乙肝病毒表面抗原可疑阳性标本确认方法的建立

目的 建立基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）确认方法,避免错误诊断。方法收集ELISA检测HBsAb〉15COI的血清,取HBsAb阳性;HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;HBsAb、HBcAb阳性三种模式的血清各20份混合,与HBsAgELISA结果浓度〉20COI的血清中和以确认HBsAb的中和活性,制成确认试剂。确认试剂与30例HBsAg弱阳性阳性患者血清中和,HBsAgCOI下降率〉50％判定为阳性,其结果与罗氏确认试剂盒进行比对。结果确认试剂可以很好的中和HBsAg,对30例HBsAg弱阳性标本的判定结果为24例阳性,6例阴性,与罗氏确认试剂盒结果完全一致。结论成功建立HBsAg确认方法,适用于对HBsAg弱阳性样本进行确认,并且简单经济。     

检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义

目的检测乙肝患者血清中乙肝两对半（HBVM）、乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）以及HBVDNA，比较在不同乙肝两对半模式的患者中HBV．LP与HBVDNA的检出率，探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）用于乙肝患者临床诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测HBV．LP和乙肝两对半，采用荧光定量PCR方法对患者HBVDNA进行检测。结果（1）相同乙肝模式患者血清中HBV．LP与HBVDNA检出率差异无统计学意义；（2）143例小三阳乙肝患者血清中HBV．LP与HBVDNA阳性率差异无统计学意义，二者的检出一致率为82．52％[（65＋53）／143]；（3）HBV—LP吸光度（A值）与HBVDNA呈正相关关系（r=0．983）。结论乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白与HBVDNA有良好的正相关关系，在HBeAg阴性的乙肝患者中乙肝病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）与HBVDNA有较高检出一致率，HBV—LP用于临床反映乙肝病毒复制水平，特别是HBeAg阴性乙肝患者体内病毒复制情况有重要的意义。     

血清乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白检测的临床意义与评价

目的通过对乙型病毒性肝炎(乙肝)患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)、HBV DNA、乙肝前S1(PreS1)及传统的乙肝两对半的检测与平行比较研究,探讨LHBs用于临床诊断乙型肝炎的意义。方法检测385例乙肝患者的血清标本,LHBs、PreS1及乙肝两对半采用酶联免疫方法,HBV DNA检测采用实时荧光定量PCR法。结果307份HBV DNA阳性标本中LHBs的阳性率(86.97%)明显高于PreS1的阳性率(49.5%),两者差异有统计学意义(P<0.05);LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关性,r=0.935;HBeAg阴性标本中LHBs的检出率为76.92%,比较HBV DNA的检出率(67.95%)无统计学意义;PreS1的检出率(45.73%)则明显低于LHBs和HBV DNA。结论乙肝患者血清中LHBs表达与HBV DNA拷贝数呈正相关,两者的检出率与符合率均高于PreS1,LHBs检测可以用于反映乙肝患者病毒复制的血清免疫学指标。     

乙型肝炎病毒表面抗原国家定量标准品的研制

目的 研制乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)国家定量标准品及定量线性参考品.方法 收集各地乙型肝炎患者和健康献血员血样,用不同厂家乙型肝炎、丙型肝炎病毒血清学试剂盒筛选.6个协作单位用7种试剂以世界卫生组织(WHO)HBsAg定量标准品标定1份HBsAg国家定量标准品,稀释后得到HBsAg国家定量线性参考品.结果经7种试剂共21次协作标定,得到HBsAg国家定量标准品的浓度为1226 IU/ml,各次检测结果的变异系数均小于15%.将国家定量标准品系列稀释后得到由8个不同浓度血清组成的HBsAg国家线性参考品,经检测后表明其浓度与理论浓度的差值均<15%,通过加速试验检测该参考品的稳定性效期暂定为5年.将其作为HBsAg国家线性参考品并初步限定检测结果的允许值范围.结论 标定1份HBsAg国家定量标准品并建立了由8份血清组成的HBsAg国家定量线性参考品.     

