PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响简

 目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制。方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化。2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性髓系白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P<0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P<0.05)。以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P<0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平负相关,转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低4.80、5.88、5.72倍,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平分别降低26.0、5.23、2.86、4.76倍。结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭。     

MicroRNA-26a的表达对急性髓系白血病细胞增殖的影响

目的观察构建has-miR-26a重组慢病毒的表达载体对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响。方法构建人MicroRNA-26a慢病毒表达载体(LV-miR-26a-GFP)并感染人急性髓系白血病细胞系NB4;分为未感染组、感染组(感染LV-miR-26a-GFP)以及阴性对照组(感染LV-GFP);用real-time RT-PCR检测miR-26a在NB4细胞内的表达水平,Western blot检测PTEN的表达;用CCK-8法绘制细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖。结果成功构建miR-26a重组慢病毒的表达载体,感染白血病细胞NB4后,能够成功过表达miR-26a。生长曲线的结果显示与感染LV-GFP阴性对照组和未感染组相比,LV-miR-26a-GFP感染组细胞的增殖速度显著增加(P<0.01),软琼脂克隆形成实验证实了感染LV-miR-26a-GFP的NB4细胞的克隆形成能力(GFP+克隆数为75+10)与阴性对照组(感染LV-GFP)相比(GFP+克隆数为26+5)显著增强(P<0.05)。在NB4细胞中过表达miR-26a后,其靶基因PTEN的表达明显被抑制。结论 MicroRNA-26a的表达可增强急性髓系白血病细胞的增殖能力,促进白血病细胞的增殖。     

CoCl2对胰腺癌PC-3细胞系VEGF表达的影响

资料表明,多种肿瘤中存在着VEGF的过度表达,并且其与多种肿瘤的恶性程度及预后不良密切相关。肿瘤细胞的迅速增殖所造成的局部氧分压和pH值的改变,可能对促进VEGF等血管生成因子的分泌,启动新生血管生成发挥着重要作用。本实验的目的就在于通过CoCl2诱导肿瘤细胞低氧环境,观寨缺氧对细胞VEGF表达的影响。     

急性髓系白血病淋系抗原的表达及其意义

<正>自1993年以来,我们用单克隆抗体(McAb)对40例急性髓系白血病(AML)的白血病细胞免疫表型进行了检测.1 材料和方法1.1 病例和标本 40例AML均系我院住院患者,都为初发病例;男性21例,女性19例;年龄13～71岁;按FAB分型标准,M_16例,M_2.9例,M_39例,M_47例,M_5 9例.检测标本多数为化疗开始前抽取的骨髓,少数为外周血.1.2 检测方法 间接免疫荧光法,荧光阳性细胞≥0.20作为阳性指标.实验中采用的McAb有:CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD41b、HLA-DR、μ、SmIg等.McAb分别购自军事医学科学院和中国医学科学院血液学研究所.     

波动性葡萄糖对胰岛细胞凋亡及PTEN表达的影响

目的:研究细胞凋亡是否与PTEN表达升高相关,并探讨PTEN表达升高是否通过活性氧簇(ROS)进行调控。方法:细胞分为5组:恒定低糖组(L组)、恒定高糖组(H组)、葡萄糖波动组(F组)、高糖后低糖组(HL组)及波动后低糖组(FL组)。检测各组ROS水平、细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度、胰岛素水平和PTEN蛋白的表达。结果:F组较H、L组钙离子浓度升高,胰岛素分泌减少,ROS水平升高,PTEN蛋白表达增加,细胞凋亡增多(P0.05)。HL组较H组钙离子浓度、ROS水平、PTEN蛋白表达和凋亡率有所下降,但仍高于L组(P0.05)。FL组较F组钙离子浓度、ROS水平、PTEN蛋白表达和凋亡率有所下降,但仍高于低糖组(P0.05)。结论:波动性葡萄糖较恒定高糖更易导致胰岛细胞凋亡,可能与细胞内钙离子浓度变化,加重氧化应激促进PTEN表达增加有关。葡萄糖浓度恢复可一定程度解除氧化应激,使PTEN表达减少,细胞损伤减轻。     

NGAL对慢性髓系白血病细胞伊马替尼耐药的影响

<正>目的:研究lipocalin家族成员NGAL对慢性髓系白血病细胞伊马替尼(imatinib)耐药性的影响及其机制。方法:构建针对NGAL的慢病毒干扰载体,建立稳定干扰NGAL的细胞系。MTT法检测细胞活力。Hoechst 33258染色和流式细胞术检测imatinib诱导的细胞凋亡。结果:NGAL的干扰载体成功降低了白血病K562/G01细胞系中NGAL的表达。Hoechst 33258染色和     

