肾癌细胞凋亡的超微结构改变

目的 观察肾癌细胞凋亡的形态学特征及凋亡过程中线粒体结构的变化,揭示线粒体在细胞凋亡过程中的作用。方法 采用3种化疗药物诱导肾癌细胞发生凋亡,再于光镜和电镜下观察肾癌细胞的形态结构改变。结果 3种药物均可诱导肾癌细胞凋亡,有典型的细胞凋亡的形态学改变,线粒体结构改变早于细胞染色质结构改变。结论 线粒体在细胞凋亡的过程中起着重要的调控作用,其内部某些成分可能启动或阻止细胞凋亡的发生。     

二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2 细胞的诱导分化作用的实验研究

目的:探讨二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2细胞的诱导分化作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,用DMSO干预细胞,MTT法检测药物对细胞增殖活力的影响;倒置相差显微镜和瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;放射免疫法检测细胞甲胎蛋白（AFP）和清蛋白(ALB)的分泌量;酶促反应试剂盒检测细胞中γ-谷胺酰转肽酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性。结果:用DMSO处理HepG2细胞72h后,能显著抑制细胞的增殖（P＜0.05）;细胞的形态向成熟细胞分化;细胞AFP的分泌量和γ-GT酶的活性明显降低,ALP活性和ALB含量则显著升高（P＜0.05）。结论:DMSO具有诱导人肝癌HepG2向正常细胞分化的作用并抑制细胞增殖。     

33例急性白血病细胞超微结构和超微细胞化学的研究

我们对33例急性白血病(AL)细胞进行超微结构和超微细胞化学的观察,探讨了这两项技术对AL,主要是对分化差或罕见类型白血病如毛细胞白血病(HCL)、急性巨核细胞白血病(M7)和混和细胞白血病(MCL)正确诊断的意义及某些生物学特征。     

rhTNF瘤内注射致膀胱癌的超微结构改变

FNF是迄今所知抗肿瘤作用最强的细胞因子,体内外实验均表明TNF对多数肿瘤具有杀伤或细胞抑制(cytostasis)作用。但因其剂量依赖性毒副作用,加之生物半衰期短,全身应用难以在局部达到有效浓度而限制了临床应用。增加应用剂量常引起寒战、高热、低血压、甚至发生恶液质等严重副作用。目前对TNF的研究侧重于分子修饰,改变应用策略等方面,以提高疗效,减少不良反应。Bartsch等向黑色     

肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡时核基质的改变及意义

已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1],我们比较了肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡前及凋亡时核基质的改变,并分析了核基质蛋白在HL60细胞凋亡过程的可能作用及其意义。材料与方法1．HL60细胞的培养的准备：HL60细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用RPMI1640液、小牛血清10％、青霉素100u／ml、链霉素ug／ml,培养条件：温度37℃、湿度100％、CO25％。2．肿瘤坏死因子诱导HL60细胞调亡：参照文献Voelkd．Johnson等［’j介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼…     

DMSO诱导的MEC—1细胞在裸鼠中的致瘤性实验

本实验以一定浓度的二甲基亚砜（ＤｉｍｅｔｈｙｌＳｕｌｆｏｘｉｄｅＤＭＳＯ）对涎腺粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ—１细胞进行体外诱导，诱导后的细胞及未诱导的细胞以１．１×１０６浓度分别接种裸鼠。体外经细胞形态及ＤＮＡ指标观察，诱导后ＭＥＣ—１细胞异型性降低，有向成熟细胞分化的趋势。动物实验，诱导组成瘤率７５％，对照组成瘤率１００％，两组有显著差异（Ｐ＜０．０１）；诱导组肿瘤生长速度缓慢，快速生长期肿瘤倍增时间延长（Ｐ＝０．０１２４＜０．０５）；诱导组裸鼠生存期较长。结果表明ＤＭＳＯ对ＭＥＣ—１细胞具有一定诱导分化作用     

