PGT-A及PGT-SR在辅助生殖中的应用

目的探讨胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)在辅助生殖中应用的价值,为PGT的临床应用提供依据。 方法回顾性分析行非整倍体筛查（PGT for aneuploidies,PGT-A）和染色体结构异常检测（PGT for structural rearrangements,PGT-SR）助孕夫妇的临床资料、实验室资料及妊娠结局资料。采用囊胚期外滋养层细胞活检及基因检测技术,挑选检测结果正常的胚胎行单囊胚移植。比较年轻女性（＜35岁）组与高龄女性（≥35岁）组的一般资料、胚胎培养情况、胚胎活检结果及妊娠结局。 结果共纳入PGT-A 194个周期,635个胚胎,101个移植周期;共纳入PGT-SR 92个周期,399个胚胎,40个移植周期。PGT-A及PGT-SR中≥35岁组获卵数均少于＜35岁组(P＜0.05),胚胎发育情况差异无统计学意义(P＞0.05),PGT-A及PGT-SR中≥35岁组正常胚胎率明显低于＜35岁组(P＜0.05)。随着年龄的增加,PGT-A胚胎活检正常率逐渐下降;PGT-A 101个移植周期中活产44例（43.56%）,各组间妊娠结局差异无统计学意义（P＞0.05）;PGT-SR 40个移植周期中活产19例（47.50%）,妊娠结局差异无统计学意义（P＞0.05）;子代均健康。 结论PGT是解决复发性流产、高龄女性、染色体异常夫妇的有效治疗手段,能够有效改善高龄女性的生育状况,但40岁以后的女性是否行PGT助孕,应权衡利弊后决定。     

胚胎植入前遗传学诊断在平衡易位携带者中的作用

目的:胚胎植入前遗传学诊断目前已是一项确定的技术,为那些可能将严重遗传病传递给后代的高风险患者提供了产前诊断的机会。胚胎植入前遗传学诊断已经用于诊断那些可能生育单基因遗传性疾病或X连锁染色体疾病患儿的高风险夫妇,筛查与年龄增长相关的非整倍体疾病及夫妇自身为携带平衡染色体重排的患者。目的:对经胚胎植入前遗传学诊断确定的病例做一概述,双亲为平衡易位患者,经胚胎植入前遗传学诊断筛查易位体及非整倍体后,确定适合移植的胚胎数目。设计:本文为回顾性研究,报道某一中心6对夫妇通过荧光原位杂交技术进行胚胎植入前遗传学诊断…     

改良高分辨G显带技术在复杂染色体重排携带者中的应用

目的应用染色体改良高分辨G显带技术,对四例复杂染色体重排(CCRs)携带者进行细胞遗传学分析,探讨该技术对CCRs的临床应用价值。方法选取因复发性流产或不孕不育就诊于广东省妇幼保健院医学遗传中心的4对夫妇,经改良高分辨G显带技术制备外周血染色体,核型分析并与常规方法进行比较。结果改良高分辨G显带染色体分辨率达到550条以上核型占比50%以上;核型分析提示4对夫妇中各有一方是CCRs携带者,涉及3～4条染色体易位;易位染色体涉及3号和12号染色体最多。结论改良高分辨G显带技术能更好的发现CCRs携带者的多个染色体易位,避免漏诊。该技术成本较低、操作简单,适合在基层单位推广。     

着床前遗传学筛查周期中不同受精来源囊胚发育速度与染色体整倍性分析

目的为了提高着床前遗传学筛查(PGT)周期患者体外授精-胚胎移植(IVF-ET)成功率和胚胎利用率,通过单核苷酸多态性-微阵列比较基因组杂交技术(array-SNP)分析PGT患者的2PN、0PN和1PN来源的胚胎染色体的整倍性,从而优化移植策略。方法回顾性分析2013—2018年在我中心行PGT助孕,其2PN、1PN和0PN来源的胚胎均有囊胚形成的患者,比较不同发育速度的2PN、0PN和1PN来源的活检囊胚的染色体整倍性。结果比较第5天不同受精来源的活检囊胚染色体整倍体率差异无统计学意义(P>0.05);第6天囊胚中,0PN来源的活检囊胚染色体整倍体率要低于2PN和1PN来源的活检囊胚整倍体率,差异有统计学意义(P<0.05);第5天和第6天的囊胚相比,不同受精来源的囊胚染色体整倍体率差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于PGT周期患者,0PN以及1PN来源的胚胎培养后形成囊胚,通过芯片技术检测其染色体正常的囊胚仍占一定比例,可作为移植胚胎。不同发育速度的囊胚,其染色体的整倍体率差异并无统计学意义。     

