纤维素酶辅助提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的工艺优化研究

以薯蓣皂苷元的提取收率为考察指标,采用中心组合试验设计和响应面分析法对纤维素酶酶解提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的工艺条件进行优化,确定其最佳工艺条件:采用盾叶薯蓣与水的料液比为1∶10;酶解pH值为5.75;酶解温度为54℃;酶解作用时间为2.5h;纤维素酶用量为10.8U/g的工艺条件,使得薯蓣皂苷元的提取率达到1.5%以上。结果表明纤维素酶辅助提取法是提高薯蓣皂苷元的有效途径。     

盾叶薯蓣四倍体及辐射株系薯蓣皂苷元含量分析

目的提高盾叶薯蓣药材的品质。方法通过组织培养,分别用秋水仙素和Co60射线处理盾叶薯蓣愈伤组织和丛生芽,获得盾叶薯蓣四倍体和辐射株系,并分别对其试管苗和部分株系一年生田间苗根茎中的薯蓣皂苷元含量进行分析。结果经诱导获得的大部分四倍体和辐射株系试管苗根茎中薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系;四倍体株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量有较强的相关性,而辐照株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量相关性不明显。但整体看,根茎中薯蓣皂苷元含量高的试管苗在田间生长1年后,薯蓣皂苷元含量一般也较高。结论在组织培养的基础上,利用多倍体和辐射诱变育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

盾叶薯蓣四倍体及辐射株系薯蓣皂苷元含量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质。方法 通过组织培养,分别用秋水仙素和Co60射线处理盾叶薯蓣愈伤组织和丛生芽,获得盾叶薯蓣四倍体和辐射株系,并分别对其试管苗和部分株系一年生田间苗根茎中的薯蓣皂苷元含量进行分析。结果 经诱导获得的大部分四倍体和辐射株系试管苗根茎中薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系;四倍体株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量有较强的相关性,而辐照株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量相关性不明显。但整体看,根茎中薯蓣皂苷元含量高的试管苗在田间生长1年后,薯蓣皂苷元含量一般也较高。结论 在组织培养的基础上,利用多倍体和辐射诱变育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

HPLC—ELSD法测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量

目的:建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC—ELSD),Allti-ma C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(52:48),流速1.0 mL·min~(-1);蒸发光散射检测器参数:漂移管温度40℃,气压3.5 kPa。结果:薯蓣皂苷在0.24～4.80μg(r=0.9995)范围内线性关系良好,平均回收率为97.9%(RSD=1.1%,n=6)。结论:该方法简便、快速、灵敏、准确、重现性好,可作为盾叶薯蓣的质量控制方法。     

植物生长调节剂对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的 大田条件下,研究几种植物生长调节剂对盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元含量及根茎产量的影响。方法 采用单因素施肥方法,结果采用SPSS 17.0统计软件包进行分析。结果 发现施用萘乙酸、多效唑、烯效唑和2,4-D均可大大提高盾叶薯蓣根茎产量,但对于薯蓣皂苷元含量的影响较小。对薯蓣皂苷元含量的影响,2,4-D>膨大素>NAA>稀效唑>多效唑;对盾叶薯蓣根茎产量的影响,2,4-D>NAA>多效唑>稀效唑>膨大素。结论 喷施一定浓度的2,4-D,对优质、高产盾叶薯蓣的栽培,具有重要的实践意义。     

薄层扫描法测定盾叶薯蓣中盾叶新苷和薯蓣皂苷的含量

目的:采用薄层扫描法测定盾叶薯蓣中盾叶新苷和薯蓣皂苷的含量。方法:采用瑞士CAMAG TLC SCANNER Ⅲ型线性扫描仪,含0.3％CMCNa的硅胶G薄层板,展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置过夜后的下层溶液,显色:10%硫酸乙醇溶液喷雾,110℃烘烤约10 min。检测波长510nm,狭缝尺寸:6.0 mm×1.0mm。结果:盾叶新苷点样量在0.622～3.11μg,薯蓣皂苷在0.986～4.98μg的范围内与峰面积呈良好线性关系,r分别为0.9991,0.9993;回收率分别为96.4％,97.7％。结论:本法操作简便,精密度好,结果准确可靠。     

