar大鼠随机分成5组:正常组、模型组、电针组、磁刺激组和电针加磁刺激组。复制急性大脑中动脉缺血模型,分别施以电针、磁刺激和电针加磁刺激方法处理,采用免疫组织化学方法,检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管生成素2(Ang-2)及其受体(Tie-2)的表达。结果:电针组、磁刺激组和电针加磁刺激组梗死灶周围bFGF、Ang-2表达增强,尤以电针加磁刺激组明显(P<0.01),而Tie-2的表达虽较正常组增高,但各治疗组之间比较差异无显著性意义。结论:电针结合磁刺激可以增强急性脑缺血大鼠梗死灶周围bFGF和Ang-2的表达,促进了急性脑缺血大鼠梗死灶周围的血管新生。     

电针结合经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠pCREB表达的影响

目的：探讨电针结合经颅磁刺激（rTMS）对局灶性脑缺血大鼠磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白（pCREB）表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法：Wistar大鼠75只,随机分为A、B、C、D及E组各15只,A组为正常对照,B、C、D及E组大鼠采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,术后A、B组不实施处理,C组进行电针治疗,D组给予rTMS治疗,E组给予电针及rTMS联合治疗。通过Western blot检测脑缺血后第7、14及28d3个不同时相大鼠海马胞核内pCREB的表达,并观测神经功能缺损程度评分的变化。结果：脑缺血后不同时相点缺血侧海马pCREB阳性表达和灰度值,B组在7d时高于A组,28d时低于A组（P〈0．05）,14d时与A组比较差异无显著性意义;C、D组和E组各时相点均高于B组,7及14d时高于A组（均P〈0．05）,28d时与A组比较无差异;E组7及14d时相点均高于C及D组（P〈0．05）;C与D组各时相点均无差异。各时相点神经功能缺损评分C、D组和E组均较B组下降（P〈0．01）,尤以E组为明显。结论：电针结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复有显著的促进作用,pCREB的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。     

电针结合经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠p-CREB表达的影响

目的：探讨电针结合重复经颅磁刺激(rTMS)对局灶性脑缺血大鼠磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法：Wistar大鼠75只,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为正常组、模型组、电针组、rTMS组和电针结合rTMS组,通过免疫组化检测脑缺血后第7天、第14天与第28天三个不同时相大鼠海马胞核内p-CREB表达的变化,并观测其神经功能评分和学习记忆能力。结果：脑缺血后不同时相缺血侧海马p-CREB阳性表达,模型组在第7天时高于正常组,第28天时低于正常组P＜0.05,第14天时与正常组相比P＞0.05;电针组、rTMS组和电针结合rTMS组三个时相均高于模型组,第7天、第14天时高于正常组,差异具有显著性意义（P＜0.05）,第28天时与正常组相比P＞0.05,其中,电针结合rTMS组第7天、第14天时高于电针组、rTMS组P＜0.05,电针组和rTMS组各时相均无显著性差异（P＞0.05）。电针组、rTMS组和电针结合rTMS组各时相神经功能评分和电跳台实验评分均较模型组改善(P＜0.01,P＜0.05),尤以电针结合rTMS组为明显。结论：电针结合rTMS促进p-CREB的表达可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。     

运动训练结合电针治疗对脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区巢蛋白表达的影响

目的探讨运动训练结合电针治疗对脑缺血再灌注大鼠海马齿状回区巢蛋白表达的影响。方法54只Wistar大鼠随机分为造模对照组（A组）、运动训练组（B组）和运动训练结合电针治疗组（c组），采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，大脑中动脉阻塞lh，再灌注7，14和21d，应用免疫组织化学方法分别检测各组大鼠缺血侧和对侧海马齿状回区巢蛋白的表达情况。结果3组大鼠均表现为7d时的海马区阳性细胞最多。而且在各时间点的缺血侧海马DG区的巢蛋白阳性细胞数均明显多于对侧DG区（P〈0．01）。7，14和21d时，c组和B组大鼠缺血侧海马区巢蛋白阳性细胞较A组明显增多，差异有统计学意义（P〈0．01），7d和14d时，c组大鼠缺血侧海马区巢蛋白阳性细胞较B组亦明显增多（P〈0．01）。结论脑缺血再灌注大鼠海马区巢蛋白阳性细胞的增多存在时间规律及原位增殖特性，运动训练和电针治疗可显著增加巢蛋白阳性表达的数量。     