胚胎植入前非整倍体筛查的研究进展

胚胎植入前非整倍体筛查是选择染色体数目正常的胚胎用于体外受精/单精子卵胞浆内显微注射周期的移植,目前采用荧光原位杂交方法可以分析5条或9条染色体。本文主要概述胚胎植入前非整倍体筛查在高龄待孕妇女、早期不明原因习惯性流产、反复植入失败者中应用,在这些情况中发生非整倍体的概率较高,正常胚胎鉴定和非整倍体的排除有利于提高体外受精-胚胎移植的胚胎植入率和妊娠率。其外简明介绍其他的新方法在胚胎植入前非整倍体筛查中研究进展。     

基于Array-CGH技术的胚胎植入前遗传学诊断在XYY综合征患者中的应用

目的 评估基于Array-CGH技术的植入前遗传学诊断(PGD) 对超雄综合征(XYY综合征)患者胚胎染色体进行分析的应用效果.方法 研究选取行PGD助孕的5例XYY患者及15例染色体易位患者,对两组的女方年龄、精子浓度、前向运动精子比例、获卵数、第二次减数分裂中期(MII)卵子数、优质胚胎数、染色体异常率进行比较.结果 XYY组和染色体易位组在女方年龄、精子浓度、PR、获卵数、MII卵子数、优质胚胎数均差异无统计学意义,PGD检测结果中,两组的染色体异常率差异无统计学意义.XYY组活检21枚胚胎,其中10枚胚胎为常染色体异常,1枚为性染色体异常.非整倍体率为52.38%,常染色体异常为47.62%,性染色异常为4.80%.结论 XYY综合征患者行体外受精时有和男性染色体易位患者类似的胚胎染色体异常率,Array-CGH可同时检测XYY综合征患者全部染色体情况,避免大量异常胚胎植入女方体内,有利于降低子代出生缺陷,值得临床应用.     

针对染色体易位携带者的微阵列比较基因组杂交-植入前遗传学诊断技术的建立与应用

目的:应用微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)对染色体平衡易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断,探讨其临床应用价值。方法:应用荧光原位杂交技术(FISH)对染色体易位携带者D3胚胎进行检测,对结果为异常且发育到囊胚的15枚胚胎应用array-CGH再次检测,建立array-CGH技术平台,再将array-CGH技术应用于染色体平衡易位携带者胚胎植入前遗传学诊断。结果:对经过FISH检测为异常且发育到囊胚的15枚胚胎进行全基因组扩增(WGA)后采用array-CGH技术进行检测,发现array-CGH技术不仅能够检测到FISH结果对应的数目异常和结构异常,还可以发现除FISH诊断的染色体异常外其他染色体异常。其对于相互易位病例不平衡易位断裂点检测的结果与对易位携带者的核型分析结果一致。应用array-CGH技术对5对染色体易位携带者夫妇的31枚胚胎进行胚胎植入前遗传学诊断,30枚获得检测结果 ,1对夫妇移植1枚整倍体胚胎后获得妊娠,羊水染色体分析提示胎儿染色体核型正常。结论:通过全基因组扩增以及array-CGH技术,对染色体平衡易位携带者胚胎进行植入前遗传学诊断,能够全面评估胚胎染色体的情况,具有良好的临床应用前景。     

自然周期体外受精联合卵母细胞体外成熟,进行植入前遗传学诊断筛查非整倍体胚胎后首次成功的妊娠结局

目的:报道自然周期体外受精(IVF)联合体外成熟,并对胚胎进行植入前遗传学诊断(PGD)后,首例成功妊娠。设计:病例报道。机构:大学医院。患者:1例35岁患多囊卵巢的妇女,就诊于不孕门诊。干预:未成熟卵母细胞体外成熟和PGD。主要观察指标:体外成熟后的胚胎行PGD作非整倍体筛查。结果:收集到2个成熟卵母细胞和13个未成熟卵母细胞,8个卵母细胞成熟后正常受精,对其中6个胚胎活检进行染色体分析。在D5移植2个染色体正常的胚胎,最后成功分娩了一健康婴儿。结论:本病例报道表明,体外成熟可获得足够数量的胚胎作PGD进行非整倍体筛查,这种方法可…     

