非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其意义

目的：探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排的检测在非霍奇坌淋巴瘤（NHL）中的诊断价值。方法：用半巢式和混合聚合酶链式反应方法，联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况。结果：1）采用FR3A引物，44例B-NHL有37例出现IgH基因重排，检测率为84％：采用FR2A引物，有27例出现IgH基因重排．检测率为61％：采用FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）与J区（JHb、JHc）引物，有34、33例出现IgH基因重排．检测率为77％、75％：结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3），总检测率为95％.2）15例T-NHL有4例出现IgH基因重排．而5例LRH未出现IgH基因重排。3）1例免疫纽化未分型的NHL经PCR检测后，明确分型为B细胞性淋巴瘤。结论：联合采用多对引物可提高检测阳性率；IgH基因重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义。     

聚合酶链反应检测IgH和TCRγ基因重排在Lennert淋巴瘤诊断中的应用

目的 对免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）及Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）进行基因重排分析，并对其在Ｌｅｎｎｅｒｔ淋巴瘤诊断中的应用初步探讨，方法 新鲜的淋巴结标本用常规方法提取ＤＮＡ，经聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增后进行ＩｇＨ及ＴＣＲγ基因重排分析。对ＩｇＨ基因扩增，选用嵌套式ＰＣＲ法，对ＴＣＲγ基因扩增，采用多对混合引物Ｍｉｘ１，Ｍｉｘ３和Ｍｉｘ２，Ｍｉｘ３分两组间同时进行，结果 经ＰＣＲ基因重排分析表明ＴＣＲ     

非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其义

目的探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的诊断价值.方法用半巢式和混合聚合酶链式反应方法,联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mjxtures(VH1、VH2、VH3)检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况.结果1)采用FR3A引物,44例B-NHL有37例出现IgH基因重排,检测率为84%;采用FR2A引物,有27例出现IgH基因重排,检测率为61%;采用FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)与J区(JHb、JHc)引物,有34、33例出现IgH基因重排,检测率为77%、75%;结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3),总检测率为95%.2)15例T-NHL有4例出现IgH基因重排,而5例LRH未出现IgH基因重排.3)1例免疫组化未分型的NHL经PCR检测后,明确分型为B细胞性淋巴瘤.结论联合采用多对引物可提高检测阳性率;IgH基因重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义.     

荧光定量PCR法检测弥漫大B细胞淋巴瘤IgH基因重排的意义

 目的 探讨荧光染料标记的实时定量PCR方法检测弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）IgH基因重排的可行性和临床意义。方法 44例DLBCL患者的57份骨髓标本用于检测IgH基因重排。Namalwa细胞系作阳性对照,U-937细胞系作阴性对照。SYBR Green荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法检测IgH基因重排CDRⅢ。β-actin 作内参照,对IgH基因重排相对定量。结果 分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性。荧光定量PCR检测IgH基因重排的阳性率分别为63.2 ％。Ⅰ、Ⅱ期患者IgH基因重排表达量中位数为0,Ⅲ、Ⅳ期患者IgH基因重排表达量中位数为0.35,两组患者之间差异有统计学意义（P＝0.018）。LDH值高于正常组,IgH基因重排表达量为0.39,LDH值低于正常组,IgH基因重排表达量为0.01,两组之间差异有统计学意义（P＝0.046）。结论 荧光染料标记的定量PCR方法可用于DLBCL的骨髓微小残留病变的检测。检测骨髓IgH基因重排,可以协助分期。     

PCR检测恶性淋巴瘤基因重排的方法学探讨

恶性淋巴瘤（ＭＬ）的诊断是当今肿瘤病理学上最感棘手的问题。除形态学和免疫组织化学外,分子水平的诊断已日益显示出重要作用。ＭＬ中出现克隆性的免疫球蛋白（Ｉｇ）或Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排已为大家所熟悉,并被用于淋巴瘤的辅助诊断。基因重排经典的检测方法...     

