mTOR信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响

目的:探讨mTOR信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响。方法:将非小细胞肺癌细胞系A549细胞分成对照组与实验组,对照组不对mTOR信号通路进行干预,实验组采用不同剂量的雷帕霉素干预mTOR信号通路,两组采用不同剂量射线辐射,对比分析两组细胞的存活能力、克隆数目、凋亡情况。结果:实验组细胞的平均存活时间为(3.5±0.7)d,对照组细胞的平均存活时间为(5.8±0.6)d,实验组明显短于对照组,对比两组差异显著,有统计学意义(P<0.05);实验组细胞4Gy、8Gy的平均克隆数目分别为(55±6)个、(19±2)个;对照组细胞4Gy、8Gy的平均克隆数目分别为(144±21)个、(96±13)个,实验组明显低于对照组,对比两组差异显著,均有统计学意义(P<0.05);实验组细胞的凋亡比例明显高于对照组,对比两组差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论:mTOR信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性具有一定的影响,抑制mTOR信号通路可增强非小细胞肺癌放疗的敏感性。     

葛根素通过Nrf2/ARE通路调控小神经胶质BV-2细胞的氧化应激损伤

[目的]研究葛根素对双氧水(H2O2)诱导小神经胶质BV-2细胞氧化应激损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。[方法]体外常规培养BV-2细胞,用H2O2诱导细胞氧化应激损伤模型,并同时将细胞分为正常对照组、H2O2诱导模型组、H2O2+5μmol/L葛根素组、H2O2+10μmol/L葛根素组及H2O2+20μmol/L葛根素组,CCK8试剂盒检测葛根素对细胞存活率的影响,相关试剂盒检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹方法检测核转录因子(Nrf2)、GCLC、NQO1及HO-1蛋白表达水平。[结果] H2O2能诱导BV-2细胞氧化应激损伤;与H2O2诱导组相比,不同剂量的葛根素可明显增加细胞的存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放及增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);免疫印迹结果显示葛根素可明显增强Nrf2的转位,并诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H2O2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。[结论]葛根素可明显降低BV-2细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路的有关。     

半枝莲含药血清通过抑制mTOR信号通路影响非小细胞肺癌NCI-H1650细胞上皮间质转化

目的 探讨半枝莲含药血清通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)NCI-H1650细胞上皮间质转化。方法 选取健康青紫蓝大白兔制备半枝莲含药血清,根据不同剂量分为对照组、低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)。选取人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650与含药血清培养,采用逆转录RT-PCR、免疫印迹、MTT、划痕实验等方法,观察4组不同剂量半枝莲含药血清抑制mTOR信号通路对NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖、迁移的影响。结果 4组mTOR表达量差异具有统计学意义,其中C组mTOR表达量低于对照组和A组(P<0.05);4组Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达相对灰度值差异具有统计学意义,且C组Vimentin、N-cadherin灰度值低于对照组、A组、B组,E-cadherin灰度值高于对照组(P<0.05);4组24、48、72 h吸光度差异具有统计学意义,且C组24、4...     

中药抑制小胶质细胞活化的实验研究进展

<正>小胶质细胞(MG)是中枢神经系统(CNS)内的常驻免疫细胞,占所有CNS胶质细胞的5%~20%,具有抗原递呈作用,与CNS内的炎症反应、细胞凋亡、脱髓鞘、轴索变性、神经再生等多种生理病理过程有关,是神经研究领域的重要研究对象。中药在神经系统疾病的治疗中发挥重要作用,其中抑制MG的活化是其关键环节之一。笔者现对近几年中药抑制MG活化的实验研     

星形胶质细胞和小胶质细胞介导的神经病理痛研究进展

<正>神经病理痛(neuropathic pain,NPP)是一种由疾病或躯体感觉系统的损伤引起的慢性难治性疼痛,可起源于外周或中枢神经系统损伤(三叉神经痛、脊髓损伤)、病毒感染(带状疱疹后遗神经痛)、代谢紊乱(糖尿病性神经痛)、卡压、肿瘤等[1],常表现为自发性疼痛、痛觉过敏或痛觉超敏,严重影响患者的生活质量。目前,神经病理痛的发病机制尚未完全明     

mTOR信号通路与肿瘤靶向治疗研究进展

mTOR接受上游信号激活后通过调控其下游的靶分子4E-BP1和p70S6K而发挥作用,该信号通路在调节细胞生长、细胞周期进程及蛋白质合成等过程中发挥重要作用。该通路的异常也与恶性肿瘤的活化及形成密切相关。目前,针对该通路的靶向抑制剂已应用于临床,因此对mTOR信号通路的深入研究对恶性肿瘤的靶向治疗中具有重要的意义。     

