麻痹性贝毒在广州市售经济贝类中污染状况分析

目的通过对广州市黄沙海产品批发市场7种经济贝类为期一年的麻痹性贝毒(PSP)污染状况的调查分析,了解海产品食用的安全性。方法毒性测定按照AOAC小白鼠法进行,成份分析利用高效液相色谱(HPLC),安全性评价采用联合国粮农组织(FAO)及我国渔政渔港监督管理局制定的贝类安全食用标准(4MUg肉)。结果在调查的84份贝样中,染毒贝整体毒力(消化腺与肉的加权平均毒力)低于4MUg肉,毒素最高含量仅为184MUg肉,所有贝类均在安全食用范围之内。染毒贝类主要为栉孔扇贝(ChlamysMimachlamysnobilis)和嵌条扇贝(Pectenalbicans)。毒素在2个种9份样品的消化腺中检出,某些样品肌肉组织出现小白鼠毒性反应。一份样品消化腺中毒素含量高达1452MUg,高效液相色谱(HPLC)分析表明,该样品毒素成份主要为B1、GTX23、GTX14及C类。结论广州市市售鲜贝PSP含量和检出率整体水平均较低;贝中消化腺毒素含量及检出率明显高于肌肉,个别腺体毒素含量超出标准。毒素分布存在季节性差异,春季毒素比较强,夏秋季检出率高。因此有针对性的加强贝毒监测非常必要。     

双壳贝类麻痹性贝毒抗性机制的研究

麻痹性贝毒(PSP)是一类神经肌肉麻痹剂,可以阻断电压门控钠离子通道,造成神经系统传输障碍而产生麻痹作用。某些双贝壳类对PSP毒素具有耐受性和抗性,其抗性机制可能与代谢速率、生物转化和钠通道突变等有关,其中钠通道突变是双壳贝类对PSP毒素产生抗性的最重要的分子机制。     

福建口岸出口贝类产品毒化状况的监测分析

目的：为了解我省出口贝类产品是否存在DSP和PSP这两种贝毒的污染，也为建立水产贝类毒素监测体系提供必要的监测数据。方法：2003～2005年对福建出入境检验检疫局辖区内采样并送检的出口贝类产品的贝类毒素污染状况进行监测；腹泻性贝类毒素检验方法采用SN0294—93，麻痹性贝类毒素检验方法采用SN0352—95。结果：3年间共检出口样品268批次。麻痹性贝类毒素均未检出。而腹泻性贝类毒素的合格样品数为266份，仅2份贻贝样品DSP大于0．05MU／g。结论：3年间福建出口的贝类产品大部分状况良好，只有两批次贻贝受到腹泻性贝类毒素的污染。     

中国沿海的贝毒问题研究

我国对贝毒的调查研究工作目前正在开始，除了已查明江瑶具有内源性贝毒之外，主要的研究工作集中在赤潮产生的麻痹性贝毒（ＰＳＰ）上面，ＰＳＰ中毒案例主要发生在中国南方的浙江、福建、广东及台湾等地，其中有一些案例是致命性的。科研人员研究了广东省各种贝类中ＰＳＰ的含量，组织中分布及季节变化的情况，对其组份进行分析发现主要成份为ＳＴＸ，ｎｅｏＳＴＸ及ＧＴＸ１～４等。在我国沿海已发现了三种产生ＰＳＰ的毒藻，其中的Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍｔａｍａｒｅｎｓｅ已分离出孢子并培养出单株克隆体供研究用，值得注意的是，我国沿海还发现过产生腹泻性贝毒，神经性贝毒及失忆性贝毒等毒源藻类，应提高警惕其形成“赤潮”，并在贝体内大量积累的可能性     

免疫亲和色谱分离纯化PSP贝毒GTX23,的研究

目的:分离纯化有毒塔玛亚历山大藻中麻痹性贝毒GTX2,3组分。方法:采用免疫亲和色谱方法,对有毒塔玛亚历山大藻中麻痹性贝类毒素进行分离纯化。结果:通过HPLC检测,免疫亲和柱有效的将麻痹性贝毒的GTX2,3与GTX14,分离,获得了一定数量但具有高纯度的麻痹性贝毒GTX23,。结论:初步建立了免疫亲和色谱技术对麻痹性贝类毒素GTX23,分离纯化的方法。     

