瑞香狼香水提物小鼠药物血清诱导K562细胞凋亡

目的从细胞凋亡角度探讨瑞香狼毒(SCL)抗肿瘤作用机理.方法用SCL小鼠药物血清处理培养的人白血病K562细胞,MTT比色法观察对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,流式细胞仪观察DNA改变.结果SCL(5～20)g*kg-1小鼠药物血清显著抑制K562细胞增殖,明显诱导K562细胞凋亡的形态学改变和DNA变化.凋亡细胞率与小鼠服用SCL水提物的剂量呈正相关.结论SCL水提物可诱导肿瘤细胞凋亡.     

分割剂量电离辐射对卵巢癌细胞多药耐药的影响

目的 研究不同分割剂量电离辐射方案对卵巢癌细胞多药耐药性的影响.方法 采用卵巢癌亲本细胞SKOV3及其耐药细胞株SKVCR,分别进行假照射、单次照射(10 Gy)、常规分割照射(2 Gy ×5)和超分割照射(1 Gy×2 ×5).MTT方法检测细胞对4种化疗药物硫酸长春新碱( vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)、盐酸吡柔比星(pirarubicin,THP)和顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的变化.Western blot检测P-gp蛋白表达量.结果 与SKOV3相比,SKVCR倍增时间增加为1.8倍,P-gp糖蛋白表达增高,4种药物对SKVCR的IC50浓度明显增加(P＜0.05).在SKOV3中,与假照组相比,单次照射后细胞对THP、DDP药敏性降低,常规分割照射后细胞对VCR、THP、VP-16药敏性降低,超分割照射使VP-16药敏性降低;在SKVCR中,与假照组相比,3个照射组对VCR、VP-16的药敏性增高,对DDP的药敏性无明显改变,单次和分割照射均可降低P-gp表达.结论 单次、分割和超分割照射在SKOV3亲本细胞中诱导多药耐药,在耐药株SKVCR中逆转对VCR、VP-16的耐药性.     

硫氧化还原蛋白对胃癌细胞化疗敏感性的调节作用

目的 探讨硫氧化还原蛋白(Trx)对胃癌细胞化疗敏感性的调节作用。方法 通过RT-PCR从人胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR细胞中克隆Trx全长cDNA,构建Trx正反义真核表达载体,并借助脂质体将正义载体转入胃癌细胞SGC7901、反义载体转入胃癌耐药细胞SGC7901／VCR,利用MTT试验在体外检测基因转染细胞及其对照细胞对化疗药物的敏感性。结果 转染Trx正义载体后,SGC7901细胞对长春新碱、顺铂、阿霉素的敏感性显著降低;转染Trx反义载体后,SGC7901／VCR细胞对长春新碱、顺铂、阿霉素的敏感性显著升高。结论 Trx可能参与了胃癌细胞多药耐药性的形成,改变Trx的表达水平可以调节胃癌细胞的化疗敏感性。     

长春新碱载体红细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨长春新碱(VCR)载体红细胞的体外抗肿瘤活性。方法采用改良低渗预膨胀技术制备VCR载体红细胞,并将VCR载体红细胞与人红白血病细胞株K562共培养,MTT法检测K562细胞增殖,PI/Rhodamin123染色,流式细胞分析K562细胞周期和细胞凋亡情况,Hoechest33258细胞核染色观察凋亡K562细胞核形态。结果VCR载体红细胞可明显抑制K562细胞增殖并促其凋亡,且该作用随剂量增高而加强。与载体红细胞混合培养24h后,S+G2/M期K562细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,与VCR原药作用一致,与未载药红细胞的作用相比差异显著(P<0.01)。结论经红细胞载药并释放出来的VCR在体外具有与原药相同的抗肿瘤活性。     

