成人慢性髓性白血病骨髓细胞血管内皮生长因子的表达

血管生成出现于实体瘤生长的早期,抗血管生成可能成为治疗实体瘤的一个新的策略。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是人类实体瘤中主要的促血管生成细胞因子之一,其在慢性髓性白血病（chronic myelogenous leukemia,CML）病程进展中是否呈现过度表达尚不清楚。为此,本研究采用RT-PCR和ELISA方法对CML病人骨髓细胞及血浆VEGF的表达进行了研究。结果表明,多数CML细胞、白血病细胞系及正常人骨髓细胞均表达VEGF,CML病人VEGF mRNA检测阳性率（93.1%)高于骨髓移植后的CML病人（50%）及正常人（60%）;未治CML病人血浆VEGF浓度（380.6pg/ml）比CML骨髓移植后病人血浆的VEGF浓度（38.0%pg/ml)高9倍;未治CML骨髓细胞分泌的VEGF（499.8pg/ml)比正常人骨髓细胞分泌的（141.3pg/ml)多2.5倍,两之间有显性差异（P＜0.05)。研究结果说明VEGF在CML病人中确实存在过度表达,其在CML发病机制中的作用值得进一步深入研究。     

低浓度STI571提高β1整合素介导的Ph（＋）慢性髓性白血病髓系祖细胞增殖抑制

为探讨ABL酪氨酸激酶特异性抑制剂STI571(CGP57148B)对Ph(+)慢性髓性白血病(CML)的疗效机制,观察了STI571预处理(0.1 μmol/L×30-60 min)前后β1整合素活化剂及纤连蛋白(FN)单独或联合作用以及STI571预处理本身对正常及CML粒巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的影响,并结合阻断实验观察了VLA-4及VLA-5整合素在其中的作用.结果显示①STI571预处理、β1整合素活化剂单独或联合作用或FN单独作用对CML及正常CFU-GM均无明显抑制作用,STI571预处理对活化剂或FN的作用也无直接影响;②β1整合素活化剂+FN对CML CFU-GM抑制作用明显低于对正常CFU-GM的作用;③经STI571预处理后,活化剂+FN对CML CFU-GM抑制作用明显提高达正常水平;④阻断VLA4+VLA5整合素或总β1整合素可阻断STI571的上述作用.研究结果提示STI571提高Ph(+)CML祖细胞β1整合素介导的增殖抑制作用.     

bcr-abl反义寡核苷酸治疗慢性髓细胞性白血病的研究进展

自体造血干细胞移植是治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的一种重要方法,近几年来bcr-abl反义寡核苷酸在CML的治疗尤其是自体骨髓移植的体外净化方面取得了很大进展,提供了治疗白血病及其他恶性肿瘤的新方法。     

急性髓细胞白血病转化为慢性粒细胞白血病1例

<正>慢性粒细胞白血病(CML)发病率相对较高,对治疗药物产生耐药性后易进展为急性白血病,其主要为急性髓细胞变,偶见急淋或急性双系列变[1-6]。由急性髓细胞白血病(AML)转化为CML的相关报道在国内外罕见。我院发现的1例AML转化为CML,报道如下。1病历资料患者,男,37岁。2005年于我院确诊为伴成熟型急性髓细胞白血病(AML-M2),染色体核型分析未见明显异常。治     

南方汉族慢性髓细胞性白血病与HLA-DPB1 等位基因的相关性研究

为了探讨慢性髓细胞性白血病(CML)与人类白细胞抗原(HLA)DPB1基因的相关性和分析其遗传易感性，采用测序分型技术(SBT)对86例主要为广东籍的南方汉族CML患和82例健康对照进行HLA-DPB1基因分型。结果表明HLA-DPB1*1301和DPB1*20011的基因频率在病例组高于对照组。结论：这些等位基因与CML间可能存在正相关关系。     

转染反义VEGFl21 cDNA恢复K562细胞β1整合素的活化功能

为了探索血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在K5 6 2细胞 β1整合素活化功能中的作用 ,利用转染正义 (S)、反义 (As)VEGF12 1cDNA及空载体 (V ,pcDNA3 )的不同K5 6 2细胞株 ,通过流式细胞术检测其粘附分子VLA 4(CD4 9d/CD2 9)和VLA 5 (CD4 9e/CD2 9)表达及 β1整合素的可活化性。结果显示 :K5 6 2 /V ,K5 6 2 /S和K5 6 2 /As细胞 β1整合素VLA 4 (CD4 9d/CD2 9)与VLA 5 (CD4 9e/CD2 9)的表达率均在 92 %以上 ,但经 β1整合素活化剂 8A2抗体激活后 ,K5 6 2 /As细胞可活化表位 9EG7表达率较K5 6 2 /V细胞明显提高 (75 .6± 10 .5vs 4 1.2± 2 .1% ,P <0 .0 1)。结论 :转染反义VEGF12 1cDNA能增加K5 6 2细胞 β1整合素的可活化性     

