组织型纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂对系统性红斑狼疮的检测价值

<正>自身免疫介导并累及多个系统、临床表现起伏是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的显著特征,血液、造血系统受损较常见,其发病机制仍不十分清楚[1]。SLE可以引起全身多器官损害并常存在高凝状态,甚至发生血栓或     

测定血浆组织型纤溶酶原激活物活性的酶联纤维蛋白溶解法

组织型纤溶酶原激活物（ｔ—ｐＡ）是反映人体纤溶系统活性的一个重要成分，人血浆ｔ—ＰＡ活性的变化与临床许多疾病的发生和发展有密切关系。笔者建立了测定血浆ｔ—ＰＡ活性的酶联纤维蛋肉溶解法，并对该方法的准确度、精密度和灵敏度进行了研究。运用本法确立了不同年龄组的正常参考值，检测了４０例患者血浆ｔ—ＰＡ活性的变化并对其变化的机理作了初步探讨。     

测定血浆组织型纤溶酶原激活物活性的酶联纤维蛋白溶解法

组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）是反映人体纤溶系统活性的一个重要成分，人血浆ｔ－ＰＡ活性的变化与临床许多疾病的发生和发展有密切关系。笔者建立了测定血浆ｔ－ＰＡ活性的酶联纤维蛋白溶解法，并对该方法的准确度，精密度和灵敏度进行了研究。运用本法确立了不同年龄组的正常参考值，检测了４０例患者血浆ｔ－ＰＡ活性的变化并对其变化的机理作了初步探讨。     

血瘀证患者血浆组织型纤溶酶原激活因子与组织型纤溶酶原激活抑制因子活性改变的观察

探讨急性心肌梗塞、冠心病及恶性肿瘤等血瘀证的准确治则。观察１２４例血瘀证患者，与２８例正常中老年作对照，以分析血浆组织型纤溶酶原激活因子（ｔＰＡ）和组织型纤溶酶原激活抑制因子（ＰＡＩ）的活性改变与临床病证的关系。结果：冠心病组（７９例）与对照组比较，血浆ｔＰＡ活性显著降低，ＰＡＩ活性显著升高（Ｐ均＜０．０５）；急性心肌梗塞组（１５例）与对照组比较，血浆ｔＰＡ活性高于其１．５倍，而ＰＡＩ活性也明显增高（Ｐ均＜０．０５）；恶性肿瘤组（３０例）血浆ｔＰＡ活性高于对照组１倍以上（Ｐ＜０．０５），而ＰＡＩ活性无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。提示：冠心病患者血浆ｔＰＡ活性下降，ＰＡＩ活性增高，纤溶活性普遍下降，血液趋于凝滞，临床应行活血化瘀的治疗方法。急性心肌梗塞患者血浆ｔＰＡ和ＰＡＩ的变化较复杂，随病程进展，在较短的时间后，纤溶功能下降需以较大灵活性辨证论治，随时更改药方。恶性肿瘤患者血浆ｔＰＡ活性明显增高，纤溶功能亢进，血粘度下降，对恶性肿瘤的局部浸润和全身转移有促进作用，故中医治疗应慎用活血化瘀攻法而应以扶正祛邪为治则，可获良效     

组织型纤溶酶原激活物及其抑制物与缺血性脑卒中…

本文介绍了组织型纤溶酶原激活物及其抑制物的来源，基本结构及在纤溶系统中的主要作用，并对其对与缺血发表离卒中的发生，发展和恢复的关系以及运动对其产生的影响进行了综述。     

组织型纤溶酶原激活物抗原及纤维蛋白（原）降解产物E碎片检测的…

本文以自制单克隆抗体建立夹心ＥＬＩＳＡ法检测ｔ－ＰＡ：Ａｇ，ＦＤＰ－Ｅ含量，配合ｔ－ＰＡ：Ａ，ＰＡＩ：Ａ，Ｄ－Ｄｉｍｅｒ３项指标测定５０例正常成人，１５例正常小儿，７４例肝脏疾病，４７例小儿肾炎和１９例急性心肌梗死患者，结果表明，各型肝炎ｔ－ＰＡ：Ａｇ，ｔ－ＰＡ，Ａ，ＦＤＰ－Ｅ和Ｄ－Ｄｉｍｅｒ均显著升高，ＰＡＩ：Ａ则降低，与肝病严重程度相平行；小儿肾炎患者上述５基指标有程度不一变化，表现纤溶活性增     

