灵芝多糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的　研究灵芝多糖肽 (GLPP)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响并探讨其作用机制。方法　以Griess法 ,观察GLPP对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)产生的影响 ;以免疫组化法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ,观察GLPP对iNOS的影响。结果　GLPP(2 5～ 2 0 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (3 12 5～ 2 0 0mg·L-1)均可促进巨噬细胞NO释放 ,但对LPS刺激NO的释放影响不大 ;GLPP(10 0mg·kg-1)灌胃给药 5d或体外给药 (10mg·L-1)均可使巨噬细胞iNOS含量增加。结论　GLPP可增加小鼠腹腔巨噬细胞NO产生 ,其机制可能与其促进巨噬细胞iNOS合成有关。     

氨氯地平对巨噬细胞基质金属蛋白酶-2,9 mRNA表达及分泌的影响

目的 :观察氨氯地平对巨噬细胞基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,MMP 9)的mRNA表达及分泌影响 ,探讨氨氯地平是否具有稳定动脉粥样硬化斑块 ,减少其破裂的功能。方法 :收集小鼠腹腔巨噬细胞与不同浓度的氨氯地平进行培养 ,采用RT PCR方法检测细胞MMP 2 ,MMP 9mRNA的表达 ;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP 2 ,MMP 9的活性 ,在蛋白分泌水平观察氨氯地平对MMP 2 ,MMP 9分泌影响。结果 :5 μg·L- 1浓度的氨氯地平对MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达和分泌几乎没有影响 (P >0 .0 5 ) ;15 μg·L- 1浓度可以完全抑制MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达 ,对MMP 9分泌有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,对MMP 2的抑制作用较轻 (P >0 .0 5 ) ;浓度为 30 μg·L- 1时 ,完全抑制MMP 2 ,MMP 9的mRNA表达 ,对MMP 2 ,MMP 9分泌的影响由于细胞破裂的影响而不能定论。结论 :中等浓度的氨氯地平可能具有稳定动脉粥样硬化斑块 ,减少其破裂的功能。     

木瓜苷对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

目的　研究木瓜苷对佐剂性关节炎 (AA)大鼠的治疗作用及部分机制。方法　大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型 ;足容积法测量继发侧足肿胀度 ,进行疼痛评分和多发性关节炎评分 ,MTT法检测胸腺T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞的增殖反应以及腹腔巨噬细胞产生IL 1水平 ,放射性免疫法测定腹腔巨噬细胞产生TNFα 和PGE2含量。结果　大鼠免疫后d 17开始分别灌胃木瓜苷 30、6 0、12 0mg·kg-1和阿克他利 6 0mg·kg-1对照药 ,连续给药 8d。木瓜苷 6 0、12 0mg·kg-1于d 2 1、d 2 4降低AA大鼠继发侧关节肿胀度、关节疼痛评分、多发性关节炎指数 ;木瓜苷 12 0mg·kg-1恢复AA大鼠胸腺T淋巴细胞增殖能力 ;木瓜苷各剂量还可不同程度抑制AA大鼠腹腔巨噬细胞产生IL 1、TNFα 和PGE2 。结论　木瓜苷可减轻AA大鼠关节肿胀、疼痛和多发性关节炎程度 ;该作用可能与调节T淋巴细胞的功能 ,抑制腹腔巨噬细胞过度分泌炎性细胞因子有关     

猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用

目的观察猪苓多糖(PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用,并研究Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法用PPS12.5,25,50及100mg·L-1刺激C3H/HeN小鼠和TLR4缺陷的C3H/HeJ小鼠脾细胞72h或腹腔巨噬细胞24h,以[3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖反应;以Griess法测定腹腔巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;以溴化氰活化多糖的方法制备荧光胺(Flu)标记的PPS(Flu-PPS)及Flu-葡聚糖,应用流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合。结果 PPS可明显促进C3H/HeN小鼠脾细胞增殖并诱导腹腔巨噬细胞分泌NO,IL-1β和TNF-α,且具有浓度依赖性(r=0.999,P<0.01)。用抗TLR4单抗20mg·L-1与C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞预孵育1h后加入PPS50mg·L-1,与单独PPS50mg·L-1孵育比较,巨噬细胞培养上清IL-1β和TNF-α浓度分别由(0.38±0.06)μg·L-1和(0.29±0.05)μg·L-1降至(0.18±0.01)μg·L-1和(0.12±0.02)μg·L-1,降幅达52.6%和58.6%(P<0.01)。PPS对C3H/HeN小鼠的脾细胞增殖、腹腔巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α的作用明显强于C3H/HeJ小鼠:PPS12.5～100mg·L-1组脾细胞增殖分别增加了2.4,1.7,1.5和22.2倍,IL-1β增加了0.9,1.3,1.2和1.1倍,TNF-α增加了1.3,0.9,0.6和0.6倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪及激光共聚焦显微镜分析结果表明,Flu-PPS1mg·L-1与小鼠腹腔巨噬细胞结合的荧光强度显著高于Flu-葡聚糖,增加Flu-PPS浓度至5mg·L-1,荧光强度并未相应增强,表明Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合具有饱和性;未标记的PPS100mg·L-1及抗TLR4单抗200mg·L-1可明显阻断Flu-PPS与巨噬细胞的结合。结论 PPS可能通过TLR4活化小鼠腹腔巨噬细胞。     