急性髓系白血病细胞条件培养液对间充质干细胞的生物学影响

背景：目前,关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变,并探讨急性髓系白血病细胞条件培养液在其中的作用。方法：从GEO数据集中筛选差异基因进行富集分析,并构建蛋白质互作网络和获取Hub基因。培养急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞,使用急性髓系白血病细胞条件培养液处理健康供者的骨髓间充质干细胞,对各组细胞进行成脂诱导分化、成骨诱导分化、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期检测和Hub基因的验证。结果与结论：(1)从GSE84881中获取急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞基因表达数据,筛选出184个上调基因和140个下调基因。(2)富集的生物学功能主要包括细胞周期、脂肪细胞分化、细胞代谢过程和MYC通路。根据Degree算法筛选出上调的10个Hub基因和下调的10个Hub基因。(3)通过体外细胞实验发现,与健康供者的骨髓间充质干细胞相比,急性髓系白血病患者骨髓间充质干细胞表面抗原未发生改变,但其成脂分化能力增强、成骨分化能力减弱、β-半乳糖苷酶阳性...     

人反义VEGF基因对肾癌细胞VEGF表达的影响

目的：构建反义VEGF基因真核表达载体，研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响。 方法： 克隆人VEGF基因，将反义VEGF基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)真核表达载体，酶切鉴定；转染人肾癌细胞，G418筛选阳性克隆。RT-PCR方法检测VEGFmRNA的表达，免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达，MTT法测细胞生长，流式细胞术检测细胞周期。 结果： 成功构建反义VEGF基因真核表达载体；反义 VEGF组VEGFmRNA的表达受到抑制，明显低于空载体组和对照组VEGFmRNA的表达,空载体组VEGFmRNA的表达没有受到影响；反义 VEGF组的VEGF蛋白表达明显低于空载体组和对照组，空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异；反义 VEGF组细胞生长减慢，G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少。 结论： 人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达，抑制肾癌细胞生长，为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。     

PD-L1在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的 探究程序性死亡分子1配体-1（PD-L1）在急性髓系白血病（AML）中的表达作用和临床意义。方法 选取2013年1月~2016年12月在我院进行治疗并确诊为AML的初治患者49例为观察组,选择同期在我院接受治疗的27例非恶性疾病如缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血者作为对照组。对比两组患者血液中的PD-L1表达水平,分析患者性别、年龄、初诊白细胞计数、亚型的对血液中PD-L1的影响,确定PD-L1表达与临床疗效的相关性。结果 对照组患者治疗前的PD-L1表达与观察组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后,观察组的PD-L1表达高于对照组,统计学意义显著（P＜0.01）。单因素结果显示,PD-L1在AML初诊患者中的表达水平与患者的性别、年龄、初诊WBC数、分型无相关性（P＞0.05）;未缓解AML患者组PD-L1表达水平高于持续完全缓解组AML患者（P＜0.01）。结论 PD-L1可能参与AML的免疫逃逸机制,并可能与病情进展及治疗效果相关。     

MicroRNA-3666调节白血病细胞PTEN基因的表达*

 目的： 探讨白血病细胞中microRNA-3666（miR-3666）对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因（PTEN)表达的调控作用。方法: qRT-PCR检测miR-3666在正常人外周血单个核细胞、不同类型白血病细胞系以及临床初诊未治的不同类型白血病细胞中的表达差异,利用TargetScan在线分析软件预测miR-3666潜在靶基因PTEN后,构建含有靶基因野生型3’端非翻译区域(3’UTR)及突变型3’UTR（缺失了整段预测的miR-3666结合序列）的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-3666 模拟体或阴性对照,共转染HEK293T 细胞,应用双萤光素酶检测试剂盒测定萤光素酶活性。FAM标记的miR-3666抑制体和阴性对照分别核转染至K562 细胞,FACS检测转染效率,并采用 Western blotting检测PTEN蛋白的表达。结果: miR-3666 在人白血病细胞系及原代白血病细胞中的表达明显高于正常人外周血单个核细胞,尤其高表达于K562细胞系及原代慢性粒细胞白血病细胞中;双萤光素酶报告基因测定系统验证PTEN是miR-3666的潜在靶基因;K562细胞中下调miR-3666后,Western blotting检测结果显示PTEN蛋白显著上调。结论: 白血病细胞中miR-3666 的表达上调,下调miR-3666后可以促进靶基因PTEN 的表达,miR-3666 有可能成为白血病治疗的新靶点。     

