miR-221-5p通过靶向调控ALDH1A2对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-221-5p与醛脱氢酶1家族成员A2(ALDH1A2)的靶向关系及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 收集2020年7月至2022年7月于岳池县人民医院接受根治性胃癌切除术的50例胃癌患者的胃癌组织及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和人胃癌细胞系BGC-803、AGS、SGC-7901、BGC-823、HGC-27。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织和细胞中miR-221-5p、ALDH1A2 mRNA的表达,Pearson相关分析胃癌组织中二者的相关性,分析miR-221-5p表达与患者临床病理参数的关系;生物信息学预测和双荧光素酶实验验证miR-221-5p对ALDH1A2的靶向调控作用;将HGC-27细胞分为对照组、抑制物-NC组、miR-221-5p抑制物组、模拟物NC组、miR-221-5p模拟物组、miR-221-5p模拟物+pc DNA3.1组和miR-221-5p模拟物+pc DNA3.1-ALDH1A2组,转染相应的质粒;分别采用MTT法、克隆形成实验、Transw...     

miR-139-5p通过调节Notch信号通路对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-139-5p通过靶向抑制Notch信号通路调控乳腺癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过实时定量PCR法检测miR-139-5p以及Notch1在乳腺癌和乳腺上皮细胞中的表达;采用双荧光素酶报告基因法验证miR-139-5p对Notch1的调控作用;通过CCK8和流式细胞术分别检测miR-139-5p与Notch1对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响,并通过Western blot法检测miR-139-5p对Notch1及相关凋亡蛋白表达的影响。结果:miR-139-5p在人乳腺癌细胞中表达显著下调（P<0.05）,尤其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中下调更为显著（P<0.01）;双荧光素酶报告基因实验证实miR-139-5p能与Notch1 3’ UTR结合;同时miR-139-5p过表达能够显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡（P<0.01）,显著抑制Notch1蛋白表达（P<0.01）,进而降低相关凋亡蛋白Bcl-2的表达,增强Bax的表达。 结论:miR-139-5p能够通过抑制靶基因Notch1的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

circ-ERBB2通过抑制miR-136-5p维持乳腺癌中的HER2下游信号促进曲妥珠单抗耐药

目的:探讨circ-ERBB2/miR-136-5p轴是否参与曲妥珠单抗耐药乳腺癌的耐药性分子机制。方法:qPCR法检测曲妥珠单抗敏感和耐药乳腺癌组织,以及HER2-和HER2+乳腺癌组织中circ-ERBB2和miR-136-5p的表达水平。建立小鼠异种移植瘤模型,评估敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p对乳腺癌细胞成瘤性及对曲妥珠单抗耐药性的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circ-ERBB2与miR-136-5p的序列互作位点。CCK-8细胞增殖能力测定敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p以及给予曲妥珠单抗治疗对于乳腺癌常规或曲妥珠单抗耐药BT-474（Trast-resist）细胞增殖能力的影响。Western blot法检测敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p后,对常规或BT-474（Trast-resist）细胞内HER2、p-Akt、p-ERK1/2表达水平的影响。结果:与曲妥珠单抗敏感乳腺癌组织相比,曲妥珠单抗耐药乳腺癌组织中circ-ERBB2的表达水平显著升高,miR-136-5p表达水平显著降低（P<0.01）。无论激素受体表达为阳性或是阴性,与HER2-乳腺癌组织相比,在HER2+乳腺癌组织中circ-ERBB2表达显著上调,miR-136-5p表达水平被显著抑制（P<0.01）。敲低circ-ERBB2的表达或过表达miR-136-5p均能够抑制BT-474（Trast-resist）细胞增殖及其胞内HER2、p-Akt和p-ERK1/2的表达水平（P<0.01）。结论:circ-ERBB2能够通过抑制miR-136-5p参与维持乳腺癌中的HER2下游信号并促进曲妥珠单抗耐药。     

miR-497-5p通过HMGA2调控食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-497-5p通过高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭能力的影响。方法:利用UALCAN、GEPIA数据库分析miR-497-5p和HMGA2 mRNA在食管癌中的表达。通过生物信息学网站starBase分析miR-497-5p和HMGA2在食管癌样本中表达的相关性。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p对HMGA2基因的调控。采用细胞划痕实验和Transwell实验分析miR-497-5p通过HMGA2对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:miR-497-5p在食管癌中的表达明显低于其对照样本(P<0.05),HMGA2 mRNA在食管癌中的表达明显高于其对照样本(P<0.05)。miR-497-5p和HMGA2的表达成负相关,miR-497-5p对靶基因HMGA2具有直接调控作用。miR-497-5p mimic组细胞的迁移和侵袭能力明显低于阴性对照(NC)组(P<0.001);而miR-497-5p mimic+HMGA2组细胞的迁移和侵袭能力与miR-497-5p mimic组相比明显上升(P&l...     

LncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探究lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 通过在线生物软件分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库比较lncRNA NBAT1在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达量。RT-qPCR方法比较正常细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-453中lncRNA NBAT1的表达水平。生物信息学预测lncRNA NBAT1、miR-3664-5p、Caspase 9三者之间关系,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞株,RT-qPCR检测转染后lncRNA NBAT1的表达,qPCR检测miR-3664-5的表达,Western blot检测Caspase 9的蛋白表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,观察mimics miR-3664-5p对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生的缓解效应。结果 TCGA数据库分析发现,lncRNA NBAT1在乳腺癌组织中的表达量显著低于正常组织(P＜0.001);qPCR检测发现lncRNA NBAT1在正常细胞株MCF-10A细胞中表达量最高(P＜0.001),MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中表达量比MCF-10A细胞低(P＜0.001),MCF-7细胞表达量最低(P＜0.001);通过生物信息学预测lncRNA NBAT1可以吸附miR-3664-5p,Caspase 9是miR-3664-5p的靶基因,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌细胞株MCF-7,qRT-PCR检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组LncRNA NBAT1的表达增高(P＜0.001),miR-3664-5的表达降低(P＜0.001),Western blot检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组Caspase 9的表达增高(P＜0.001)。CCK-8和克隆形成实验发现pc-NBAT1组比pc-NC组细胞的增殖能力降低(P＜0.001);同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,发现mimics miR-3664-5p能够对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生缓解效应(P＜0.001)。结论 lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌治疗提供新的潜在靶点。     

乳腺癌患者组织中miR-6861-5p的表达及临床意义

目的:研究乳腺癌患者组织中微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）的表达水平及临床意义。方法:完全随机选取本院2013年7月至2017年7月住院患者乳腺癌组织139例、良性病变组织101例及癌旁组织79例,实时定量PCR检测miR-6861-5p表达水平并分析乳腺癌组织miR-6861-5p的表达与临床病理特征的相关性。以43例完成随访患者治疗前miR-6861-5p表达量的中位数,将其分为miR-6861-5p高表达组（24例）和低表达组（19例）,Log-rank单因素分析比较两组患者的生存期差异。结果:乳腺癌组织中miR-6861-5p的RNA表达水平（9.242±3.188）显著高于良性病变组织（7.224±3.249）（P<0.01）及癌旁组织（7.221±2.594）（P<0.01）,其表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移情况及激素受体表达相关（P<0.05）;miR-6861-5p在Luminal B-like型的表达量（10.910±2.386）显著高于TNBC亚型（7.605±2.565）（P<0.001）;miR-6861-5p高表达组的3年生存率低于miR-6861-5p低表达组（P=0.023）。结论:乳腺癌组织中miR-6861-5p的表达水平显著增高,是乳腺癌疾病进展、淋巴结转移及分子分型的潜在生物标志物。     

血清miR-129-5p水平与HER-2阳性晚期乳腺癌患者曲妥珠单抗敏感性的相关性分析

目的:探索HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗敏感性的预测价值。方法:入组HER-2阳性晚期乳腺癌患者107例,均接受曲妥珠单抗靶向治疗,依据实体瘤疗效评价标准（RECIST 1.0）将患者分为曲妥珠单抗敏感组（76例）和曲妥珠单抗耐药组（31例）,实时荧光定量PCR法检测初次曲妥珠单抗治疗前患者血清miR-129-5p水平,并与同期35名健康体检女性人群的血清miR-129-5p水平比较;分析患者的血清miR-129-5p水平与其临床病理特征的关系;使用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）确定患者血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗治疗敏感性的预测价值和其阈值。结果:曲妥珠单抗敏感组患者的血清miR-129-5p水平显著低于健康对照组（0.627±0.058 vs 1.027±0.129,P=0.001）,而曲妥珠单抗耐药组患者的血清miR-129-5p水平显著低于敏感组患者（0.276±0.031 vs 0.627±0.058,P=0.002）。HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平与年龄、月经情况、ECOG评分、肿瘤转移部位均无关,但与组织学分级及肿瘤转移部位数量有关,I-II级患者的miR-129-5p水平显著低于III级患者,有一个或两个肿瘤转移部位的患者的血清miR-129-5p水平显著低于有三个或以上肿瘤转移部位的患者,差异有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线分析表明患者的血清miR-129-5p水平对区分曲妥珠单抗敏感与耐药患者的阈值为0.43,灵敏度为0.89,特异度为0.72,且曲妥珠单抗耐药组患者血清miR-129-5p≤0.43的患者比例显著高于敏感组患者（71.0% vs 26.3 %,P＜0.05）。结论:HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平可有效预测其对曲妥珠单抗的疗效,有望成为预测患者曲妥珠单抗疗效的有效生物标记物。     