乙型肝炎表面抗原定量与肝组织病理关系的临床研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒感染者血清乙肝表面抗原定量水平与肝脏病理之间的关系.方法 收集我院272例乙肝表面抗原阳性超过6个月并接受肝脏穿刺活检的患者的临床资料.检测血清乙肝表面抗原定量、乙肝病毒基因型、ALT、HBV DNA、血常规、肝脏组织病理等各项资料,分别按照肝脏炎症活动程度(G0、G1、G2、G3、G4)和纤维化程度(S0、S1、S2、S3、S4)分组.观察分析乙肝表面抗原定量、HBV DNA与肝组织炎症活动程度和纤维化程度之间的关系.分析乙肝表面抗原定量与HBV DNA之间的相关性.结果 乙肝表面抗原定量与HBV DNA之间的相关性是显著的,表面抗原定量对数是对肝脏纤维化有显著影响的变量.结论 乙肝表面抗原对数是较DNA定量对数特异度和灵敏度更高的诊断肝脏纤维化程度的指标.     

乙型肝炎表面抗原不同突变体对细胞免疫的影响

目的　研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)不同突变体对细胞免疫的影响。方法　将野生型和变异型HBsAg基因重组质粒NS2 Swt、NS2 S12 6、NS2 S133、NS2 S14 1、NS2 S14 5分别转染CHO细胞,72h收获细胞上清。采用ELISA法检测各组细胞上清preS2 蛋白的表达量。将这些细胞上清刺激PHA活化的人淋巴细胞,MTS法检测不同变异株抗原对淋巴细胞增殖活性以及淋巴细胞分泌IFN γ、IL 10和IL 2的影响。结果　变异和野毒株(wt)各组细胞上清preS2 蛋白的表达量基本一致。变异和wt重组HBsAg刺激T细胞后,其上清MTS显色后的A4 90 值均高于空白组和pCI neo组,说明HBsAg中的蛋白可以促进T细胞增殖;T12 6S氨基酸变异HBsAg能够刺激IFN γ分泌增加;M133T氨基酸变异刺激IL 10分泌增加。结论　这4种乙型肝炎病毒(HBV)变异株感染人体后,机体对它们的细胞免疫反应可能不会有明显的增强或减弱,但也不能忽视T12 6S和M133T变异抗原改变了某些细胞因子的表达,可能对机体细胞免疫造成的潜在影响。     

体外诊断试剂稳定性评价要求及常见问题

稳定性评价是体外诊断试剂产品性能验证的重要组成部分,一般包括实时稳定性、使用稳定性、运输稳定性等,是贯穿于整个试剂研发、上市前评价及上市后监测的重要内容,是产品有效期设计的依据。本文旨在参照我国现行注册申报相关法规及文件要求基础上,结合相关审评经验,阐述体外诊断试剂稳定性评价研究及常见问题,为从事该类产品注册申报前性能研究的从业人员提供参考。     

乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果分析

乙型肝炎病毒(HBV)在我国感染率高,易慢性化,引起肝硬化和原发性肝癌.如何简单快捷地评估HBV在体内是否复制已成为基层医院诊治的首要问题.近年来逐渐认识到乙型肝炎表面抗原大蛋白(LHBs)在HBV感染中具有越来越重要的临床意义,为此我们研究分析了乙肝病毒表面抗原大蛋白检测结果,旨在探讨LHBs反映乙肝患者HBV复制程度的可靠性.     

核苷类似物抗病毒过程中乙型肝炎表面抗原与DNA复制水平的相关性

目的 监测核苷类似物治疗慢性乙犁肝炎(CHB)的过程中HBsAg及HBV DNA水平的动态变化,并探讨HBsAg滴度与HBV DNA复制水平的相关性.方法 选取57例拉米夫定(LAM)、20例阿德福韦(ADV)抗病毒治疗2年以及23例未使用核苷类似物治疗的CHB患者,所有患者均未进行其它抗病毒药物治疗.于不同时间点采集血清标本,动态监测HBsAg及HBV DNA水平,并分析两者之间的相关性.结果 (1)57例LAM抗病毒治疗的CHB患者中,20例有效应答后出现病毒反弹的患者,在HBV DNA发生剧烈变化的4个时间点.未观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平的一致变化,无相关性(P>0.05);37例应答良好的患者,可观察到HBsAg水平随HBV DNA复制水平的一致变化,呈正相关(r=0.71,P<0.05).(2)20例ADV抗病毒治疗的CHB患者中,7例有效应答后出现病毒反弹的患者,未观察到HBsAg随HBV DNA水平的一致变化,无相关性(P>0.05);13例应答良好的患者,可观察到HBsAg随HBV DNA复制水平的一致变化,呈正相关(r=0.73,P<0.05).结论 核苷类似物治疗CHB的过程中,对核苷类似物抗病毒治疗有良好应答的患者,HBsAg滴度在一定程度上能反映HBV DNA复制水平,HBsAg滴度与HBV DNA复制水平有相关性.     