阿糖胞苷对姜黄素诱导的人急性髓系白血病细胞自噬的影响

目的:观察化疗药物阿糖胞苷作用下姜黄素是否诱导人急性髓系白血病KG1a细胞产生自噬及可能的机制。方法:体外培养KG1a细胞,透射电镜观察不用药物处理后细胞超微结构的变化;用吖啶橙染色检测细胞内酸性自噬泡的变化;MTT法检测细胞活力变化;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-qPCR和Western blot检测自噬相关因子beclin-1和LC3 mRNA及蛋白的表达。结果:姜黄素对KG1a细胞的活力有明显抑制作用(P0.05),且呈剂量依赖关系,姜黄素联合阿糖胞苷组细胞活力抑制率明显高于单药组,且两组均高于对照组(P0.01)。电镜结果显示姜黄素能诱导细胞自噬小体的产生,阿糖胞苷能使姜黄素诱导的自噬小体增加。吖啶橙染色发现联合用药组能提高姜黄素诱导的细胞自噬,细胞内酸性自噬泡及含有自噬泡的细胞数均增加。细胞周期结果显示细胞主要被阻滞在G_0/G_1期。RT-qPCR结果显示联合用药组beclin-1和LC3的mRNA表达水平均比单药组及对照组明显升高(P0.01);Western blot结果显示联合用药组比单药组beclin-1的蛋白表达明显上调(P0.05),LC3-II/LC3-I的比值升高。结论:姜黄素能抑制KG1a细胞活力并诱导细胞发生自噬,阿糖胞苷能促进姜黄素诱导的细胞自噬,作用优于姜黄素单用组,可能与两药联合上调beclin-1和LC3-Ⅱ的表达有关。     

髓系白血病患者的临床和细胞遗传学研究

目的研究髓系白血病(myeloid leukemia,ML)患者细胞遗传学特点和相关临床表现及预后。方法采用骨髓细胞直接法和(或)不加植物血凝素的24h体外细胞培养法制备骨髓染色体。应用热变性姬姆萨显带技术为主、胰酶消化技术必要时补充,进行染色体核型分析。结果在578例髓系白血病中:急性髓系白血病(acute myeloid leuckemia,AML)420例,223例检出有克隆性染色体异常,占53.1%(223/420)。t(8;21)、t(15;17)、inv(16)、del(11)分别与M2b、M3、M4Eo、M5特异性相关。慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)158例,153例检出有克隆性染色体异常,占96.8%(153/158例)。t(9;22)与绝大多数CML及少部分M0、M1、M2特异性有关。本组髓系白血病中有18例(AML13例、CML5例)患者,占3.1%(18/578),其细胞遗传学检查未见克隆性染色体异常,与患者的临床表现、骨髓象形态学及免疫学的诊断不尽相同。为此我们应用了荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,其中15例结果完全符合临床和髓系白血病的血液学改变,同时也明显提高了临床的诊断率。结论染色体核型分析不但有助于髓系白血病的诊断和鉴别诊断,而且还是临床监测病情缓解和复发、判断疗效的重要指标。在染色体核型分析基础上选用合适的FISH技术,可对大多数髓系白血病患者作出精确的染色体分析。     

RNAi对B系淋巴瘤Namalwa细胞中VEGF表达和增殖的影响

目的 应用RNA干扰 (RNA interference,RNAi) 技术抑制VEGF的表达,观察其对B系淋巴瘤细胞株Namalwa生物学行为的影响.方法 设计3条针对人VEGF mRNA的siRNA序列,经脂质体转染至Namalwa细胞.采用RT-PCR、Western blot法检测转染后Namalwa细胞VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 siRNA-2组VEGF mRNA及其蛋白的表达明显减少(P<0.01),siRNA-2组细胞体外增殖能力减弱(P<0.05).结论 RNAi技术可明显抑制Namalwa细胞VEGF的表达及细胞的体外增殖.     

