赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响简

 目的 研究赖氨大黄酸（RHL）、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法 肺癌细胞株A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot 法检测细胞48h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果 细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P<0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P<0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

乙莫克舍增强顺铂对肺癌细胞系A549的抑制作用

目的探讨化学药物顺铂与肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)小分子抑制剂乙莫克舍(etomoxir)对肿瘤细胞增殖及迁移的影响。方法分别用顺铂(7.5μmol/L)、etomoxir(75μmol/L)及顺铂联用etomoxir处理人非小细胞肺癌细胞系A549 72 h,CCK8检测A549的增殖作用;Transwell细胞迁移实验检测A549的迁移能力;annexin V/PI检测A549细胞凋亡;用etomoxir和顺铂联合治疗,裸鼠皮下成瘤模型检测该种联合治疗方法对肿瘤生长的影响。结果顺铂联用etomoxir后,肿瘤细胞生长及迁移能力受到明显抑制(P0.05),并且肿瘤细胞的凋亡有明显增加(P0.05);另外顺铂联用etomoxir治疗后,小鼠肿瘤的生长受到明显抑制(P0.05)。结论顺铂联用etomoxir可以降低肿瘤细胞增殖能力,增强肿瘤细胞凋亡,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,进而抑制肿瘤在裸鼠体内的生长。     

Erastin诱导人非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的 探讨爱拉斯汀(erastin)对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的诱导作用及机制.方法 不同浓度的erastin处理A549细胞,加入/不加入活性氧集团(ROS)清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC),加入/不加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK);试剂盒检测细胞铁含量;CCK-8法和流式细胞测量术检测细胞损伤和凋...     

顺铂和电子线照射对人肺癌细胞凋亡的影响

探讨单纯照射和单纯顺铂以及照射联合顺铂对肺癌细胞凋亡的影响。应用细胞培养技术,分别采用单纯照射,单纯顺铂,照射联合顺铂用于人肺癌细胞SPC—A4细胞,通过荧光染色法、DNA凝胶电泳分析等检测方法观察其诱导凋亡的差异。并进行量化以比较3种方法诱导细胞凋亡效果差异的程度。结果表明,顺铂组、照射组、顺铂联合照射组,DNA琼脂糖凝胶电泳及裂解显示凋亡发生。荧光染色法细胞凋亡的定性观察、定量分析表明,顺铂诱导的细胞凋亡呈时间依赖性,照射组中以6Gy和8Gy照射12h的凋亡率最高,在24h时凋亡率反而下降,顺铂联合照射与单纯照射及单纯顺铂相比,在对应时间段相比凋亡率前者明显高于后两者（P〈0．001）。结果表明,单纯顺铂和单纯照射及顺铂联合照射均能诱导肺癌细胞凋亡,顺铂联合照射诱导肺癌细胞的凋亡率明显高于单纯顺铂及单纯照射。     

桂皮酸联合顺铂对人肝癌MHCC97细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 目的： 探讨桂皮酸（cinnamic acid,CA）联合顺铂（cisplatin）对人肝癌细胞株MHCC97的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法：以人肝癌细胞株MHCC97为研究对象,分为正常对照组、CA组、cisplatin组和CA+cisplatin组。采用MTT比色法检测细胞活性,倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,膜联蛋白V/碘化丙啶双染流式细胞术定量检测细胞凋亡率, Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3的活化。结果：CA单用或与cisplatin联用对正常人肝细胞L-02未见明显抑制作用,但两药单用或联用可明显抑制肝癌细胞MHCC97的增殖并诱导其凋亡。CA单用或与cisplatin联合作用于MHCC97细胞,其早期凋亡率比cisplatin组高,而中晚期凋亡及坏死率却相反。联用组在低浓度时具有很好的促凋亡作用,其促凋亡活力强于CA或cisplatin单用组,且联用可起到显著减毒增效的作用。 CA和cisplatin单用或联用均可促进caspase-3蛋白的活化,具有时间正效应,且CA组和联合组的cleaved caspase-3蛋白表达量高于cisplatin组。结论：CA和cisplatin联合应用或单用均能有效抑制MHCC97细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与激活caspase-3表达有关。     

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制。方法30、60、120、240和480μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,30~480μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P<0.05)。Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高。凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。     

肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的研究

目的研究FAK调节肺癌细胞系A549抗失巢凋亡的功能和信号通路。方法应用光镜观察,Hoechst33342染核、电镜、Western印迹、RNA干涉技术、P13K的抑制剂,对FAK调节肺癌细胞A549抗失巢凋亡的功能和信号通路进行研究。结果发现肺癌细胞系A549具有抗失巢凋亡的能力;A549细胞悬浮培养时,FAKtyr-397／861／925的活性随时间的延长逐渐增加后降低,磷酸化的P13K和AKT表现出与其一致的活性变化;通过RNA干涉实验发现干涉组比对照组细胞出现明显的凋亡现象,同时P13K／AKT的磷酸化水平下降;P13K的抑制剂组比对照组出现更多的凋亡细胞。结论FAK在肺癌细胞A549抗失巢凋亡中发挥了重要作用,其抗失巢凋亡的机制是通过激活下游P13K／AKT通路来实现的。     

蛋氨酸脑啡肽联合紫杉醇对肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋氨酸脑啡肽(MENK)联合紫杉醇(PTX)对肺癌细胞A549的增殖和凋亡影响。方法:CCK-8法检测各实验组对细胞增殖的抑制作用;利用中效原理对药物联合应用的效应进行评价;Hoechst33258荧光染色实验观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率。结果:MENK和PTX均能抑制A549细胞的增殖,并且MENK联合PTX组抑制率高于单独用药组;在整个效应范围中,MENK与PTX的药物合用指数(CI)1,两药联合应用效应为协同作用;Hoechst33258荧光实验发现,MENK与PTX组均出现凋亡形态学变化,MENK联合PTX组细胞凋亡数量最多;流式细胞术检测空白对照组、MENK组、PTX组、MENK联合PTX组的细胞凋亡率分别是1.53%、6.23%、6.04%、13.22%,联合用药组的细胞凋亡率明显高于单独用药组。结论:MENK与PTX均能抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡,两药联合应用具有协同作用,显著增强抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的能力。     

赖氨大黄酸通过激活JNK诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白及JNK蛋白与蛋白磷酸化水平。结果 RHL能有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并能诱导其凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够激活caspase-3、caspase-7和PARP,并激活磷酸化的JNK表达,磷酸化的JNK表达增加在RHL的诱导凋亡中起主要作用。结论 RHL通过激活JNK-caspase-PARP信号通路抑制HeLa细胞增殖,并诱导其凋亡,赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的问题,有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。     

刚地弓形虫培养上清抑制肺癌A549细胞系增殖

目的研究刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)培养上清对体外培养的肺癌细胞A549增殖及细胞周期的影响。方法取对数生长期的A549细胞(浓度为5×104mL-1)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(4×107mL-1、8×107mL-1、16×107mL-1)弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值);PI染色后检测细胞周期;以Western blot检测细胞周期蛋白cyclinB1、cdc2表达或活性。结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制A549细胞系增殖,处理组细胞周期在G2/M期产生阻滞;A549细胞系的cyclinB1、cdc2蛋白表达量下降。结论刚地弓形虫培养上清能够抑制肺癌A549细胞系增殖,并通过调节cyclinB1、cdc2等蛋白表达或活性改变引起肺癌A549细胞系G2/M期阻滞。     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响

BACKGROUND: Studies have found that realgar has anti-tumor effect, but its effect on proliferation, apoptosis and migration of A549 lung cancer cells is rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of nano-realgar on A549 lung cancer cell proliferation, apoptosis and migration. METHODS: Cultured A549 lung cancer cells were seeded onto 6-well culture plates containing 100 mg/L nano-realgar (experimental group) or normal saline (control group). Cell growth was observed under microscope for 48 hours. Cell proliferation and apoptosis were detected using MTT assay (24, 48, 72 hours of culture) and flow cytometry (24 and 48 hours of culture), respectively. Integrin β1 and cadherin expression was detected using immunohistochemical method at 24 hours of culture. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Cell growth. In the experimental group, shrunk cells that were round or oval-shaped were scattered, and cell number was reduced. In the control group, adherent cells characterized by big size, abundant cytoplasm and fusiform shape grew vigorously. Moreover, some cells were fused into pieces. (2) Cell proliferation. The absorbance values of cells were significantly lower in the experimental group than the control group at different time (P < 0.05), while the cell growth inhibition ratio was higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (3) Cell apoptosis. The end-stage apoptotic rate and total apoptotic rate of cells were both higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (4) Immunohistochemical detection. The A549 cell surface integrin β1 and cadherin positive densities were significantly lower in the experimental group than the control group (P < 0.05). Taken together, the nano-realgar can inhibit the proliferation, invasion and metastasis, and induce apoptosis in A549 cells.     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

