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相似文献
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1.
将hGMCSF基因克隆至真核表达质粒pCDS中,构建成重组质粒pCG1。用电穿孔法将质粒pCG1导入COS7细胞和直接注射小鼠骨骼肌内,ELISA检测显示质粒pCG1转染COS7细胞后48、72、96h和肌注质粒pCG1后d10、d15、d20、d25小鼠体内均有hGMCSF的表达。生物学活性检测显示含肌注pCG1的小鼠血液有维持TF1细胞生长的作用,表明重组质粒pCG1表达分泌的hGMCSF具有生物学活性  相似文献   

2.
利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体(ScFv)的原核表达载体,并在大肠杆菌JM109中表达可溶性的HCV-core-ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有HCV-core-ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经NcoⅠ/Not Ⅰ酶切鉴定,该ScFv基因由750bp组成。将其亚克隆到pCANTAB5E表达载体中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒进行DNA序列测定,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM109,在其培养上清中获得了可溶性HCV-core-ScFv的表达。酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV-core-ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PA  相似文献   

3.
应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增出完整的丙型肝炎病毒核心蛋白基因,将其克隆于表达载体pBV220 PRPL启动子的下游,构建了重组质粒pBV-HCV;转化大肠杆菌后,以非融合蛋白方式表达了丙型肝炎病毒核心蛋白。SDS-PAGE电泳显示,此蛋白的分子量约为20kDa,表达量约占菌体蛋白的11%;Western印迹实验证明,此蛋白能与慢性丙型肝炎患者血清发生特异反应。序列分析结果表明,克隆于pBV  相似文献   

4.
目的:构建我国登革2 型病毒43 株(D2-43)的PrM-E基因片段,观察其在哺乳动物细胞中的表达。方法:采用RT-PCR和分子克隆技术构建PrM-E基因片段,包括编码PrM 的信号肽序列、完整的PrM 蛋白和去除羧基端跨膜疏水区部分氨基酸的97.8% E蛋白的基因片段。用电穿孔法将构建的含有PrM-E基因的pCMV-ME真核重组质粒导入哺乳动物细胞中进行表达。采用蛋白印迹和间接免疫荧光法对表达产物进行特异性鉴定。结果与结论:构建的PrM-E基因全长2 019个核苷酸,序列分析证明其核苷酸序列是正确的。PrM-E基因在BHK-21 细胞中获得高效表达,表达蛋白可与D2-43 多克隆抗体起特异反应,且表达蛋白主要位于细胞浆中。  相似文献   

5.
目的:克隆MutS基因并构建高效表达菌株,为建立DNA错配突变检测系统和应用于临床肿瘤的检测等打下重要的基础。方法与结果:通过聚合酶链反应(PCR)从E.coli基因组中扩增得到MutS基因(2.6kb),克隆在pGEM-T载体上,构建了重组质粒载体pGEM-T/MutS,核酸序列分析表明所克隆的基因与Genbank的MutS一致。然后亚克隆到原核表达载体pBV220上,构建了重组菌株DH5α/pBV220-MutS,42℃热诱导表达MutS蛋白。SDS-PAGE分析显示在相对分子质量97×103左右处出现一条表达量高达30%以上的表达蛋白带,而对照菌株表达量很低。将重组质粒pBV220-MutS转化到MutS缺陷菌株ES1301互补了该菌株MutS的缺陷,使其链霉素、利福平抗性(Strr,Rifr)的突变频率分别降低99%、96%。结论:克隆得到MutS基因并在大肠杆菌中得到高效表达,表达的MutS蛋白在菌体内具有生物学功能  相似文献   

6.
用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原Ⅰ(CFA/Ⅰ)的重组克隆,通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化,再经超速离心及DEAE-Sephadex A50柱层析,得到了CFA/Ⅰ的纯化样品,得率约为0.9mg/g湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示一条蛋白质带,其分子量为15kDa,与天然CFA/Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明,纯化的重组克隆CFA/Ⅰ与天然CFA/  相似文献   

7.
目的:构建人脑源性神经营养因子和神经营养素-3重组腺病毒,使其携带神经营养因子感染神经系统细胞,在局部释放有生物活性的营养因子。方法:U针人全长BDNF与NT3基因分别插入pCDNA3载体,然后将表达序列CMV-BDNF-BGHpA和CMV-NT3-BGHpA切下,插入E1区缺失的腺病毒载体pHΔElsp1A中,与pJM17共转染293细胞,通过同源重组产生重组腺病毒。结果和结论:经过二次CsCl  相似文献   

8.
用基因重组干扰素(IFN-γ)对41例骨髓增生异常综合征(MDS)病人造血祖细胞的作用进行了体外观察,结果:①IFN-γ体外对非血液病对照组病人的红系祖细胞(CFU-E)和粒系祖细胞(CFU-GM)无明显促增殖作用,而对MDS病人的CFU-E和CFU-GM有明显促增殖作用。其作用呈剂量依赖型,在IU/ml时作用最小,100U/ml时作用最强;②IFN-γ对MDS原CFUE和CFU-GM增殖正常组加入IFN-γ后集落数增加最明显,而对增殖明显减低组集落数无明显增加;③IFN-γ对MDS不同亚型病人CFUE和CFU-GM作用不同,其中对转化中原始细胞增多的难治性贫血(RAEB-T)型病人有效率较高。  相似文献   

9.
用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ(CFA/Ⅰ)的重组克隆,通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化,再经超速离心及DEAE-SephadexA50柱层析,得到了CPA/Ⅰ的纯化样品,得率约为0.9mg/g湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示一条蛋白质带,其分子量为15kDa,与天然CFA/Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明,纯化的重组克隆CFA/Ⅰ与天然CFA/Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了CFA/Ⅰ的菌毛形态。  相似文献   

10.
我国登革2型病毒株E蛋白B抗原区基因的表达与鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的和方法:通过对登革2型病毒E蛋白B区基因片段的表达,研究B区蛋白的抗原性。首先采用PCR方法扩增了编码B区蛋白的基因片段,并将其插入到pMal-C2原核载体进行融合表达。采用蛋白质印迹法和ELISA法对表达产物进行特异性鉴定。结果与结论:在构建的重组质粒B165-pMal中,E蛋白B区与大肠杆菌的麦芽糖结合蛋白(MBP)基因以融合形式高效表达。该融合蛋白可与登革1 ̄4型病毒的鼠腹水抗体起特异反  相似文献   

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