细胞因子体外诱导慢性髓细胞性白血病树突状细胞分化的研究

本研究探讨干扰素（IFN）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的可能新机制，为临床治疗CML提供新的思路。用Ficoll密度离心法分离骨髓单个核细胞（BMMNC），用不同细胞因子组合体外诱导培养树突状细胞（DC），在倒置显微镜及光镜下观察DC形态，应用流式细胞术检测其表面标志（CD1a，CD83，CD86，HIA-ABC，HIA-DR，CD54）。MTT法检测其混合淋巴细胞反应（MLR）能力。结果表明：经不同细胞因子组合所诱导出的DC，其特征性表面分子表达率均高于培养前的DC（P〈0．01）；IFN-α＋GM-CSF组DC表达HLA—ABC、HLA-DR明显高于IL-4＋GM-CSF培养组（P〈0．05）；而IFN-α＋GM-CSF4-IL-4组DC的CD86表达率及MLR水平均高于其它细胞因子组合组（P〈0．05）。干扰素耐药组DC表面分子表达率及MLR水平较新诊断组和干扰素治疗有效组均明显减低（P〈0．05），但A、B、C各组的CD86表达率及MLR水平在IFN-α＋GM-CSF4-IL-4因子组合条件下无明显差异。结论：CML骨髓单个核细胞在含有IFN-α的细胞因子组合条件下可分化为具有形态和免疫表型特征的DC，且表达较高的Ⅰ类和Ⅱ类分子、共刺激分子、黏附分子及MLR，表明干扰素治疗CML的机理可能与DC有关，这一结果提示通过增强内源性DC功能可能提高CML临床疗效。     

PD-L1阻断对慢性髓系白血病源性树突状细胞的功能影响

程序性死亡-1配体-1(PD-L1)作为近年来发现的B7家族新的成员,已被证实有免疫负调节作用,白血病源性树突状细胞(DC)高表达PD-L1可能是影响其功能的原因之一,本研究试图阻断PD-L1在DC上的表达以增强白血病源性DC的免疫刺激功能。应用人rhGM-CSF、rhIL-4及TNF-α细胞因子组合诱导慢性髓系白血病细胞(CML)分化DC,观察给予加或不加PD-L1单克隆抗体对DC的影响。应用流式细胞术检测DC免疫表型及PD-L1,MTT法检测DC刺激自体T淋巴细胞的增殖能力,ELISA法测定上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10的水平。结果显示,负性调节分子PD-L1随着慢性髓系白血病源性树突状细胞(CML-DC)成熟表达不断升高,阻断PD-L1能增强CML-DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,促进T细胞分泌IFN-γ和IL-2并抑制IL-10的产生(p<0.05)。结论:阻断PD-L1可增强白血病源性DC的功能,为白血病DC瘤苗治疗技术提供了新的方法。     

慢性髓细胞性白血病患者肿瘤细胞表达VEGF受体的研究

目的:了解慢性髓细胞性白血病患者肿瘤细胞VEGF、b-FGF、KDR、Flt-1基因表达,探讨血管生成因子与肿瘤细胞间的相互作用。方法:用RT-PCR方法检测16例慢性髓细胞性白血病患者骨髓粒系细胞VEGF、b-FGF、KDR、Flt-1基因表达,以5例原发性血小板减少性紫癜患者作对照组进行比较。结果:VEGF和b-FGF基因高表达,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。KDR基因基本不表达,Flt-1明显表达但与对照组无明显差异。结论:虽然KDR和Flt-1的表达意义不大,但VEGF和b-FGF基因高表达。证实了肿瘤细胞分泌血管生成因子增加,可能存在自分泌途径。     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病（ＣＭＬ）细胞起源于ＣＭＬ多能造血干细胞,树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ,ＤＣ）是功能强大的抗原提呈细胞。ＣＭＬ细胞在ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成ＣＭＬ－ＤＣ,在自体或异体条件下均能刺激Ｔ细胞的显增殖,发挥特异性的抗ＣＭＬ细胞毒效应。     