麻痹性贝毒对学习记忆及肌肉运动耐力影响

目的 探讨低水平摄入麻痹性贝毒（paralytic shellfish poisoning，PSP）对大鼠学习记忆能力、肌肉运动耐力的影响。方法 从市售污染贝类海产品中提取麻痹性贝毒。大鼠随机分为5组，设3个染毒组，2个对照组。高、中、低剂量染毒组灌胃用PSP溶液浓度分别为18．4，9．2和4．6μgSTX／kg。空白对照组为自由饮用水，溶剂对照组为经小鼠检测无毒的贝组织盐酸提取液（0．1mol／L）。各组大鼠每天灌胃1次，染毒剂量每周按体重调整1次。第28，29d进行跳台实验，测试学习记忆能力，第31～34d进行游泳实验。测试肌肉运动耐力情况。结果 高剂量雄性大鼠学习错误次数显著增加，而衡量记忆能力的各项指标则差异无统计学意义；中、高剂量雌性大鼠不仅学习错误次数显著增加，而且衡最记忆能力的潜伏期也显著缩短。高剂量雄性大鼠的游泳时间明显低于对照组。结论 低水平长期摄入PSP毒素对大鼠学习记忆能力及肌肉运动耐力可造成一定程度的损害。     

深圳市市售贝类的腹泻性贝类毒素污染状况分析

目的了解深圳市市售双壳贝类腹泻性贝类毒素的污染状况。方法于2013—2014年在深圳市农贸市场采集贝类,采用酶联免疫测定法对腹泻性贝类毒素含量进行分析,根据联合国粮农组织制订的贝类安全食用标准对贝类水产品的食用安全性进行评价。结果 186份样本均有感染腹泻性贝类毒素情况,最高值为52.19μg/100 g肉,最低值为2.91μg/100 g肉。腹泻性贝类毒素存在一定的季节分布特征,气温较高的5、7、8月含量高于气温较低的3、11月。结论深圳市市售贝类存在一定程度的腹泻性贝类毒素污染,应加强对贝类的监测和毒素危害的宣传,确保食用安全。     

一起赤潮后海产品麻痹性贝类毒素衰减结果分析

目的 以2017年漳州沿海一起赤潮引起的麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)中毒事件为研究起点,研究贝类海产品中的PSP在自然条件下的衰减情况。方法 在漳浦佛昙和龙海港尾海域采集牡蛎和贻贝进行PSP检测。结果 2017年6月8日相关海域海产品最大毒素总毒力为21 056.7 μg/kg,2017年6月26日海产品PSP总毒力值衰减86%以上,2017年7月20日海产品PSP总毒力值衰减97%以上,2018年12月所有海产品中PSP均未检出。结论 本次赤潮发生后,漳浦佛昙和龙海港尾两个海域贝类海产品约需45天净化周期方可食用,相关海域约需18个月净化至贝类毒素完全消失。     

免疫方法在藻毒素及贝毒素检测中的应用

有害藻类自身或通过食物链在鱼类、贝类等生物体内蓄积,对生物直至人类产生危害。藻类毒素和贝毒的检测方法要求快速、方便、准确,并且在其含量极微时即可检出以起到预警作用。免疫方法使之成为可能。本文介绍了免疫测试技术的基本原理及其在藻毒素和贝毒检测中的应用,总结了该方法的应用前景和不足之处,旨在常规检测中推广和普及免疫方法。     

福建省市售水产品中河豚毒素及腹泻性贝类毒素污染状况

目的调查福建省市售水产品中腹泻性贝类毒素(DSP)、河豚毒素(TTX)的污染状况。方法采用高效液相色谱-串联质谱法对样品中的腹泻性贝类毒素、河豚毒素进行定量检测。结果螺类的检出率最高;2014年螺类、双壳贝类、鱼干类、海蟹类4种水产品中的毒素检出率差异有统计学意义(χ~2=13.832,P0.05),检出率高低依次为螺类海蟹类双壳贝类鱼干类。2014年TTX的检出率较高与2013年TTX检出率差异有统计学意义(χ~2=6.481,P0.05)。结论福建省市售的水产品中以TTX污染为主,织纹螺和圆尾鲎检出率高,毒素含量高。监管部门应加强市场监管。     

从暴发腹泻的贻贝中同时检出腹泻性贝类毒素和扇贝毒素

目的:2011年5月25日-5月27日,我市苍南县暴发了57例因食用贻贝引起的腹泻性贝类毒素(DSP)中毒事件,采集了19份样品进行检测。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱方法对贻贝中5种脂溶性贝类毒素进行检测,根据欧盟贝类毒素的限量值进行评价。结果:15份样品检出大田软海绵酸(OA)、鳍藻毒素-1(DTX-1)和7-epi-pectenotoxin-2 seco acid(7-epi-PTX-2sa),16份检出pectenotoxin-2seco acid(PTX-2sa),7份检出pectenotoxin-2(PTX-2)。其中4份样品中游离OA和DTX-1含量超出欧盟限量值3倍多,它们的总OA约超出9倍。其余均低于欧盟限量值。首次在我国贝类中检出了PTX-2sa和7-epi-PTX-2sa。结论:鉴于部分贻贝样品DSP超标,今后应加强贝类上市前的监测工作。     