螺旋藻不同组份对小鼠脾细胞分泌IL-2的促进作用

本文采用 MTT法观察螺旋藻粗粉及提取物对 CTL L细胞和正常 BALB/ c小鼠脾细胞分泌 IL - 2的影响。实验结果表明 ,所用的螺旋藻的 3个组份在实验浓度范围内对 CTLL细胞无增殖活化作用、螺旋藻粗粉及提取物多糖、藻兰蛋白 1、0 .1和 0 .0 1g· L-1浓度时均对正常小鼠脾细胞分泌 IL - 2有促进作用 ,藻兰蛋白部分作用最强 ,其它提取物作用次之 ,在上述浓度范围内 IL - 2分泌水平有剂量依赖关系。高浓度 (1g· L-1)粗粉及提取物具有协同 Con A(2 mg· L-1)刺激小鼠脾细胞分泌 IL - 2的作用     

吗啡和芬太尼对人外周血肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6表达的影响

目的 :研究吗啡和芬太尼对人外周血肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白细胞介素 6(IL 6)表达的影响并探讨其机制。方法 :试验分单独药物组 (A1:吗啡 2 0 0mg·L-1,A2 :吗啡 2mg·L-1,A3 :芬太尼 2mg·L-1和A4:芬太尼 2 0 μg·L-1)、激活组〔A1,A2 ,A3 和A4组加入脂多糖 (LPS) ,称为B1,B2 ,B3 和B4组〕和对照组 (C1:空白对照和C2 :LPS对照 ) ,共 1 0组。检测 7份正常人血标本。用ELISA检测TNF α和IL 6含量。结果 :A组TNF α浓度为 1 84～2 5 1ng·L-1;IL 6为 3 96～ 490ng·L-1。与C1组 (TNF α:2 79ng·L-1;IL 6:5 61ng·L-1)比较 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。B组TNF α浓度为 3 5 7～5 3 4ng·L-1;IL 6为 72 0～ 1 3 1 0ng·L-1,明显低于C2 组(TNF α:1 2 2 6ng·L-1;IL 6:1 5 63ng·L-1) (P <0 .0 5 ;P <0 .0 1 ) ,且高剂量组低于其低剂量组。结论 :吗啡和芬太尼不影响静息状态下TNF α和IL 6的表达 ,但可抑制LPS诱导的TNF α和IL 6表达 ,且具有明显量效关系     

丹皮总苷的抗炎免疫作用及部分机制研究

目的　研究丹皮总苷 (TGM)对佐剂性关节炎 (AA)大鼠抗炎免疫作用及其作用机制。方法　观察AA大鼠灌胃(ig)给药后继发性炎症反应、免疫功能及前列腺素 (PGE2 )释放水平的变化 ,并检测TGM体外给药对正常及AA大鼠免疫功能的影响。结果　TGM (2 5、5 0与 10 0mg·kg-1ig )对AA大鼠继发性炎症反应 (继发性足肿胀、多发性关节炎、继发炎症反应的踝关节病理组织学改变 )有明显治疗作用 ,且以 5 0mg·kg-1·d-1疗效最佳 ,并可使AA大鼠萎缩的胸腺器官重量恢复至正常。TGMig对AA大鼠低下的ConA诱导的增殖反应和IL 2产生以及对AA大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)过高的IL 1和PGE2 产生有明显的抑制作用。体外培养发现 ,TGM对LPS诱导正常大鼠PMΦ产生IL 1具有低浓度 (0 4～ 10mg·L-1)促进和高浓度 (5 0～ 2 5 0mg·L-1)抑制的双向作用 ,对PMΦ产生PGE2 呈浓度依赖性地升高 ,其中IL 1产生曲线的下降支与PGE2 释放曲线两线呈负相关 (r =- 0 998,P <0 0 5 ) ;同时发现TGM在 10～ 2 5 0mg·L-1范围内能显著降低AA大鼠PMΦ产生IL 1和PGE2 ,同时显著升高AA大鼠脾淋巴细胞ConA增殖反应和IL 2产生。结论　TGM具有抗炎和剂量依赖性的免疫调节作用 ,并具有双向调节免疫细胞功能的特征 ,通过抑制细胞免疫功能实现对AA大鼠的治疗作用     

