LncRNA GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)GABPB1-AS1调控miR-150-5p表达对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMC）纤维化的影响。方法 采用qRT-PCR法检测高糖诱导的HMC细胞中LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p表达情况,将对数期HMC细胞分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、高糖+pcDNA3.1-NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+mimic NC组、高糖+pcDNA3.1-GABPB1-AS1+miR-150-5p mimic组,培养48 h后,CCK-8法检测各组细胞增殖率;qRT-PCR法检测细胞中纤维连接蛋白（FN）、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、纤维结缔组织生长因子（CTGF）mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blot法检测FN、ICAM-1、CTGF蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-150-5p靶向...     

红枣色素通过调控miR-29b-3p/MST1表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及机制

目的探讨红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制。方法设正常对照组(NG)(5 mmol/L D-葡萄糖),高糖处理(HG)组(30 mmol/L D-葡萄糖),HG+红枣色素-低组(30 mmol/L D-葡萄糖+50 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-中组(30 mmol/L D-葡萄糖+150 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-高组(30 mmol/L D-葡萄糖+250 mg/L红枣色素);将miR-NC、miR-29b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p分别转染至未经任何处理的MPC5细胞中,记为miR-NC组,miR-29b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-29b-3p组;将miR-NC、miR-29b-3p、si-NC、si-蛋白激酶1(MST1)染至单纯30 mmol/L的D-葡萄糖处理的MPC5细胞中,记为HG+miR-NC组,HG+miR-29b-3p组、HG+si-NC组、HG+si-MST1组。将anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p转染至30 mmol/L的D-葡萄糖和250 mg/L红枣色素处理的MPC5细胞中,记为HG+红枣色素+anti-miR-NC组、HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组,均采用脂质体法。qRT-PCR检测miR-29b-3p和MST1 mRNA的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与NG组比较,HG组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,MST1 mRNA的表达水平显著升高,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,不同浓度红枣色素的高糖处理组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平逐渐显著升高,MST1 mRNA的表达水平显著降低,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.21±0.03)显著低于miR-NC组(0.42±0.04);anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.87±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.40±0.04),差异均有统计学意义(P0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著升高,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与HG+miR-NC组比较,HG+si-MST1组小鼠足细胞SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。与HG+红枣色素+anti-miR-NC组比较,HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡有保护作用,其机制可能与调控miR-29b-3p/MST1及SOD和MDA活性有关。红枣色素可作为治疗肾损伤的药物,miR-29b-3p、MST1可成为肾损伤治疗的靶点。     

METTL3/miR-126调控TGF-β1/smad2对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响

目的：探讨类甲基化转移酶3(METTL3)/miR-126对高糖（HG）诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）增殖的影响及其作用机制。方法：将NRK-52E细胞分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、HG组（35 mmol/L葡萄糖）、HG+siRNA-NC组和HG+METTL3 siRNA组。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞上清液中转化生长因子（TGF）-β1蛋白含量,RT-qPCR法检测miR-126和METTL3基因表达,western blotting检测METTL3和smad2蛋白表达,RNA免疫共沉淀技术（RIP）检测METTL3与miR-126的结合情况。结果：与对照组比较,HG组细胞增殖率和G1期细胞所占百分比降低,G2期细胞所占百分比及METTL3、TGF-β1、smad2、miR-126表达升高（P<0.05）;与HG组比较,HG+METTL3 siRNA组细胞增殖率升高,G1期细胞所占百分比降低,S期细胞所占百分比升高,METTL3、TGF-β1、smad2、miR-126表达降低（均P<...     

FGD5-AS1/miR-519d-3p轴调控高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2炎症因子表达和细胞凋亡

目的：探讨FGD5-AS1对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达、细胞凋亡的影响及其机制。方法：25 mmol/L葡萄糖诱导HK-2细胞24 h后,RT-qPCR检测细胞中FGD5-AS1和miR-519d-3p表达量。分别转染FGD5-AS1过表达载体(pcDNA-FGD5-AS1)、miR-519d-3p抑制剂或共转染pcDNA-FGD5-AS1与miR-519d-3p模拟物至HK-2细胞,用25 mmol/L葡萄糖诱导转染后的细胞24 h, ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6水平,流式细胞术、Western blotting分别检测细胞凋亡率及凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9的表达。双荧光素酶报告基因实验验证FGD5-AS1和miR-519d-3p的调控关系。结果：与对照组比较,HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中FGD5-AS1表达量明显降低(P<0.01),miR-519d-3p表达水平明显升高(P<0.01)。上调FGD5-AS1或下调miR-5...     

胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞凋亡及小窝蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡及小窝蛋白(caveolin,Cav)-1表达的影响?方法:体外培养HUVEC,分为A组(对照组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L)?B组(高糖组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L)?C组(高糖+低浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/+胰岛素浓度20 mU/L)?D组(高糖+高浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L+胰岛素浓度1 000 mU/L)?采用流式细胞仪检测细胞凋亡比例及细胞周期,免疫组化检测HUVEC的Cav-1表达?结果:在高糖条件下,HUVEC凋亡比例显著升高,停滞于G0/G1期细胞增加,Cav-1表达减少;低浓度胰岛素使细胞凋亡比例减少,Cav-1表达增加;加入高浓度胰岛素不能改变细胞凋亡比例及细胞周期,Cav-1表达亦无明显改变?结论:低浓度胰岛素可抑制高糖导致的内皮细胞凋亡,而高浓度胰岛素无此作用,其机制可能与Cav-1表达有关?     

过表达Sirt1对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响?方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),利用Sirt1重组慢病毒载体感染细胞获得过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞并分为4组:①NG+LV-CTL组:正常葡萄糖(5.5 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;②HG+ LV-CTL组:高糖(30 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;③NG+LV-Sirt1组:正常葡萄糖+Sirt1慢病毒感染;④HG+LV-Sirt1组:高糖+Sirt1慢病毒感染;再设立3组未感染细胞作为对照,分别为:①NG组(正常葡萄糖);②NM组(正常糖+甘露醇组24.5 mmol/L);③ HG组(高糖处理),培养不同时间后以CCK-8法检测细胞增殖情况;实时定PCR 和Western blot 法检测各组细胞TGF-β1 mRNA 和蛋白表达水平?结果:①通过重组慢病毒感染,嘌呤霉素筛选,获取稳定过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞系;②与NG组相比较,各时间点HG?HG+LV-CTL?HG+LV-Sirt1组CCK8的吸光值均明显升高(P均 < 0.01)?处理24?48 h后,HG+ LV-Sirt1组的吸光值明显低于HG?HG+ LV-CTL组?③与NG组相比较,HG?HG+ LV-CTL?HG+ LV-Sirt1组TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显上调,差异均有显著性(P均 < 0.01);HG+LV-Sirt1组的TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显低于HG?HG+ LV-CTL组(P均 < 0.01);而NG?NM?NG+LV-CTL及NG+LV Sirt1组间相比较,无统计学差异(P > 0.05)?结论:过表达Sirt1能够抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达,Sirt1可能成为防治糖尿病肾病的作用靶点?     

miR-155在高糖诱导足细胞损伤的表达及其与足细胞损伤相关蛋白表达的相关性

目的 探讨高糖(HG)诱导足细胞损伤中miR-155的表达变化及miR-155与足细胞损伤相关蛋白表达的关系。方法 体外培养人肾小球足细胞(AB8/13),用30 mmol/L的D-葡萄糖溶液刺激AB8/13 48 h作为HG组,同时以终浓度为5 mmol/L的D-葡萄糖溶液处理细胞48 h作为正常对照(NC)组。用CCK8法检测细胞增殖活性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin的mRNA和miR-155的表达。Western blot法检测nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin蛋白的表达。鬼笔环肽染色观察细胞骨架变化。细胞免疫荧光检测蛋白nephrin、synaptopodin。结果 HG可抑制足细胞增殖,降低细胞存活率(P<0.01)。HG作用的Ab8/13中的miR-155表达水平升高,nephrin、F-actin、synaptopodin、p-cadherin的mRNA与蛋白表达水平降低(P<0.05)。HG会导致足细胞骨架紊乱。结论 H...     

circFAM73A靶向调控miR-140-3p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移和炎症因子释放的影响

