LncRNA PVT1 miR-30d表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后的关系

【摘要】 目的 探讨LncRNA PVT1、miR 30d表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后的关系。 方法 选取2012年2月～2014年1月行手术治疗的76例上皮性卵巢癌患者的癌组织标本作为上皮性卵巢癌组,另选取本院收治的76例良性卵巢肿瘤作为对照组。检测LncRNA PVT1、miR 30d相对表达量,根据表达水平分为高表达组与低表达组;根据对顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、环磷酰胺（CTX）的敏感性将患者分为敏感组和耐药组并对比LncRNA PVT1、miR 30d表达情况;应用Pearson法对miR 30d和LncRNA PVT1表达的相关性进行分析;采用Kaplan Meier对上皮性卵巢癌患者5年的生存情况进行分析。 结果 与对照组相比,上皮性卵巢癌组miR 30d表达水平降低（P＜0.05）,LncRNA PVT1表达水平升高（P＜0.05）。miR 30d、LncRNA PVT1表达均与FIGO分期、分化程度密切相关（P＜0.05）。DDP、ADM敏感组miR 30d表达水平显著高于耐药组（P＜005）,LncRNA PVT1表达水平显著低于耐药组（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示上皮性卵巢癌组织中miR 30d和LncRNA PVT1表达呈负相关（P＜005）。Kaplan Meier法分析显示miR 30d高表达组5年内总生存率及中位生存时间远高于低表达组（73.7% VS 33.3%,28.0月 VS 20.0月,P＜0.05）;LncRNA PVT1低表达组5年内总生存率及中位生存时间远高于高表达组（81.5% VS 22.4%,27.0月 VS 18.0月,P＜0.05）。 结论 上皮性卵巢癌患者癌组织miR-30d低表达,LncRNA PVT1高表达,miR-30d、LncRNA PVT1表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后有关。     

LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环调控胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环对SGC-7901细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析胃癌组织、癌旁正常组织、SGC-7901细胞、GES-1细胞中LncRNA CASC15、miR-153-3p和Nrf2的表达量...     

血清lncRNA CASC2、miR-590-5p与支气管哮喘患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析

目的 探讨血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)-癌易感性候选基因2(CASC2)、微小核糖核酸-590-5p(miR-590-5p)与支气管哮喘(BA)患者气道炎症、气流受限的关系及其预测效能分析。方法 选择2021年12月至2022年12月我院收治的BA患者145例,将其分为急性发作期组(50例)、慢性持续期组(50例)和临床控制期组(45例),另选取50例同期健康体检者为对照组。检测各组的血清lncRNA CASC2、miR-590-5p表达及气道炎症、气道重塑和肺功能指标水平,并分析其相关性。分析血清lncRNA CASC2与miR-590-5p对BA患者气流受限的预测价值。结果 对照组、临床控制期组、慢性持续期组、急性发作期组的lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平和肺功能指标水平依次降低,气道炎症、气道重塑指标水平依次升高(P<0.05)。Pearson分析显示,BA患者的lncRNA CASC2、miR-590-5p表达水平与气道炎症、气道重塑指标呈负相关,与肺功能指标呈正相关(P<0.05)。轻、中、重度气流受限患者的血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平依次降低(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清lncRNA CASC2与miR-590-5p表达水平联合预测气流受限的曲线下面积(AUC)高于两指标单独预测。结论 血清lncRNA CASC2、miR-590-5p在BA患者中低表达可导致气道炎症、气道重塑及气流受限,联合检测血清lncRNA CASC2、miR-590-5p对气流受限程度有较高的预测价值。     

MiR-130a 在上皮性卵巢癌铂类敏感与耐药患者血清中的表达及相关机制研究

目的 分析miR-130a在上皮性卵巢癌铂类敏感与耐药患者血清中的表达情况,探讨其耐药的相关机制。方法 选取32例上皮性卵巢癌铂类化疗耐药患者及30例化疗敏感患者,采用实时荧光定量PCR检测受试者血清中miR-130a表达差异,ELISA法检测血清中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,BCL-2）表达情况。结果 耐药组患者血清miR-130a和BCL-2表达均高于敏感组,而PTEN表达低于敏感组（P均＜0.05）。且随着组织学分级增加及淋巴转移的发生,耐药组患者血清miR-130a表达量显著升高（P<0.05）。结论 MiR-130a可能通过抑制PTEN激活PI3K/AKT信号通路、上调BCL-2抑制肿瘤细胞凋亡参与上皮性卵巢癌铂类化疗耐药的产生,miR-130a有望成为逆转上皮性卵巢癌化疗耐药的基因治疗新靶点。     

