miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。     

miR-532抑制Sema4C逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗的敏感性

目的:探讨miR-532抑制Sema4C逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用。方法:检测宫颈癌细胞Caski经过沉默Sema4C表达后EMT标志物表达水平;利用Transwell迁移与侵袭实验检测沉默Sema4C表达所引起的宫颈癌细胞Caski迁移与侵袭能力变化;预测Sema4C是miR-532直接的靶基因并用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性;Western blotting及qRT-PCR检测表达miR-532后EMT标志物E-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达水平及mRNA表达水平;利用Transwell迁移与侵袭实验检测Caski细胞经过转染miR-532 mimic后迁移、侵袭能力的变化;CCK8检测过表达 miR-532及沉默 Sema4C对宫颈癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。结果:Sema4C参与调节宫颈癌细胞Caski上皮间质转化,下调Sema4C可逆转这一过程;Sema4C是miR-532直接的靶基因;miR-532可逆转宫颈癌细胞的EMT;过表达miR-532及沉默Sema4C能显著提高宫颈癌细胞对顺铂敏感性。结论:miR-532通过抑制靶基因Sema4C的表达水平在宫颈癌中扮演抑癌基因的角色,逆转了宫颈癌细胞Caski的上皮间质转化及增加对顺铂化疗的敏感性。     

FBXW7调控非小细胞肺癌上皮间质转化的作用机制

目的:研究FBXW7在非小细胞肺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)过程中发挥的作用。方法:收集100对非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织,利用免疫组化检测FBXW7在癌组织和癌旁组织中的表达。利用Western blot检测FBXW7在细胞系中的表达及FBXW7对EMT部分标志蛋白的影响。利用Transwell实验检测FBXW7对NSCLC细胞迁移能力的影响。免疫共沉淀实验和泛素化的Western blot验证FBXW7与Snail1的关系。结果:FBXW7在NSCLC组织中的表达明显低于对应癌旁组织中的表达。FBXW7在正常肺上皮细胞中的表达也明显高于4种非小细胞肺癌细胞系中的表达。FBXW7过表达显著抑制A549细胞的迁移能力。FBXW7过表达也明显抑制NSCLC细胞的EMT。机制研究发现,FBXW7可以直接结合并泛素化降解Snail1蛋白,并且Snail1部分逆转FBXW7对NSCLC细胞EMT标志蛋白的影响。结论:FBXW7对NSCLC细胞EMT的调控部分依赖于泛素化降解Snail1蛋白。     

过表达miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制肺癌A549细胞的上皮间质转化

目的：探讨过表达 miR-497 靶向细胞周期蛋白 E1（cyclin E1,CCNE1）对肺癌 A549 细胞上皮间质转化（epithelialmesenchymal transition,EMT）的影响。方法：常规培养人肺癌A549细胞,细胞实验分为正常组（不加干预）、对照组（转染miR497 mimics-NC）、实验组（转染miR-497 mimics）。采用Transwell小室实验、免疫荧光染色、qPCR、Western blotting法分别检测各组细胞迁移和侵袭能力、蛋白间质标志物α-SMA和上皮标志物E-cadherin的表达、miR-497和CCNE1的表达水平,荧光素酶基因基因报告实验验证miR-497和CCNE1的靶向关系。结果：与对照组和正常组相比,实验组A549细胞迁移和侵袭的数量明显减少（均P<0.05）,细胞的间质标志物α-SMA的绿色荧光强度明显减弱（[ 36.95±5.81）vs（98.69±2.36）、（97.94±2.63）,均P<0.05],上皮标志物E-cadherin的绿色荧光强度明显增强（[ 388.41±10.93）vs（100.95±6.37）、（102.55±3.18）,均P<0.05],miR-497 的表达明显升高（均P<0.05）,CCNE1的表达均明显下降（均P<0.05）。miR-497能够靶向调控CCNE1的表达。结论：在肺癌A549细胞中miR-497能够靶向调控CCNE1的表达,上调miR-497的表达后能明显抑制A549细胞迁移和侵袭能力,影响EMT相关蛋白的表达。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

miR-200家族在上皮-间质转化中的研究进展北大核心CSCD

0引言 microRNAs（简称miRNAs）是一类进化上高度保守的小分子非编码RNA,长度为21～23nt左右,具有转录后调控基因表达的功能。在癌组织中,它们的调节功能普遍异常,因此被认为是癌基因或是肿瘤抑制因子。miR．200家族成员通过结合并抑制靶基因mRNA的表达,抑制上皮间质转化、肿瘤细胞迁移、侵袭转移,这些靶基因包括参与上皮-间质转化的ZEBl基因和ZEB2基因,snail2,VEGFR-1,D．cateni/Wnt通路中β-catenin基因,EGFR抑制子抗性基因ERRFI-1和化疗药物抗性基因TUBB3,然而在胃癌细胞或胃癌组织中,由于上皮基因的沉默缺失,miR-200家族成员的表达普遍下降。     