基于AR/mTOR信号通路探讨西黄丸对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡影响的实验研究

基于雄激素受体(androgen receptor, AR)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路,研究西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。西黄丸悬液灌胃制备SD大鼠含药血清。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测低、中、高剂量西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞体外增殖的影响。流式细胞术检测不同浓度西黄丸干预后LNCaP细胞的凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase caspase-3, cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、AR的蛋白表达以及mTOR蛋白的磷酸化水平。结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使LNCaP细胞的活力显著降低;低、中、高剂量西黄丸含药血清均能使细胞凋亡率显著增加;低、中、高剂量西黄丸含药血清组细胞中cleaved ...     

基于TLR4-MyD88-TRAF6信号通路的儿茶素没食子酸酯抗小神经胶质细胞炎性损伤作用

[目的]研究儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小神经胶质细胞（BV-2）炎性损伤的保护作用,并探讨其对TLR4-MyD88-TRAF6信号通路活化的影响。[方法]采用脂多糖（LPS,1 mg/L）体外诱导BV-2细胞炎性损伤,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量（50 μmol/L）EGCG组、LPS+中剂量（100 μmol/L）EGCG组、LPS+高剂量（200 μmol/L）EGCG组;CCK8法检测BV-2细胞相对存活率,ELISA法检测炎性因子白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,Western Blot方法分析诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素内氧化酶还原酶（COX-2）、Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）及TNF-α相关受体因子6（TRAF6）蛋白表达。[结果]与LPS诱导组相比,不同浓度EGCG干预的BV-2细胞相对存活率明显升高（P<0.05）,细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低（P<0.05）,细胞中炎性蛋白iNOS及COX-2表达水平显著降低（P<0.05）;细胞中TLR4、MyD88及TRAF6蛋白表达也显著降低（P<0.05）,并表现出剂量依赖性。[结论]EGCG能显著抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制TLR4-MyD88-TRAF6信号通路活化。     

TLR4/NF-κB信号通路调控血管性痴呆小胶质细胞极化以及中医治疗的研究进展

血管性痴呆(vascular dementia, VaD)为临床常见的神经退行性疾病,严重危害人类健康。不管是持续低灌注状态还是重建血流导致的再灌注损伤,大脑中都存在严重的神经性炎症,其中小胶质细胞作为中枢神经系统炎症反应的关键调节因子,在神经元的死亡起着重要的作用,其表型极化的激活传统上被归类为神经毒性M1型或神经保护性M2型,促进小胶质细胞向M2型极化具有明显抗炎作用而改善神经炎症。Toll样受体(toll like receptors TLRS)家族的TLR4在小胶质细胞表面广泛表达,并通过激活下游信号经典炎症蛋白核因子κB(nuclear factor kappa-B)NF-κB参与神经炎症的调节,因此研究TLR4/NF-κB信号通路通过调控小胶质细胞表型极化而抑制神经性炎症具有重要的意义,中医药治疗VaD具有悠久的历史,其疗效显著不良反应小,目前多项研究表明中医药单体、中药复方等通过多靶点治疗的优势,可通过抑制TLR4/NF-κB的激活从而调控小胶质细胞从炎症M1表型到保护性M2表型的早期转变而保护神经元细胞,因而从TLR4/NF-κB信号通路调控VaD小胶质细胞极化的机制研...     