真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15在肺癌细胞中表达上调且通过miR-153-3p激活Wnt/β-catenin 通路调控A549细胞增殖、侵袭及化疗敏感性实验研究

目的:探讨真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15(lncRNA CASC15)调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的作用机制。方法:实时荧光定量PCR实验分析lncRNA CASC15、miR-153-3p在65例肺癌组织、50例癌旁组织、肺癌A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞中的差异表达。选取A549细胞进行培养,并将siRNA CASC15转染A549细胞,分析下调CASC15对A549细胞增殖和侵袭的影响,用不同浓度顺铂(0、2、4、8、16μg/ml)处理A549细胞后,检测细胞活力和凋亡率。miRcode预测lncRNA CASC15的潜在结合靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步分析与miR-153-3p之间的相关性。下调miR-153-3p或同时上调lncRNA CASC15和miR-153-3p表达,分析A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性情况。过表达或下调miR-153-3p,检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。XAV939作用细胞后进一步检测miR-153-3p对A549细胞的增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果:与癌旁正常组织或B...     

血清miR-150-5p和miR-155-5p对老年糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨血清miR-150-5p和miR-155-5p在老年糖尿病肾病(DN)中的表达水平及其诊断价值。方法采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测2015年1月—2017年12月海南西部中心医院收治的126例老年DN患者(DN组)、140例2型糖尿病患者(2型糖尿病组)和65例健康体检者(对照组)的血清miR-150-5p和miR-155-5p水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p和miR-155-5p水平对老年DN患者的诊断价值。结果 DN组血清miR-150-5p(3.35±1.26)和miR-155-5p(5.47±1.80)表达水平均高于2型糖尿病组和对照组,差异有统计学意义(P0.01)。2型糖尿病组与对照组血清miR-150-5p和miR-155-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-150-5p和miR-155-5p诊断老年DN的最佳截值分别为2.65、4.16,灵敏度分别为82.7%和80.3%,特异度为74.8%和83.6%。二者联合诊断老年DN的AUC(95%CI)为0.892(0.834～0.953)优于单项miR-150-5p[0.805(0.749～0.865)]和miR-155-5p[0.837(0.779～0.894)](P0.05),其灵敏度(90.4%)和特异度(85.7%)最好。结论血清miR-150-5p和miR-155-5p水平在老年DN患者中升高,有望作为老年DN诊断的生物学标志物。     

循环miRNA在活动性肺结核中的表达及其在疾病治疗中的诊疗价值

目的 研究循环miRNA在活动性肺结核患者中的表达水平及其在疾病治疗中的诊疗价值。 方法 选择2015年1月—2016年12月在绍兴市立医院就诊并确诊为活动性肺结核患者110例作为观察组，同时，选取绍兴市立医院其他肺部疾病患者45例作为其他肺部疾病对照组，及同期于绍兴市立医院进行健康体检者45例作为健康对照组。活动性肺结核患者进行2H3R3Z3E3/4H3R3或2HRZE/4HR标准方案治疗。采用qRT-PCR技术检测并分析miR-155-5p、miR-21-5p、miR-29a和miR-142-5p的表达变化。 结果 活动性肺结核组的miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a显著高于健康对照组和其他肺部疾病对照组(P<0.05)。其他肺部疾病对照组的miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a显著高于健康对照组(均P<0.05)。但3组间miR-142-5p表达的差异无统计学意义(均P>0.05)。经规范化抗结核治疗后，活动性肺结核组患者miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a均出现不同程度的下降(P<0.05)。而miR-142-5p表达在治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。经ROC曲线分析，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a对活动性肺结核具有良好的诊断意义，敏感性和特异性均较好。 结论 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a在活动性肺结核中呈高表达状态，且给予规范化抗结核治疗后可显著降低，其水平变化可作为诊断肺结核及评价抗结核治疗效果的有效标记物。      