MicroRNA-29a靶向抑制PTEN基因诱导非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨microRNA-29a（miR-29a）及其靶蛋白PTEN在TGF-β1诱导非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用机制。方法:选择A549细胞经终浓度为10 ng/ml TGF-β1诱导48 h后,分为Blank组（不转染任何序列）、阴性对照（negative control,NC）组（转染阴性对照序列）、IN组（转染miR-29a inhibitors）、siRNA组（转染PTEN-siRNA）和IN+siRNA组（共转染miR-29a inhibitors和PTEN-siRNA）。普通显微镜观察各组细胞形态学变化;免疫荧光检测各组细胞中E-cadherin表达水平;qRT-PCR法检测EMT相关因子及PTEN mRNA表达水平;Western blotting法检测转染后EMT相关因子、PTEN、Akt和p-Akt蛋白的表达;划痕实验检测各组细胞迁移能力。构建裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤生长,免疫组化检测裸鼠肿瘤组织中PTEN及EMT相关因子蛋白表达水平。结果:A549细胞转染miR-29a inhibitors后TGF-β1诱导细胞的上皮间质转化显著受到抑制,N-cadherin、Vimentin及Slug的mRNA和蛋白表达水平在IN组中显著低于Blank组和NC组,但在siRNA组和IN+siRNA组中显著上调（均P<0.05）。与Blank组和NC组相比,IN组PTEN mRNA和蛋白表达水平明显升高,且p-Akt的表达显著降低,细胞迁移率显著下降,而siRNA组和IN+siRNA组PTEN mRNA和蛋白表达明显降低,p-Akt的表达显著上升,细胞迁移率显著升高（均P<0.05）。裸鼠移植瘤实验结果显示与Blank组和NC组相比,IN组肿瘤生长较慢,重量降低,E-cadherin和PTEN蛋白表达显著升高,N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug蛋白表达显著降低（均P<0.05）。结论:TGF-β1能诱导NSCLC细胞发生EMT,且能上调miR-29a并抑制PTEN的表达水平;抑制miR-29a的表达水平可能通过上调靶基因PTEN,促进Akt磷酸化,抑制EMT的发生。     

过表达巨噬细胞移动抑制因子对子宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨过表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化 （EMT）的影响.方法 应用基因转染方法将重组质粒pEGFP-N1-MIF转入SiHa细胞,构建过表达MIF的SiHa细胞;用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫细胞化学方法分别检测各组细胞中E-cadherin、vimentin mRNA及蛋白的表达水平.结果 RT-PCR检测结果显示,转染pEGFP-N1-MIF的细胞中MIF mRNA相对表达量升高（F=2950.278,P＜ 0.01）;转染pEGFP-NI-MIF的细胞中vimentin的mRNA高于各对照组,而E-cadherin的mRNA低于各对照组（F值分别为2 135.048,1 893.563,均P＜0.01）;转染pEGFP-N 1-MIF的细胞中vimentin的蛋白表达水平高于各对照组,而E-cadherin的蛋白表达水平低于各对照组（F值分别为2 348.021,1 789.421,均P＜ 0.01）.结论 过表达MIF促进SiHa细胞中vimentin表达,抑制E-cadherin表达,说明过表达MIF促进子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化.     

miR-573 inhibits prostate cancer metastasis by regulating epithelial-mesenchymal transition

The metastastic cascade is a complex process that is regulated at multiple levels in prostate cancer (PCa). Recent evidence suggests that microRNAs (miRNAs) are involved in PCa metastasis and hold great promise as therapeutic targets. In this study, we found that miR-573 expression is significantly lower in metastatic tissues than matched primary PCa. Its downregulation is correlated with high Gleason score and cancer-related mortality of PCa patients (P = 0.041, Kaplan-Meier analysis). Through gain- and loss-of function experiments, we demonstrated that miR-573 inhibits PCa cell migration, invasion and TGF-β1-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT) in vitro and lung metastasis in vivo. Mechanistically, miR573 directly targets the fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1) gene. Knockdown of FGFR1 phenocopies the effects of miR-573 expression on PCa cell invasion, whereas overexpression of FGFR1 partially attenuates the functions of miR-573. Consequently, miR-573 modulates the activation of FGFR1-downstream signaling in response to fibroblast growth factor 2 (FGF2). Importantly, we showed that GATA3 directly increases miR-573 expression, and thus down-regulates FGFR1 expression, EMT and invasion of PCa cells in a miR-573-dependent manner, supporting the involvement of GATA3, miR-573 and FGFR1 in controlling the EMT process during PCa metastasis. Altogether, our findings demonstrate a novel mechanism by which miR-573 modulates EMT and metastasis of PCa cells, and suggest miR-573 as a potential biomarker and/or therapeutic target for PCa management.     