推拿抑制小胶质细胞活化干预膝骨关节炎疼痛机制研究

疼痛是膝骨关节炎的主要症状,也是临床治疗难题之一。常常久病不愈,病情反复发作,时间长达十几年甚至几十年不等,而且病情会因天气变化加重,不能长时间走路,甚至蹲不下身。膝骨关节炎疼痛机制复杂,主要可以分为外周和中枢,外周涉及软骨、软骨下骨、滑膜等病理改变,中枢则涉及到脊髓和脑对疼痛信号的传导及异常加工和处理。近年来,中枢神经系统相关研究表明,膝骨关节炎疼痛的发生不仅和神经元有关,还与小胶质细胞活化关系密切。小胶质细胞在痛觉整合、调制过程中具有重要作用,是中枢神经系统重塑、形成中枢敏化关键之一。中医推拿治疗膝骨关节炎疼痛可通过抑制小胶质细胞激活途径,从而调节小胶质细胞与神经元的相互作用而产生良好镇痛效应。推拿治病机制除和局部生物力学相关外,关键还对中枢进行调控。国内外相关推拿干预膝骨关节炎疼痛实验均表明,推拿可从多系统、多层面改善软骨基质、抑制多种炎症因子表达及调控信号通路等。同时,中枢神经系统方面研究表明,调控脊髓和脑是推拿产生镇痛效应重要途径。文章就小胶质细胞在推拿干预膝骨关节炎疼痛中的研究进行综述,以期为后续机制研究提供参考。     

下丘脑弓状核小胶质细胞活化在大鼠外周炎症性疼痛中的作用

目的:本实验旨在研究外周炎症下下丘脑弓状核(hypothalamic arcuate nucleus,ARC)小胶质细胞在其中的作用。方法:雄性SD大鼠采用随机数字法,将其分为4组:假炎症组(S组)、炎症痛组(CFA组)、生理盐水组(NS组)和米诺环素组(M组)。CFA组、NS组和M组采用大鼠左侧后肢足垫皮内注入完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)0.1 m L/只制备大鼠炎症性痛模型;S组大鼠左侧后肢足垫皮内注入生理盐水(NS)0.1 m L/只。注入后第3天时,NS组和M组分别于下丘脑弓状核内注射生理盐水或米诺环素0.5μL。各组取7只大鼠,分别于注射前1天(T0)、注射后第2天(T1)、第3天给药前30 min(T2)、第3天给药后30 min(T3)、第5天(T4)和第7天(T5)时测定机械痛阈。于T1-5时各处死6只大鼠,取下丘脑弓状核组织,行Western Blot检测小胶质细胞含量。结果:与S组比较,CFA组、NS组和M组T1-5时机械痛阈降低,小胶质细胞表达水平升高(P0.05);CFA组和NS组各时点机械痛阈和小胶质细胞含量差异无统计学意义(P0.05);与CFA组和NS组比较,M组T3时机械痛阈升高,小胶质细胞表达水平降低(P0.05)。结论:下丘脑弓状核小胶质细胞的活化参与了大鼠炎症性痛的形成与维持。     

瘀血痹片通过抑制外周炎症缓解慢性炎性痛小鼠痛觉过敏及足肿胀

目的:观察瘀血痹片对慢性炎性痛小鼠痛觉过敏及足肿胀的影响,并探索初步作用机制.方法:使用完全弗氏佐剂(CFA)左侧足底注射建立小鼠慢性炎性痛模型,并分为模型组、阳性药布洛芬组(91 mg·kg-1)和瘀血痹片低、中、高剂量组(55,110,220 mg· kg-1),同时以假手术组作对照.造模后每日剂量等分为早晚2次灌...     

中医药通过mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种进化保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其生物学功能主要是参与细胞的增殖、生长及分化,从而调节机体的代谢过程。诸多国内外研究表明,mTOR是细胞凋亡及自噬信号转导通路的交汇点,营养、药物及氧化应激等多种刺激均可通过mTOR介导的信号通路对细胞的凋亡和自噬起到关键性的调控作用。目前,诸多研究已经证明,mTOR信号通路的改变与多种人类疾病的发病机制密切相关,如癌症、代谢紊乱(肥胖和2型糖尿病)、心血管和神经退行性疾病、与年龄有关的疾病和卵泡发育障碍等。近年来,越来越多的医家以该通路为切入点,以细胞凋亡和自噬为研究载体,研究了中医药对细胞凋亡和自噬的调节。其中包括中药单体、中成药、中药复方以及针灸等药物及物理疗法调控凋亡及自噬的实验研究。本文从mTOR信号通路入手,探讨了mTOR与细胞凋亡及自噬的关系,综述了中医药经mTOR途径调节细胞凋亡与自噬的最新进展,为中医药在该领域的深入研究提供了思路与参考。今后,中医药领域仍可以mTOR信号通路为依托,在中医基础理论的指导下对细胞凋亡和自噬的时效关系进行探索,为中医药在机体的作用机制提供新的现代医学的理论支持和作用靶点。     