电针结合重复经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠蛋白激酶表达的影响

目的:探讨电针(EA)结合重复经颅磁刺激(rTMS)对局灶性脑缺血大鼠蛋白激酶A(PKA)表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法:Wistar大鼠75只,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为正常组、模型组、EA组、rTMS组和EA+rTMS组,通过Western印迹检测脑缺血后第7天、第14天与第28天三个不同时间点大鼠海马胞核内PKA表达的变化,并观测其神经功能评分。结果:脑缺血后不同时间点缺血侧海马PKA灰度值,模型组在第7天时高于正常组,第28天时低于正常组(P0.05),第14天时与正常组相比P0.05;EA组、rTMS组和EA+rTMS组3个时相均高于模型组,第7天、第14天时高于正常组,差异具有显著性意义(P0.05),第28天时与正常组相比P0.05,其中,EA+rTMS组第7天、第14天时高于EA组、rTMS组P0.05,EA组和rTMS组各时间点均无显著性差异(P0.05)。EA组、rTMS组和EA+rTMS组各时间点神经功能评分均较模型组改善(P0.01),尤以EA+rTMS组为明显。结论:EA结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复具有显著的促进作用,PKA蛋白的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。     

电针结合经颅磁刺激对脑缺血大鼠VEGF164 mRNA和CD31表达的影响

目的研究电针结合经颅磁刺激对急性脑缺血大鼠血管生成的影响。方法将55只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、电针组、磁刺激组和电针加磁刺激组。复制急性大脑巾动脉缺血模型，分别施以电针、磁刺激和电针加磁刺激方法处理，采用逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学方法，检测VEGF164mRNA及血小板内皮细胞黏附因子（CD31）的表达。结果电针绢、磁刺激组和电针加磁刺激组梗死灶周同VEGF164mRNA和CD31表达增强（P〈0．05或P〈0．01），尤其以电针加磁刺激组明最。结论电针结合磁刺激可以增强急性脑缺血大鼠梗死灶周围VEGF164mRNA和CD31的表达，从而实现非分子水平的治疗性血管生成作用。     

电针联合经颅磁刺激对急性脑缺血大鼠VEGF及其受体Flk-1表达的影响

目的观察电针联合经颅磁刺激对急性脑缺血大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1表达的影响.方法将25只雄性Wistar大鼠随机分成5组正常组、模型组、电针组、磁刺激组和电针加磁刺激组.制造大鼠急性大脑中动脉缺血模型后,各治疗组分别施以电针、磁刺激和电针加磁刺激处理,采用免疫组织化学方法观察不同干预方法对VEGF及Flk-1表达的影响.结果免疫组织化学染色结果显示,模型组梗死灶周围VEGF和Flk-1的表达较正常组明显增强(P＜0.05);电针组、磁刺激组和电针加磁刺激组VEGF和Flk-1的表达与模型组比较,均明显增强(P＜0.05),尤以电针加磁刺激组为明显(P＜0.01).结论电针或磁刺激治疗均可增强急性脑缺血大鼠梗死灶周围VEGF和Flk-1的表达,从而减轻缺血后脑损伤,促进脑功能的康复,二者联合应用疗效更佳.     

电针结合经颅磁刺激对脑缺血大鼠不同脑区NGF、BDNF及mRNA的表达

目的：研究电针（EA）结合经颅磁刺激（rTMS）对急性脑缺血大鼠不同脑区神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）及mRNA的表达。方法：120只成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、EA组、rTMS组和EA＋rTMS组（分别为A、B、C、D、E组）各24只。除A组外,其它组均复制急性大脑中动脉缺血模型,选取1d作为开始治疗的时间点,C、D组和E组分别施以EA、rTMS和EA结合rTMS方法处理。在治疗后的7、14及28d3个时间点各组分别取8只,采用免疫组织化学检测法、Westernblot以及RealtimePCR法检测大鼠脑组织NGF、BDNF及mRNA的表达。结果：C、D组和E组大鼠梗死灶周围以及海马区NGF、BDNF及mRNA的表达增强（P〈0．05）,尤其以E组表现更明显,28d后各组差异无统计学意义。结论：EA结合rTMS治疗能上调NGF、BDNF及mRNA的表达。     