目的:探讨circFAM73A靶向调控miR-140-3p对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移和炎症因子释放的影响及作用机制。方法:将人视网膜血管内皮细胞分别采用5.5 mmol/L葡萄糖(NG组)或25 mmol/L葡萄糖(HG组)处理，在HG组分别转染si-circRNA FAM73A和miR-140-3p inhibitors后，RT-qPCR检测circRNA FAM73A、miR-140-3p、TNF-α和IL-6表达水平；流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡情况和凋亡相关分子Cleaved caspase 3的表达水平；Transwell检测细胞迁移情况；双荧光素酶报告实验与RIP检测circRNA FAM73A和miR-140-3p的靶向结合情况。结果:circFAM73A的表达水平在高糖处理人视网膜血管内皮细胞后显著升高，miR-140-3p的表达水平显著下降(均P<0.05);沉默circFAM73A能够显著抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡、迁移、炎症因子TNF-α和IL-6的释放(均P<0.05);低表达miR-140-3p能...     

高糖微环境下miR-449对人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用和机制研究

目的 探讨miR-449在高糖(HG)作用下对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其可能的作用机制。方法 将hBMSCs接种于成骨培养基培养,诱导其成骨分化。实验组：成骨培养基中加入高糖25 mmol/L,模拟高糖微环境处理。对照组：细胞维持在5 mmol/L葡萄糖的正常培养基中。采用茜素红染色、碱性磷酸酶活性测定、双荧光素酶测定、实时定量PCR(qRT-PCR)检测等方法测定以下指标：(1)miR-449在HG诱导的hBMSCs成骨分化时的表达水平;(2)miR-449模拟物和抑制物对碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨相关标志物表达的影响;(3)Sirt1和Fra-1的过表达对miR-449在HG处理的hBMSCs成骨分化标志物表达的影响。结果 (1)HG处理的实验组hBMSCs成骨分化低于对照组细胞(P<0.05),miR-449表达水平较对照组降低(P<0.05)。(2)在HG诱导的hBMSCs成骨分化过程中,miR-449模拟物可降低ALP活性(P<0.05),降低成骨标志物的mRNA表达(P<0.05);而miR-449抑制剂能提高成骨标志物...     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

普鲁卡因通过调控miR-138抑制OGD诱导的大鼠皮层神经元损伤

探讨普鲁卡因（PROC）对氧糖剥夺（OGD）诱导大鼠皮层神经元损伤的影响及可能机制。方法 体外培养大鼠皮层神经元,用不同剂量（0.00、3.50、7.00、14.00 mg/L）PROC干预大鼠皮层神经元24 h,建立OGD模型。CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测活化的半胱天冬酶（cleaved-caspase）3和cleaved-caspase9蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中miR-138表达。转染miR-138模拟物或抑制剂至大鼠皮层神经元细胞后,建立OGD模型,上述相同方法检测神经元损伤情况。结果 与对照组相比,OGD组存活率、miR-138表达降低,LDH释放率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达增加（均P＜0.05）。与OGD组比较,OGD+PROC-L组、OGD+PROC-M组和OGD+PROC-H组存活率、miR-138表达增加,LDH释放率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达降低（均P＜0.05）。过表达miR-138后,OGD诱导的大鼠皮层神经元存活率增加,LDH漏出率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达降低（均P＜0.05）。敲减miR-138可逆转PROC对OGD诱导大鼠皮层神经元损伤的影响。结论PROC可能通过上调miR-138,抑制OGD诱导的大鼠皮层神经元损伤     

lncRNA SNHG14通过miR-181c-5p/SOX6信号轴调控缺血性脑卒中神经元细胞凋亡

目的 通过IS体外模型探究lncRNA SNHG14在神经元细胞凋亡中的作用机制。方法 通过氧葡萄糖剥夺（OGD）诱导的神经元细胞损伤来模拟IS。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG14、miR-181c-5p、SOX6基因表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-3检测试剂盒测定Caspase-3活性,RNA免疫沉淀实验和萤光素酶报告分析实验验证miR-181c-5p与SNHG14、SOX6的相互作用。结果sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于sh-NC组（P <0.05）,OGD+sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于OGD+sh-NC组低（P <0.05）。OGD+sh-SNHG14组细胞活性率较OGD+sh-NC组高（P <0.05）。OGD+sh-SNHG14组细胞凋亡率、Caspase-3相对表达量较OGD+sh-NC组低（P <0.05）。miR-NC组miR-181c-5p相对表达量较miR-181c-5p mimics组低（P <0.05）,inhibitor NC组较mi...     

