原发性肝癌细胞凋亡与端粒酶的表达

目的　了解原发性肝癌 (HCC)端粒酶活性和细胞凋亡的关系。方法　采用PCR技术为基础的TRAP方法检测端粒酶 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果　 45例HCC平均凋亡指数为 ( 5 6± 2 7) %,而相应 45例癌旁组织的凋亡指数为 ( 12 3± 4 1) %(P <0 0 1)。组织分级Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ级的凋亡指数平均为 ( 1 8± 0 2 ) %,( 3 4± 2 8) %和 ( 7 4±3 6) %(P <0 0 5 )。而端粒酶表达阳性 42例 ( 93 %) ,其活性强度与癌灶数目和门脉癌栓形成显著相关 ,而与癌灶的体积和分化无关。结论　HCC癌细胞凋亡受抑 ,而端粒酶活化表达 ,两者共同构成了肿瘤细胞积聚的基础     

端粒酶在临床中的研究进展

端粒是线性染色体末端的一段特殊DNA-蛋白质、有保护染色体的完整和稳定的作用；端粒酸则特别的酶蛋白-RNA，能维持端粒长度和染色体功能稳定。端粒、端粒酶与细胞的衰老、永生化和癌变密切相关。因此，越来越受到人们的关注。     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外,以HL60细胞株细胞为对象,采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量;采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性;采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比,HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时,HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化;当浓度增至0．040—0．050μg／m1,hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后,hTERT mRNA表达呈下降趋势,24h后端粒酶活性明显下降,两者的下降趋势基本相似,但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下,HL60细胞凋亡率增加,而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降,且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。     

反义人端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的分子生物学机制研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA( human telomerase RNA,hTR)基因对肝癌细胞株Bel-7402凋亡的诱导作用及其分子生物学机制.方法 利用前期实验成功转染人端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组(Bel-7402-hTR-EcoRI)、反义转染组(Bel-7402-hTR-BamHI)和空白对照组(Bel-7402).PCR鉴定转染结果,hoechst 33258荧光染色观察3组细胞的变化,实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正义转染组及空白对照组细胞相比,反义转染组部分细胞出现凋亡特征性改变,p53、Bax的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 反义端粒酶RNA可诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调p53和Bax的表达并下调Bcl-2的表达.     

人类端粒酶基因反义核酸对恶性肿瘤细胞端粒酶抑制的实验研究

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 62细胞、Hep 2细胞端粒酶活性和K5 62细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 62细胞、Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后K5 62细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 62细胞和Hep 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 62细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径     

端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

人端粒酶逆转录酶在肿瘤免疫治疗中的应用

寻找有效的抗原表位是近期肿瘤免疫治疗的热点．人端粒酶逆转录酶(hTERT)的免疫学特性使其成为肿瘤免疫治疗中一个吸引人的目标。从人和鼠系统获得的数据证实,细胞毒淋巴细胞(CTL)能识别hTERT特异的肽并杀死多种组织类型hTERT表达的肿瘤细胞。由于hTERT在人肿瘤组织中的广泛表达,在极少正常组织的低水平表达,临床试验已开始检验将hTERT作为肿瘤免疫治疗目标的可行程度。近期树突状细胞(DC)转运系统及其相关技术的发展和成熟提供了一个快速有效筛选抗原肽的方法。     

人端粒酶逆转录酶在肿瘤免疫治疗中的应用

寻找有效的抗原表位是近期肿瘤免疫治疗的热点,人端粒酶逆转录酶(hTERT)的免疫学特性使其成为肿瘤免疫治疗中一个吸引人的目标.从人和鼠系统获得的数据证实,细胞毒淋巴细胞(CTL)能识别hTERT特异的肽并杀死多种组织类型hTERT表达的肿瘤细胞.由于hTERT在人肿瘤组织中的广泛表达,在极少正常组织的低水平表达,临床试验已开始检验将hTERT作为肿瘤免疫治疗目标的可行程度.近期树突状细胞(DC)转运系统及其相关技术的发展和成熟提供了一个快速有效筛选抗原肽的方法.     