超临界CO2萃取盾叶薯蓣醇提物中薯蓣皂素

目的：优选盾叶薯蓣醇提物中薯蓣皂素的提取工艺。方法：采用超临界CO2萃取技术和正交实验设计研究盾叶著蓣提取物中薯蓣皂素的最佳提取条件,以薯蓣皂苷元作为对照品,采用比色法测定含量。结果：优选提取工艺为：用3倍量无水乙醇作夹带剂、萃取压力30MPa、萃取温度50℃、萃取时间2h;结论：该法可综合利用资源,大幅减少废水的生成,减少环境污染,生产周期也明显缩短。     

不同产地盾叶薯蓣质量综合评价比较

目的对采自3个不同产地的盾叶薯蓣的质量进行综合评价研究。方法利用HPLC法对3个不同产地共计12批的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元的含量进行测定。结果湖北郧西、陕西安康、湖南安化3个产地中薯蓣皂苷的含量范围为0.4752%~0.8931%、伪原薯蓣皂苷的含量为0.7348%~1.0023%、薯蓣皂苷元的含量范围为2.3384%~5.6641%,经分析表明3个产地的盾叶薯蓣中有效成分有显著性差异(P<0.05)。结论地理条件对药材的有效成分的含量有显著的影响,由该实验得出陕西安康地区的盾叶薯蓣中3种有效成分含量均较高,质量较好,为盾叶薯蓣GAP的制定提供依据。     

植物生长调节剂对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的大田条件下,研究几种植物生长调节剂对盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元含量及根茎产量的影响。方法采用单因素施肥方法,结果采用SPSS17．0统计软件包进行分析。结果发现施用萘乙酸、多效唑、烯效唑和2,4-D均可大大提高盾叶薯蓣根茎产量,但对于薯蓣皂苷元含量的影响较小。对薯蓣皂苷元含量的影响,2,4-D〉膨大素〉NAA〉稀效唑〉多效唑：对盾叶薯蓣根茎产量的影响,2,4-D〉NAA〉多效唑〉稀效唑〉膨大素。结论喷施一定浓度的2,4-D,对优质、高产盾叶薯蓣的栽培,具有重要的实践意义。     

薯蓣属植物化学成分的研究——Ⅹ.蜀葵叶薯蓣中甾体皂甙和皂甙元的分离和鉴定

蜀葵叶薯蓣(Dioscorea althaeoides Kunth)为我国特有薯蓣品种,主产于四川、云南等省。根茎含薯蓣皂甙元。我们在系统研究国产薯蓣属植物化学成分的工作中,对蜀葵叶薯蓣中的甾体皂甙和皂甙元进行分离和鉴定。     

环境因子与远志药材质量相关性分析

目的:分析土壤、气候条件等环境因子对远志药材品质的影响。方法:用高效液相色谱法测定远志酸含量,通过实地调查与查阅当地气象资料研究远志生长地的海拔、年平均温度、7月平均温度、年降水量、年日照时数以及无霜期与远志酸含量的关系;采用常规方法测定土壤水分含量、pH值以及土壤营养元素含量,并考察与远志酸含量的关系。结果:远志酸含量与7月平均温度、年降水量、年日照时数以及无霜期等气候因子存在线性关系;与土壤全氮、全磷、有效磷、速效钾、有机质含量以及水分含量等土壤因子存在线性关系。结论:影响远志酸含量的地理气候因子主要是年日照时数和无霜期,土壤因子主要是有效磷与土壤水分含量。     

白英不同药用部位不同生长期薯蓣皂苷元含量分布规律的研究

目的:探讨白英不同药用部位不同生长期薯蓣皂苷元的含量分布规律。方法:分别于5、6、7、8、9、10、11月份采集白英的根、茎、叶、果等药用部位作为样品,采用高效液相色谱法测定样品中薯蓣皂苷元的含量。色谱柱为Agilent ZorbaxODSC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(93∶7,V/V),流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为203nm。结果:薯蓣皂苷元的检测浓度在0.0525～1.0500mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9994);平均加样回收率为100.53%,RSD=1.62%(n=6)。白英根中薯蓣皂苷元的含量最高,平均为1.216mg·g-1,其次依次为果实、下部茎、叶、上部茎;白英根、叶中的薯蓣皂苷元含量8月份最高,上、下部茎含量9月份最高,果实含量10月份最高。结论:白英不同药用部位不同生长期薯蓣皂苷元的含量差别较大,以8、9月份采收质量较好。     