齐墩果酸对血管紧张素II诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其作用机制

目的 研究齐墩果酸（OA）对血管紧张素II（Ang II）诱导的大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用胰酶消化法及差速贴壁法培养大鼠CFs,实验分为空白对照组、Ang II（10-6 mol·L-1）组、Ang II（10-6 mol·L-1）+OA（60,80,100 μmol·L-1）组。细胞长至融合状态时,先加入OA（60,80, 100 μmol·L-1）预处理1 h,然后加入Ang II（10-6 mol·L-1）作用24 h。应用二甲基四唑氮蓝（MTT）法测定细胞增殖活性,酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞上清中I型胶原含量,蛋白质印迹法（Western blotting）和激光扫描共聚焦显微镜分别检测各组CFs中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）蛋白表达和活性氧（ROS）变化。结果 Ang II能诱导CFs增殖,并能增加细胞上清中I型胶原的含量,同时CTGF的蛋白表达及CFs中ROS水平也显著增加。OA在60~100 μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性抑制Ang II诱导的CFs增殖,并且OA能减弱Ang II诱导的CTGF和ROS表达。结论 OA可通过ROS-CTGF途径抑制Ang II诱导的CFs增殖和胶原生成。     

益气健脾法对大鼠慢性溃疡性结肠炎NF-kB信号转导通路的实验研究

目的益气健脾法对慢性溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜上皮组织NF-k B蛋白因子表达的影响,阐述补气健脾法对慢性溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用葡聚糖硫酸钠(dextron sulfate sodium,DSS)自由灌喂的方式建立UC的模型,用蒸馏水配制浓度为4%的DSS溶液,放到饮水瓶中自由饮用,连续用药2周,造模成功后分别给予益气健脾法中药煎剂高中低剂量组,西药美沙拉嗪组不同方法进行干预。结果模型组大鼠结肠组织NF-k B因子的表达均明显高于正常组(P<0.01);健脾益肠散高、中剂量组结肠组织NF-k B因子表达均较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);益气健脾法低剂量组NF-k B因子表达亦低于模型组(P<0.05);益气健脾法中剂量组对NF-k B的影响与美沙拉嗪组比较差异不显著,但明显优于低剂量组(P<0.05)。而健脾益肠法的高剂量组NF-k B蛋白表达明显低于中剂量组及西药组(P<0.05)。结论 (1)益气健脾法对溃疡性肠黏膜免疫的保护作用可能与结肠组织的NF-k B因子表达有关;(2)益气健脾方治疗溃疡性结肠炎效果显著,优于西药组,值得临床推广应用。     

抑制下丘脑mTOR信号通路延缓雌性大鼠青春期启动的机制

目的:探讨下丘脑雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对雌性大鼠青春期启动的影响以及mTOR信号通路可能的作用机制。方法:选取清洁级雌性美国斯泼累格·多雷(SD)大鼠,随机分为N组(正常对照组)、二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组)、雷帕霉素(Rapa)组。23日龄时,对DMSO组及Rapa组大鼠行侧脑室置管术;29～35日龄,Rapa组大鼠予侧脑室注射Rapa,DMSO组予侧脑室注射等量DMSO,N组大鼠不予任何干预。每日对大鼠称重,28日龄开始观察阴门开启情况。35日龄上午,末次侧脑室注射后2 h分别处死各组大鼠。分析各组大鼠体质量、阴门开启时间,子宫和卵巢发育情况、血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平、下丘脑mTOR信号通路相关基因和蛋白表达量的变化。结果:侧脑室注射Rapa后,与N组和DMSO组相比,Rapa组大鼠下丘脑p–mTOR及p–S6K1蛋白表达量下降,Rapa组大鼠表现出阴门开启时间延迟,血清LH、E2水平显著下降,体质量、子宫湿重、卵巢湿重以及子宫指数、卵巢指数显著降低,神经肽Y(NPY)基因表达水平明显上升,差异均具有统计学意义(P &l...     