瑞香狼毒水提物小鼠药物血清对人肝癌细胞增殖的影响

目的 从整体水平探讨瑞香狼毒水提物（ＳＣＬＡ）的抗癌机理。方法 以不同剂量ＳＣＬＡ灌胃给药后,在不同时间采集小鼠血清,处理体外培养的人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞,用ＭＴＴ比色法和集落形成试验观察细胞增殖能力。结果 ＳＣＬＡ５、１０、２０ｇ．ｋｇ＾－１给药１、２、３ｈ后的药物血清处理肿瘤细胞后,其ＭＴＴ转化率和克隆形成率均显著降低;给药２ｈ后的药物血清表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖作用。结论 直接抑制癌     

ZNRD1基因的克隆及其反义核酸对胃癌耐药细胞阿霉素蓄积的影响

为获得ZNRD1基因的编友区序列，构建反义真核表达载体，通过检测ZNRD1基因反义核酸转染对胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901／VCR阿霉素（ADM）积蓄能力的影响，评价ZNRD1在抗胃癌细胞多药耐药性方面的应用前景。用PCR方法扩增目的基因序列，PCR产物经DNA序列测定证实后，采用分子克隆技术，将所获目的基因全长cDNA片段按反方向克隆入真核表达载体pcDNA3.1^ 的多克隆位点之间，对重组质粒进行酶切鉴定。用脂质体介导法将ZNRD1反义核酸转染SGC7901／VCR，流式细胞仪（FACS）检测SGC7901／VCR细胞内阿霉素的蓄积量。结果应用PCR反应扩增出特异性片段，经DNA序列,下实与文献报道的ZNRD1基因编码区序列一致；构建了反义真核表达载体pcDNA3.1-ZNRD1；转染SGC7901／VCR细胞后，可提高细胞内ADM蓄积量。ZNRD1反义核酸转染后，胃癌多药耐药细胞株SGC7901／VCR对抗肿瘤药物ADM的积蓄作用提高，提示ZNRD1反义核酸具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用。     

A549肺腺癌多细胞球体放射抗拒细胞的化疗药物敏感性

目的 探讨A549肺腺癌多细胞球体放射抗拒细胞的化疗药物敏感性。方法 放射抗拒细胞为6MV高能X线照射25Gy后的第10代再增殖细胞，对照组为A549亲代细胞和MCF-7长春新碱耐药（MCFT／VCR）细胞。6种化疗药物分别为顺铂（DDP）、长春花碱酰胺（VDS）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、羟基喜树碱（HCP）、丝裂霉素（MMC）和阿霉素（ADM），异搏定（VPL）作为耐药逆转剂。MTT比较药敏试验效果，RT—PCR检测mdrl和MRP耐药基因表达。结果 A549亲代和放射抗拒细胞对DDP耐药，对VDS、5-FU、HCP、MMC和ADM敏感。VPL的抑制率分别为98％和25％（P〈0．001）。未加药组A549亲代细胞的A值为放射抗拒细胞的2倍（P〈0．001）。MCF7／VCR细胞对DDP和MMC耐药，对VDS、5-FU、HCP和ADM较敏感。VPL的抑制率80％。A549所有细胞的mdrl／β2-MG为0，MRP／β2-MG为0．7左右，MCFT／VCR分别为35和4．36。结论 A549放射抗拒细胞的化疗药物敏感性无明显变化，对VPL的敏感性减低不能以mdrl和MRP耐药基因的表达水平来解释，可能与某种膜蛋白的变化，以及细胞增殖能力减低有关。与化疗引起的多药耐药不同，对于放射抗拒细胞，VPL可能不是一个理想的耐药逆转剂，应寻求新的生物制剂联合化疗药物治疗放射抗拒复发肿瘤。     