铂耐药上皮性卵巢癌组织中CXCL5的表达与患者临床特征的关系

目的 探讨铂耐药上皮性卵巢癌组织中CXC趋化因子配体-5(CXCL5)的表达与患者临床特征的关系。方法 收集行满意肿瘤细胞减灭术后联合铂类为主规范化疗的134名上皮性卵巢癌患者,根据患者停止化疗后6个月的复发情况分为铂耐药组70例(实验组)和铂敏感组64例(对照组)。采用免疫组化法检测卵巢癌组织CXCL5表达,分析其与上皮性卵巢癌铂耐药的相关性。结果 CXCL5在铂耐药上皮性卵巢癌患者组织中的表达主要位于癌细胞的细胞质中;CXCL5在铂耐药型卵巢癌组织中的表达水平明显低于铂敏感型,2组差异有统计学意义(P<0.05);CXCL5在铂耐药组上皮性卵巢癌患者组织中的表达与新辅助化疗、总化疗次数、人附睾蛋白4(HE4)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、血小板(PLT)、FIGO分期、组织学分化程度、腹水量有显著相关性(P<0.05);其中与新辅助化疗、总化疗次数、HE4、FIGO分期、腹水量呈负相关,与NEUT、PLT、组织学分化程度呈正相关;与糖类抗原(CA125)、年龄、绝经状态、病灶大小、肿瘤单双侧、脉管阳性无明显相关性(P>0.05)。结论 铂耐药上皮性卵巢癌患者组织...     

miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 分析微小RNA(microRNA)-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法 OncoLnc在线数据库分析miR-3614-5p表达水平与卵巢癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-3614-5p在卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的表达。以miR-3614-5p表达最低的细胞系为转染对象,分别转染化学合成的miR-3614-5p模拟物(miR-3614-5p组)和miR-NC(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测高表达miR-3614-5p对细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测并验证miR-3614-5p的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3614-5p对靶基因表达的影响。结果 miR-3074-5p表达水平较高的卵巢癌患者生存期长于miR-3074-5p表达水平较低的患者(P<0.05)。与IOSE80细胞比较,miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达显著减少(P<0.01),其在OVCAR-3细胞中表达最少(P<0.01)。与对照组比较,miR-3614-5p组OVCAR-3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)、细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。miR-3614-5p与G蛋白α抑制剂2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)mRNA的3′非翻译区存在结合位点(P<0.01)。高表达miR-3614-5p可显著干扰GNAI2基因的表达(P<0.01)。结论 miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达降低,其可通过干扰靶基因GNAI2的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移过程,miR-3614-5p可能是治疗卵巢癌的新靶点。     

lncRNA CASC2通过调控miR-218-5p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应及迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA肿瘤易感候选基因2(CASC2)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞炎症反应、迁移及侵袭的影响及其机制。方法 收集45例RA患者滑膜组织和18例健康对照者滑膜组织，采用qRT-PCR检测滑膜组织中CASC2和miR-218-5p的表达水平。ENCORI在线软件预测和双荧光素酶报告实验分析CASC2和miR-218-5p的靶向相互作用。将CASC2过表达质粒及miR-218-5p mimic转染至人RA滑膜成纤维细胞系MH7A中，qRT-PCR检测细胞中CASC2和miR-218-5p表达水平；CCK-8检测细胞的增殖水平；ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测基质金属酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平。结果 RA患者滑膜组织中CASC2表达水平较健康对照者滑膜组织减少(P<0.05),而miR-218-5p表达水平则增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示，CASC2与miR-218...     

卵巢癌中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义

目的 检测卵巢癌中microRNA-144-3p（miR-144-3p）与血清和糖皮质诱导蛋白激酶（SGK3）的表达水平,并探究其临床意义。方法 收集2010年3月~2012年7月于笔者医院经手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织和12例正常卵巢组织。实时定量PCR（qRT-PCR）技术检测卵巢癌组织miR-144-3p水平;蛋白质印迹（Western blot）法技术检测卵巢癌组织SGK3水平;分析卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 （1）卵巢癌组织miR-144-3p表达水平显著低于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（2）卵巢癌组织SGK3蛋白表达水平显著高于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（3）卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3蛋白表达水平显著呈负相关（P<0.05）。（4）卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况、分化程度有关（P<0.05）,与患者的年龄、有无腹腔积液、组织学类型无关（P>0.05）。（5）全部患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累积生存率分别为76.56%、53.13%、25.00%。miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为67.57%、37.84%、10.81%;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为88.89%、74.07%、44.44%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.001）。（6）SGK3高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为68.29%、39.02%、9.76%;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为91.30%、78.26%、52.17%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.000）。结论 miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,可能成为上皮性卵巢癌临床治疗及预后的新靶点。     

抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用

目的：探讨微小RNA(microRNA,miR)-30a/高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗(以下简称化疗)药物诱导的细胞凋亡的影响。方法：随机选取30例经化疗药物治疗后表现为化疗敏感和化疗抵抗的骨肉瘤患者组织,分为化疗敏感组(n=15)和化疗抵抗组(n=15),采用real-time PCR检测两组中miR-30a和HMGA2的mRNA表达水平,以及骨肉瘤细胞U2-OS经不同浓度的化疗药物(顺铂、阿霉素、氨甲蝶呤)处理后miR-30a的mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关因子Beclin 1,自噬微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)、自噬抑制因子P62的表达情况。在骨肉瘤细胞U2-OS中转染miR-30a模拟物和抑制剂,构建miR-30a高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况;采用单丹磺酰尸胺(monodansylcada,MDC)染色法检测细胞内自噬水平,ROS荧光探针-二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内ROS水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡程度,线粒体膜电位荧光探针JC-1检测细胞线粒体氧化损伤程度;采用双荧光素酶法检测miR-30a与HMGA2的相互作用,同时通过转染HMGA2模拟物和HMGA2-shRNA干扰质粒载体,构建HMGA2高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况。结果：化疗抵抗组中miR-30a的mRNA水平显著低于化疗敏感组(P<0.05),HMGA2的表达与miR-30a相反(均P<0.05)。在相对低浓度(5 μml/L)的化疗药物刺激下,骨肉瘤细胞U2-OS内的miR-30a mRNA表达下调,Beclin 1和LC3B均显著上调(均P<0.01),P62显著下调(P<0.01)。在miR-30a高表达组中,与对照组相比,Beclin 1和LC3B的表达水平与miR-30a明显下降(P<0.05),P62的表达水平明显升高(P<0.05),在miR-30a低表达组中则相反;在经过化疗药物处理后的miR-30a高表达组中,细胞自噬水平更低,细胞存活率更低,ROS水平更高,线粒体氧化损伤程度更高,细胞凋亡水平更高(均P<0.05),miR-30a低表达组则相反(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测验证了miR-30a与HMGA2的靶向互补配对关系;与对照组相比,HMGA2高表达组中Beclin 1和LC3B的表达水平与HMGA2明显升高(P<0.05),P62的表达水平明显下降(P<0.05),在HMGA2低表达组中则相反。结论：积极发挥miR-30a/HMGA2抑制骨肉瘤细胞自噬的功能,能够破坏细胞应对ROS介导的自噬与凋亡的平衡,增强化疗药物对细胞的杀伤作用。     

卵巢癌组织中miR-377的表达及其与临床病理参数的关系

目的:考察卵巢癌组织中miR-377的表达,分析miR-377表达与临床病理参数及预后的相关性.方法:收集卵巢癌组织及同期正常卵巢组织标本各50例,分别设为卵巢癌组及对照组,并收集病人临床病理参数资料.采用RT-qPCR技术检测2组样本的中miR-377的表达水平,分析miR-377与卵巢癌病人相关临床病理参数的关系,...     