无创胚胎染色体筛查在染色体非整倍体检测中的应用效果

目的探讨无创胚胎染色体筛查技术(NICS)在染色体非整倍体检测中的应用效果。方法收集2017年5月至2019年5月在安徽省妇幼保健院生殖中心拟行体外受精-胚胎移植的364例患者的囊胚培养液,并行NICS筛查。对单囊胚移植且临床确认妊娠的46例患者,根据其妊娠结局不同行不同染色体检查方法:对12例流产的患者行流产组织染色体检查,并以该检查结果为金标准,计算NICS的灵敏度和特异度;对继续妊娠的34例患者行外周血无创产前遗传学筛查(NIPS),比较NICS结果与NIPS筛查结果的差异。结果 12例流产的患者样本中,流产组织染色体检查与NICS检查为染色体非整倍体者均为3例,NICS筛查的灵敏度为100%;在流产组织染色体检查为整倍体的9例样本中,对应的NICS检出2例为非整倍体,其特异度为77.78%,两种筛查方法的一致性分析Kappa值为0.64。继续妊娠的34例患者样本中,NIPS筛查均未检出13、18、21号染色体为非整倍体胚胎,NICS对这3条染色体的筛查结果与NIPS一致。结论 NICS筛查染色体非整倍体有较好的灵敏度,但假阳性率偏高,需进一步技术优化以提高特异性。     

孕早中期血清学指标联合筛查在染色体非整倍体筛查中的应用

目的研究孕早中期血清学指标联合筛查在染色体非整倍体筛查中的应用效果。方法选取筛查的31 752名孕妇,其中孕早期筛查14 481例,孕中期筛查11 238例,孕早中期血清学指标联合筛查6 033例。采取时间分辨免疫荧光法(DELFIA)分别于孕早期测定孕妇血清游离β人绒毛膜促性腺激素(free-βhCG)、妊娠相关蛋白A (PAPP-A),B超测定胎儿颈项透明层厚度(NT)值;孕中期采取DELFIA测定free-βhCG、甲胎蛋白(AFP)及游离雌三醇(uE3);孕早中期血清学指标联合筛查则联合孕早期妊娠相关蛋白A (PAPP-A)、NT和孕中期free-βhCG、甲胎蛋白(AFP)、uE3指标,依据血清学结果和其他基础指标评估染色体非整倍体风险。对于高风险孕妇,行羊水穿刺诊断,所有接受筛查孕妇随访至出生结局并记录。结果孕早中期血清学指标联合筛查高风险率低于孕早期及孕中期,产前诊断率有较大提升,检出率有所增加,假阳性率较低,侵入性检查率相对减少。结论孕早中期血清学指标联合筛查染色体非整倍体可降低筛查高风险率和假阳性率,提高检出率,能有效减少侵入性穿刺,且拥有更高的检出效率,临床上值得推广。     

激动剂长方案与拮抗剂方案对胚胎整倍体率的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a)的选择对胚胎植入前非整倍体遗传学检测(PGT-A)周期胚胎整倍体率以及临床妊娠率的影响。 方法 选取2017年1月—2020年10月于山东大学生殖医学研究中心进行PGT-A周期的卵巢储备良好的年轻女性为研究对象(共359个周期、1 475个囊胚),根据促排卵方案分为拮抗剂组(n=157)、激动剂组(n=202)。应用单因素分析比较两组的基线参数、促排卵及取卵周期参数,并将差异有统计学意义的参数纳入Logistic回归模型进行多因素分析。其中主要观察指标为胚胎整倍体率,次要指标为临床妊娠率。 结果 单因素分析结果显示,激动剂组与拮抗剂组比较,优质囊胚率(41.4% vs 42.9%, P=0.335)、囊胚整倍体率(56.1% vs 52.6%, P=0.171)、冻融胚胎移植(CET)临床妊娠率(69.2% vs 63.2%, P=0.289)差异均无统计学意义。平衡女方年龄、BMI、MⅡ卵子数、多囊卵巢综合征(PCOS)诊断、促性腺激素(Gn)用量、人体毛绒膜促性腺激素(HCG)用量等参数后,选择GnRH激动剂或拮抗剂进行垂体抑制与胚胎整倍体率及临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。对卵巢储备好的年轻患者而言,其获卵数与胚胎整倍体率差异有统计学意义(P=0.04,OR=1.02,95%CI:1.00~1.04)。 结论 GnRH激动剂长方案和拮抗剂方案的选择不会影响胚胎整倍体率及临床妊娠率。因此在全胚冷冻周期中,对卵巢储备功能正常及卵巢高反应的年轻女性进行卵巢刺激可灵活选用拮抗剂方案和激动剂长方案。     

