接触三硝基甲苯工人血红蛋白加合物的竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定

首次用竞争抑制性酶联免疫吸附试验（ＣＩ一ＥＬＩＳＡ），定量测定了接触三硝基甲苯工人血中４一氨基一２，６一二硝基甲苯（４Ａ）血红蛋白（Ｈｂ）加合物水平为０．０７±ｓ０．０４ｎｇ·ｍｇ－１Ｈｂ，各工种间差别无显著性；样品经酸水解处理后，接触者４Ａ一Ｈｂ水平为０．０６±ｓ０．０５ｎｇ·ｍｇ－１Ｈｂ，与不经酸水解处理样品相比．无显著差别．首次证明Ｃ１一ＥＬＩＳＡ与传统的高效液相色谱分析方法对同批接触样品测定的结果存在较好的相关性。     

接触三硝基甲苯工人血红蛋白加合物的竞争抑制性酶…

首次用竞争抑制性酶联免疫吸附试验，定量测定了接触三硝基甲苯人工血中４－氨基－２，６－二硝基甲苯血红蛋白加合物水平为０．０７±ｓ０．０４ｎｇ．ｍｇ＾１Ｈｂ，各工种间差别无显著性；样品经酸水解处理后，接解者４Ａ－Ｈｂ水平为０．０６±ｓ０．０５ｎｍ．ｍｇ＾－１Ｈｂ，与不经酸水解处理样品相比，无显著差别，首次证明ＣＩ－ＥＬＩＳＡ与传统的高效液相色谱分析方法对同批接触样品测定的结果存在较好的相关性。     

三硝基甲苯血红蛋白加合物作为生物监测的标志物

在前文已证实TNT进入体内可与蛋白共价结合的基础上,用[~(14)C]TNT法比较了TNT与血红蛋白、血浆蛋白及肝、肾组织蛋白四种蛋白加合物的共价结合,从加合物的剂量反应关系,在体内存留时间以及取样方便等条件来看,血红蛋白加合物是生物监测最有希望的指标,文中对它作为生物监测的意义进行了讨论。     

酶联免疫吸附试验测定操作的体会

酶联免疫吸附试验（ELISA）是利用酶标记物作为指示物,以抗原．抗体的特异性结合反应为基础,在酶标记物同抗原一抗体结合后,由于酶的催化放大作用,使得ELISA既保持抗原抗体反应的特异性,又体现酶催化放大的敏感性。     

三硝基甲苯蛋白加合物及其结构鉴定

在三硝基甲苯(trinitrotoluene,TNT)的分布和排泄实验中。约90％的注入量于给药后3～4d排出体外,体内部分主要分布于血液和肝、肾组织,其中以血液中的含量最高,从血液中各组分含量测定看到血红蛋白部分占比例最高,且存留较久,提示TNT有以共价结合形式存在体内的可能,通过加合物的分离,提取和测定,首次证实TNT可与蛋白共价结合,在血液和肝组织中,分别约有20％和30％以加合物形式存在.进一步对所形成的血红蛋白及肝组织蛋白加合物水解,提取,净化,并经高效液相色谱对其结构进行了鉴定,证实提取液中的主要放射性是由TNT还原代谢产物2氨基-4,6-二硝基甲苯(2A)和4氨基-2,6-二硝基甲苯(4A)所构成,与体外制备血红蛋白加合物的结构相比,得到类似结果。     

直接竞争酶联免疫吸附分析法测定牛奶中磺胺二甲嘧啶

应用自制的磺胺二甲嘧啶(SM_2)-蛋白质偶联物,经免疫得高质量兔抗SM_2抗血清。建立了测定SM_2的酶联免疫吸附分析(ELISA)竞争法,重现性好,特异性强,测定线性范围0.05～5.0μg·L~(-1),最低检出浓度为0.025μg·L~(-1)。全脂牛奶与脱脂牛奶的加标实验回收率分别为82.1％～128.8％和90.6％～124.0％。测定了270个牛奶试样,未发现大于欧盟允许的最高浓度25μg·L~(-1)的阳性试样。     

酶联免疫吸附检测进展

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）技术是1971年由Engvall和Perlman建立的一种生物活性物质微量测定新技术,以其灵敏度高、特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用。近年来,该技术不断改进,形成了多种分析方法．并且在检测的灵敏度、特异性、操作简单化、高效性等方面都有很大提高。     