云芝多糖B抑制血管紧张素Ⅱ诱导的巨噬细胞骨调素基因上调表达

目的探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVPS-B对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的RAW264.7巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的影响及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及其转录因子ATF-2可能的调控作用。方法用RT-PCR检测CVPS-B对AngⅡ诱导的RAW264.7巨噬细胞OPN基因表达的影响;用Western blot测定AngⅡ(1μmol.L-1)诱导RAW264.7细胞p38MAPK转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式;用Western blot测定CVPS-B对RAW264.7巨噬细胞p38MAPK及其转录因子ATF2磷酸化表达的影响。结果CVPS-B(10mg·L-1)在AngⅡ(1μmol·L-1)刺激前30min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12h,抑制率达到50.3%(P<0.01);不同浓度CVPS-B1、10、50mg·L-1在AngⅡ(1μmol·L-1)刺激前30min加入培养基,共同孵育12h,其抑制率分别为13.8%、41.2%(P<0.01)及63.7%(P<0.01)。不同浓度CVPS-B及SB202190预孵12h,SB202190在5μmol·L-1(高浓度)时能明显抑制p38MAPK的磷酸化表达,相反,CVPS-B在10、50mg·L-1(高与低浓度)时均不能明显抑制p38MAPK的磷酸化表达。CVPS-B能明显抑制ATF2的磷酸化表达并呈剂量依赖性;而且,SB202190加CVPS-B在低剂量时(SB2021901μmol·L-1加CVPS-B10mg·L-1)也能明显抑制ATF2的磷酸化表达。结论CVPS-B能明显抑制AngⅡ诱导的RAW264.7巨噬细胞OPN基因表达。CVPS-B的抑制作用可能是通过调控转录因子ATF-2的活性实现的。     

黑灵芝多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究黑灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法用不同浓度的黑灵芝多糖作用于正常的和LPS活化的腹腔巨噬细胞;测定巨噬细胞代谢MTT活力;Griess法测定NO的产生;ELISA法检测巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的分泌水平。结果黑灵芝多糖对细胞代谢MTT活力有增强作用;在20～160mg·L-1范围内,多糖呈剂量依赖性地促进正常的巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β,增强免疫;而巨噬细胞经LPS激活后,与LPS组比较,多糖不同程度地抑制NO、TNF-α、IL-1β的过量分泌。结论黑灵芝多糖能有效地增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫,可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的诱导作用。     

重组人胸腺素α原体外对IFN-γ、IFN-α及TNF-α的影响

目的　在体外实验中考察克隆并表达的人胸腺素α原 (prothymosinα ,ProTα)对几种重要细胞因子IFN γ、IFN α和TNF α分泌的影响。方法　在体外分离脾淋巴细胞、脾巨噬细胞及腹腔巨噬细胞 ,用ELISA法检测ProTα对IFN γ、IFN α和TNF α分泌的影响。结果　 10 - 7mol·L- 1 ProTα明显促进脾细胞分泌IFN γ(P <0 .0 5 ) ,该浓度的ProTα也明显刺激小鼠脾巨噬细胞分泌IFN α(P <0 .0 1) ;在小鼠腹腔巨噬细胞中 ,ProTα能明显刺激IFN α和TNF α的分泌 (P <0 .0 1)。结论　在体外实验中 ,ProTα对细胞因子IFN γ、IFN α和TNF α的分泌均有促进作用 ,这为ProTα进一步体内研究奠定了基础     