前次剖宫产史瘢痕子宫产妇应用气囊助产术辅助阴道分娩对产程及妊娠结局的影响

目的 分析前次剖宫产史瘢痕子宫产妇应用气囊助产术辅助阴道分娩对产程及妊娠结局的影响,以期为前次剖宫产史瘢痕子宫产妇的临床分娩提供参考依据。方法 对照组开展常规阴道分娩,观察组在对照组基础上应用气囊助产术辅助阴道分娩;比较两组分娩方式、产程及妊娠结局。结果 两组分娩方式、妊娠结局比较差异均无统计学意义(P＞0.05);但观察组第一产程时间、第二产程时间及总产程时间均显著低于对照组(P＜0.05)。结论 前次剖宫产史瘢痕子宫产妇应用气囊助产术辅助阴道分娩可有效缩短产程,且不增加中转剖宫产、产钳助产及不良妊娠结局风险,值得临床推广。     

对β-地中海贫血携带者进行胚胎植入前遗传学诊断

目的 探讨对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断的方法。方法 对4例β-地中海贫血携带者进行超排卵和体外受精-胚胎移植治疗,胚胎活检后应用全基因组扩增技术,巢式-PCR及反向点杂交进行胚胎植入前遗传学诊断,根据诊断结果选择健康的胚胎移植入子宫。结果 4例患者共获卵97个,受精率为83%,可供活检的胚胎47个,总扩增效率为84.8%。平均等位基因脱扣发生率为14.9%。共移植10个健康胚胎,获得1例三胎妊娠（其中1个为空囊）,现已分娩健康双胎。结论 对β-地中海贫血进行植入前遗传学诊断可使β-地中海贫血患者实现生育健康后代的愿望,达到优生的目的。     

应用荧光聚合酶链反应对α地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目的探讨应用跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）技术在α地中海贫血（简称α地贫）植入前遗传学诊断（PGD）中的应用。方法获取Ot地贫东南亚缺失型携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞跨越断裂点荧光PCR检测技术,并对4对夫妇双方均为α地贫——SEA缺失型杂合子应用荧光PCR进行了α地贫的PGD。结果单个淋巴细胞平均扩增效率为90．0％（72／80）,平均等位基因脱扣（ADO）率为8．3％（6／72）。对4对夫妇进行4个周期PGO,共检测38个胚胎,获得38个卵裂球,其中34个卵裂球扩增成功,扩增效率为89．5％（34／38）,ADO率为5．9％（2／34）。经PCR分析,共获得11个正常胚胎,8个杂合子胚胎,15个重型地贫胚胎。移植了11个胚胎,获得2例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用单细胞荧光PCR技术可对α地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生的目的。     

Successful pregnancy outcome after in vitro fertilisation following Pre-implantation Genetic Diagnosis/Polymerase Chain Reaction screening for single gene disorder (sickle cell anaemia) before embryo transfer: The clinical experience of an in vitro fertilisation clinic in Nigeria

A couple, both carriers of the sickle cell anaemia trait (Genotype HbAS) with an offspring already affected with the genetic disease underwent a Pre-implantation Genetic Diagnosis/Polymerase Chain Reaction screening of biopsied blastomeres. DNA analysis of single blastomeres was carried out to find out indicated a viable intra-uterine pregnancy with embryos which carried the sickle cell mutation, which resulted in a livebirth (HbAS). PGD/PCR in combination with IVF appears to be the most suitable treatment plan for patients who are at a higher risk of reproducing offspring affected with inheritable genetic diseases.     

男性罗氏易位的临床特点及其胚胎着床前遗传学诊断

目的：分析男性罗氏易位的生育期临床特点,探讨胚胎着床前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD）技术在男性罗氏易位携带者中的临床应用。方法：2005年1月至2011年10月,共对80例男性罗氏易位携带者进行了96个PGD周期,选择正常或罗氏易位核型的胚胎移植。分析男性罗氏易位携带者的临床特点及其PGD周期的临床特点。结果：80对男性罗氏易位者夫妇中,62对夫妇因男方严重少、弱精症而致原发不孕,占77.50%（62/80）;8对夫妇因男方继发少、弱精症而出现继发不孕,占10%（8/80）;10对夫妇因反复自然流产就诊,占12.50%（10/80）。80例男性罗氏易位携带者中,（13;14）易位有50例,占62.50%（50/80）;（14;21）易位有15例,占18.75%（15/80）。96个PGD周期中,17个周期无胚胎可以移植,79个周期进行了胚胎移植,25个PGD周期获得临床妊娠,妊娠率31.65%（25/79）。至目前,共有18对夫妇分娩了21个健康子代,3对夫妇持续妊娠中。结论：少、弱精症是男性罗氏易位携带者不育的主要原因,辅助生育技术可以解决其不育问题。PGD技术可以为男性罗氏易位携带者获得健康的子代提供帮助,减少了女方流产及分娩畸形儿的发生率。     

First unaffected pregnancy using preimplantation genetic diagnosis for sickle cell anemia.