基于地理信息系统的何首乌地理分布及分布区的生境特征研究

目的:借助地理信息系统(GTS)研究何首乌在中国的地理分布以及分布区的生境特征,为何首乌资源的保护和人工栽培提供参考。方法:建立何首乌分布区数据库,在ArcGIS9.3软件中制作何首乌分布区的县界多边形电子地图,结合中国地貌、土壤和植被图运用多边形叠加分析的方法提取何首乌分布区的地貌、土壤和植被类型。采用频数分布统计法研究何首乌分布区的气候特征。结果:何首乌资源分布区有90%的县市的年平均气温在13～22℃,有85%的县市的年均日照时数在1100～2300h,77%的县市的年均降水量在800～1600mm;66%的面积处于2000m以下的中低海拔地区,土壤以红壤、黄壤为主,植被类型主要是灌丛和矮林。结论:借助GIS技术进行何首乌生态环境特征分析,方便快捷、可靠,可为何首乌资源的保护和人工栽培提供参考。     

基于数据融合的藏药五脉绿绒蒿品质评价及其环境影响因素研究

目的 运用光谱数据融合策略建立藏药五脉绿绒蒿总生物碱含量快速检测模型,探讨环境因素对五脉绿绒蒿生物碱类物质积累的影响。方法 分别采集19个不同产地的五脉绿绒蒿的近红外光谱(near-infrared,NIR)、中红外光谱(mid-infrared,MIR)和中红外衰减全反射光谱(attenuated total reflectance,ATR),利用紫外分光光度法测定总生物碱的含量,采用主成分回归方法分别建立3个单一光谱模型和2个数据融合定量检测模型,通过Pearson相关性分析探讨地理因子、气候因子、土壤因子等不同环境因素与总生物碱含量的关系。结果 经数据融合后,NIR+ATR模型效果较好,其校正集相关系数、预测集相关系数、校正集均方根误差、预测集均方根误差值分别为0.980 3,0.997 2,0.060 3,0.063 3,且残差预测偏差>4。海拔、年均降水量与总生物碱含量呈显著正相关关系,纬度、年均温度与总生物碱含量呈显著负相关关系,土壤全氮和碱解氮与总生物碱含量呈极显著正相关关系。结论 光谱数据融合可以增强模型的预测能力,五脉绿绒蒿生物碱类物质的积累同时受大的地理环境因子和小环境土壤因子及气象因子的影响。本研究可为五脉绿绒蒿快速质量评价及资源合理利用规划提供科学依据。     

基于连作障碍条件下穿山龙皂苷类活性成分的含量变化

目的采用高效液相色谱法对不同连作条件下穿山龙中的皂苷类活性成分进行含量测定,探讨不同连作条件对于穿山龙皂苷类活性成分含量的影响。方法采用RP-HPLC,色谱柱:Agilent TC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;流速1.0 mL/min,柱温:35℃,检测波长:203 nm,计算皂苷类成分含量,并采用SPSS等软件对所得结果进行分析。结果吉林通化种植基地的穿山龙中,除了甲基原薯蓣皂苷为连作一茬3年时含量最高,其他三种皂苷类成分原薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷均为正茬4年时最高,而后随着连作年限的增加,含量逐渐减少,并且原薯蓣皂苷与薯蓣皂苷含量呈正相关。结论穿山龙随着连作年限的增加,其皂苷类活性成分的含量也随之下降,说明连作障碍对其皂苷类活性成分的含量积累造成了影响,但正茬4年时其皂苷类成分总含量最高,提示正茬4年为采收最佳时间,这为该药材的质量控制及GAP规范种植提供了依据和示范。     