二苯乙烯苷对C反应蛋白诱导的小鼠巨噬细胞明胶酶A和B表达的影响

目的为探讨二苯乙烯苷(TSG)预防动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制,观察TSG对C反应蛋白(CRP)诱导的巨噬细胞表达明胶酶A和B的影响。方法体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞,分为空白对照组、模型组(给CRP20mg·L-1)、模型+辛伐他汀100μg·L-1组、模型+TSG120及60μg·L-1组。给予CRP12h后加入干预药物,共同培养24h后进行指标的检测。用蛋白免疫印迹法观察各组细胞明胶酶A和B蛋白表达的差异;用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察各组细胞明胶酶A和B mRNA表达的差异;ELISA法测定细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)含量。结果蛋白免疫印迹分析显示,模型组明胶酶A和B蛋白的表达较空白对照组明显增加;与模型组(明胶酶A:1.14±0.26,明胶酶B:1.26±0.24)相比,辛伐他汀(明胶酶A:0.71±0.12,明胶酶B:0.73±0.15)及TSG(120μg·L-1组:明胶酶A,0.74±0.11,明胶酶B,0.88±0.13;60μg.±0.18,明胶酶B,1.12±0.18)均能降低明胶酶A和B蛋白的表达,并随TSG处理浓度的增加有下降趋势。RT-PCR显示,模型组明胶酶A和B的mRNA表达较空白对照组明显增加;与模型组(明胶酶A:2.45±0.18,明胶酶B:2.59±0.19)相比,辛伐他汀(明胶酶A:0.86±0.06,明胶酶B:0.98±0.10)及TSG(120μg·L-1组:明胶酶A,0.98±0.09,明胶酶B,1.24±0.13;60μg·L-1组:明胶酶A,1.32±0.12,明胶酶B,1.80±0.15)均能降低明胶酶A和B的mRNA表达,并随TSG处理浓度的增加有下降趋势。ELISA结果显示,与空白对照组比较,模型组IL-6和TNF-α水平明显升高;与模型组IL-6(614±52)ng·L-1,TNFα(82.5±4.7)mg·L-1相比,辛伐他汀IL-6(290±32)ng·L-1,TNFα(36.3±2.7)mg·L-1及TSG120μg·L-1组:IL-6(310±28)ng·L-1,TNFα(42.1±3.1)mg·L-1;60μg·L-1组:IL-6(498±46)ng·L-1,TNFα(58.6±3.4)mg·L-1能明显降低细胞培养液中IL-6和TNFα含量。结论TSG可通过抑制上调的明胶酶A和B的表达、IL-6及TNFα的分泌以抑制斑块不稳定。     

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞白介素1α和肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响

采用RT-PCR和凝胶图像吸光度分析系统检测灵芝多糖（GLB₇）对小鼠腹腔巨噬细胞白介素1α(IL-1α),肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA表达的影响. 加入不同浓度的GLB₇（5,10,20,40 mg·L^-1）, 培养3及3.5 h后观察GLB₇浓度与IL-1α和TNF-α mRNA表达之间的量效关系. 发现GLB₇能浓度依赖性诱发IL-1α和TNF-α mRNA的表达,而对照组未见有IL-1α和TNF- α mRNA的表达;3及3.5 h培养上清中IL-1α和TNF-α活性与对照组比较亦有明显升高,并具有一定的浓度依赖关系. 说明GLB7免疫增强和抗肿瘤作用的基础与其在转录水平诱发IL-1α和TNF-α mRNA的表达有关.     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活性氧自由基的影响

为进一步探讨灵芝多糖 ( GLP)免疫调节作用机理 ,采用激光扫描共聚焦显微镜技术 ,动态监测灵芝多糖均一体 GLB7对小鼠腹腔巨噬细胞 ( M )活性氧自由基含量的影响 .以 GLB7( 2 0 mg· L-1)刺激 M ,发现探针 DCHF- DA的荧光强度明显下降 ,与静息水平相比 ,平均下降 ( 36± 6) % ( n=6,P<0 .0 5) ;同时还能拮抗 PMA引起的 M 呼吸爆发 ,荧光强度下降幅度为 ( 1 9± 4) % ( n=6,P<0 .0 5) .结果证明 :GLB7能减少 M 内活性氧自由基的生成 ,具有清除活性氧的作用 ,这也是 GLB7产生免疫增强和抗衰老作用的重要途径 .     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

阿克他利对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1和T淋巴细胞亚群的影响

Effects of actarit on production of interleukin-1（IL-1）by peritoneal macrophages from adjuvant arthritis(AA) rats ex vivo and the ratio of subpopulation of T lymphocytes in AA rats ex vivo and the production of hydrogen peroxide （H₂O₂）by peritoneal macrophages of mice in vitro were studied. The results showed that IL-1 synthesis from the adherent peritoneal macrophages induced with lipopolysaccharide (8 mg·L^-1) in AA rats in vivo were inhibited by actarit; the ratio of L₃T₄⁺/Lyt-2⁺ was lowered after administrating actarit; and H₂O₂ release of the peritoneal macrophages of mice was reduced in dose-dependent manner. The data suggest that the therapeutic effects of actarit on AA rats be related to inhibition of production of IL-1 and reduction of H₂O₂ release and lowered rat io of L₃T₄⁺/Lyt-2⁺ T-lymophocyte.     

蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

目的对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞(M)能量代谢水平,中性红吞噬法测定腹腔M的吞噬功能,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果蟾酥各萃取层中的水层(VB2)、乙酸乙酯层(VB4)及总水提蛋白层(VB6)分别在1.25～30、10～20和10～40mg.L-1浓度范围内增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;其他3组(VB1,VB3和VB5)蟾酥提取物单独作用或与ConA联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响;VB2,VB4和VB6在1.25～40mg.L-1浓度范围内可增强ConA诱导的小鼠腹腔M能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10mg.L-1时,VB2,VB4和VB6可协同ConA增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率,并降低CD4+CD8-和CD4-CD8+、增加CD4+CD8+T淋巴细胞亚群百分率。结论蟾酥不同溶剂萃取物VB2,VB4和VB6体外可协同ConA促进脾淋巴细胞和腹腔M的免疫功能,其机制可能与协同ConA促进DNA合成并活化CD4+CD8-T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的数量有关。     

甲胺及其代谢产物甲醛在动物体内的药代动力学

目的进一步了解血浆氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)活性与内源性甲醛的生理学与病理学意义。方法采用高效液相色谱法测定小鼠、大鼠和兔血浆中SSAO活性和静脉给予甲胺后甲胺及其代谢产物甲醛浓度。结果小鼠、大鼠和兔血浆中SSAO活性分别为(4.1±1.0),(2.0±0.3)和(325.8±3.9)μmol·h-1·L-1。3种动物单次iv甲胺后,甲胺的分布和代谢迅速。小鼠单次iv4.2mg·kg-1甲胺后甲醛浓度在代谢初期缓慢上升,在20~40min达峰后缓慢消除。而大鼠单次iv4.2mg·kg-1甲胺后血浆甲醛浓度无明显改变。兔单次iv2.3,9.6和36.8mg·kg-1甲胺后,甲胺AUC与剂量不成比例,Cl随剂量增加明显减少,呈非线性动力学特征。甲醛在兔体内消除较快,甲醛AUC与甲胺剂量的比值和全身清除率Cl无明显差异,但ke随给予甲胺剂量的增大而减少,t1/2显著延长。结论甲胺在3种动物间代谢情况相似,其代谢产物甲醛则明显不同。甲胺给予剂量的不同可能导致甲胺代谢动力学的改变,进而可能影响甲醛的代谢。     

曲格列酮对转化生长因子-β_1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型基因表达的影响

目的观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原Ⅰ型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用。方法将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,随后加入TGF-β15mg.L-1作用24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,再加入TGF-β15mg.L-1作用24h,通过实时荧光定量PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原Ⅰ型mRNA和纤连蛋白mRNA表达。结果曲格列酮0.25～5μmol.L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10μmol.L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmol.L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原Ⅰ型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10μmo.lL-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10μmol.L-1可显著下调胶原Ⅰ型mRNA表达(P<0.05)。结论曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型纤维的增加有关。     

银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷诱导PC12细胞缺氧诱导因子-1α表达

目的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在介导心肌和脑低氧/缺血的适应性反应中起重要作用,本文研究银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷的药理作用机制是否与HIF-1α表达及其相关信号通路有关。方法MTT比色法观察PC12细胞活性,蛋白质免疫印迹法分析PC12细胞HIF-1α及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达,RT-PCR观察HIF-1αmRNA表达。结果一定浓度范围的银杏内酯、刺五加皂苷或人参皂苷均可促进PC12细胞的活性,在浓度分别为37.5,50和60mg·L-1时达最好效果;银杏内酯(37.5mg·L-1)、刺五加皂苷(50mg·L-1)或人参皂苷(60mg·L-1)处理PC12细胞24h均可诱导p-ERK1/2和HIF-1α表达增高,且引起HIF-1αmRNA表达水平的上调,提示HIF-1α蛋白水平的增高与其合成增加有关。结论银杏内酯、刺五加皂苷和人参皂苷均可诱导PC12细胞表达HIF-1α,该作用可能与激活MAPK信号通路有关。