松油烯4醇体内外对人肺癌细胞系A-549增殖抑制作用

目的探讨松油烯4醇体内外对人肺癌细胞系A-549增殖抑制作用及其可能机制。方法不同浓度松油烯4醇作用于A-549细胞24 h后,应用MTT法检测抑制率及IC50;CCK-8比色分析法绘制不同浓度下的生长曲线;透射电镜观察药物作用后细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、细胞内Ca2+浓度变化;将A-549细胞移植瘤裸鼠分为对照组、低剂量组、高剂量组药物连续腹腔注射10 d后分别测量各组移植瘤体积和重量,观察药物的体内抗肿瘤作用。结果 A-549细胞24 h的IC50为0.067%v/v;CCK-8实验结果表明给药组生长曲线明显较对照组平缓,并与给药剂量呈显著相关性;电镜观察可见经松油烯4醇处理的A549细胞内自噬泡数量明显增加。FCM检测周期显示S期阻滞;检测显示细胞凋亡率明显增加,凋亡率呈现浓度-效应关系;各药物干预组A-549细胞内Ca2+荧光强度均明显高于对照组(P0.05)。体内实验显示各实验组经松油烯4醇治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组(P0.05),高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为77.6%和53.3%。结论松油烯4醇在体外能抑制A-549细胞的增殖。     

熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

目的 探讨熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养A549细胞,分别以0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L熊果酸处理48h后,平板克隆实验与MTT实验检测肺癌A549细胞的增殖能力;流式细胞术检测肺癌A549细胞的凋亡率;Transwell实验检测A549...     

腹腔热灌注与顺铂联用增加人卵巢癌细胞系凋亡

目的研究腹腔热灌注(HIPE)和顺铂对人卵巢癌细胞凋亡的影响。方法将人卵巢癌OVCAR-3和A2780细胞各分为对照组、顺铂组、热疗组和热化疗组;显微镜观察卵巢癌细胞形态;AO/GV染色、流式细胞仪检测卵巢癌细胞凋亡细胞比率;荧光定量PCR(q-PCR)检测卵巢癌细胞凋亡相关基因caspase7、caspase9和Bid等。结果 1)顺铂组、热疗组及热化疗组卵巢癌细胞回缩,部分漂浮,其中热化疗组细胞变化最明显;2)顺铂组、热疗组及热化疗组较对照组凋亡细胞增多,其中热化疗组凋亡细胞数量最多(P0.05);3)顺铂组、热疗组、热化疗组较对照组凋亡细胞比率增多,热化疗组凋亡细胞比率最大(P0.05);4)促凋亡相关基因caspase3、caspase6、caspase7、caspase8、caspase9、Bax、Bak和Bid在热化疗组表达明显高于其他各组,凋亡抑制相关基因Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1和c-FLIP表达较其他各组明显下降。结论顺铂和热疗可促进卵巢癌细胞凋亡,且热化疗联合作用效果最明显。     

曲古柳菌素A对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:检测不同浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂古曲柳菌素A(TSA)对A549细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨TSA抑制A549肺癌细胞的分子机制.方法:以流式细胞术分析,Annexin V/PI 法,免疫印迹研究 TSA 对A549 细胞的细胞周期、凋亡及Bax蛋白水平变化的影响.结果:TSA处理后,100nmol/L和400nmol/L引起细胞G0/G1及G2/M期阻滞.Annexin V/PI法显示TSA可诱导细胞凋亡.Bax蛋白的表达随着TSA浓度的增高而增强.结论:不同浓度的TSA对A549细胞周期阻滞影响不同,低浓度可诱导细胞凋亡.     

腺苷2a受体抑制剂抑制人非小细胞肺癌细胞系A549增殖和迁移

目的探讨腺苷2a受体抑制剂(A2aRi)对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将细胞分为对照组及干预组,干预组予不同浓度的A2aRi处理;用MTT法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移; 24 h后,免疫荧光观察A2aR和caspase3在细胞中表达定位;用Western blot和RT-qPCR检测A2aR、caspase3蛋白和A2aR m RNA的表达。结果 A2aRi能抑制A549细胞的增殖(P0. 01),其迁移能力减弱,A2aR红色荧光强度较对照组减弱,caspase3绿色荧光强度较对照组增强,两者均在胞质中表达。Caspase3蛋白表达增加(P0. 01),A2aR蛋白表达减少(P0. 01); A2aR m RNA表达下调(P0. 05)。结论 A2aR在人非小细胞肺癌细胞系A549中高表达,A2aRi能抑制A549细胞增殖和减弱其迁移能力。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。