circPUM1靶向调控miR-144-3p对宫颈癌细胞放射抵抗的影响

目的：探讨环状RNA?pumilio?RNA结合家族成员（circPUM）1对宫颈癌细胞放射抵抗的影响及其可能的作用机制。方法：收集2019年8月至2020年2月郑州大学第二附属医院收治的47例宫颈癌患者的癌组织及其相应癌旁组织（距离癌组织5?cm处正常组织）标本。定量反转录聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中circPUM1、miR-144-3p的表达量;Pearson法分析宫颈癌组织中circPUM1与miR-144-3p表达量的相关性。将circPUM1慢病毒短发夹RNA（sh-circPUM1）及其阴性对照（sh-NC）、miR-144-3p寡核苷酸模拟物（miR-144-3p?mimic）及其阴性对照（miR-NC）、sh-circPUM1与miR-144-3p抑制物（anti-miR）、sh-circPUM1与anti-miR阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至人宫颈癌细胞SiHa,并通过0、4?Gy照射剂量照射,采用细胞计数试剂盒（CCK-8法）、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测活化的胱天蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达量;Starbase平台分析及细胞实验检测circPUM1与miR-144-3p的靶向关系。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circPUM1的表达量增加（P<0.05）,miR-144-3p的表达量减少（P<0.05）;circPUM1与miR-144-3p呈负相关（r=–0.9282,P<0.01）;转染sh-circPUM1或miR-144-3p?mimic后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平升高（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数减少（均P<0.05）;circPUM1可靶向结合miR-144-3p;共转染sh-circPUM1与anti-miR后,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved-caspase3蛋白表达水平降低（均P<0.05）,集落形成数、迁移及侵袭细胞数增多（均P<0.05）。结论：沉默circPUM1可通过靶向调控miR-144-3p表达而抑制宫颈癌细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭能力及诱导细胞凋亡,从而减弱细胞放射抵抗性。     

干扰LncRNA LRRC75A-AS1抑制肺癌细胞发生发展研究

目的:探讨LncRNA LRRC75A-AS1/miR-22-3p对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其可能作用机制.方法:采用qRT-PCR法检测肺癌组织与癌旁组织中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;体外培养人肺癌细胞A549,si-NC、si-LRRC75A-AS1、si-LRRC75A-AS1与...     

甲基莲心碱在氧化应激中的作用机制研究

目的 探究甲基莲心碱（Nef）抗氧化应激作用及其机制。方法 体外培养大鼠近端肾小管上皮 细胞（NRK-52E）,分为对照组、高渗组、高糖组、Nef 组、锌原卟啉Ⅸ（ZnP）组和HO-1 抑制剂组。采 用CCK-8 法检测细胞活力,Western blot 检测血红素加氧酶1（HO-1）和P67 蛋白的表达,DCFH-DA 探 针检测活性氧（ROS）,化学氧化酶标法检测HO-1 酶活性,TBA 法检测丙二醛（MDA）。结果 与对照组 比较,高糖组的氧化应激指标P67 表达增加,ROS 和MDA 含量升高,细胞活力下降（P <0.05）;与高糖组比 较,Nef 组HO-1 蛋白表达和酶活性增加,P67 表达降低,ROS 和MDA 含量减少,细胞活力上升（P <0.05）; HO-1 抑制剂组较Nef 组上述作用减弱（P <0.05）。结论 Nef 通过诱导HO-1 表达并增加其酶活性,从而 减轻高糖培养的NRK-52E 细胞氧化应激损伤。     