乙型肝炎病毒表面抗原基因点突变对HBsAg抗原性的影响

目的 研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBV S基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播.方法 构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表达质粒,分别将重组野毒株HBsAg表达质粒pSS1adw2及pSS1adr和重组变异株HBsAg表达质粒pSS1adw2-145Arg、pSS1adr-126 Ser和pSS1adr-126 Asn转染COS-7细胞,进行瞬时转染.采用市售HBsAg ELISA检测试剂盒对细胞上清进行抗原性检测.结果 野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性;145位点突变后、导致HBsAg的抗原性下降.结论 推测是由于145位点变异影响了"a"抗原决定簇的空间结构,从而降低了其与抗-HBs的结合能力.     

两种巨细胞病毒IgG抗体ELISA诊断试剂性能评价

目的对国内两种巨细胞病毒IgG抗体ELISA诊断试剂进行评价。方法用两种试剂对BBI公司的质控盘QTC711,血清转化盘PTC901,BIOMEX公司血清转化盘SCP—CMV-001（RP-003）、SCP—CMV-002（RP-019）,儿童、孕妇和门诊患者2163份标本进行检测,对不一致的样本用DiasorinELISA试剂盒和Mikrogen重组免疫印迹试剂盒进行复测,比较两种试剂的灵敏度、特异性和对不同人群的检测差异。结果A试剂对3个血清转化盘的检出时间均早于B试剂,平均提前25d,与AbbottImxCMVIgG检测灵敏度一致。两种试剂检测孕妇样本607份,8份不一致,总符合率98．68％;门诊样本512份,7份不一致,总符合率98．63％;儿童样本1044份,74份不一致,总符合率92．91％,两试剂对儿童人群的符合率低于孕妇和门诊人群。两试剂对三个人群检测均为阴性的161份样本,和A试剂检测为阳性B试剂检测为阴性的89份样本,用意大利Diasorin公司CMV—IgGELISA试剂复测,A试剂与Diasorin的阳性符合率为100％,阴性符合率为93．06％,总符合率为95．22％;B试剂与Diasorin的阴性符合率为100％,78份阳性未检出,总符合率为68．92％。选择A试剂与Diasorin结果不一致的样本12份,一致的样本6份,用重组免疫印迹复测,其中14份阳性,4份阴性。结论国内A试剂对血清转化盘的检测窗口期较B试剂显著提前。两试剂对孕妇和门诊人群的符合率高于儿童人群。两试剂不符合的样本用进口试剂盒复测,A试剂与进口试剂盒的符合率高于B试剂,显示了较高的灵敏度。     

HBsAg ELISA试剂盒筛检结果的评估

目的 评估部分国产与进口HBsAg ELISA试剂盒筛查血源的价值.方法 选用部分国产和进口HBsAg ELISA试剂,对中国生物制品检定所120份HBsAg临床科研组合血清样本及随机抽取400份东莞市无偿献血者血清标本为验证样本进行同步平行检测,以中国生物制品检定所组合血清及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准.结果采用四格表法计算两者对等指标并进行评价.结果 国产HBsAg ELISA试剂和进口HBsAg ELISA试剂的灵敏度分别为85.71%（72/84）和100%（84/84）;特异性分别为100%（436/436）和96.55%（421/436）;尤登指数分别为0.86、0.97;两种试剂重复合格率均为100%.结论 试剂的灵敏度以进口HBsAg ELISA试剂较好,但特异性比国产试剂差,两种试剂的重复性均好,两种试剂联合筛检献血者血样标本可提高临床输血的安全性.     

三种副溶血性弧菌分子检测试剂盒的评价

目的综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果。方法选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAIGEN公司的副溶血性弧菌Real-timePCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定各种试剂盒检出限;以国标法为标准,评价每种试剂盒的灵敏度、特异度和符合率;最后比较三种试剂盒的耗时、成本和操作性。结果 PCR、Real-timePCR和LAMP检测试剂盒的检出限分别为1.18×103cfu/ml、11.8cfu/ml和11.8cfu/ml;在74份海产品检测中,三种试剂盒的灵敏度分别为100%、100%和100%;特异度分别为56%、48%和50%;符合率分别为70%、65%和66%;三种试剂盒检测结果之间差异无统计学意义（P=0.074）;耗时分别为120、80和80min;成本分别为：10、40和45元/次;操作性从难到易排列依次为PCR、Real-timePCR和LAMP检测试剂盒。结论三种分子检测试剂盒的灵敏度高,特异度较低,操作简便,可推荐作为副溶血性弧菌检测的初筛方法。     