间接竞争酶联免疫吸附法检测骨肽的研究

目的：研究酶联免疫吸附法对骨肽的检测。方法：考察抗原浓度、竞争时间、二抗浓度、工作时间、显色时间等对间接竞争酶联免疫吸附结果的影响。结果：检测抗原浓度为0.25μg/ml,竞争时间30min,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶400,二抗反应时间40min,显色时间15min。结论：本实验通过优化间接酶联免疫检测条件,建立了骨肽的间接竞争酶联免疫吸附检测方法,试验结果稳定,且精确度较好。     

Establishment of indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of platycodin D in Radix Platycodonis

Platycodin D (PD) has been used as the quality control marker of Radix Platycodonis for its high content and various pharmacological properties. In this study, a specific polyclonal antibody against PD (PD–pAb) was developed, and PD–pAb-based indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) was established for the detection of PD in Radix Platycodonis. The 50% inhibition concentration (IC₅₀) of PD was 2.70 μg/mL and the linearity range for PD was from 0.032 μg/mL to 100 μg/mL. No cross reactivity with PD–pAb was found in five PD analogs except for platycodin D2 (PD2, 0.93%). The average recovery of PD by icELISA was 97.14% (RSD = 1.17%). The icELISA was used for the detection of PD in different Radix Platycodonis samples and the results were confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The correlation coefficient between the two assays was 0.9654. Taken together, the established icELISA might be a simple, cheap, rapid, sensitive, reliable and high-throughput method for determining the contents of PD in Radix Platycodonis.     

酶联免疫吸附法测定人血清舒芬太尼浓度

目的建立酶联免疫吸附法(EUSA)检测人血清舒芬太尼浓度。方法应用舒芬太尼试剂盒(美国Neogen公司)拟合标准曲线,测定其检测限、精密度、回收率和交叉反应率,并检测开胸手术后行舒芬太尼自控静脉镇痛(PCIA)患者的血清样本36份。结果舒芬太尼浓度为0.07～1.50μg·L~(-1)时线性良好(R~2=0.996),检测限0.06μg·L~(-1),方法回收率100.5%,日内和日间RSD分别<10%和15%,与麻醉期间常用药物的交叉反应率低,羟乙基淀粉130/0.4存在时吸光度增加。结论ELISA测定人血舒芬太尼简便、快捷,可用于临床药动学研究。     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶（HRP）标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2．5μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁．中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2．5-5．0μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱．结论双抗体奕心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

晚期糖基化交联产物裂解剂酶联免疫吸附测定筛选方法的建立

目的　建立一种快速、体外筛选晚期糖基化终产物 (AGE)交联结构裂解剂的方法。方法　以牛血清白蛋白 (BSA)与葡萄糖孵育形成AGE BSA ,并与包被于 96孔酶标板上的大鼠尾胶原蛋白交联制备AGE BSA 胶原交联结构 ,药物作用一定时间后 ,采用以抗BSA为抗体的ELISA方法检测BSA残留量 ,以此评价裂解剂的裂解强度。并对ELISA全程条件进行了优化。结果　BSA与葡萄糖孵育 3～ 4个月后 ,在Ex/Em( 395 / 4 6 0nm)下出现特异性荧光 ,SDS电泳显示 6 8.0ku的BSA已转化为分子量大于6 8.0ku蛋白质 ,表明已形成AGE BSA ;AGE BSA可与鼠尾胶原蛋白形成特异性的交联结构 ,最强特异性结合的包被量为每孔 0 .0 1～ 0 .1μg。最理想的封闭液为Pierce公司的SuperBlock封闭缓冲液。用新建立的ELISA方法对先导化合物苯基 4 ,5 二甲基噻唑氯嗡盐 (ALT 711)及新合成 10种裂解剂进行了体外裂解效应的评价 ,ALT 711结果与文献报道基本一致 ;本方法筛选的结果与高效液相以小分子二羰基化合物为底物的筛选方法结果趋势一致。结论此方法可用于体外筛选AGE交联裂解化合物 ,并具有高通量的特点     