血管增生与慢性髓细胞性白血病治疗效果的关系

目的：探讨血管增生在CML(慢性髓细胞性白血病)病程中的变化，为CML抗血管新生药物治疗提供实验依据。方法：应用ELISA法检测CML患者与正常人群血浆中VEGF、TXB2、GMP-140的水平，并观察CML患者血浆作用下内皮细胞株在纤维蛋白、Ⅳ型胶原上迁移能力的改变。结果：CML患者血浆中VEGF、TXB2、GMP-140水平较正常对照显著增高，其中治疗前水平又较治疗后高。CML患者血浆作用下内皮细胞株迁移能力增强，以治疗前为甚。结论：CML患者存在血管增生，病情缓解后，血管增生也得到了缓解。提示不仅血管增生检测指标可以作为CML等恶性肿瘤疗效及预后判断参数，而且抗血管新生治疗将为恶性肿瘤治疗开拓新的领域。     

成人慢性髓性白血病骨髓细胞内IL-1受体拮抗剂的表达及意义

为了研究细胞内白细胞介素1受体拮抗剂（intracellular interleukin-1 receptor antagonist，icIL-1ra）在成人慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)骨髓细胞不同群体细胞内的表达及意义，本研究利用15种不同荧光标记为单克隆抗体，将骨髓细胞分成不同的群体，通过流式细胞术检测未治的，经STI571(signal transduction in-hibitor571)或其它药物治疗的CML慢性期（chronic phase，CP）和加速/急变期（accelerated or blastic phase，AP/BP）病人及正常人骨髓不同群细胞中icIL-lra的表达。结果显示：①IL-lra表达于CML病人及正常人所有的有核细胞内，但各群细胞的表达不同，以粒细胞表达量最高，淋巴细胞表达量最低；②17例未治CML病人骨髓总有核细胞、粒细胞、淋巴细胞icIL-lra平均荧光强度明显低于8例正常人组；③13例骨髓幼稚细胞数大于或等于10％的CML-AP/BP病人骨髓总有核细胞、粒细胞及淋巴细胞icIL-lra平均荧光强度明显低于43例幼稚细胞数小于5％或9例幼稚细胞数为5％-10％的CML-CP病人。结论：CML病人骨髓总有核细胞与正常人相比icIL-lra表达降低。IcIL-lra在CML病人骨髓总有核细胞表达量降低可能是CML疾病进展的因素之一。     

慢性髓细胞白血病患者的预后判断

从临床、细胞遗传学、细胞生物学和分子生物学等层面综述了影响慢件髓细胞性白血病患者慢性期长短和影响伊马替尼治疗反应的有关因素,介绍了几个预测患者预后的危险分层系统.     

慢性髓系白血病细胞来源的树突状细胞

慢性髓系白血病(CML)细胞起源于CML多能造血干细胞,树突状细胞(dendritic cell,DC)是功能强大的抗原提呈细胞。CML细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子的共同作用下,在体外可以诱导生成CML-DC,在自体或异体条件下均能刺激T细胞的显著增殖,发挥特异性的抗CML细胞毒效应。     

白血病细胞髓外浸润的分子机制

白血病细胞尤其是伴有粒单分化的髓系细胞、T淋巴细胞常并发髓外组织浸润，成为白血病复发、死亡的重要因素。如同其安恶性实体瘤一样，参与其浸润及调控的因子众多，而且它们之间存在着促进或抑制的复杂关系。     

急性髓性白血病完全缓解患者残留白血病细胞检测研究

本研究的目的是观察急性髓性白血病患者完全缓解后血液和骨髓中微小残留病变变化情况 ,并探讨微小残留病变在监测急性髓性白血病复发中的应用价值。用流式细胞术检测 3 3例化疗达完全缓解的急性髓性白血病患者血液和骨髓中残留白血病细胞 (residualleukemiccells,RLC)。结果显示 :急性髓性白血病完全缓解组和正常对照组外周血RLC分别为 ( 4 .75 18± 4 .15 3 7) %和 ( 0 .4 83 5± 0 .2 0 0 5 ) % ,二者比较有统计学差异 (P <0 .0 0 1) ;完全缓解组骨髓和正常对照组骨髓RLC分别为 ( 17.90 82± 2 0 .4 819) %和 ( 0 .72 85± 0 .2 2 0 9) % ,二者比较有统计学差异 ( P <0 .0 0 1) ;持续缓解组与复发组外周血RLC分别为 ( 2 .2 3 3± 1.5 92 3 ) %和 ( 10 .2 3 69± 9.4 714 ) % ;持续缓解组与复发组骨髓RLC分别为 ( 4 .779± 3 .0 3 3 6) %和 ( 3 8.0 685± 19.4 2 95 ) %。二组比较有统计学差异 (P <0 0 0 1)。结论 :应用流式细胞术检测残留白血病细胞对及时预测复发有重要意义 ,有利于在复发早期进行治疗。     