抑制多胺生物合成对A549细胞生长及端粒酶激活的抑制作用

目的：研究抑制多胺生物合成对肿瘤细胞生长及端粒酶活性的作用。方法：以人肺腺癌A549细胞系为模型,MTT法观察细胞生长,流式细胞分析法,Mary-Grnermrold法和DNA Ladder电泳法检测细胞凋亡,端粒酶重复扩增法测定端粒酶活性。结果：经二氟甲基鸟氨酸（DFMO）处理的A549细胞,其生长受到抑制,部分细胞发生凋亡,端粒酶活性被明显抑制,如同时加入外源性腐胺,上述现象消失,结论：DFMO对多胺生物合成的抑制所引起的肿瘤细胞生长抑制及凋亡诱导,可能与其对端粒酶激活的抑制有关。     

细胞凋亡与增殖在胆总管囊肿发病中的作用（摘要）

目的 :研究胚胎发育不同时期胆总管壁细胞凋亡与增殖情况 ;不同类型 (囊状、梭状型 )胆总管囊肿内胆汁淀粉酶与囊肿壁细胞凋亡与增殖变化关系 ,了解胆汁淀粉酶对囊肿壁细胞凋亡与增殖变化的影响 ;了解细胞凋亡与增殖在胆总管囊肿中的作用。为阐明胆总管囊肿的发病机制及其防治提供依据和途径。方法 :①胎儿组 :取不同胎龄 (6、7、8、9、10月 )人工流产胎儿胆总管标本各 5例 ;②从我院肝胆小儿外科 1995 1 ～ 2 0 0 0 12 住院病人中 ,通过相应检查排除其他疾病 ,按临床检查 (ＵＳ ＣＴ)及手术发现分以下三组 ,囊状扩张组 32例 ,梭状扩张…     

细胞凋亡在狼疮性肾炎发病机制中的作用

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)是典型的自身免疫性疾病 ,用免疫荧光显微镜和电镜检查肾活检标本 ,几乎全部都有病变 ,称为狼疮性肾炎 (ＬＮ) ,其病理表现复杂多样 ,因在多数ＬＮ肾组织中发现ＩｇＧ型抗 ＤＮＡ ,因此过去认为循环ＤＮＡ 抗 ＤＮＡ复合物沉积于肾小球是ＬＮ的重要发病机制。而充当ＬＮ发病中的免疫原、激活Ｔｈ细胞、Ｂ细胞、与循环中的抗ＤＮＡ抗体形成免疫复合物并沉积于肾小球的元凶———核小体的异常释放。目前 ,认为可能与细胞凋亡 (又称程序性细胞死亡 )有关 ;在器官水平上 ,肾小球的增殖、硬化与细胞凋亡的关系 ,可能决…     

儿童睾丸肿瘤P53、端粒酶的表达与凋亡的相关研究

目的:探讨儿童睾丸肿瘤P53、端粒酶的表达及其与凋亡之间的关系.方法:通过免疫组化以及TUNEL法分别对35例儿童睾丸肿瘤组织进行P53、hTERT及凋亡细胞的检测.结果:在畸胎瘤、卵黄囊瘤、胚胎癌中,P53的表达指数(P53-LI)、hTERT阳性信号面密度(Sv)随着临床分型和恶性度的升高而增大,而凋亡指数(AI)同样随之增高,统计分析结果提示P53、hTERT以及AI与临床分型密切相关(P值均＜0.01).而P53、hTERT与AI呈正相关(P＜0.01).结论:儿童睾丸生殖细胞肿瘤的凋亡是一个多基因参与的复杂过程,P53、端粒酶的表达与肿瘤病理恶性程度及凋亡指数呈正比.     

足细胞凋亡在糖尿病肾病发病中的作用

糖尿病肾病是糖尿病患者最常见的慢性并发症之一,也是导致终末期肾衰竭的重要原因。近年研究发现,作为肾小球滤过屏障结构成分的足细胞在糖尿病肾病发生发展过程中起重要作用。多种因素如糖脂毒性、血管紧张素、糖基化终末产物等可引起足细胞的凋亡,促使糖尿病肾病的发生。     