细胞凋亡与增殖失衡在小鼠大肠癌诱发过程中的作用

目的:观察小鼠大肠癌不同阶段中细胞增殖与凋亡的变化规律,探讨细胞增殖-凋亡失衡在大肠不同阶段中的作用.方法:利用二甲肼(DMH)皮下注射诱发昆明种小鼠实验性大肠癌动物模型,分别于诱癌12、18、24、32周分批处死动物,以DNA末端标记(TUNEL)和免疫组化PCNA染色分别标记凋亡细胞和增殖细胞,多阶段动态观察增殖细胞和凋亡细胞的分布和密度变化.结果:小鼠正常粘膜中凋亡细胞全部位于表层,增殖细胞位于基底,数量均很少.诱癌早期增殖细胞和凋亡细胞轻度增多,二者比值变化不大;诱癌中期二者密度均显著升高,比值变化不显;诱癌晚期非癌粘膜增殖和凋亡细胞密度高于其它时段,不典型增生粘膜中增殖细胞增多,且随其程度递增,而凋亡细胞虽有升高,但不随其程度变化,二者比值则随其程度呈下降趋势.结论:1)在动物模型上证实了小鼠大肠癌发生过程中存在细胞增殖-凋亡失衡;2)诱癌早期低增殖、低凋亡,中期高增殖、高凋亡,晚期(癌)极高增殖、低凋亡;3)增殖细胞随不典型增生程度递增,凋亡细胞变化不显,二者比值呈递增趋势;4)癌变阶段最本质的变化为凋亡/增殖比值极度降低.以上结果支持我们以前在人类大肠癌研究中提出的"细胞选择性增殖"假说.     

放射性核素诱发细胞凋亡的形态学及基因表达定量分析

形态改变是细胞凋亡的重要特征之一。本文对近几年来放射性核素诱发细胞凋亡及用形态计量学定量研究的国内外有关进展进行综述 ,主要内容包括 :( 1)细胞凋亡的形态学特征 ;( 2 )放射性核素诱发的细胞凋亡 ;( 3)细胞凋亡与基因表达调控 ;以及 ( 4 )细胞凋亡的形态学定量研究。     

人KB细胞和CCL227细胞与肿瘤球细胞超微结构的比较

目的:比较人口腔癌KB细胞和结肠癌CCL227细胞与肿瘤球细胞的超微结构,为肿瘤干细胞研究提供更多的资料.方法:使用有血清培养液培养两种肿瘤细胞,无血清培养液分别诱导两种肿瘤细胞生成肿瘤球.常规方法制备KB细胞、CCL227细胞、KB肿瘤球细胞、CCL227肿瘤球细胞透射电子显微镜切片,透射电子显微镜观察、拍照.结果:在四组样本中,细胞基本表现两种形态.一种细胞表面有突起,核糖体、线粒体数量相对较多.另一种细胞表面无突起,细胞核周围出现微丝,核糖体、线粒体数量减少,核内染色质出现靠边,后一种细胞在肿瘤球细胞中较多见.结论:伴随生理功能的改变,肿瘤干细胞的结构也发生了一些改变,这些改变可能会使蛋白合成下降.     

细胞同步化对肿瘤坏死因子诱导Hela细胞凋亡的影响

目的 研究细胞周期时相对肿瘤坏死因子（TNF）诱导Hela细胞凋亡的影响。方法 应用胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法将培养的Hela细胞同步化,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色,分析同步化的Hela细胞和正常培养的Hela细胞对TNF（加放线菌酮增效）诱导凋亡的敏感性。结果 同步化Hela细胞较正常培养的Hela细胞对TNF诱导调亡的敏感性增强。结论 TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关。     

贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化

背景与目的：实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀（depleted uranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因表达谱。方法：用难溶性贫铀氧化物（dUO2)作用腺病毒-12/SV40病毒永生化的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）,通过观察不同代龄细胞的倍增时间,血清抗性,半固体琼脂克隆形成率及裸鼠成瘤性,鉴定细胞的恶性转化特性;用213个肺癌相关基因的芯片对贫铀诱发的转化BEAS-2B细胞的基因表达谱进行检测。结果：贫铀作用后的第5代BEAS-2B细胞倍增时间明显缩短,血清抗性显著增强;第10代细胞具有锚着独立性生长特性（半固体琼脂克隆形成）;第15代裸鼠体内成瘤。二甲亚砜（DMSO）对贫铀诱发的BEAS-2B细胞恶性转化有明显保护效果。213个肺癌相关基因的芯片检测结果表明,转化细胞中有70多个基因的表达水平发生明显改变,其中10余个基因表达水平明显下降。结论：贫铀在体外具有致癌性。     