急性脑梗死患者血浆组织型纤溶酶原激活物与抑制物活性的动态变化

目的观察急性脑梗死不同时期患者血浆纤溶活性的动态变化,探讨其变化在病情发展中的作用。方法采用发色底物显色法测定60例脑梗死患者急性期与恢复期和60例同期住院非心、脑血管疾病患者血浆组织型纤溶酶原激活物(tissue-plasminogenactivator,t-PA)、纤溶酶原激活抑制物(plasminogenactivatorinhibitor,PAI)活性。结果脑梗死急性期组与恢复期组和对照组相比,t-PA活性明显减低,PAI活性显著增高(P均<0.01)。恢复期组与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论急性脑梗死患者纤溶平衡失调,故检测其血浆t-PA,PAI活性动态变化可作为脑梗死诊断与治疗的一个客观参考指标。     

组织型纤溶酶原激活物抗原的检测及其临床应用

组织型纤溶酶原激活物抗原的检测及其临床应用王钦红王鸿利邵慧珍朱立红王振义采用自行研制的组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）单克隆抗体（单抗）建立夹心ＥＬＩＳＡ法检测ｔ－ＰＡ抗原（ｔ－ＰＡ∶Ａｇ），同时测定ｔ－ＰＡ活性（ｔ－ＰＡ∶Ａ）和ＰＡＩ活性（ＰＡＩ∶...     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性脑梗死效果荟萃分析

目的评价重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）治疗急性脑梗死（acute cerebral Infarction,ACI）的效果。方法检索近10年PubMed、Cochrane Database of Systematic Reviews、EMbase、中国知网、万方数据库中关于rt-PA治疗ACI的随机对照试验（RCT）研究,同时筛检纳入文献的参考文献,对纳入研究的方法学进行评价。对文献质量进行严格评价和资料提取,对符合质量标准的RCT文献用Review manager 5.0软件进行Meta分析。结果 5篇RCT文献共283例ACI纳入研究,方法学质量均为中等,其中治疗组（使用rt-PA）122例,对照组（常规溶栓治疗）161例。Meta分析结果表明治疗组存活率、脑血管再通率明显高于对照组,差异均有统计学意义[RR=2.55,95%CI（1.33,4.87）;RR=2.20,95%CI（1.24,3.90）];在继发血管闭塞、脑出血、再灌注损伤等不良反应方面,两组RCT结果比较差异无统计学意义[RR=0.91,95%CI（0.51,1.62）]。结论相比应用尿激酶等传统溶栓方案,rt-PA可显著提升ACI患者的治愈率,且不增加发生不良结局的危险性,治疗效果显著。     

A novel strategy for the generation of angiostatic kringle regions from a precursor derived from plasminogen

In this study we have explored the feasibility of generating angiostatin by incorporating an endoproteolytic furin cleavage site into plasminogen to allow conversion of the precursor molecule into an angiostatic active K1-3 fragment. We show that secretable angiostatin can be successfully generated from cells infected with adenovirus carrying the furin-mutated plasminogen (AdmuthPlgK3). Supernatant from cells transduced with AdmuthPlagK3 inhibits tube formation and proliferation and migration of human umbilical vein endothelial cells with an efficiency similar to that of supernatant from cells infected with adenovirus expressing kringle 1-3 of plasminogen (AdK1-3). Administration of AdmuthPlgK3 and AdK1-3 in mice results in significantly decreased endothelial cell infiltration in VEGF-embedded Matrigel plugs. Treatment with AdmuthPlgK3 and AdK1-3 exerts strong antitumoral effect in models of hepatocellular carcinoma and Lewis lung cancer. This antitumor effect was associated with decreased microvessel density in the tumors. Taken together, our data demonstrate that angiostatin endowed with strong antiangiogenic and antitumor effects can be released from a furin-mutated plasminogen acting as a precursor. This strategy may have potential to develop angiostatic anti-cancer therapies.     