CONTEXT: Sickle cell anemia is a common autosomal recessive disorder. However, preimplantation genetic diagnosis (PGD) for this severe genetic disorder previously has not been successful. OBJECTIVE: To achieve pregnancy with an unaffected embryo using in vitro fertilization (IVF) and PGD. DESIGN: Laboratory analysis of DNA from single cells obtained by biopsy from embryos in 2 IVF attempts, 1 in 1996 and 1 in 1997, to determine the genetic status of each embryo before intrauterine transfer. SETTING: University hospital in a large metropolitan area. PATIENTS: A couple, both carriers of the recessive mutation for sickle cell disease. INTERVENTIONS: Standard IVF treatment, intracytoplasmic sperm injection, embryo biopsy, single-cell polymerase chain reaction and DNA analyses, embryo transfer to uterus, pregnancy confirmation, and prenatal diagnosis by amniocentesis at 16.5 weeks' gestation. MAIN OUTCOME MEASURE: DNA analysis of single blastomeres indicating whether embryos carried the sickle cell mutation, allowing only unaffected or carrier embryos to be transferred. RESULTS: The first IVF attempt failed to produce a pregnancy. Of the 7 embryos analyzed in the second attempt, PGD indicated that 4 were normal and 2 were carriers; diagnosis was not possible in 1. Three embryos were transferred to the uterus on the fourth day after oocyte retrieval. A twin pregnancy was confirmed by ultrasonography, and subsequent amniocentesis revealed that both fetuses were unaffected and were not carriers of the sickle cell mutation. The patient delivered healthy twins at 39 weeks' gestation. CONCLUSION: This first unaffected pregnancy resulting from PGD for sickle cell anemia demonstrates that the technique can be a powerful diagnostic tool for carrier couples who desire a healthy child but wish to avoid the difficult decision of whether to abort an affected fetus.     

基于辅助生殖人群的复发性流产夫妇染色体核型回顾性分析

目的 分析实施辅助生殖技术夫妇的外周血染色体核型,为临床诊疗和遗传咨询提供理论依据。 方法 回顾性分析2015年1月至2018年12月山东大学附属生殖医院实施辅助生殖的1 438例(719对)复发性流产(RSA)患者及3 292例(1 646对)自然流产1次患者的外周血染色体核型,比较染色体变异的种类、发生率及其在男性和女性中的比例差异,分析流产次数与染色体核型的关系。 结果 1 438例(719对)RSA患者中检出染色体变异320例,其中男性染色体变异165例,女性染色体变异155例;染色体结构畸变占染色体变异的57.58%,其中相互易位比率最高;不同性别1次流产组与RSA组间染色体互相易位和罗伯逊易位差异均有统计学意义(P<0.001),染色体倒位差异无统计学意义(男:P=0.21;女:P=0.83);随着流产次数的增加,男女性染色体畸变率趋势差异均有统计学意义(P<0.001)。 结论 实施辅助生殖人群中自然流产1次患者的染色体畸变率低于RSA患者;RSA患者的染色体异常以染色体易位多见,且染色体畸变率与流产次数无关。     

Birth of healthy children after preimplantation diagnosis of β-thalassemia

Background Clinical programs for preventing β-thalassemia are presently based on prospective carrier screening and prenatal diagnosis. This paper report an achievement of a pregnancy with unaffected embryos using in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET), in combination with preimplantation genetic diagnosis (PGD), for a couple at risk of having children with β-thalassemia.Methods A couple carrying different thalassemia mutations, both a codon 41-42 mutation and the IVS Ⅱ 654 mutation, received standard IVF treatment, with intracytoplasmic sperm injection, embryo biopsiy, single cell polymerase chain reaction (PCR) and DNA analysis. Only unaffected or carrier embryos were transferred to the uterine cavity. After confirmation of pregnancy, a prenatal diagnosis was performed.Results Of a total of 13 embryos analyzed for β-globin mutations, PGD indicated that 2 were normal,3 were affected, and 6 were carriers. Diagnosis could not be made in the other 2 embryos. Three embryos were transferred to the uterus on the third day after oocyte retrieval. Ultrasonography revealed a twin pregnancy with one blighted ovum. The prenatal genetic diagnosis revealed that both fetuses were unaffected, and two healthy boys were born, confirming the results of PGD.Conclusions We developed a single-cell based primer extension preamplification (PEP)-PCR assay for the detection of β-thalassemia mutations. The assays were efficient and accurate at all stages of the procedure, and resulted in the birth of PGD-confirmed β-thalassemia free children in China. PEP was used here in PGD for β-thalassemia.