葛根素抗衰老作用的研究

目的研究葛根素的抗衰老作用及机理。方法取SD大鼠40只,随机分为5组,生理盐水(老龄)对照组、小剂量(老龄)给药组、大剂量(老龄)给药组、VE(老龄)对照组,(少龄)对照组。给药4周,颈椎脱臼处死,检测心、脑、肝等组织中的SOD的活性和MDA的含量。结果葛根素对大鼠心、肝等组织中SOD活性显著升高,心、脑、肝等组织中MDA含量显著下降。结论葛根素具有抗衰老作用,其抗衰老作用的主要作用机制可能是提高SOD活性,降低MDA含量起作用的。     

通迪胶囊治疗骨科急慢性疼痛疗效观察

目的观察通迪胶囊与双氯芬酸钠缓释片用于骨科各种急慢性疼痛性疾病的镇痛疗效及不良反应。方法选择100例急慢性颈、肩、腰、腿痛和骨性关节炎患者,随机分为治疗组和对照组,各50例。治疗组口服通迪胶囊;对照组口服双氯芬酸钠缓释片,分别记录治疗前、治疗5天后、治疗10天后的VAS评分。结果两组治疗后各时点VAS评分与治疗前比较有显著差异（P〈0．05）,两组间比较治疗前、治疗后各时点VAS评分无差异（P〉O．05）。结论通迪胶囊用于急慢性颈、肩、腰、腿痛、骨折、扭伤、拉伤和骨性关节炎的镇痛治疗有明显疗效,与双氯芬酸钠缓释片镇痛作用相似,副作用少,是一种安全、有效的镇痛药物。     

补肾活髓颗粒对慢性再生障碍性贫血患者mTOR信号通路的影响

目的 :观察补肾活髓颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,并从调控m TOR信号通路角度探讨其作用机制。方法:70例患者按随机数字表法分成两组,试验组在常规西药治疗的基础上加用口服补肾活髓颗粒治疗,对照组采用西药常规治疗,并设30例健康人为正常组。观察治疗前后临床症状、临床疗效及不良反应,并用RT-PCR方法检测CAA患者骨髓单个核细胞m TOR信号通路中的m TOR m RNA表达。结果:试验组总有效率83.33%,优于对照组的64.51%(P0.05)。两组治疗后血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)均有明显上升(P0.01)。CAA患者骨髓中m TOR表达水平低于正常水平(P0.01),治疗后两组m TOR m RNA表达水平均有所提高,但试验组高于对照组(P0.01)。结论:补肾活髓颗粒可显著改善CAA患者临床症状,提高临床疗效,且安全、无不良反应。补肾活髓颗粒可显著提高HGB、WBC、PLT的数量。补肾活髓颗粒通过激活CAA患者m TOR信号通路活性增加骨髓造血细胞的增殖,提高骨髓造血细胞的数量,并改善恢复骨髓造血功能。     

Treatment of Tongdi Capsule in the Treatment of Acute and Chronic Orthopedic Pain

目的 观察通迪胶囊与双氯芬酸钠缓释片用于骨科各种急慢性疼痛性疾病的镇痛疗效及不良反应.方法 选择100例急慢性颈、肩、腰、腿痛和骨性关节炎患者,随机分为治疗组和对照组,各50例.治疗组口服通迪胶囊;对照组口服双氯芬酸钠缓释片,分别记录治疗前、治疗5天后、治疗10天后的VAS评分.结果 两组治疗后各时点VAS评分与治疗前比较有显著差异(P<0.05),两组间比较治疗前、治疗后各时点VAS评分无差异(P>0.05).结论 通迪胶囊用于急慢性颈、肩、腰、腿痛、骨折、扭伤、拉伤和骨性关节炎的镇痛治疗有明显疗效,与双氯芬酸钠缓释片镇痛作用相似,副作用少,是一种安全、有效的镇痛药物.