小鼠胚胎干细胞源性肝细胞的培养体系及分选

背景：已证实细胞可以向肝细胞分化。目前的研究集中在诱导分化上，对分化的肝细胞进行分选和进一步扩增研究较少。目的：比较不同的培养体系对胚胎干细胞源性的肝细胞生长的影响。设计：对比观察。材料：ES-D3细胞由上海细胞生物学研究所丛笑倩教授提供。方法：采用半固体培养D3小鼠胚胎干细胞系，形成胚胎体。将来源于18d的胚胎体用胰酶消化为单个细胞，在胶原处理过的培养皿中贴壁2h，分别采用Novastem培养体系、肝细胞培养液培养体系和普通培养体系培养3d。前2种培养体系又各分为含去除肝脏小鼠血清、含正常小鼠血清和无血清组3组，普通的培养体系分为含正常小鼠血清和含体积分数为O．1的胎牛血清2组。每组细胞均加入20ug／L肝细胞生长因子、20ug／L表皮生长因子。主要观察指标：细胞计数法分析细胞的增殖率，反转录-聚合酶链反应检测自蛋白的表达以及有限稀释聚合酶链反应法半定量检测胚胎源性肝细胞的含量。结果：①胚胎干细胞源性的肝细胞在不同的培养体系中，生长速度和肝细胞的含量不一样，在加有正常小鼠血清的Novastem培养基中，细胞增殖最快，在无血清的Novastem培养体系中，胚胎干细胞源性的肝细胞含量明显增高。②除了DMEM＋体积分数为0．1的胎牛血清组未检测到外，其他组均检测到了白蛋白表达。③在无血清Novastem培养体系中，肝样细胞含量明显增多。结论：无血清的Novastem培养体系能分选和扩增分化的肝细胞，提高肝细胞纯度。     

中国人TFPI-2基因的克隆及测序分析

目的对中国人的组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因进行克隆并测序。方法从人新鲜肝组织提取总RNA,经逆转录PCR(RT-PCR)扩增出TFPI-2的全长cDNA,经亚克隆、筛选、鉴定后,进行正反测序。结果中国人TFPI-2基因cDNA全长1222bp,除258bp、585bp和884bp处与目前GenBank中收录的国外学者克隆的TFPI-2基因序列不同外,其他完全一致。其序列Gen-Bank登记号TFPI AY691946。结论中国人TFPI-2基因序列与已经报道的西方人的TFPI-2基因序列基本相同,但三处单核苷酸多态性的意义何在,目前尚不清楚。     

人骨形态发生蛋白4成熟肽cDNA的克隆及测序

背景:研究表明骨形态发生蛋白4 的骨诱导能力最强,但在组织中含量甚微.目的:克隆人骨形态发生蛋白4 成熟肽基因.方法:从人胎盘组织中提取信使核糖核酸,根据基因库人骨形态发生蛋白4 基因序列合成两条引物,利用一步法反转录聚合酶链式反应技术扩增出人骨形态发生蛋白4 成熟肽的基因序列,将聚合酶链反应扩增产物基因片段连接克隆载体质粒中转化大肠杆菌DH5a 进行克隆筛选鉴定及测序.结果与结论:琼脂糖凝胶电泳检测反转录聚合酶链式反应产物及阳性克隆质粒经双酶切产物显示一长约370 bp 的条带,脱氧核糖核酸测序结果与基因库中的序列相符.结果证实,利用反转录聚合酶链式反应技术可成功的从人胎盘组织中克隆出人骨形态发生蛋白4 成熟肽基因.     

人骨形态发生蛋白4成熟肽cDNA的克隆及测序

背景：研究表明骨形态发生蛋白4的骨诱导能力最强,但在组织中含量甚微。目的：克隆人骨形态发生蛋白4成熟肽基因。方法：从人胎盘组织中提取信使核糖核酸,根据基因库人骨形态发生蛋白4基因序列合成两条引物,利用一步法反转录聚合酶链式反应技术扩增出人骨形态发生蛋白4成熟肽的基因序列,将聚合酶链反应扩增产物基因片段连接克隆载体质粒中转化大肠杆菌DH5α进行克隆筛选鉴定及测序。结果与结论：琼脂糖凝胶电泳检测反转录聚合酶链式反应产物及阳性克隆质粒经双酶切产物显示一长约370bp的条带,脱氧核糖核酸测序结果与基因库中的序列相符。结果证实,利用反转录聚合酶链式反应技术可成功的从人胎盘组织中克隆出人骨形态发生蛋白4成熟肽基因。     

cDNA cloning of human plasminogen activator-inhibitor from endothelial cells.