Effects of Electroacupuncture Combined with Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation on the Expression of Nestin in Neural Stem Cell after Focal Cerebral Ischemia in Adult Rats*

Objective: To investigate the influence of electroacupuncture (EA) combined with repetitive transcranial magnetic stimulation(rTMS) on the temporal profile of nestin expression after induction of focal cerebral ischemia in adult rats and to explore the mechanism of EA combined with rTMS in treating ischemic brain injury. Method: The model of transient focal ischemia was produced by occlusion of middle cerebral artery. Seventy-five Wistar rats were randomly divided into normal group, model group, EA group, rTMS group and EA+rTMS group. The neurologic impairment rating and ability of learning and memory were observed at the 7th、14th and 28th d after infarction respectively. Meanwhile, Western blotting was used to observe the number of nestin expression positive cells. Result: Nestin-positive cells were found in cortex, subgranular zone(SGZ), subventricular zone (SVZ) of the ipsilateral side at different time points after cerebral ischemia. The number of nestin-positive cells peaked at the 7th d, began to decrease at the 14th d and was significantly higher in EA+rTMS group than that in model group(P<0.05), then almost reached normal at the 28th d. The improvement of neural motor function deficits as well as the indexes of learning and memory were more obvious in EA+rTMS group compared with model group(P<0.01, P<0.05). These effects were most obvious in EA+rTMS group compared with the EA and rTMS group(P<0.05). Conclusion: EA and rTMS possess the potency of building up and can increase the number of nestin-positive cells in some brain regions after focal cerebral ischemia, which might be one of the important mechanisms of EA combined with rTMS in treating ischemia brain injury.     

局灶性脑缺血大鼠海马CA3区突触体素的动态表达

背景突触体素(synaptophysin,SYN)与神经生长、修复、再生和突触重塑密切相关,成为近年来医学研究的热点.以往学者对脑缺血再灌注大鼠模型顶叶突触体素表达研究较多.采用线栓法堵塞大鼠大脑中动脉,建立局灶性脑缺血模型,观察海马CA3区突触体素的动态表达,可为临床研究脑缺血后神经重塑提供理论依据.目的研究局灶性脑缺血后海马CA3区突触体素的动态表达以及神经修复的可塑性.设计随机对照的实验研究.单位承德医学院附属医院老年病科、承德医学院解剖教研室和河北医科大学.材料选取健康成年SD大鼠40只,随机分为脑缺血组和对照组,每组又分为7,14,21,30 d 4个时间点,每个时间点取5只大鼠.干预采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型,采用苏木精-伊红染色,光镜下观察有无梗死灶.应用免疫组化技术观察海马CA3区突触体素的表达.主要观察指标①苏木精-伊红染色结果.②海马CA3区突触体素的表达.结果假手术组在大脑皮质及海马区,苏木精-伊红染色可见神经元呈层状分布,各层细胞数量较多,形态完整,细胞核圆大且核仁明显,核仁被染成紫色,胞浆呈浅粉色,神经元同周围组织间无空隙存在.缺血组可见梗死灶,表现为正常结构消失,排列紊乱,细胞数量减少,胞核固缩、深染.假手术组SYN阳性神经元的吸光度值各时间点比较差异无显著性意义(P＞0.05).实验组同假手术组比较,SYN吸光度值明显降低(P＜0.01),组内7～21 d时的吸光度值逐渐升高,且差异有显著性意义(P＜0.01),30 d时SYN的吸光值降低,但同21 d时相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论脑缺血损伤后海马CA3区突触体素表达减少,但机体自身存在着神经元的修复和再生,可使突触体素的表达逐渐上调.     