转染反义VEGF121 cDNA恢复K562细胞β1整合素的活化功能

为了探索血管内皮细胞生长因子(VEGF)在K562细胞β1整合素活化功能中的作用,利用转染正义(S)、反义(As)VEGF121 cDNA及空载体(V,pcDNa3)的不同K562细胞株,通过流式细胞术检测其粘附分子VLA-4(CD49d/CD29)和VLA-5(CD49e/CD29)表达及β1整合素的可活化性.结果显示:K562/V,K562/S和K562/As细胞β1整合素VLA-4(CD49d/CD29)与VLA-5(CD49e/CD29)的表达率均在92%以上,但经β1整合素活化剂8A2抗体激活后,K562/As细胞可活化表9E9EG7表达率较K562/V细胞明显提高(75.6±10.5vs41.2±2.1%,P＜0.01).结论:转染反义VEGF121cDNA能增加K562细胞β1整合素的可活化性.     

慢性髓系白血病的分型问题

慢性髓系白血病(CML)是生物学和临床表现都呈异质性的疾病,目前认为它主要有CGL、aCML和CMML三个亚型。本文综述了这些类型的概况、血液学特征和FAB协作组的看法。     

慢性髓性白血病人源树突状细胞的细胞毒作用及其体外扩增

本研究观察来源于慢性髓性白血病患者的CD34 细胞经两步培养扩增后产生的树突状细胞的抗白血病 免疫功能。从慢性髓性白血病患者骨髓或外周血中分离出CD34 细胞或外周血单个核细胞分别进行两步培养。 首先将其与rhFlt3-L和rhTPO共育7天,再与rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4共同培养14天,以诱导树突状细胞产 生:同时以rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4直接诱导体系作对照。获得的DC通过流式细胞仪检测免疫表型,电镜分 析细胞超微结构及G显带法进行的染色体分析后,并用MTT法检测DC刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细 胞的杀伤作用.结果表明:慢性髓性白血病的CD34 细胞经过rhFlt3-L和rhTPO的初始扩增培养7天后,CD34 细 胞总数扩增77±5倍。用rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4诱导培养14天,DC产率达到(39±8)％,细胞扩增倍数及 DC比例均明显高于直接诱导产生的培养方法(P<0.01),且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖,进而杀伤CML 细胞。结论:两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率,优于直接诱导培养;CML细胞来源的DC可诱 导产生抗白血病免疫反应。     

钙离子载体诱导慢性髓系白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

本研究旨在探索钙载体（calcium ionophore,CI）诱导慢性髓性白血病（CML）细胞分化成树突状细胞（DC）的作用,了解诱导产生P210蛋白的情况和刺激自身T细胞产生针对CML细胞的细胞毒作用。用CI和粒－单集落刺激因子（GM—CSF）联合诱导CML病人骨髓来源的单个核细胞,通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态变化和超微结构,用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的变化和变化过程;用Western blot检测CML特异的肿瘤标志物P210蛋白在DC中的表达;通过乳酸脱氢酶（LDH）实验评估CI诱导的CML—DC刺激自身T细胞产生抗CML细胞的细胞毒作用。结果表明：CML细胞经CI和GM—CSF联合诱导96小时后在倒置显微镜和电子显微镜下观察到DC典型的形态结构;流式细胞仪检测显示CD83、CD86、CD80、HLA—DR、CD40等细胞表面分化抗原的表达显著提高;Western blot实验表明,生成的CML—DC有P210蛋白的表达,与未经诱导的CML单个核细胞比较,用CI和GM—CSF联合诱导生成的CML－DC的P210蛋白表达水平降低;LDH实验表明,这些CML—DC刺激的自身T细胞对CML细胞的杀伤率显著高于用CML细胞刺激的自身T细胞。结论：CI和GM—CSF联合能快速诱导CML细胞分化成DC,这些CML—DC表达CML细胞特异的肿瘤标志物P210蛋白,但其表达水平较未经诱导的CML单个核细胞低;CML细胞经诱导生成的CML—DC能够刺激自身T细胞产生抗白血病细胞毒性。