Full-length cDNA for plasminogen activator inhibitor (PAI-1) was isolated from a human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) lambda gt11 cDNA library. Three overlapping clones were identified by immunologic screening of 10(6) recombinant phage using a rabbit anti-human fibrosarcoma PAI-1 antiserum. The fusion proteins encoded by these three clones also react strongly with a monoclonal mouse anti-human fibrosarcoma PAI-1 antibody. By nucleotide sequence analysis, PAI-1 cDNA encodes a protein containing 402 amino acids with a predicted, nonglycosylated molecular mass of 45 kD. Identity of this material as authentic PAI-1 was confirmed by the presence of high level homology with the primary amino acid sequence of an internal peptide prepared from purified rat hepatoma PAI-1. The predicted amino acid sequence also reveals extensive homology with other members of the serine protease inhibitor gene family. Cultured HUVECs contain two PAI-1 mRNA species, both encoded by a single gene, differing by 1 kb in the 3' untranslated region. The PAI-1 gene is located on human chromosome 7.     

A synthetic peptide derived from staphylokinase enhances plasminogen activation by tissue‐type plasminogen activator

Summary. Background: A synthetic nonadecapeptide (SP; GPYLMVNVTGVDGKGNELL) previously enhanced the activation of plasminogen by the SAK/plasmin complex. Objectives: To identify the binding site for SP on plasminogen and elucidate the effects of SP on plasminogen activation by the tissue‐type plasminogen activator (t‐PA). Methods: The effects of SP on plasminogen activation were estimated using a chromogenic substrate and from the cleavage of plasmin on SDS‐PAGE under reduced conditions. The binding to SP of various peptides derived from the amino acid sequence of plasminogen was analyzed with an IAsys biosensor. The SP‐mediated structural change to plasminogen was analyzed by circular dichroism (CD) spectroscopy. The thrombolytic effects of SP were examined using a mouse model of thrombosis. Results: SP enhanced the activation of plasminogen by t‐PA. The catalytic efficiency (k_cat/K_m) of Glu‐plasminogen activation by t‐PA was 11.4‐fold higher in the presence than absence of SP. The binding of SP to plasminogen was greatly inhibited by a synthetic peptide, FEKDKYILQGVTSWGLG, located close to the C‐terminal of the plasminogen B region. Near‐ultraviolet CD spectra of the complex between SP and Glu‐plasminogen significantly differed from those of Glu‐plasminogen. When SP was administered in a mouse model of thrombosis, early recanalization was observed in a dose‐dependent manner. However, SP did not cause recanalization in t‐PA gene‐deficient mice. Conclusions: SP bound to the B region and promoted the activation of plasminogen by t‐PA, and then induced effective thrombolysis.     

人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性研究

目的:探讨人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性,为神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植治疗神经系统损伤奠定基础。方法:取孕14周流产胚胎,无菌分离制备大脑神经细胞悬液,用CD133标记的免疫磁珠分选NSC,提取NSCRNA,进行RT-PCR探测MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录;用流式细胞术检测细胞表面MHC-I,MHC-II类分子的表达;用正常成人外周血单个核细胞与培养NSC共培养和MTT比色分析法观察淋巴细胞增殖反应;将NSC小鼠脑内接种,进行组织染色观察细胞移植部位的组织学变化。结果:新分离和传代的NSC均发生MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录,MHC-I类分子在NSC表面的表达百分率为(5.66±0.37)%,NSC在体外能诱发淋巴细胞增殖反应,A值为1.09±0.48和1.15±0.29,与阴性对照比差异有显著性意义(P<0.05)。NSC小鼠脑内移植具有修复神经损伤作用,局部无淋巴细胞浸润和炎症。结论:人胚脑源性神经干细胞具有免疫原性,但直接脑内接种未发现引起明显的移植排斥反应。