丙型肝炎病毒抗体酶标试剂盒的评价

目的了解国内丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂盒的质量。方法应用中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品及美国ＢＢＩＡｎｔｉ－ＨＣＶｐａｎｅｌ对Ａｂｂｏｔ等四家国外及六家国内丙型肝炎病毒抗体试剂盒进行了评价。结果１９８份中国国家丙型肝炎病毒抗体参考品中的１００份阳性参考品的检出率，Ａｂｂｏｔ试剂盒为９８％，国产试剂盒为９５％～９７％。对２５份ＢＢＩｐａｎｅｌ中的２３份阳性血清，ｐａｎｅｌ检出率Ａｂｂｏｔ等国外试剂盒为８７％～１００％，国产试剂盒为７０％～９１％。结论国产试剂盒所用丙型肝炎病毒抗原结构区抗原与国外试剂一致，但非结构区抗原较弱。提高国产丙型肝炎病毒抗体试剂盒的质量，应增加高质量的非结构区抗原的应用     

乙型肝炎病毒表面抗原突变体稳定表达细胞系的建立和抗原性鉴定

目的 探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的分子机制。方法 在对46例HBsAg阴性但血清HBVDNA阳性感染者的S基因序列进行分析的基础上，构建了6株新的HBsAg变异株(4株联合点突变株，2株插入变异株)的EBO-plpp真核表达载体，并转染了COS7细胞，建立了这6株HBsAg变异株的稳定表达细胞系。分别用酶联免疫法(ELISA)和放射免疫法(RIA)对细胞表达的HBsAg抗原性进行检测。结果 除1例插入变异株可检测到较弱的阳性外，其余5株均检测不到HBsAg的存在。结论 新发现的HBsAg联合点突变和氨基酸插入变异，均对HBsAg的抗原性有负面的影响，是造成HBsAg阴性HBV感染的直接原因。     

乙肝母婴阻断"成功"儿童外周血中检出HBV DNA

目的 检测乙型肝炎母婴阻断成功儿童血清HBV DNA,提出应该完善母婴阻断效果评价指标的建议.方法 采集乙肝疫苗母婴阻断后HBsAg阴性的儿童血清标本,经试剂盒提取HBVDNA,采用巢式PCR方法 扩增HBV DNA S区基因片段后纯化测序.结果 140例儿童血标本中,12例HBV DNA阳性,阳性率8.6%;S基因测序检测未发现突变株.结论 鉴于血清学检测方法 敏感性低于PCR扩增方法 .在评价乙型肝炎母婴阻断效果时,加入HBV DNA指标,可使其更完善.     

我国戊型肝炎ELISA诊断试剂的质量比较

目的对戊型肝炎(戊肝)诊断试剂进行质量评价。方法选择北京万泰生物药业(万泰),北京现代高达生物技术(高达),上海科华生物工程(科华),GeneLabs Diagnostic Inc(GeneLabs),和河南华美生物工程(华美)共5家公司生产的检测戊肝病毒IgG(HEV-IgG)抗体的ELISA试剂,分别检测戊肝诊断试剂参比品、可疑戊肝临床患者和正常人群血清HEV抗体。结果对24份阳性和30份阴性参比品检测,以万泰试剂检测符合率最高,阳性和阴性符合率分别为95.83%(23/24)和96.67%(29/30),总符合率为96.30%,其次为高达试剂87.50%(21/24)和100%(30/30),总符合率为94.44%,华美试剂87.50%(21/24)和96.67%(29/30),总符合率92.59%,GeneLabs66.67%(16/24)和100%(30/30),总符合率为85.18%,科华试剂45.83%(11/24)和100%(30/30),总符合率为75.93%。对42份可疑戊肝患者血清HEV抗体检测阳性率,高达试剂为100%(42),万泰和华美试剂均为97.62%(41),GeneLabs和科华试剂均为90.48%(38)。对230份正常人群HEV抗体检测阳性率,从高到低依次为万泰试剂31.74%(73),华美试剂为23.91%(55),高达试剂为17.39%(40),GeneLabs和科华试剂分别是7.83%(18)和3.48%(8)。结论5家试剂检测急性期戊肝患者抗体阳性率均能达90%以上,具有很高的一致率,而应用于普通人群HEV感染的调查,其抗体阳性率从31.74%~3.48%不等。不同的试剂存在假阳性或和阳性漏检现象。依本室参比品和人群血清阳性率来看,万泰试剂检出率较高。     