miR-145-5p靶向TAGLN2调控结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的机制探讨

目的:探究微小RNA-145-5p（miR-145-5p）在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其靶向调控肌动蛋白凝胶蛋白2（TAGLN2）对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术对48例结直肠癌患者癌组织、配对癌旁组织、结直肠癌细胞株（HCT8、SW620、HCT116、HT-29）及结直肠黏膜细胞FHC中的miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达进行定量分析。将SW620细胞设为空白对照组、miR-145-5p mimics组、mimics-NC组、pcDNA3.1-TAGLN2组、pcDNA3.1-Vector组和miR-145-5p mimics+pcDNA3.1-TAGLN2组,采用qPCR检测miR-145-5p和TAGLN2 mRNA表达,采用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力,采用免疫印迹法（Western blot）检测TAGLN2蛋白及EMT相关蛋白表达,采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TAGLN2间的靶向关系。结果:miR-145-5p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）,并与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）;TAGLN2在结直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,并与miR-145-5p表达呈负相关（P<0.05）;miR-145-5p和TAGLN2在结直肠癌HCT8、SW620、HCT116和HT-29细胞中的表达水平显著低于或高于FHC细胞（均P<0.05）。miR-145-5p过表达可降低SW620细胞的侵袭和迁移能力。miR-145-5p靶向调控TAGLN2表达,单独转染TAGLN2阳性质粒可增加SW620细胞的侵袭和迁移能力,与miR-145-5p mimics同时转染后,TAGLN2蛋白、波形蛋白（Vimentin）和神经钙黏素（N-cadherin）表达降低,上皮钙黏素（E-cadherin）表达升高,TAGLN2对SW620细胞侵袭和迁移能力的增强作用被显著抑制。结论:miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达状态,其表达水平与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,miR-145-5p靶向调控TAGLN2抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。     

结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达变化对多药耐药的影响

目的:探讨人结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达发生变化后对P-gp和MRP的影响。方法:采用Western Blot和qRT-PCR法检测人结肠癌细胞分别转染miR-145-5p mimics/inhibitor、miR-143-3p mimics/inhibitor后P-gp 和MRP的表达。结果:转染miR-145-5p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,转染miR-145-5p inhibitor后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-145-5p mimics NC和miR-145-5p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。转染miR-143-3p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,miR-143-3p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。结论:miR-145-5p及miR-143-3p对多药耐药蛋白P-gp、MRP具有调控作用,参与了结肠癌的多药耐药。     

lncRNA H19靶向miR-106a-5p调控乳腺癌细胞放射敏感性的分子机制

目的:研究lncRNA H19对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测MCF-7细胞中H19、miR-106a-5p的表达;将si-NC组（转染si-con）、si-H19组（转染si-H19）、si-H19+anti-miR-NC组（si-H19和anti-miR-NC共转染）、si-H19+anti-miR-106a-5p组（si-H19和anti-miR-106a-5p共转染）,均用脂质体转染至MCF-7细胞,再用4 Gy放射照射;MTT法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与对照组相比,放射照射组（IR）MCF-7细胞中H19显著降低,miR-106a-5p显著升高（P＜0.05）;敲减H19、过表达miR-106a-5p均可抑制MCF-7细胞增殖并促进凋亡,增强细胞的放射敏感性;H19靶向miR-106a-5p。抑制miR-106a-5p可逆转敲减H19对MCF-7细胞放射敏感性的增强作用。结论:敲减H19可抑制乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,增强放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向miR-106a-5p有关,可为提高乳腺癌的放射敏感性提供新靶点。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。