荧光定量聚合酶链反应检测B细胞淋巴瘤IgH基因重排的进展

实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)是近年出现的一种新的核酸定量技术,为检测血液系统肿瘤微小残留病(MRD)提供了快速、简便、精确、敏感、可靠的定量检测方法.对判断疗效、预防复发,指导治疗有一定的临床意义.就目前国内外用RQ-PCR在B细胞淋巴瘤患者中检测IgH基因重排的应用研究进展进行综述.     

石蜡包埋B细胞性恶性淋巴瘤组织克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测研究

[目的]探讨克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的价值.[方法]采用半巢式PCR方法,对81例B-NHL病例,36例反应性增生及12例非淋巴瘤组织样本进行克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测,以上病例均为经福尔马林固定的石蜡包埋组织.[结果]81例B-NHL中68例IgH阳性(阳性率为83.95%),36例反应性增生均为多克隆性,12例非淋巴瘤组织样本结果IgH均为阴性.[结论]克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测可以作为诊断恶性B细胞性非霍奇金淋巴瘤的有效分子标志.     

以IgH、bc1-2/IgH为分子标志检测B细胞淋巴瘤微小残留病研究进展

肿瘤的复发与停止治疗时患者体内仍存在用常规方法无法检测出的微小残留病(minimalresidualdisease,MRD)有关,关于MRD的研究已成为肿瘤研究领域的热点。B细胞所特有的基因重排等遗传学特征为我们提供了可用于检测B细胞淋巴瘤(B NHL)MRD的分子标志,本文就这一方面的研究进展进行综述。1　IgH、bc1- 2 /IgH检测B NHLMRD的理论基础B NHL与其他恶性肿瘤一样具有克隆性的特征,它的所有的子代瘤细胞都是从同一个恶变的细胞演化而来的,即这个恶变的B细胞及其所有的子代细胞是一个克降,它们具有相同的基因编码,当患者经治疗达CR(完全…     

PCR技术检测IgH基因重排及其在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

收集２４例ＰＧＬ石蜡标本，利用ＰＣＲ技术扩增ＣＤＲ－Ⅲ区，检测其免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排，同时收集结内非霍奇金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）、反应性增生淋巴结组织等标本作为对照。结果显示，８３％（２０／２４）Ｂ细胞性ＰＧＬ获得阳性克隆性条带７５％（２４／３２）结内Ｂ－ＮＨＬ获得阳性条带。研究表明应用ＩｇＨ基因引物进行ＰＣＲ扩增可用于ＮＨＬ的诊断和分型，证明Ｂ细胞性ＰＧＬ与Ｂ－ＮＨＬ的ＩｇＨ基因重排一致     

B细胞淋巴瘤患者骨髓IgH基因克隆性重排检测的临床意义

目的 探讨半巢式聚合酶链反应(PCR)检测B细胞淋巴瘤患者骨髓中IgH基因克隆性重排的可行性,并初步评价其临床价值.方法 选用FR2、FR3A引物,采用半巢式PCR方法检测105例B细胞淋巴瘤患者骨髓中IgH基因的单克隆性重排,与骨髓穿刺细胞形态学检测结果进行比较,并评价PCR检测结果与临床病理特征的关系.结果 105例B细胞淋巴瘤患者中,IgH基因克隆性重排PCR检测48例(45.7%)阳性,而骨髓细胞形态学只检测出22例(21.0%),两者差异有统计学意义(P<0.05),符合率为71.4%(75/105).弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)及小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)初治患者PCR检测阳性率分别为30.8%、25.0%和100.0%.PCR检测结果与Ann Arbor分期有关,早期B细胞淋巴瘤患者lgH基因克隆性重排PCR检出阳性率低于晚期患者(P=0.02).PCR检测阳性和阴性患者的近期疗效差异无统计学意义(P>0.05),但CR率(23.3%和46.3%)差异有统计学意义(P=0.019).结论 IgH基因克隆性重排PCR检测可能是判断B细胞淋巴瘤患者骨髓异常的有效方法,较骨髓细胞形态学敏感;Ann Arbor分期晚的患者PCR检测阳性率高于分期早的患者;PCR检测阳性者治疗后获得CR的机会低于阴性者.     