原发性乳腺癌组织中端粒酶活性表达与癌细胞凋亡相关性的研究

目的 :探讨原发性乳腺癌组织中端粒酶活性表达与细胞凋亡发生基因表达的相关性及其预后意义。　方法 :应用端粒酶 TRA P- PCR电泳、银染及 EL ISA法、凋亡细胞原位检测 (TU NEL法 )和 S- P免疫组化染色等技术 ,分别对端粒酶定性和定量测定其活性 (TA)、计算凋亡指数 (AI)、检测凋亡相关基因 Bcl- 2和 p5 3蛋白表达水平。　结果 :TA定性检测平均阳性率为 89.8%、定量测定吸光值中位数 0 .6 3± 0 .2 9,均明显高于正常乳腺和良性病变组织(P<0 .0 5 ) ,其表达阳性率高者预后较差 ,5年累积生存率 (6 0 .3% )低于阴性者 (77.4% ) ,二者有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,但酶表达与患者年龄、临床 TNM分期、肿瘤大小、发生部位、病理学类型、淋巴结转移等无关。 AI中位数4.83± 0 .74,与 TA表达高度相关 (r=0 .7331,P <0 .0 5 ) ,凋亡相关基因 Bcl- 2和 p5 3蛋白表达阳性率分别为6 3.4%和 40 .7% ,其中 Bcl- 2表达水平与 TA、AI高低呈高度正相关 (r=0 .7814,P<0 .0 5 ) ,p5 3与之呈负相关 (r=- 0 .6 2 5 5 ,P<0 .0 5 ) ;经多变量 Cox回归分析显示仅 TA、AI对乳腺癌患者生存期有影响 ,TA阳性率高、AI>4.0 %者的平均生存时间短于 TA阴性、AI<4.0 %者 (P<0 .0 5 )。此外 ,术前接受化疗者的 TA表达水平低于未化疗者 (6 4.7     

VG染色在慢性肝病组织中的应用

目的应用VG染色对肝活检和尸检标本进行观察。探讨胶原纤维在慢性肝病组织内的分布及肝纤维化的形成机制。方法应用VG染色对40例肝活检和尸检标本进行检测,HE染色确定病理诊断。光镜下观察,VG染色显示慢性肝病组织中的胶原纤维。结果 9例慢性肝炎中,轻型慢性肝炎2例,慢性中度肝炎4例,重度慢性肝炎3例;31例肝硬化中不完全分割性型3例,细结节型17例,粗结节型11例。经VG染色后胶原纤维染成粉红色,并形成间隔分割肝组织。结论胶原纤维可能起源于贮脂细胞和成纤维细胞,VG染色对慢性肝病有诊断意义。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及对其端粒酶活性的影响

目的 为观察并比较不同型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异，并探讨肿瘤细胞端粒酶活性变化与凋亡之间的关系。方法 用A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染Hela细胞，于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞的形态，Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率，并用PCR-ELISA法检测肿瘤细胞端粒酶活性。结果 A1型流感病毒（UV-A1）及B型流感病毒（UV-B）作用于Hela细胞后24h，电镜下可见细胞凋亡的特征性改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高，于12-24h达高峰，其中UV-B诱导凋亡百分率最高达38．6％，Uv-A1最高为23．9％。紫外线照射后的UV-B最高达到20．9％。UV-A1最高达到10．1％；此外，Hela细胞端粒酶活性均有所下降，其中UV-B诱导后的Hela细胞端粒酶活性下降比A1型更明显，同时，紫外线照射后的UV-B诱导的Hela细胞端粒酶活性也略降低。结论 UV-B在导肿瘤细胞凋亡的能力及降低其端粒酶活性方面都比UV-A1要强，而且经紫外线照射后的UV-B仍然具有一定的诱导Hela细胞凋亡的能力；流感病毒降低肿瘤细胞的端粒酶活性可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的又一重要机制。     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

端粒和端粒酶在抗衰老研究中的现状

发现"染色体是如何被端粒(telomere)和端粒酶(telomerase)保护的"研究成果使美国科学家Elizabeth H.Blackburn、Carol W.Greider和Jack W.Szostak荣获2009年诺贝尔生理学或医学奖。他们的发现解决了一个生物学中的重要课题,即染色体在细胞分裂过程中是怎样实现完全复制,同时还能受到保护且不发生降解的机制,由此可能揭开人类