荧光免疫层析法和酶联免疫吸附法检测英夫利西单抗血药浓度的比较研究

目的:探讨荧光免疫层析法(fluorescence immunochromatography assay,FICA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测英夫利西单抗(infliximab,IFX)血药浓度结果的相关性与一致性。方法:采用已上市的IFX药物浓度测定试剂盒(荧光免疫层析法)与实验室建立的检测IFX浓度的ELISA方法测定克罗恩病患者血液样本IFX浓度。通过Spearman相关分析、Passing-Bablok回归、单样本t检验、Bland-Altman散点图和Cohen's Kappa系数等对检测结果统计分析。结果:共收集到44份血液样本,FICA和ELISA法检测IFX结果的Spearman系数为0.87(P＜0.01)。Passing-Bablok回归分析显示,FICA和ELISA法检测IFX结果的回归方程为C_FICA＝0.5071C_ELISA+0.6230。单样本t检验提示2种方法检测IFX结果差值与0有显著差异。Bland-Altman散点图显示FICA与ELISA法所测IFX血药浓度的差值中有91.43%(32/35)在一致性界限内(差值均值±1.96 SD)。对2种分析方法检测IFX结果定性分析表明一致性为68.18%(30/44),Cohen's KAppa系数为0.51。结论:FICA与ELISA法检测IFX结果高度相关,但一致性存在差异。ELISA法所测IFX浓度结果高于FICA,提示运用IFX检测结果进行临床决策时要关注检测方法。     

以精子抗原肽为抗原的抗精子抗体ELISA检测方法的建立

目的建立组合多个精子抗原肽为抗原的检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法用PS3全自动多肽合成仪合成4个特异精子肽,并经反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化和质谱鉴定。用ELISA检测4个合成肽的抗原性,基于对这些合成肽抗原活性的评价,将4个精子抗原肽混合后(组合肽)作为抗精子抗体(AsAb)检测用抗原。结果合成了实验所需要的抗原性肽段,RP-HPLC结果显示纯度达95%以上。以组合肽为抗原建立的检测AsAb的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为95.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,以组合的精子抗原肽作为包被抗原建立的ELISA方法可提高AsAb检测的灵敏度。     

重组蝎毒抗神经兴奋肽的ELISA分析方法建立及稳定性的初步研究

目的建立重组蝎毒抗神经兴奋肽(ANEP)的ELISA分析方法并对ANEP的稳定性进行初步研究。方法以分别建立的间接ELISA和间接竞争ELISA分析方法进行ANEP含量测定,并通过方法学的优化,最终以建立的间接法ELISA方法测定了温度、pH值、反复冻融、超声对ANEP稳定性的影响。结果间接ELISA相对于间接竞争ELISA有着更好的线性关系和灵敏度,线性范围0.025~1.60μg/mL。检测限为10 ng/mL。稳定性实验表明ANEP在37,60℃的条件下放置24 h含量基本不变,pH 5~11的缓冲液中保持稳定,反复冻融、超声4 min后含量降低。结论所建立的间接ELISA方法能很好的用于ANEP的测定。ANEP的热稳定性较好,强酸性下不稳定,对反复冻融与超声等稳定性较差。     

金标快速法与ELISA法检测HBV的对比分析

目的：探讨金标快速法与酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HBV的效果,为临床选择一种经济、快速准确、敏感检测HBV的新方法。方法：将2008年9月本院门诊体检的东莞市一所中学5980例新生,并随机分为金标快速法组（210例）和ELISA法组（210例）,对两种检测方法进行测定,并对测定结果分别进行比较分析。结果：用金标快速测试法与ELISA法平行检测乙肝HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc,差异尢统计学意义（Χ^2=0．25、0．10、0．13,P〉0．05;∑Χ^2=0．48,v=5,P〉0．05）;两种方法检测结果HBV五项指标的总符合率分别为98．57％、99．52％、98．10％、95．23％、96．19％以ELISA法为常规法验证金标快速测试法,则金标法的敏感性分别为99．50％、100．00％、98．95％、94.20％、95．65％．特异性为85．17％、99．51％、97．48％、96．03％、96．64％。用金标快速测试条进行乙肝五项指标重复检测,两次检测结果具有较高的一致性。结论：两种方法比较,金标快速测试法较酶联免疫试验法具有简单便捷、快速准确的特点,是一种较好的乙肝病毒五项指标快速测定方法．值得在基层医院大力推广。