Bcl-2基因重排在恶性淋巴瘤微小残留病变检测中的应用

目的建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变（ＭＲＤ）的方法,探索Ｂｃｌ２基因重排在恶性淋巴瘤的分期、化疗疗效和预后评估中的意义。方法多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测Ｂｃｌ２／ＪＨ基因重排,系列稀释试验检测该方法的敏感性。结果９种恶性淋巴瘤细胞系中,ＳｕＤＨＬ４,ＳｕＤＨＬ６有Ｂｃｌ２／ＪＨ基因重排,系列稀释试验检测该方法的敏感度达１∶１０５。滤泡性淋巴瘤（ＦＮＨＬ）患者１６例中,４例外周血和骨髓中同时检出Ｂｃｌ２（ＭＢＲ）／ＪＨ基因重排,化疗达ＣＲ后仍存在。结论多聚酶链反应检测Ｂｃｌ２／ＪＨ基因重排,是检测滤泡性淋巴瘤患者微小残留病变的一个快速、有效、敏感的方法,对疾病的分期、疗效和预后评估有一定的临床应用价值。     

用IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变

目的探讨IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变的意义。方法采用IgHTCR-β、TCR-γ基因重排标志检测,36例经常规HE、免疫组化不能诊断的疑难淋巴组织增生性病变,并进行克隆性分析。结果29例淋巴组织增生性病变呈克隆阳性,其中IgH、TCR双重排阳性者为1例,IgH单一阳性8例,TCR单阳性为8例。克隆阳性病例与免疫组化结果一致的为24/29例,7例阴性者,4例为反应性增生,2例经随诊为猫抓病淋巴结炎,1例为不典型增生。结论IgH、TCR基因重排技术对于疑难淋巴组织增生性病变的诊断和鉴别诊断有较大的意义。     

Bcl-2 gene rearrangement determined by PCR as a mean to detect minimal residual disease in malignant lymphomas

Minimalresidualdisease(MRD)playsacausativeroleintumorrecurrenceandestablishmentofeffectiveandsensitiveassessmentofMRDcouldbeveryusefulforstagingandevaluationoftreatmentofdisease.Inthisstudy,weassessedtheusefulnessofhcf-2/JHPCRanalysisonoccultlymphoma...     

BIOMED-2体系检测免疫球蛋白重链基因重排在黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤诊断中的应用

 【摘要】　目的　探讨BIOMED-2标准化体系检测免疫球蛋白重链（IGH）基因重排对黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤（MALT淋巴瘤）诊断的应用价值。方法　45例标本包括不同部位原发的MALT淋巴瘤36例、淋巴结外淋巴组织增生性病变3例、幽门螺杆菌（HP）感染相关性重度胃炎6例。用DNA提取试剂盒从石蜡包埋组织中提取所选病例的基因组DNA,通过BIOMED-2体系质控混合引物检测其质量,应用IGH VH-JH 3组引物组合进行IGH基因克隆性重排检测;比较分析该体系在MALT淋巴瘤诊断中的敏感性和特异性。结果　45例中31例（MALT淋巴瘤22例,淋巴组织增生性病变3例、重度胃炎6例）提取的基因组DNA可扩增出300 bp片段,其余14例DNA均严重降解。22例MALT淋巴瘤中,16例检测出IGH基因重排,灵敏度为72.7 %;6例严重胃炎病例未检测出IGH克隆性重排,其特异度是100 %;3例淋巴组织增生性病变中1例检测出IGH克隆性重排,2例未检测出重排。结论　在MALT淋巴瘤的诊断和淋巴组织增生性疾病的鉴别诊断中,BIOMED-2标准化体系检测IGH基因克隆性重排是一种快速可靠的方法,具有重要的临床应用价值。     