重复经颅磁刺激对脑梗死后海马PSD-95和GAP-43表达的影响及其机制研究

目的:观察高频重复经颅磁刺激(rTMS)对脑梗死大鼠缺血侧海马突触后致密物质-95(PSD-95)和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响及其可能机制。方法:SD雄性成年大鼠20只,分为模型组(A组)和rTMS组(B组)各6只,rTMS+NS(normal saline)组(C组)和rTMS+阻滞剂H89组(D组)各4只,建立脑梗死模型,给予7d的20Hz rTMS治疗,应用Western Blot方法检测A、B组缺血侧海马PSD-95和GAP-43表达并观察超微结构,进一步研究给予C、D组间蛋白激酶A-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)、PSD-95和GAP-43表达变化。结果:与A组相比,B组PSD-95和GAP-43表达增加(P0.01),电镜下突触体积增大,突触前后膜电子致密区增宽,电子密度和突触囊泡数量增加。D组pCREB、PSD-95、GAP-43表达较C组均减少(P0.01)。结论:rTMS有可能通过对PKA-CREB信号通路调节来促进脑梗死后海马PSD-95、GAP-43的表达。     

功能性电刺激对急性脑梗死大鼠运动功能和缺血半影区与镜区突触素表达的影响

目的：观察功能性电刺激（FES）对急性脑梗死大鼠运动功能和缺血半影区与镜区突触素（SYN）表达的影响。方法：采用Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,MCAO造模步骤结束后,在大鼠偏瘫侧上肢埋置金属导线连接FES治疗仪。将大鼠随机分为3组：假手术组、安慰电刺激组和FES组,每组又分为0d、3d、7d、14d 4个亚组,每亚组6只。FES在术后3d开始,使大鼠偏瘫上肢产生伸腕和伸指动作,每天1次,每次10min。在FES刺激前后的各个时间点进行网屏实验以观察各组的运动功能变化;应用Western-blot技术检测缺血半影区和镜区SYN蛋白表达。结果：FES组在刺激7d和14d后运动功能较安慰电刺激组明显改善(P<0.05)。脑缺血半影区在刺激3d、7d、14d后、镜区在刺激7d、14d后,FES刺激组较安慰电刺激组SYN蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：FES可以改善急性脑梗死大鼠的运动功能,并增强脑梗死周围缺血半影区和镜区SYN的蛋白表达,即增强脑的可塑性,但半影区的可塑性出现早于镜区,且表达强于镜区。     

电针对脑缺血大鼠海马神经元microRNA132和p250GAP蛋白表达的影响

目的:探讨电针(electroacupuncture,EA)对脑缺血大鼠海马区microRNA132(miR132)和p250GAP蛋白表达的影响及可能内在机制。方法:将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、EA组、EA+H89(N-[2-(pBromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide·2HCl hydrate)组和EA+NS(normal saline)组。永久性结扎双侧颈总动脉(2-vessel occlusion,2VO)制备脑缺血模型,造模成功次日于百会穴(GV20)和大椎穴(GV14)施以EA治疗。治疗后的7,14,21d,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)方法检测海马miR132的表达,并通过蛋白免疫印迹(western blot)方法检测海马GTP酶活化蛋白p250GAP蛋白的表达。结果:同时间点各组大鼠间相比,7、14、21d时,模型组与假手术组相比,大鼠海马组织miR132的表达量均显著下降,同时p250GAP蛋白量均显著增加(P0.05);EA组与模型组相比,miR132的表达量均显著增加(P0.05);同时p250GAP蛋白量均显著下调(P0.05);EA+H89组与EA+NS组相比,miR132表达量均显著下调(P0.05);p250GAP蛋白量均显著增加(P0.05)。同组别三个不同时间点之间miR132表达量相比,EA+NS组大鼠在14d时miR132的表达量较7d显著增加,但21d时miR132的表达量较14d显著减少(P0.05),其余组各时间点间无显著统计学差异。结论:EA能促进脑缺血大鼠海马区miR132增加并下调p250GAP蛋白的表达,给予H89后电针的作用被部分抑制,提示电针的作用可能与激活PKA/CREB信号通路相关。     