麻痹性贝类毒素细胞检测法的建立

目的:麻痹性贝类毒素的N-2a细胞检测方法的建立并确定可能的检测限值。方法:使用不同浓度毒素标准品结合藜芦定和乌本苷共同作用对数生长期的N-2a细胞,通过cck-8试剂盒检测细胞毒性,确立细胞检测方法的检出限及比较各毒素作用大小,并同步利用小鼠生物法进行验证,通过精确记录小鼠死亡时间,比较各毒素的毒作用大小。结果:麻痹性贝类毒素能明显降低藜芦定和乌本苷的细胞毒性,且具有剂量-反应关系,通过比较得出毒素各成分毒性大小为:neoSTX>STX>dcSTX>GTX1,4>GTX2,3>dcGTX2,3;小鼠生物法的毒作用平均死亡时间为:neoSTX组(6.5 min),GTX1,4组(8.0 min),STX组(9.0 min),dcSTX组(15 min);GTX2,3组和dcGTX2,3组未见动物死亡。结论:细胞检测与小鼠生物法具有较好的一致性,表明所建立的细胞检测法可行,且细胞毒性试验检测方法具有较高的灵敏度,最低检出限值可达到10-9mol/L剂量水平,其中浓度在10-6~10-8mol/L间具有较好的线性。     

腹泻性贝类毒素的细胞F-肌动蛋白荧光检测法的建立

目的通过检测大田软海绵酸(OA)对HL-7702肝细胞的F-肌动蛋白的解聚作用,建立腹泻性贝类毒素(DSP)的荧光检测法。方法使用鬼比环肽标记F-肌动蛋白,多功能酶标仪检测荧光强度,通过荧光强度的变化分析样品中毒素的含量。比较荧光检测法和ELISA法对贝类样品的检测结果,分析所建荧光检测法的可靠性。结果 OA能明显破坏细胞F-肌动蛋白的聚合。随着作用浓度的增加,破坏程度也随之增加。在2.5～40 nmol/L范围内呈现明显的线性关系(R2=0.9931),检测限值可达到2.01μg/100g贝肉;进行样本检测时,加标回收率为92.76%～96.49%,并与ELISA法检测具有较好的线性相关(R2=0.830)。结论与现有的检测法相比,F-肌动蛋白荧光检测法具有较好的重复性和较低的检出限,可用于有毒贝类的筛查与检测。     

应用细菌回复突变试验研究贻贝中麻痹性贝毒的致突变性

目的 了解贻贝中麻痹性贝类毒素的致突变性。方法 采用TA97、TA98、TAl00、TAl02测试菌株,在-S9和+S9条件下分别对0.0029～1.83 μg STX/皿剂量范围内的贻贝中麻痹性贝类毒素进行检测。结果 在2种不同的条件下,各剂量水平的4种测试菌株都能正常生长;所有剂量的回变菌落数与对照组相比均无1倍及以上的显著增加,且无剂量-反应关系。结论 在该试验条件下,贻贝中麻痹性贝毒未见致突变性作用。     

Cluster analysis of toxins profile pattern as a tool for tracing shellfish contaminated with PSP-toxins

Paralytic shellfish poisoning (PSP) is one of the most lethal biotoxin-induced diseases worldwide, which may pose serious public health threat and potential devastating economic damage on fisheries industry in the affected region(s). To prevent the importation of PSP contaminated shellfish to a community, detailed documentation on the supply chain and routine surveillance systems are, in principle, crucial measures to protect people from this intoxication. However, difficulties have always been encountered on the traceability of the source/origin of contaminated shellfish.In the present study, we reported the potential application of PSP-toxins profiles with similarity analysis that can be used to identify epidemiological linkage between shellfish samples collected from markets and patients during a PSP outbreak. PSP-toxins were identified and quantified by ion-pair chromatographic separation followed by post-column oxidation to fluorescent imino purine derivatives. Samples from a PSP incident and other surveillance samples collected in our past 7-year record were also compared for their similarity in PSP-toxins profiles patterns. Molar distributions (nmol%) of 10 PSP-toxins were analyzed by Unweighted Pair Group Method with Arithmetric averages (UPGMA). Three prominent clusters emerged with similarity levels reaching over 80% for each, suggesting that each group of samples probably originated from a same source/batch. The PSP-toxins profiles and toxicities determined from surveillance samples could provide premonitory clues on the occurrences of PSP incident and outbreak with corresponding toxin profiles in the later time. Due to species-specific characteristics of PSP-toxins composition and profile in shellfish under varieties of environmental and physiological conditions, PSP-toxins profile can be a specific and useful biochemical indicator for tracing PSP contaminated shellfish provided that spatio-temporal occurrence patterns of toxins profiles are available in a databank for inter-laboratory comparison and standardized methodologies such as consentaneous toxins extraction and identification criteria are used for analysis and comparison.