脂肪酸结合蛋白5和细胞维甲酸结合蛋白2在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨脂肪酸结合蛋白5（fatty acid-binding protein 5,FABP5）与细胞维甲酸结合蛋白2（cellular retinoic acid-binding protein 2,CRABP2）在脑胶质瘤中的表达及与脑胶质瘤病理级别、维甲酸治疗抵抗的关系。方法 应用免疫组织化学染色法检测125例脑星型细胞瘤组织中FABP5及CRABP2蛋白表达。全反式维甲酸作用前后,以Brdu-ELISA法检测胶质瘤细胞增殖,并以实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞株中FABP5及CRABP2在mRNA水平的表达。结果 FABP5阳性细胞比例在WHO Ⅱ级星型细胞瘤中占（16±9）%,Ⅲ级中占（33±22）%,Ⅳ级中占（50±29）%,FABP5蛋白表达与胶质瘤病理级别呈显著正相关（P<0.05）。CRABP2阳性细胞比例在Ⅱ级星型细胞瘤中占（46±12）%,WHO Ⅲ级中占（30±15）%,Ⅳ级中占（10±9）%,CRABP2蛋白表达与胶质瘤病理级别呈显著负相关（P<0.05）。全反式维甲酸促进了胶质瘤细胞株的增殖,全反式维甲酸作用后胶质瘤细胞FABP5 mRNA表达显著上调,而CRABP2显著下调。 结论 FABP5及CRABP2的异常表达与胶质瘤恶性程度相关,并可能介导了胶质瘤细胞对维甲酸的分化抵抗效应。     

黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变中JNK1的变化

目的 观察黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变过程中JNK的变化,进一步了解JNK1信号转导通路在肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展过程中的作用。方法 取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,空白对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）诱发大鼠肝细胞癌,空白对照组大鼠,按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,58周时处死取肝。所有标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR、Western blot分别检测癌组织及肝组织JNK1 mRNA及JNK1活性蛋白质水平。结果 实验组大鼠46周时发现首例肝癌,存活至实验结束并发生肝癌的大鼠共24只,6只无任何肿瘤发生,空白对照组大鼠11例均未发生肿瘤。实验组及空白对照组大鼠均可检出不同程度的JNK1 mRNA表达,其中肝癌组织较癌旁组织及正常肝组织明显增强（P<0.05）。Western blot结果显示,实验组中无癌大鼠20周、出癌大鼠36周始即有不同程度p-JNK1活性表达,并随着AFB1作用时间延长阳性率明显增加,且无癌大鼠p-JNK1检出的时间较出癌大鼠早;半定量分析表明无癌大鼠肝组织p-JNK1活性较同期出癌大鼠肝组织及肝癌组织增强,在实验第46周及58周时尤其明显（P<0.01）。结论 在AFB1诱导肝细胞癌的过程中JNK信号通路处于激活状态,JNK信号通路的激活可能起到抑制HCC的作用,如JNK信号通路激活时间较早、强度较大可阻止HCC的发生。     

鼻咽癌组织中bcl-2及EB病毒潜伏膜蛋白表达与放射诱发细胞凋亡的关系

目的　探讨鼻咽癌 (NPC)组织bcl 2及EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP)表达与放射诱发细胞凋亡的关系。方法　采用免疫组化S P法及TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL法 ) ,分别检测 35例NPC组织中bcl 2及EB病毒LMP的表达 ,以及放疗总量为 10Gy时NPC组织的细胞凋亡率 (AR )。结果　NPC组织bcl 2及LMP的表达率分别为 71.4%(2 5 /35 )、45 .7% (16 /35 ) ,AR为 (6 1.3± 11.8) %。放疗后的AR与LMP表达呈正相关 ,与bcl 2的表达呈负相关。结论　LMP有促进NPC放疗后细胞凋亡的生物学作用 ,其作用与bcl 2的表达无关 ;而bcl 2表达阴性者对放射线的敏感较阳性者强。     

土槿乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系

目的 探讨土槿乙酸(PLAB)的抗癌活性及其机制。方法 对用不同浓度PLAB处理的HL60细胞，或半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂DEVD-fmk预处理的HL60细胞。采用MTT法检测HL60细胞抑制增殖作用，采用Hoechst33342/PI双荧光活细胞染色和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡，CPP32 colorimetric kit检测caspase-3酶活性。结果 PLAB以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的生长，其IC50值为1μmol/L。PLAB诱导HL60细胞死亡的形式以细胞凋亡为主，且该凋亡可被caspase-3抑制剂所遏制。PLAB诱导的caspase-3酶的活化与剂量和作用时间呈依赖关系。结论 PLAB能有效诱导HL60细胞凋亡，该凋亡过程伴有caspase-3的活化。     

长春新碱诱导肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素与bcl-2 的变化

  目的 探讨长春新碱（VCR）诱导HepG2肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素表达的变化及阻断泛素一蛋白酶体通路对此凋亡和bcl-2表达的影响。方法 应用VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡，采用流式细胞仪检测凋亡及泛素的表达；以RT-PCR检测bcl-2的表达。结果 VCR处理后发生自噬性凋亡的HepG2细胞中泛素含量增加（P〈0．01）。加用蛋白酶体特异抑制剂乳胞素后的乳胞素＋VCR组凋亡率明显比单用VCR组高（P〈0．01），而bcl-2表达则比单用VCR组更低。结论 泛素一蛋白酶体通路参与了VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡及对bcl-2蛋白的调控。对蛋白酶体功能的抑制可以促进VCR诱导的HepG2细胞凋亡。     