逆转录病毒载体介导的HBsAg抗原表达及其稳定性研究

目的 探讨逆转录病毒载体介导的HBsAg抗原的表达及其稳定性。方法 将HBsAg基因插入逆转录病毒载体PLXSN中，构建成重组逆转录病毒载体。用电穿孔法转染PA317细胞，包装成假病毒颗粒，在不同温度下冻存。于不同时间用假病毒颗粒感染HepG2、NIH3T3及293细胞，用RT—PCR及ELISA法检测HBsAg表达；以感染后G418抗性克隆形成数确定假病毒颗粒的活力。结果 在各个时间段HBsAg表达量均差异无显著性。在-20℃冻存时，6个月后克隆数即下降过半，12个月后仅形成少数克隆，24个月后无克隆形成；在-40℃冻存时12个月后HepG2、NIH3T3、293形成的克隆数分别为121、332和89，24个月后分别为42、137和43，与冻存前比较差异有显著性；-70℃冻存时，24个月后克隆数分别为159、463和112，与冻存前比较差异无显著性。结论 HBsAg重组逆转录病毒颗粒在-70℃保存2年后，病毒活力未受明显影响，HBsAg表达量亦无明显改变。     

在慢性乙型肝炎治疗过程中HBsAg水平与HBV DNA病毒复制的相关性分析

目的： 病毒载量的测定常被用来诊断和监测慢性乙型肝炎的疗效。文献报道采用全自动微粒子化学发光免疫反应测定HBsAg水平可作为替代标记。本研究旨在进一步分析慢性乙型肝炎治疗过程中血清HBsAg水平和HBV DNA水平的相关性。方法：本研究选取47例慢性乙型肝炎的患者［男性35人,女性12人,平均年龄(35±8)岁］。聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗患者（18例）、聚乙二醇化干扰素α-2a +拉米夫定联合治疗患者（14例）、拉米夫定单一治疗患者（15例）治疗48周并留取0、4、8、24、48、72周的血清。用TaqMan PCR测定HBV DNA水平,全自动微粒子化学发光免疫反应测定HBsAg水平。结果：18例聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗的患者和14例聚乙二醇化干扰素α-2a +拉米夫定联合治疗的患者可观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平的一致变化,呈显著相关（r=0.83,P<0.01）。而在15例拉米夫定单一治疗的患者则未观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平一致的变化趋势,但无相关性。聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗、聚乙二醇化干扰素α-2a+拉米夫定联合治疗的患者HBsAg水平中位数下降幅度均明显优于拉米夫定单一治疗的患者（P<0.05）。结论：在以干扰素为基础的慢性乙型肝炎治疗期间,血清HBsAg水平与HBV DNA 水平显著相关,动态HBsAg定量监测对治疗有一定的指导意义,可作为监测HBV疗效的替代标记。     

慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV抗原表达特征及其临床意义

目的探讨慢性乙型病毒性肝炎肝活检组织中检测乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝核心抗原(HBcAg)表达强度及表达方式的必要性。方法采用EnVision免疫组织化学法检测196例慢性乙型肝炎患者肝穿组织中HBsAg和HBcAg的表达水平,并用荧光定量PCR检测其血清中的HBV DNA的含量。对肝组织进行炎症活动度分级和纤维化分期。结果肝组织中的HBsAg表达强度和表达方式与炎症分级、纤维化分期和血清乙肝病毒载量均无相关性(P>0.05)。HBcAg表达强度与炎症分级无相关性(r=-0.02,P>0.05);与纤维化分期呈负相关(r=-0.28,P<0.01);与血清乙肝病毒载量呈正相关(r=0.53,P<0.01)。HBcAg表达方式与炎症分级为负相关(r=-0.27,P<0.01),其中浆型组炎症活动度分级高于核型组和混合型组(P<0.01),混合型组高于核型组(P<0.01)。HBcAg表达方式与纤维化分期亦呈较弱的负相关(r=-0.23,P<0.01),其中浆型组纤维化分期高于核型组和混合型组(P<0.05)。HBcAg表达方式与血清乙肝病毒载量呈正相关(r=0.22,P<0.01)。结论区分肝组织中的HBsAg表达强度和表达方式无益于了解慢性乙型肝炎患者肝损害的程度,而检测肝组织中的HBcAg则有助于临床抗病毒治疗。