人脑胶质瘤培养组织对化疗药物的敏感性

  目的 观察培养的人脑胶质瘤组织对临床常用化疗药物的敏感性,为胶质瘤的个体化治疗提供实验依据。 方法 利用112例脑胶质瘤标本进行组织块体外培养,观察其对临床脑胶质瘤治疗常用药物尼莫司汀(ACNU)、顺铂(DDP)、替莫唑胺(TMZ)、长春新碱(VCR)、替尼泊苷(VM26)及组合用药DDP＋VM26的敏感性,比较化疗药物体外抗肿瘤作用的差异;分析化疗药物敏感性与患者病理分级的相关性;应用透射电镜观察化疗药物作用前后肿瘤组织超微结构的变化。 结果 人脑胶质瘤培养组织对化疗药物的敏感性依次为DDP＋VM26、VM26、TMZ、VCR、DDP和ACNU;仅组合用药DDP＋VM26的敏感性与患者病理分级有关(χ²=4.447,P=0.035);透射电镜观察发现化疗药物作用后肿瘤细胞呈凋亡中晚期改变及坏死的变化。 结论 不同人脑胶质瘤培养组织对化疗药物的敏感性存在差异,引起肿瘤细胞凋亡或坏死可能是化疗药物发挥作用的机制之一。     

瑞香狼毒分子量小于一万的醇提部位小鼠药物血清体外抗肿瘤活性

目的：研究瑞香狼毒（SC）小于10000分子量醇提部位体外抗肿瘤活性，方法：制备SC分子量小于10000醇提部位（SCES）制剂，小鼠口服不同剂量SCES及服药后不同时间采血，分离血肖，SCES药物血清处理BEL－7402，SGC－7901和L－1210细胞，检测细胞MTT转化率，结果：SCES药物血清对BEL－7402，SGC－7901和L－1210细胞MTT formazan的形成均有显著的抑制作用；随着给药剂量的增加，药物血清的细胞增殖抑制作用增强，5％的3－24g.kg^-1药物血清处理BEL－7402，SGC－7901，和L－1210细胞48h，抑制率分别为16．60％－56．88％，27．53％－56．11％，37．73％－67．08％，6g.kg^-1 1、2、4、8h药物血清，抑制率分别为6．18％－29．21％，9．62％－35．13％，17．13％－45．91％。结论：SCES有明显抗肿瘤作用，对不同肿瘤细胞有明显选择性。     

OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用

目的研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用。方法应用细胞计数的方法研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的生长曲线的影响;用MTT研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的细胞毒作用;用流式细胞仪技术研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞周期的影响。结果OD-PTD融合蛋白能显著抑制细胞的生长(P<0.01);并且对K562细胞具有明显的细胞毒作用(P<0.01)。OD-PTD融合蛋白作用于K562细胞后,细胞周期变化明显,细胞从G0/G1期到S期发生明显阻滞(P<0.05)。结论OD-PTD融合蛋白对K562细胞有明显的抑制作用,为进一步探讨慢性粒细胞白血病新的治疗手段提供了实验依据。     

Radiation Chemical and Physical Mechanisms of Radiosensitization of Single Cell Systems by Iothalamate

Summary

The radiosensitizing effect of iothalamate (ITA) has been investigated in bacterial and mammalian cells in order to obtain a better understanding of the physical and radiation chemical mechanisms of sensitization displayed by the drug. In order to distinguish between the two, Escherichia coli B/r cells were irradiated with 9 MeV electrons, which allow only the radiation chemical mechanism to operate, and V79 cells with 250 KVp X-rays, which instead make possible the occurrence of both mechanisms.

It has been shown that: (a) Maximum sensitization already occurs in bacteria with 10^?2 mol dm^?3 ITA (enhancement ratio (ER) 11·2 in oxygen, 2·7 in nitrogen), while in mammalian cells a concentration higher by a factor of 10 is required (ER 2·2 both in air and nitrogen). (b) ITA sensitization is inhibited when bacteria are irradiated in growth medium instead of buffer. Such inhibition does not occur with V79 cells. (c) Cysteine and glycerol completely cancel the sensitizing effect of ITA on bacterial cells in both gas phases. Dimethylsulphoxide (DMSO) does the same in nitrogen, while in oxygen it only reduces ITA sensitization to about 50 per cent of the level observed in control conditions. With mammalian cells, all the three scavengers do not modify significantly the enhancement produced by ITA, either in air or in nitrogen. The experimental results are consistent with both postulated mechanisms of sensitization.     