Evaluation of Ultra-Microscopic Changes and Proliferation of Apoptotic Glioblastoma Multiforme Cells Induced by Velogenic Strain of Newcastle Disease Virus AF2240

Aim: Newcastle disease virus (NDV) is a member of genus Avulavirus within the family Paramyxoviridae. Interestof using NDV as an anticancer agent has arisen from its ability to kill tumor cells with limited toxicity to normal cells.Methods: In this investigation, the proliferation of brain tumor cell line, glioblastoma multiform (DBTRG.05MG)induced by NDV strain AF2240 was evaluated in-vitro, by using MTT proliferation assay. Furthermore, Cytologicalobservations were studied using fluorescence microscopy and transmission electron microscopy, DNA laddering inagarose gel electrophoresis assay used to detect the mode of cell death and analysis of the cellular DNA content byflowcytometery. Results: MTT proliferation assay, Cytological observations using fluorescence microscopy andtransmission electron microscopy show the anti-proliferation effect and apoptogenic features of NDV on DBTRG.05MG.Furthermore, analysis of the cellular DNA content showed that there was a loss of treated cells in all cell cycle phases(G1, S and G2/M) accompanied with increasing in sub-G1 region (apoptosis peak). Conclusion: It could be concludedthat NDV strain AF2240 is a potent antitumor agent that induce apoptosis and its cytotoxicity increasing while increasingof time and virus titer.     

TRAIL与低剂量5-Fu联用高效诱导大肠癌细胞凋亡的研究

目的　探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)与 5 -Fu联用是否存在协同性杀伤大肠癌细胞的作用 ,以及这种杀伤作用的可能机制。方法　常规培养大肠腺癌细胞株HT 2 9。TRAIL、5 -Fu、或 2药联用 2 4h ,采用MTT法测试细胞毒作用 ,应用流式细胞术检测细胞凋亡比例 ,透射电镜下观察亚细胞形态。结果　①HT 2 9细胞对TRAIL不敏感 ,10 0ng/mlTRAIL只能杀伤 4.5 0 %± 0 .2 6%的细胞 ,ID 5 0 >10 0 0ng/ml。细胞对 5 -Fu相对敏感 ,存在剂量依赖性细胞毒效应 ,这种效应主要通过诱导细胞凋亡实现。②TRAIL与阿霉素联用呈现高效协同作用 ,表现为亚毒性浓度TRAIL (10 0ng/ml)与亚毒性浓度5 -Fu(10 0 μg/ml)联用可杀死 60 .0 0 %± 0 .45 %的HT 2 9细胞。③流式细胞术分析及透射电镜观察证实协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。结论　大肠腺癌细胞株HT2 9对TRAIL不敏感 ,但TRAIL与亚毒性浓度 5 -Fu联用表现出高效的杀灭肿瘤细胞作用 ,这种细胞毒性作用主要由凋亡介导     

TRAIL与阿霉素联用协同杀伤人结肠癌细胞SW480

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)可选择性杀伤肿瘤细胞,而不影响正常细胞生长。当一部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感时,特定的其它药物可增强其杀伤作用。本文旨在探讨结肠癌细胞SW480对TRAIL的敏感性,以及TRAIL与阿霉素联用对细胞的杀伤作用及可能作用机制。方法:常规培养结肠癌细胞SW480。利用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞术定量分析凋亡细胞比例,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,Westernblot分析p53及bcl-2蛋白表达变化。结果:(1)SW480细胞对TRAIL不敏感,100ng/mlTRAIL只能杀伤7.8%的细胞,IC50>1000ng/ml,且不存在浓度依赖性。(2)SW480细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性作用,IC50=65μmol/L,0.86μmol/L的阿霉素对细胞不表现杀伤作用。(3)TRAIL与阿霉素合用表现出协同作用,亚毒性浓度TRAIL(100ng/ml)与亚毒性浓度阿霉素(0.86μmol/L)联用可杀伤80%SW480细胞。流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,透射电镜亦观察到大量凋亡细胞存在。药物作用前后,p53及bcl-2蛋白表达水平无明显改变。结论:结肠癌细胞株SW480对TRAIL不敏感,但TRAIL与亚毒性浓度阿霉素联用对癌细胞有协同杀伤作用,这种细胞毒性作用主要表现