miR-455-3p 通过靶向调控转脂蛋白4 抑制卵巢癌细胞SKOV-3 的增殖、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探讨miR-455-3p 对卵巢癌细胞SKOV-3 增殖、迁移能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并研究其作用机制。方法：人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3 和A2780 细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic 及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR 实验检测IOSE80、SKOV-3 和A2780 细胞miR-455-3p 和转脂蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）mRNA表达水平,Wb检测FABP4 和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖活性,Transwell 实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p 的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p 与FABP4 的靶向关系。结果：与正常卵巢上皮细胞IOSE80 相比,卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780 中miR-455-3p 低表达（均P<0.05）,而FABP4 高表达（均P<0.05）。此外,过表达miR-455-3p 明显抑制SKOV-3 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达miR-455-3p 通过上调E-cadherin 表达、下调N-cadherin 和Vimentin 表达而抑制EMT进程（均P<0.05）。FABP4 是miR-455-3p 的靶基因,且miR-455-3p 能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平（P<0.05）。过表达FABP4 能够明显逆转miR-455-3p 对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-455-3p 在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4 从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。     

PAK5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的:探讨p21活化激酶-5（p21-activated kinase 5,PAK5）蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:观察PAK5过表达对乳腺癌细胞形态的影响,人乳腺肿瘤细胞MCF-7通过慢病毒感染稳定表达Flag-PAK5。然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮-间质转化（EMT）标志物上皮-钙黏蛋白（E-cadherin）,纤维连接蛋白（Fibronectin）和波形蛋白（vimentin）的表达。最后通过Transwell实验检测过表达PAK5对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:过表达PAK5蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭形变化,下调E-cadherin蛋白,促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。结论:PAK5可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮－间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生。     

siRNA沉默Twist基因对结直肠癌细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的 结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,本研究探讨应用小分子干扰RNA (siRNA)沉默Twist信号通路对结直肠癌顺铂化疗敏感性的影响及其可能机制.方法 0、0.0625、0.125、0.25、0.5和1μg/mL的顺铂作用于SW480和LoVo这种结直肠癌细胞株48 h.Twist-siRNA转染这2种结直肠癌细胞株.CCK-8法计算转染前后顺铂对于两者的抑制率.EdU法检测癌细胞增殖能力.Hoechest 3344荧光染色检测细胞形态.蛋白印迹法检测不同药物作用下的Twist及上皮间质化相关标志物的表达变化.结果 LoVo和SW480细胞组中Twist表达量分别为0.824±0.124和0.191±0.039 9;Twist在LoVo中高表达,在SW480中低表达,差异有统计学意义,P＜0.05.SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(3.394±0.083)和(6.737±0.796) μg/mL,P＜0.05.wist siRNA干扰后SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(0.113 7±0.008 8)和(0.459 7±0.025 0) μg/mL,与单用顺铂组相比,差异均有统计学意义,均P＜0.05.Hoechest3344荧光染色结果表明,Twist转染组比未转染组出现了更加明显的细胞凋亡形态变化.CCK-8检测结果显示,采用Twist siRNA干扰后SW480和LoVo对于顺铂的IC50值分别为(0.113 7±0.008 8)和(0.459 7±0.025 0)μg/mL,与单用顺铂组相比,差异有统计学意义,P＜0.05.EdU法检测结果显示,Twist siRNA+顺铂组、顺铂组和正常组SW480细胞增殖率分别为(14.63±1.33)％、(25.55±1.73)％和(51.23±3.31)％;LoVo细胞增殖率分别为(22.35±2.39)％、(29.27±1.85)％和(64.62±3.61)％;与正常组和单用顺铂组相比,Twist siRNA+顺铂组的细胞增殖率明显降低,差异均有统计学意义,均P＜0.05.蛋白印迹法结果表明,Twist siRNA作用的同时伴随E-cadherin表达升高,而Vimentin表达降低,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 应用siRNA降低Twist信号通路活性可通过抑制上皮间质化过程而增加结直肠癌对于顺铂的化疗敏感性.     

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6（IL-6）诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用及机制。方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组（50 ng/ml重组IL-6蛋白）、IL-6+丙泊酚低剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚）、IL-6+丙泊酚高剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚）。MTT法检测细胞活力,Transwell检测细胞迁移情况,Real-time PCR方法检测EMT相关基因（E-cadherin、Vimentin和Snail1）mRNA的表达水平,Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平。使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞,检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响。结果:与对照组相比,IL-6组中细胞的活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均增加（P均<0.05）;与IL-6组相比,IL-6+丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均降低（P均<0.05）,这些变化均具有剂量依赖性。STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响（P均<0.05）。结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程,这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的。