白藜芦醇改善高糖引起肾小球系膜细胞损伤的作用研究

目的:探讨白藜芦醇（RSV）对体外高糖刺激引起大鼠肾小球系膜细胞（RGMCs）损伤的影响及其潜在分子保护机制。方法:取处于对数生长期的RGMCs,分为甘露醇高渗透压对照组（OC）、正常对照组（NG）、高糖组（HG）以及高糖RSV处理组,分别处理24、48 h。试剂盒检测不同时间各组细胞上清液中LDH的水平;Western 印迹法检测不同时间各组凋亡相关B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1、Caspase-1活性片段（p20）、Gasdermin E（GSDME）、GSDME活性片段（GSDME-N）、Caspase-3、Caspase-3活性片段（p17）、炎性相关细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）及其活化形式（mIL-1β）的表达;ELISA检测不同时间各组细胞培养上清IL-1β的水平。结果:LDH结果显示,RSV可降低高糖刺激48 h后细胞的死亡率（F=31.48,P<0.05）。Western 印迹法结果显示,仅在RSV处理24 h后,Bax表达较HG组显著降低,同时伴随Bcl-2表达升高（F=143.1,P<0.05）;RSV处理24 h后HG组p20、mIL-1β表达降低（F=26.74、25.76,均P<0.05）;此外,RSV处理48 h后p17、GSDME-N的表达较HG组明显下降（F=25.84、18.49,均P<0.05）。ELISA结果显示,与HG组相比,RSV处理48 h后上清中IL-1β的水平显著降低（F=80.22,P<0.01）。上述指标在OC组及NG组间的变化均无统计学意义（均P＞0.05）。结论:RSV可通过减少炎症因子的产生及抑制细胞早期凋亡、晚期焦亡过程来改善高糖引起的RGMCs损伤。     

热休克蛋白27/转录激活因子5复合物在高糖诱导足细胞凋亡中的意义

目的研究足细胞内热休克蛋白27(HSP27)是否与转录激活因子5(ATF5)形成复合物及其在足细胞凋亡中的意义。方法高糖刺激体外培养的小鼠肾小球足细胞系建立细胞凋亡模型,应用Hochest染色、流式细胞技术测定细胞凋亡。应用Western印迹分析技术检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的活化,应用免疫共沉淀技术检测HSP27和ATF5形成复合物的变化,阻断实验观察MAPK信号途径对高糖调节足细胞HSP27与ATF5形成复合物以及足细胞凋亡的影响。结果成功建立了高糖刺激足细胞凋亡的模型,30mmol/L高糖刺激48h凋亡率(27.2%±8.9%)显著高于5.5mmol/L正常糖(对照)48h组(10.6%±2.7%,P<0.05)。正常糖(对照)组细胞HSP27与ATF5即可形成复合物,而在高糖刺激12hHSP27与ATF5形成的复合物明显增加为正常糖组的195%±36%(P<0.05)。高糖刺激30min即可使细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和p38活化。进一步阻断实验显示ERK1/2活化抑制剂可以减弱高糖刺激引起HSP27和ATF5形成复合物的效应(PD98059+高糖组为109%±19%,高糖组211%±46%,P<0.05),同时加重高糖诱导细胞凋亡(PD98059+高糖组凋亡率为51%±4%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。p38活化抑制剂不影响高糖刺激引起的HSP27和ATF5形成复合物(SB20358+高糖组为290%±43%,高糖组为231%±20%,P>0.05),但可减轻高糖诱导细胞凋亡(SB20358+高糖组凋亡率为16%±6%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。结论高糖依赖ERK1/2信号通路而不是p38信号通路刺激足细胞HSP27与ATF5形成复合物的增加,蛋白复合物可能在高糖诱导的足细胞凋亡中起保护作用。     

circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的探讨circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制。方法选取33例胃癌组织及癌旁组织标本,实时荧光定量PCR检测circ_0001178和miR-1179的表达水平;将胃癌细胞株AGS随机分为si-NC组、si-circ_0001178组、miR-NC组、miR-1179组、si-circ_0001178+anti-miR-NC组、si-circ_0001178+anti-miR-1179组;采用克隆形成实验检测克隆形成数,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0001178和miR-1179的靶向关系。结果胃癌组织中circ_0001178表达水平明显高于癌旁组织,而miR-1179表达水平明显低于癌旁组织（P < 0.01）。抑制circ_0001178表达或过表达miR-1179,AGS细胞克隆形成数减少,细胞活性降低,AGS细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平均升高（P < 0.05）。结论抑制circ_0001178表达可能通过靶向上调miR-1179抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。