急性非淋巴细胞性白血病免疫球蛋白基因重排的研究

目的探讨急性非淋巴细胞性白血病中免疫球蛋白基因重排序列失真现象的机制及其在白血病基因分型中的意义。方法采用多聚酶链反应技术对２５例不同时期急性非淋巴细胞性白血病患者进行了研究。结果２５例患者中,有３例检测出免疫球蛋白重链基因重排,其中１例为完全缓解期患者,观察发现其在检测后１个月内有复发倾向。结论急性非淋巴细胞性白血病中存在免疫球蛋白基因重排序列失真现象。因此,免疫球蛋白基因重排可能并不能作为急性淋巴细胞性白血病诊断绝对可靠的标志。免疫球蛋白基因重排在白血病微小残留疾病检测中有一定意义。     

多发性骨髓瘤患者恶性克隆及其前体细胞检测

 为了探讨多发性骨髓瘤(MM)克隆起源, 病情判断, 以克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排为骨髓瘤基因标志, 采用聚合酶链反应(PCR)技术分析MM患者骨髓和外周血克隆性IgH基因重排。42例MM的骨髓标本34例阳性, 阳性率80.95%, 阳性率与临床分期及免疫分型不相关(P＞0.05)。10例反应性浆细胞增多症(RP)及12例正常人骨髓均阴性。24例形态学检查正常的MM外周血16例阳性, 阳性率66.67%, Ⅱ、Ⅲ期患者阳性率明显高于Ⅰ期(P＞0.025), Ⅱ、Ⅲ期之间无差异(P＞0.05)。与免疫分型不相关(P＞0.05)。外周血与骨髓均阳性患者, 克隆性IgH基因重排带位于同一电泳位置, 不同患者重排带呈多态性。研究结果表明：克隆性IgH基因重排可作为骨髓瘤克隆基因标志, MM外周血存在克隆性B细胞, 且与骨髓瘤细胞起源于同一克隆。 MM骨髓和外周血克隆性IgH基因重排检测对MM诊断, 骨髓瘤细胞克隆起源研究, 病情判断均有一定价值。     

克隆性基因重排检测技术在淋巴瘤穿刺标本中的诊断价值

目的探讨克隆性基因重排检测技术在淋巴瘤穿刺标本中的诊断价值。方法以IgH、T细胞受体γ链(Tcellreceptorγchain,TCRγ)和bcl-2/IgH融合基因(bcl-2/IgH)重排基因为分子标志,分别应用一步法、巢式及半巢式多种聚合酶链反应技术,检测40例细针穿刺活检标本(fine-needle aspiration biopsy,FNAB)克隆性基因重排。其中实验组为非霍奇金淋巴瘤(NHL)25例,对照组15例,其中霍奇金病(HD)4例,转移癌5例,反应性增生6例。结果实验组中3例滤泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma,FL)中2例bcl-2/IgH主要断裂点(bcl-2/IgHMBR)阳性,1例bcl-2/IgHMBR阴性,但IgH阳性,TCRγ检测均为阴性;19例弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中14例IgH阳性,5例阴性,无1例bcl-2/IgH及TCRγ阳性;3例T-NHL TCRγ均阳性,IgH及bcl-2/IgH均阴性;对照组3个指标检测均阴性。通过3个指标检测NHL总阳性率80%(20/25),假阴性率20%(5/25),无假阳性。结论克隆性基因重排分子检测用于FNAB标本有助于NHL的诊断,但由于存在假阴性可能,应结合细胞形态学,如能结合其他检测手段,如流式细胞术等可提高诊断率。     

检测IgH和TCR γ基因重排对NHL分期参考价值的探讨

目的：探讨以IgH和TCR γ基因重排为标志对NHL患者临床分期的参考价值。方法：多聚酶链反应(PCR)技术结合限制性酶谱分析患者骨髓和淋巴结细胞DNA IgH和TCR γ基因重排的克隆性。结果：形态学无骨髓浸润的23例NHL患者发现6例(26．1％)具单克隆基因重排。结论：IgH和TCR γ基因重排作为分子标志对形态学检查不能确认骨髓浸润的NHL患者的分期诊断有一定参考价值。