不同产地穿山龙薯蓣皂苷元含量的比较研究

目的：考察不同产地穿山龙薯蓣皂苷元含量，确定穿山龙薯蓣皂苷元的最佳产地。方法：用RP—HPLC测定穿山龙薯蓣皂苷元的含量。结果：不同产地的穿山龙薯蓣皂苷元含量差异很大，以黑龙江、内蒙、辽宁，所产含量较高，其中黑龙江最高，为1．49％。结论：黑龙江可以定为穿山龙薯蓣皂苷元的最佳产地。     

HPLC测定金刚藤颗粒中薯蓣皂苷元的含量

目的采用高效液相色谱法测定金刚藤颗粒中薯蓣皂苷元的含量。方法色谱柱为Kromasil-100C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(90∶10),紫外检测波长为203nm,流速为1.0mL/min,柱温35℃。结果在1.928～9.640μg范围内,薯蓣皂苷元的进样量与峰面积呈良好线性关系(r=0.9998),加样回收率为99.8%,RSD为1.1%(n=5)。结论此法简便、可靠,可用于金刚藤颗粒中的薯蓣皂苷元的含量测定。     

Headspace solid phase micro-extraction method optimization for residual solvent analysis]

A systematic headspace SPME method optimization is described for the residual solvent analysis using a polidimethyl-siloxane/divinylbenzene (PDMS/DVB) fiber. The first step was the chromatographic system optimization in which a narrow bore capillary column with a thick film (1 micron) of stationary phase, low starting column temperature (30 degrees C) and a narrow bore injector liner (2 mm I.D.) were used. It was found that for the investigated components a desorption temperature of minimum 150 degrees C should be used. The second step was the extraction optimization. The optimum equilibration time for all components was 30 min. It was found that the sample headspace volume has an important effect on method sensitivity and precision. At low headspace volumes (less than 1/3 of vial volume) sensitivity improves but at the same time precision worsen. The optimum headspace volume was found to be 4.6 ml. The total organic content does also have an important effect on method sensitivity and precision. At low organic content sensitivity increases but precision drops significantly. Over 1% organic content in the sample the system becomes unstable due to stationary phase swelling by the organic components. The optimum range for total organic content was found to be between 0.1% and 1%. The added NaCl quantity does increase the extraction yield. The optimum salt quantity to be added was 2 g NaCl in 5 ml sample. The last step was the desorption optimization. The influence of injector temperature and injection depth on desorption were investigated and it was found that it does not have an important effect on desorption yield. The optimum desorption temperature was 220 degrees C and the optimum injection depth was 2 cm into the injector. Among the investigated fibers the best detection limits and chromatographic behavior were given by the PDMS/DVB fiber. The measured detection limits were between 10 and 100 pg/ml and the RSD data were between 1-3%.     

黄药子凝胶的制备与质量控制研究

目的:制备黄药子凝胶并建立其含量测定方法。方法:采用卡波姆为凝胶基质制备黄药子凝胶;采用高效液相色谱法测定黄药子中活性成分薯蓣皂苷元的含量,色谱柱为Alltech C18,流动相为乙腈-水=75∶25,流速为1 mL.min-1,柱温为30℃,检测波长为303 nm,进样量为10μL。结果:本凝胶质地均匀细腻,容易涂展,黏稠度适宜;薯蓣皂苷元检测浓度线性范围为0.08～0.8mg.mL-(1r=0.999 6),平均加样回收率为98.79%(RSD=0.88%,n=5)。结论:该制剂制备工艺简单,含量测定方法简单、准确、可靠。     

清脉颗粒醇沉工艺的正交优选

目的：优选清脉颗粒的醇沉工艺。方法：选取药液相对密度,醇沉浓度及醇沉时间为考察因素,以干浸膏得率,薯蓣皂苷元苷含量为考察指标,采用正交试验优选醇沉工艺。结果：优选的醇沉工艺为药液浓缩至相对密度1.13 - 1.18 g·;ml-1,加乙醇至乙醇体积分数为60%,醇沉24 h。结论：优选的工艺稳定可行,为清脉颗粒的临床应用提供试验依据。