miR-338-3p和MACC1基因在卵巢上皮性癌(EOC)组织中的表达及其意义

 目的 探讨微RNA-338-3p（miR-338-3p）和MET转录调剂因子MACC1在卵巢上皮性癌（epithelial ovariancancer，EOC）组织中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织和65例EOC组织中miR-338-3p和MACC1基因的表达情况，分析二者表达的相关性及其与EOC临床病理指标的关系，Log-rank和Cox回归分析影响EOC患者复发和死亡的危险因素，Kaplan-Meier法分析miR-338-3p和MACC1表达对EOC患者生存的影响。结果 EOC组织中miR-338-3p和MACC1基因的表达分别为0.331±0.038和0.774±0.025，与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异有统计学意义（F=77.916，P<0.001；F=77.945，P<0.001），不同性质卵巢组织中miR-338-3p和MACC1的表达呈明显负相关（r=-0.968，P<0.001）。在EOC中，临床分期越晚、组织级别越高、有淋巴结转移的癌组织中miR-338-3p表达越低、MACC1表达越高。Log-rank单因素分析显示miR-338-3p低表达与EOC患者的复发（P=0.038，HR=4.139，95% CI：1.271~8.078）和死亡（P=0.008，HR=3.007，95% CI：1.217~7.431）相关。与其他患者相比，miR-338-3p低表达且MACC1高表达的EOC患者的总体生存率和无进展生存率最低（χ²=16.960，P=0.001；χ²=18.930，P=0.000）。结论 miR-338-3p低表达和MACC1高表达可能与EOC患者预后不良相关，二者可能共同参与EOC的进展和复发。     

miR-31、miR-21和miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的分析mi R-31、mi R-21和mi R-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达水平,并探讨其与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测92例DLBCL患者和84例对照mi R-31、mi R-21和mi R-155的表达水平,间期荧光原位杂交技术分析患者MYC和p53基因的异常情况,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center Bcell type,GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型)。结果 DLBCL组mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平高于对照组(P0.05),mi R-31、mi R-21及mi R-155在non-GCB型的表达高于GCB型(P0.05)。与MYC基因没有发生重排的患者相比,mi R-31、mi R-21及mi R-155在MYC重排的患者中表达下调(P0.05)。mi R-31、mi R-21及mi R-155在p53基因丢失组的表达较基因正常组下调(P0.05)。BCL-2蛋白阳性组mi R-31、mi R-21及mi R-155的表达较BCL-2蛋白阴性组下调(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,mi R-31、mi R-21及mi R-155高表达的DLBCL患者生存率低于低表达的患者(P0.05)。应用单因素和多因素Cox模型分析,发现mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平、免疫分型、p53基因与预后差异有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-31、mi R-21和mi R-155对DLBCL的诊断分型及预后判断有一定的参考价值,有望成为DLBCL治疗的新靶点。     

肺结核患者外周血miRNA分子表达及临床意义研究

目的 探讨肺结核患者外周血微小RNAs(miRNA)分子表达水平及临床意义,为临床早期诊断提供参考依据。 方法 选择2012年1月—2014年12月收治的30例肺结核患者、30例潜伏结核感染患者及30例健康体检者作为研究对象,采用反转录-荧光定量PCR检测活动性肺结核患者(活动组)、潜伏结核感染患者(潜伏组)及健康体检者(对照组)血浆miR-29a、miR-21-5p和miR-155-5p的表达水平,对其进行统计学处理及ROC曲线分析。 结果 活动组血浆miR-29a、miR-21-5p和miR-155-5p表达水平分别为2.11±0.43、4.74±1.29、3.17±0.65,均显著高于对照组和潜伏组(P＜0.05);潜伏组血浆miR-155-5p表达水平为0.96±0.28,显著高于对照组(P＜0.05);潜伏组血浆miR-29a、miR-21-5p与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);miR-29a、miR-21-5p、miR-155-5p诊断活动性肺结核的ROC曲线图下面积分别为0.732、0.846和0.914,敏感度和特异度分别为80.0%和69.2%、73.3%和82.9%、86.7%和90.0%。 结论 在活动性肺结核及潜伏结核感染患者中血浆miR-29a、miR-21-5p和miR-155-5p表达水平均明显升高,可作为诊断活动性肺结核的重要指标,值得临床重视。      

miR-622在上皮性卵巢癌组织中表达及与预后的关系

目的 探讨miR-622在上皮性卵巢癌组织中表达及与预后的关系.方法 选取2010年3月至2012年3月在湖北省中医院行手术切除的上皮性卵巢癌患者81例,同期,选取行手术切除治疗的良性上皮性卵巢囊肿患者48例作为对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测不同组织中miR-622表达,所有患者随访截止日期2017年3月31日,生存分析采用Kaplan-M eier法和Cox比例风险回归模型.结果 上皮性卵巢癌组织中miR-622相对表达量(2.16 ± 0.21),高于对照组(1.59 ± 0.15),差异有统计学意义(P<0.001);上皮性卵巢癌组织中miR-622表达量在不同FIGO分期、不同组织学分级和是否发生淋巴结转移中差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-M eier结果提示,高表达组患者总体生存率低于低表达组,差异有统计学意义(x2=6.932,P<0.05);FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移和miR-622表达水平是影响患者生存的独立风险因素(P<0.05).结论 miR-622在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,且与肿瘤发生、进展密切相关,是影响患者预后的因素.     