急、慢性髓性白血病细胞低温冻存后诱生的树突状细胞生物特性研究

目的 观察急、慢性髓性白血病原代细胞经低温冻存后诱生的白血病源性树突状细胞的生物特性.方法 取急、慢性髓性白血病原代细胞,一部分细胞立即培养,一部分细胞用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉为保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存一定时间后复温培养.培养时细胞内加重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4、肿瘤坏死因子-α等细胞因子,培养12 d,为白血病源性树突状细胞,观察细胞形态及免疫表型、自身混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞活性.结果 急、慢性髓性白血病新鲜或冻存的原代细胞,经组合细胞因子培养,细胞均不同程度地出现典型的树突状形态,细胞表面CD80、CD54、人白细胞表面抗原DR、CD1a、CD83、CD86表达上调,CD14下调;冻存原代细胞经培养生成的白血病源性树突状细胞,还表现为自体混合淋巴细胞反应和T淋巴细胞杀伤自体白血病细胞活性明显.结论 急、慢性髓性白血病新鲜或经低温冻存的原代细胞可诱生为白血病源性树突状细胞,这种细胞可诱导T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞,为用树突状细胞免疫治疗微小残留病提供了实验依据.     

TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响.方法将TPO cDNA构建到pBabe/pura中,通过"乒乓转染法"获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL,用Northern blot检测细胞中TPO基因的表达,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性;以未转基因的HFCL为对照,将CD34+造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+CD41+和表型为CD41-CD61+细胞的比例.结果基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因,在HFCL/TPO培养上清中有0 75 ng/ml水平的TPO活性;并且在HFCL/TPO支持下,CD34+造血细胞经过7 d扩增后,CD34+CD41+细胞的比例为(13.7±2.0)%,HFCL为(6.5±1.8)%(P＜0.01);CD41+CD61+细胞的比例为(11.9±0.7)%,略高于HFCL的(10.6±1.5)%(P＞0.05).结论基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+CD41+巨核祖细胞的扩增,但对较成熟的CD41+CD61+巨核细胞影响不明显.     

High Radiosensitivity of the MOLT-4 Leukaemic Cell Line

Summary

Radiation survival of MOLT-4, a leukaemic T-lymphocyte cell line, was measured by counting colonies formed in 0·8 per cent methyl cellulose. The survival curve was a simple exponential and showed the cells to be radiation sensitive, with D₀ = 0·49 ± 0·02 Gy and extrapolation number n = 0·92 ± 0·09. No increase in survival as measured by colony-forming ability or trypan blue dye exclusion was seen when the dose was split into two fractions, separated by a 5 h incubation period. Electron microscopy and trypan blue dye exclusion showed that 5 h after exposure to high doses, MOLT-4 cells began to die and displayed condensed, marginated chromatin and cellular vesticulation.     

人胎盘来源干/祖细胞生物学特性研究进展

胎盘通过分离可得到许多表型可塑性的细胞类型,现已成为再生医学新的细胞来源途径。目前已发表的众多文献使用了不同的分离鉴定方法,描述了来自胎盘不同区域的干细胞。本文系统整理人胎盘来源的各种干/祖细胞的生物学特性,并提示这些细胞在将来临床应用的可能性。     

脂肪间充质干细胞分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMCSs)是否能分化为肾小管上皮细胞,用于急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗.方法 体外分离和培养ADMSCs,用一种携带有荧光素酶和红色荧光蛋白(fluc-mrfp)报告基因的慢病毒转染ADMSCs;构建SD大鼠缺血再灌注诱导的AKI模型,将病毒转染ADMSCs直接从肾实质注射移植2×106细胞量.使用生物发光成像仪(bioluminescence imaging,BLI)示踪移植后的ADMSCs在大鼠体内的分布;免疫荧光染色法检测ADMSCs在体内的分化.结果 ADMSCs高表达CD29、CD90,不表达CD31、CD45、CD34;慢病毒转染后的ADMSCs稳定表达fluc和mrfp报告基因.体内ADMSCs移植后,BLI可以检测到荧光信号一直持续到第14天;免疫荧光结果进一步证实移植的ADMSCs可能分化为肾小管上皮细胞.结论 ADMSCs在体内可以分化为肾小管上皮细胞,为进一步研究ADMSCs治疗AKI提供实验基础.     

