DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

二烯丙基二硫与全反式维甲酸合用对HL-60细胞的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）与全反式维甲酸（ATRA）联合用药对HL-60细胞生长抑制及诱导分化的影响。方法采用M1Tr、流式细胞术检测细胞周期及生长抑制，用HL-60细胞表面分化抗原CD11b及NBT实验检测HL-60的诱导分化作用。结果DADS与ATRA联合使用可以增加HL-60细胞的生长抑制率，并将HL-60细胞阻滞在G0/G1期。CD11b的表达和NBT实验结果表明两者合用对HL-60细胞的诱导分化作用与任何一种药物单独使用差异无显著性，但当两者剂量各自减少一半时，其诱导分化作用却增加，与任何一种药物单独使用时的诱导分化作用相似。结论DADS与AT—RA联合使用可以协同抑制HL-60细胞的生长，剂量减半合用时可协同对HL-60细胞的诱导分化作用。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

二烯丙基二硫抑制HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达调控

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖及对c-myc基因表达的影响。方法采用MTT和细胞记数法分析DADS对细胞生长的影响、蛋白印迹法检测细胞内c-myc蛋白表达水平。结果 DADS能抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05),DADS(20μmol/L)作用12 h后能下调c-myc蛋白的表达水平。结论 DADS抑制HL-60细胞增殖,其机制可能与下调c-myc表达水平密切相关。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

二烯丙基二硫对K562细胞生长抑制和促凋亡的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病K562细胞增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响。方法采用CCK-8技术检测细胞存活率,进行细胞形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测DADS对细胞凋亡及周期的影响。结果 DADS能有效地抑制人白血病K562细胞增殖,15、30、60、120和240μmol/L DADS作用于K562细胞48h后,抑制率分别为26.3%、58.2%、44.7%、62.6%和75.6%。Hoechst形态学观察呈现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳上呈现出凋亡特征性的梯状条带,流式细胞仪检测可见亚二倍体峰并阻滞细胞于G2/M期,30、60和120μmol/L DADS作用于K562细胞12h后,Annexin V/PI双标记法检测早期凋亡细胞率分别为18.59%±0.81%、20.85%±0.65%、23.5%±1.1%（P〈0.05）。结论 DADS呈浓度依赖性抑制K562细胞生长,其机制与诱导细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期有关。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应。方法通过MTF法检测DADS对CNEl细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用。免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Westem blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果DADS能抑制CNEl细胞的生长。DADS处理CNEl细胞后,细胞呈凋亡特征性改变。流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNEl细胞凋亡。免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降。随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强。结论DADS具有诱导CNEl细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2／Bax下降,促进Casoase-3活化有关。     

DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制。方法采用MTT法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平。结果DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性，且DADS（20μmol／L）与ATRA（10^-6mol／L）对HL-60细胞增殖活性影响相近（P〈0．01），DADS（20μmol／L）作用12h后能引起G2，M期细胞百分数增高并达到最大值，上调cyclinBl的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位。结论DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点，它的激活与cyclinB1细胞质定位有关。     

菱角提取物诱导 HL-60 细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制。方法 采用 MTT 法检测菱角提取物对 HL-60 细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定 Caspase-3、9 蛋白活性。结果 菱角提取物能抑制 HL-60 细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。菱角提取物可诱导 HL-60 细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系。与对照组比较,菱角提取物可明显降低 HL-60 细胞线粒体膜电位,上调 Caspase-3、9 蛋白活性。结论 菱角提取物可抑制 HL-60 细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活 Caspase-3、9 蛋白继而诱导 HL-60 细胞凋亡有关。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

DADS诱导HL-60细胞分化中的信号传导相关蛋白

目的 研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人髓性白血病HL-60细胞分化过程中蛋白质组的差异表达.方法 运用蛋白质组学方法(双向凝胶电泳、质谱分析、生物信息学方法)分析鉴定DADS诱导HL-60细胞分化的差异表达蛋白质.结果 DADS作用HL-60细胞后,细胞形态发生明显变化,NBT还原能力明显增强.与未处理组比较,初步鉴定的差异蛋白质DJ-1蛋白在处理组中表达下调,其功能与转录调节有关.结论 DADS可能通过抑制DJ-1蛋白合成,活化PIAS蛋白抑制STATs转录因子的活性,进而抑制JAKs/STATs信号传导通路,诱导HL-60细胞分化.     