miR-145-5p靶向ARK5调控人上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法 实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。靶基因预测软件预测miR-145-5p的靶基因,生物信息学、Western blot、双荧光素酶基因验证报告实验、挽救实验等方法预测并验证miR-145-5p在卵巢癌细胞中发挥作用涉及的分子机制。结果 卵巢癌细胞中miR-145-5p的表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(t=4.345,P=0.049)。与对照组相比,过表达miR-145-5p的卵巢癌细胞增殖率明显降低(t=-15.790,P<0.001),凋亡率明显增加(t=5.433,P=0.032)。TargetScan软件在线预测及双荧光素酶基因验证报告实验结果表明,ARK5是miR-145-5p的直接靶基因(t=4.583,P=0.010)。ARK5过表达细胞的增殖率明显升高(t=27.290,P<0.001),凋亡率明显下降(t=-8.241,P=0.001)。过表达miR-145-5p可在mRNA(t=-12.824,P<0.001)及蛋白水平(t=-4.792,P=0.001)明显下调ARK5的表达。ARK5的挽救性表达显著抵消了miR-145-5p对细胞增殖的抑制(t=15.580,P=0.004)和促细胞凋亡(t=-12.470,P=0.006)的效果。结论 miR-145-5p可能是通过靶向抑制ARK5来抑制卵巢癌细胞增殖和促进细胞凋亡的。     

miR-155-5p对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及可能机制

目的: 探讨miR-155-5p对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）细胞凋亡的影响及可能机制。方法: 收集43例AML患者和21例缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNC）,qRT-PCR法检测两组细胞miR 155 5p和Bcl 2 mRNA表达水平。AML细胞转染miR 155 5p类似物或抑制剂后,CCK 8法检测经不同浓度阿糖胞苷作用后AML细胞的活性,流式细胞术检测经阿糖胞苷（0.16 μg/mL）作用后AML细胞的凋亡情况。通过qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测AML细胞转染miR-155-5p抑制剂后NF-κB、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果： AML患者较缺铁性贫血患者BMMNC的miR 155 5p（t=4.688, P=0.002）和Bcl-2 mRNA（t=4.066, P=0.014）的表达水平明显升高。CCK 8和流式细胞术检测结果显示,转染miR 155 5p类似物的AML细胞经阿糖胞苷处理后细胞活性增高,凋亡明显减少;相反,转染miR-155-5p抑制剂组细胞活性降低,凋亡明显增多（P均<0.01）。qRT-PCR和蛋白质印迹结果显示,转染miR 155 5p抑制剂后AML细胞NF κB、Bcl-2表达水平降低。结论： miR-155-5p可能通过上调NF-κB、Bcl-2的表达抑制AML细胞凋亡。     

miR-655在上皮性卵巢癌中的表达研究

目的探讨微小RNA（microRNA,miR）-655在上皮性卵巢癌中的表达、作用及其可能的分子机制。方法采用实时定量-PCR检测miR-655在40对上皮性卵巢癌组织和正常组织中的表达,分析miR-655表达水平与临床病理之间的关系。Cell Counting Kit-8（CCK-8）和流式细胞术检测miR-655对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响。Western blotting检测PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果miR-655在上皮性卵巢癌组织中的表达量明显低于正常组织（P < 0.01）。miR-655表达水平在不同肿瘤直径、病理分化程度和是否淋巴结转移病人间差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,而不同年龄、CA-125病人间miR-655 mimics表达差异均无统计学意义（P>0.05）。转染miR-655 mimics可明显抑制卵巢癌细胞的增殖并促进细胞的凋亡（P < 0.01）;miR-655 mimics转染明显抑制卵巢癌细胞中PI3K、AKT和mTOR活性（P < 0.01）。结论miR-655在卵巢癌组织中明显低表达,miR-655低表达可能与卵巢癌的肿瘤生长和分化程度相关,miR-655可明显抑制卵巢癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其在卵巢癌病人中具有一定的靶向治疗价值。