慢性髓系白血病细胞遗传学检查的临床意义分析

目的　探讨慢性髓系白血病 (CML)患者细胞遗传学改变与疾病的诊断、分期、分险率分组之间的关系。材料与方法　 15 5例CML患者按《血液病诊断及疗效标准》及Sokal危险指数进行分期分组 ,骨髓短期培训常规G显带后进行核型分析。结果　 15 5例CML患者中 ,14 8例Ph(+) ,占 95 5 % ,Ph(- )患者 7例 (4 5 % ) ,其中 4例Ph(- ) /bcr -abl(+) ,3例Ph(- ) /bcr-abl(- )。慢性期患者中 2 1例 (15 6 % )发生附加染色体畸变 ,主要有 +8(5例 ) ,+Ph(4例 ) ,+19(2例 ) ,-Y(2例 ) ,1q - (2例 )等 ;附加染色体畸变率高危组 >中危组 >低危组。加速期和急变期患者中 14例 (70 % )有附加染色体数量和 /或结构异常。结论　慢性期CML是一组高度异质性疾病 ,附加染色体畸变频率与疾病的风险度正相关 ,是判断疾病预后的有用参数。加速期、急变期CML多伴有非随机的附加染色体异常 ,这些染色体的出现可作为预后评估的指标。     

急性髓系白血病细胞遗传学的分型诊断意义

为探讨细胞遗传学在急性髓系白血病（ＡＭＬ）分型诊断中的意义，回顾性分析了１６７例原发性初诊ＡＭＬ患者的核型与ＡＭＬ亚型之间的关系。结果表明：６７．７％的患者有克隆性染色体异常，ｔ（８；２１）、ｔ（１５；１７）、ｉｎｖ（１６）／ｄｅｌ（１６）分别与Ｍ２ｂ、Ｍ３、Ｍ４Ｅｏ特异性相关，１１号染色体异常常见于Ｍ４、Ｍ５。细胞遗传学可作为ＡＭＬ亚型的分型诊断手段之一。     

CD7阳性急性髓系白血病细胞遗传学及临床特征

CD7抗原为一相对分子质量为 4 .0× 10 4的单链糖蛋白 ,通常表达于胸腺细胞、原始或幼稚 T淋巴细胞及多数成熟 T淋巴细胞 ,在免疫分型中被作为 T细胞系的早期标志。但近来研究认为除了 T细胞外 ,具有多项分化潜能的造血干细胞也表达此抗原。我们分析 2 1例 CD7阳性急性髓系白血病 (acutemyeloid leukaemia,AML )的资料 ,旨在探讨其临床特点与细胞遗传学特征。1　对象与方法1.1　病例　 2 1例病例均为本院 1999年至 2 0 0 3年住院患者 ,按 FAB分型标准 ,确定其白血病类型为 M0 3例 ,M1 3例 ,M2 a3例 ,M31例 ,M55例 ,慢粒急变转 M6 3…     

沉默CSE1L对急性髓系白血病细胞阿糖胞苷敏感性的影响及作用机制研究

目的：探讨敲减染色体分离1样蛋白(CSE1L)对急性髓系白血病细胞株THP-1细胞生物学行为及阿糖胞苷(Ara-C)敏感性的影响,并分析相关作用机制。方法：采用RT-qPCR法检测CSE1L的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞周期及凋亡水平,LinkedOmics及DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,Western blot法检测细胞周期素D1(cyclin D1)、原癌基因c-Myc、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的相对表达水平。结果：与对照组相比,空载(sh-NC)组及敲减(sh-CSE1L)组标记绿色荧光蛋白(GFP)的THP-1细胞占比均>90%。与空载组相比,敲减组CSE1L的mRNA相对表达量降低至40%,凋亡率显著升高(P<0.01)。敲减组比空载组G₀/G₁期细胞占比升高(P<0.05),S期细胞占比降低(P<0.05),而G...     

髓细胞白血病患者AMLR及单核细胞Ia抗原表达的改变

T细胞在自身非T细胞刺激下发生增殖反应称为自身混合淋巴细胞反应(AMLR)。它反映机体免疫系统内的功能调节机制。本文以氚标胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入的淋巴细胞转化试验测定单核细胞(Mon)刺激自身T细胞的增殖反应;用单克隆抗体(McAb)Tu22、Tu36和 Anti-Leu-M,通过间接免疫荧光技术测定 Mon表面 HLA-Ⅱ类抗原的表达,分析急、慢性髓细胞白血病(AML 和CML)患者 AMLR 的改变及其机理。结果表明,与 HLA 全相同的同胞比较,患者 AMLR 明显减弱(p<0.001);患者Tu22~+(HLA-DQ~+)Mon 百分率明显下降(p<0.001),但Tu36~+(HLA-DR~+)Mon 百分率无明显改变(P>0.05)。提示髓细胞白血病患者 AMLR改变与刺激细胞(Mon)表面HLA-DQ 抗原表达障碍有关。