豚鼠前庭单个毛细胞的分离

从７只豚鼠前庭中取出壶腹嵴、位觉斑，放置在胶原酶溶液中孵育５０ｍｉｎ～６０ｍｉｎ后行机械分离。可获得均含有皮板和纤毛的两种类型活性毛细胞８３（±２３）个，其中Ⅰ型毛细胞呈烧瓶状，细胞中部有明显的颈；Ⅱ型毛细胞呈圆形或椭圆形，胞体比Ⅰ型毛细胞小；Ⅰ、Ⅱ型毛细胞的比例是６２１９；分离后５ｈ仍有４０％的毛细胞具有活性。另外，笔者还观察到失活的早期变化是胞内出现颗粒。实验结果表明，酶消化后辅以机械分离，可获得大量单个、离体的活性毛细胞，并且能够进行哺乳动物前庭的生理学研究。     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。     

猴骨髓间充质干细胞的分离及原代培养特性的研究

目的：探讨猴骨髓间充质干细胞(MSCs)低分化干细胞方面的特性。方法：以Percoll(质量密度1073g/L)非连续密度梯度离心分离出骨髓悬液中的骨髓间充质干细胞，用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养，观察细脑的形态、生长状况及其超微结构。结果：原代培养的骨横间充质干细胞增殖缓侵，细胞增殖率和形态分化不均一。如有一些细脑在4wk的培养时间内末见明显增殖，这些增殖不明显的细胞有的未见明显的伸展，呈圆形，有的伸展充分，成片状；在培养2wk后也可见一些明显增殖的细胞，分别形成克隆团状或条状的增生细胞群；培养过程中可见有神经元样及多核细胞出现。原代培养的骨髓间充质干细胞的超微结构也显示了低分化的干细胞特点，如细胞表面具有微绒毛，脑浆内内质网丰富、激离核糖体数量多、线粒体小，核仁大而不规则、可见核裂，超微结构还显示了一些中胚层来源于细瘤的结构特点，如大量的微丝。结论：经Percoll细胞分离介质分离出的骨髓间充质干细胞，在非诱导条件下原代培养过程中，从形态分化、增殖率等方面显示了其多向分化潜能；从超微结构等方面显示了其中胚层来源低分化细胞的特点。这些特点可作为骨髓间充质干细胞鉴定的佐证之一，说明Percoll非连续密度梯度离心法对骨髓间充质干细胞的分离具有可靠性。     

Uptake and Clearance of Plutonium-238 from Liver Cells Transplanted into Fat Pads of F344 Rats

Summary

This research is directed toward understanding the role of liver cells and the liver environment in plutonium biokinetics. Animals injected with liver cells and control animals received a single intraperitoneal injection of 37 kBq (1 µCi) ²³⁸Pu citrate and were serially sacrificed 1, 5, 10, 15, 30, 60 or 70 days later. Uptake, retention and distribution of Pu in intact liver and in liver cells growing in fat pads were determined. From these measurements, it was observed that the cells of the intact liver took up about twice as much ²³⁸Pu as liver cells transplanted into the fat pads of the same animal. The retention half-life was 8·3 days for the total activity in the liver, 20 days using tracks/cell measurements in the liver and 16 days for the tracks/cell measurements in the liver cells translocated to fat pads. When the data on tracks/cell were standardized relative to the amount of Pu present at 5 days after the injection, there was no significant difference between the retention of Pu in liver cells from intact animals and liver cells transplanted into the fat pads. About 20 per cent of the 5-day Pu liver burden in both liver cells and liver cells transplanted into fat pads was retained at 70 days. The smaller retention and clearance for liver cells in different environments indicate that uptake and clearance of Pu from the body is dependent, to a major extent, upon hepatocyte function.