大蒜素对人白血病HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的: 探讨大蒜素对人白血病HL-60细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法: MTT比色分析法检测大蒜素对HL-60细胞生长的抑制作用,光镜观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术分析大蒜素对HL-60细胞凋亡的影响。结果: 20mg/L、40mg/L、60mg/L大蒜素均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈剂量-效应关系,40mg/L大蒜素能诱导HL-60细胞出现典型凋亡形态学变化。大蒜素诱导HL-60细胞有凋亡现象和阻滞细胞周期于G₂/M期。结论: 大蒜素对人白血病HL-60细胞生长有抑制作用,其抑制作用与诱导HL-60细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞生长抑制和凋亡

目的:研究8-硝基白杨素(8-nitrochyrsin,NOChR)对HL-60细胞生长和凋亡的影响。方法:MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;PI染色流式细胞术分析细胞周期和凋亡率。结果:NOChR呈浓度依赖性对HL-60细胞增殖具有抑制作用;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;PI染色流式细胞术结果表明以浓度依赖方式诱导HL-60细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。结论:NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关。     

氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：研究氟伐他汀（Flu）对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞（HL-60细胞）凋亡的诱导作用及可能的机制,为其临床应用提供理论依据。方法：体外培养的HL-60细胞分为空白对照组、阳性对照组［全反式维甲酸（ATRA）,10  μmol·L^-1］、Flu组（20  μmol·L^-1）和Flu（20  μmol·L^-1）加［甲羟戊酸（Mev）,100  μmol·L^-1］组。HL-60细胞被处理后,应用ACETM分析系统检测caspase-3活性以确定细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪分析细胞凋亡,DNA凝胶电泳评价DNA碎片阶梯状条带及透射电镜观察细胞的超微改变。结果：处理24 h后,Flu组HL-60细胞caspase-3活性（A405,30.68±1.57）显著高于对照组（12.05±2.15,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞caspase-3活性明显降低（14.62±1.36）,接近对照组细胞的水平（P>0.05）。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测
,与对照组比较,Flu组HL-60细胞凋亡率明显增加（4.24%  vs  10.76%,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞凋亡率降低到5.11%,与对照组细胞凋亡率(4.24%)比较差异无显著性（P>0.05）。处理72 h后Flu组HL-60细胞在琼脂糖凝胶电泳图上可观察到DNA碎片梯状条带。透射电镜观察显示：Flu组HL-60细胞胞体缩小,胞质浓缩,核染色质凝聚,呈块状聚集于核膜内侧,胞膜及细胞器完好。结论：Flu能诱导HL-60细胞凋亡,这种作用是Mev途径依赖的,提示抑制Mev途径可能是Flu诱导HL-60细胞凋亡的分子机制之一。     

水溶性壳寡糖对人白血病细胞诱导分化的影响

目的:研究水溶性壳寡糖(WSC)抑制人白血病细胞(HL-60)增殖活性的作用。方法:将WSC与HL-60细胞共培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测WSC对HL-60细胞增殖的抑制作用;氮蓝四唑(NBT)法检测WSC对HL-60细胞分化促进作用;流式细胞仪定量检测细胞凋亡。结果:250～1000mg/L的WSC能抑制HL-60细胞增殖,并促进HL-60细胞分化,WSC作用48h后流式细胞仪分析图上出现凋亡峰。结论:WSC对诱导人白血病HL-60细胞凋亡及促进分化有一定作用     

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的增殖及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、荧光染色法、流式细胞仪（FCM）检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL-60细胞的影响。结果：雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖,降低肿瘤细胞的存活率,其半数细胞抑制剂量( IC50 )为5.0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2/M期（P<0.05）。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞,且凋亡细胞百分率显著上升(P<0.05),凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论：雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖并促进细胞凋亡。     

黄荆子乙酸乙酯提取物对HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制人急性髓性白血病HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。方法:体外培养HL-60细胞和人外周血单核细胞(PBMC),MTT法测定细胞增殖;软琼脂培养集落形成法检测细胞生长;PI染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果:EVn-50对HL-60细胞增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性;而对PBMC的增殖活性影响小。EVn-50对HL-60细胞集落形成有抑制效应,呈浓度依赖性。EVn-50有效诱导HL-60细胞凋亡。结论:EVn-50具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。     

DADS诱导HL-60细胞分化的相关蛋白

目的研究二烯丙基二硫诱导人髓性白血病HL-60细胞分化过程中蛋白质组的差异表达。方法形态学观察和硝基四氮唑蓝还原反应鉴定DADS诱导HL-60细胞分化;运用蛋白质组学方法（双向凝胶电泳、质谱分析、生物信息学方法）分析鉴定差异表达的蛋白质。结果DADS诱导HL-60细胞分化后,形态发生明显变化,NBT还原能力明显增强。通过质谱分析和数据库搜索初步鉴定了18个差异表达的蛋白质点,其中galectin-10在处理组中表达上调,钙网硬蛋白前体则表达下调。结论galeetin-10表达上调、钙网硬蛋白前体表达下调与DADS诱导HL-60细胞分化有关。