电针对脑缺血大鼠海马神经元凋亡的影响

目的：探讨电针对脑缺血大鼠海马神经元凋亡的作用及可能内在机制。方法：将90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、电针+PKA抑制剂（H89）组和电针+生理盐水（NS）组,每组又分为7d、14d、21d 3个亚组。制备双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）模型;电针百会穴（GV20）和大椎穴（GV14）;通过TUNEL法和免疫蛋白印迹法观测海马神经元凋亡及Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达量。结果：各组大鼠组内3个时间点间的海马神经元凋亡率相比,模型组14d组、21d组较7d组显著增加（P<0.05）;其余各组各时间点差异均无统计学意义。凋亡相关蛋白表达量比较,电针组21d组较14d组Bcl-2蛋白量显著增多（P<0.05）。其余各组各个评价指标在3个时间点比较差异无统计学意义。同时间点各组大鼠间海马神经元凋亡率比较,模型组较假手术组均显著增加（P<0.05）;电针组较模型组均显著降低（P<0.05）;电针+H89组较电针+NS组均显著增多（P<0.05）。同时间点各组大鼠间的凋亡相关蛋白表达量比较,模型组较假手术组Bax蛋白量均显著增高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量均显著降低（P<0.05）;电针组较模型组Bax蛋白量均显著降低（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量均显著增加（P<0.05）;电针+H89组较电针+NS组Bax蛋白量均明显增多（P<0.05）,而Bcl-2蛋白量明显降低（P<0.05）,但在14d时2组Bc-2蛋白表达差异无显著统计学意义。结论：电针百会穴和大椎穴可抑制Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达而减轻脑缺血大鼠海马神经元凋亡,给予H89后电针的作用被抑制,说明电针抗凋亡作用的内在机制可能与激活PKA-CREB信号通路相关。     

A comparative study of acupoints by electroacupuncture on neural function and expression of LINGO1 after focal cerebral infarction in rats北大核心CSCD

Objective: To investigate the difference between the effect of electroacupuncture (EA) at "Renzhong-Baihui" (DU26-DU20, RB)and "Renzhong-Baihui + Ganshu-Shenshu"(DU26-DU20+L18-BL23, RB + GS)after focal cerebral infarction in rats. Method: The healthy adult male SD rats(n=91) were randomly divided into sham-operated group, model group, treatment group A(RB)and treatment group B(RB+GS) and subjected to establish the model of middle cerebral artery occlusion(MCAO)on the right side by nylon monofilament suture. EA was performed at 90 min after establishing of successful model, 30min/d. The neural function recovery was evaluated by Longa's score, RT-PCR and immunohistochemistry techniques were used to detect the expressions of LINGO1 mRNA and protein in ischemic cortex on the 1st, 3rd, 7th and 14th d respectively after ischemia. Result: The sham-operated group had no neurological dysfunction. Motor function recovered significantly in treatment group A and treatment group B, compared with model group(P<0.05). The expressions of LINGO1 mRNA and protein in model group enhanced obviously on the 1st d, then gradually decreased on the 3rd-14th d, but were still higher than that in sham-operated group on the 14th d(P<0.01). The expressions of LINGO1 mRNA and protein in treatment group A and treatment group B were all lower than that in model group on the 7d-14d (P<0.05); in addition, the expression of LINGO1 protein in treatment group B was lower than that in treatment group A, there was significant statistical difference between two treatment groups(P<0.05). Conclusion: The expressions of LINGO1 mRNA and protein in ischemic cortex increased significantly. EA might induce its' down-expression after acute cerebral infarction, promote axonal regeneration and accelerate the neural functional recovery. The therapeutic effect of RB+GS group was better than that of RB group.     

高频重复经颅磁刺激对脑缺血后海马BDNF、VEGF和Nestin表达的影响

目的:研究高频重复经颅磁刺激(rTMS)对脑缺血大鼠缺血侧海马BDNF、VEGF和Nestin表达的影响。方法:SD雄性成年大鼠16只,随机分为模型组、rTMS组、rTMS+生理盐水(NS)组和rTMS+H89组各4只,rTMS+NS组和rTMS+H89组分别侧脑室注射NS和H89,4组均建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,除模型组外均给予7 d 20 Hz rTMS治疗,应用Western Blot方法检测缺血侧海马pCREB、BDNF、VEGF和Nestin表达。结果:rTMS组pCREB、BDNF、VEGF和Nestin表达较模型组均增加(P<0.05),rTMS+H89组pCREB、BDNF、VEGF和Nestin表达较rTMS+NS组均减少(P<0.05)。结论:高频rTMS能使脑缺血后海马区BDNF、VEGF表达增加,并进一步促进Nestin表达,PKA-CREB通路的调节可能是其机制之一。