荧光定量PCR技术检测浆膜腔积液中CEA-mRNA对恶性肿瘤的诊断价值

目的 :通过定量检测浆膜腔积液中CEA mRNA的拷贝数 ,探讨其对恶性积液的诊断价值。方法 :采用荧光定量RT PCR技术分别检测经临床证实的 3 1例恶性浆膜腔积液和 2 8例良性浆膜腔积液样本中CEA mRNA拷贝数 ;所有病例均行脱落细胞涂片检测。结果 :3 1例恶性积液样本中CEA mRNA阳性率为 74 2 % ( 2 3 /3 1) ,CEA mRNA拷贝数在 1 2 2 693 7 5 /mL中位数为 76拷贝 /mL ,脱落细胞检测阳性率为 3 8 7% ( 12 /3 1) ;良性浆膜腔积液样本中CEA mRNA阳性率为 14 3 % ( 4 /2 8) ,拷贝数在 1 1～ 5 7/mL ,中位数为 2 3拷贝 /mL。结论 :荧光定量PCR技术检测积液中CEA mRNA的拷贝数对恶性积液有较高的敏感性 ,有临床实用价值     

胃癌术中腹腔冲洗液Cox-2 mRNA及CEA mRNA检测临床意义的探讨

目的：探讨腹腔冲洗液Cox-2 mRNA及CEA mRNA检测的可行性和临床意义。方法：前瞻性比较胃癌腹腔冲洗液RT-PCR法与常规细胞学法（PLC）检出脱落癌细胞的阳性率。结果：32例胃癌患者腹腔冲洗液中Cox-2 mRNA及CEA mRNA检出阳性率分别为53．1％（17／32）及56．3％（18／32），明显高于PLC检出癌细胞阳性率（21．9％），Х^2分别为5．497及4．433，P〈0．05。17例RT—PCR法检出阳性病例中，COX-2 mRNA法检出16例（94．1％），CEA mRNA法检出15例（88．2％），两种基因腹腔冲洗液脱落癌细胞检测阳性率大致相同，且检测阳性率与浆膜浸润阳性、浆膜浸润面积大、病理组织学类型、淋巴结转移和TNM病期呈正相关。结论：RT—PCR法检测胃癌腹腔冲洗液Cox-2 mRNA与CEA mRNA表达，可显著提高脱落癌细胞的检测阳性率，具有广泛的临床应用价值和意义。     

联合检测E-cadherin、CEA及Calretinin在浆膜腔积液细胞学鉴别诊断中的意义

背景与目的：浆膜腔积液中转移性腺癌细胞、恶性上皮型间皮瘤细胞和反应性间皮细胞的形态有不少相似之处，有时仅凭形态学特征不能做出准确诊断。近年来免疫细胞化学在这方面得到较多应用，但国内报道仅局限于用CK、EMA、CEA、Vim和HBME-1几种抗体，而且不能较好地进行细胞学的鉴别诊断。本研究旨在探讨联合检测E-cadherin、CEA及calretinin在浆膜腔积液鉴别诊断中的应用价值。方法：选用浆膜腔积液标本共93例，其中胸水66例、腹水24例、心包积液3例。经组织学检查或结合临床资料证实的转移性腺癌55例、恶性上皮型间皮瘤6例、间皮细胞反应性增生32例。每例均制备HE染色的涂片和细胞块，并用细胞块切片作免疫细胞化学染色。结果：E-cadherin、CEA对诊断转移性腺癌的敏感性分别为85．5％(47／55)、78．2％(43／55)，特异性分别为100％(38／38)、97．4％(37／38)。E-cadherin和CEA联合应用诊断浆膜腔积液转移性腺癌的阳性率为96．4％(53／55)。Calretinin对诊断间皮瘤和间皮细胞增生的敏感性和特异性分别为81.6％(31／38)和87．2％(48／55)。结论：E-cadherin、CEA和calretinin是鉴别浆膜腔积液转移性腺癌细胞和间皮源性细胞有价值的一组抗体。     

浆膜腔积液肿瘤标志物与血清肿瘤标志物及脱落细胞学相关性探讨

目的:探讨浆膜腔积液肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199、125、724、153、242(CA199、CA125、CA724、CA153、CA242)及甲胎蛋白(AFP)与同时期血清肿瘤标志物及脱落细胞学之间的关系。方法:选择202例确诊为恶性肿瘤并伴有浆膜腔积液的患者,依据细胞学检查结果分为脱落细胞学阳性组和脱落细胞学阴性组。对脱落细胞学阳性组的恶性浆膜腔积液患者的同一时间点的血清及浆膜腔积液肿瘤标志物水平进行检测分析。并对脱落细胞学阳性组和阴性组间的浆膜腔积液肿瘤标志物检测分析。结果:恶性浆膜腔积液肿瘤标志物水平明显高于血清,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。恶性胸腹腔积液肿瘤标志物与血清肿瘤标志物相关性好(P<0.01)。胃癌患者脱落细胞学阳性组与阴性组的浆膜腔积液肿瘤标志物水平比较发现CEA、CA125、CA199差异无统计学意义(P>0.05),CA724差异有统计学意义(P<0.05)。结论:恶性浆膜腔积液中肿瘤标志物水平与血清中肿瘤标志物水平具有很好相关性,血清肿瘤标志物的检测可以很好的反应恶性浆膜腔积液中肿瘤标志物水平。且胃癌腹水中CA724水平具有辅助诊断浆膜腔积液良恶性的价值。     

CK19mRNA和CK19蛋白联合检测在恶性胸腔积液诊断中的价值

[目的]探讨联合检测细胞角蛋白19（CK19）mRNA和CK19蛋白在恶性胸腔积液患者诊断中的价值。[方法]32例恶性胸腔积液患者和30例良性胸腔积液患者的胸水标本,以定量逆转录-聚合酶链反应法（RT—PCR）测定胸液CK19mRNA和酶联免疫吸附法（ELISA）测定胸液CK19蛋白。[结果]恶性良性胸腔积液组CK19mRNA的阳性率分别为62．5％和16．7％：恶性良性胸液组CK19蛋白的阳性率为43．8％和10．0％（P〈0．01）。联合检测胸液CK19mRNA和CK19蛋白诊断恶性胸腔积液敏感性和准确性分别为81.3％和79．0％。[结论]CK19mRNA和CK19蛋白联合检测可提高恶性胸腔积液诊断的准确性．对良恶性胸腔积液的鉴别诊断有重要参考价值。     

联合检测端粒酶和癌胚抗原对良恶性胸腔积液的诊断价值的研究

目的：探讨联合检测肿瘤标志端粒酶和癌胚抗原（CEA）对良恶性胸腔积液的诊断价值。方法：选择恶性胸腔积液31例，非恶性胸腔积液32例，采用聚合酶链反应-酶链免疫吸附分析法（PCR-EL—ISA）检测胸腔积液端粒酶活性，用酶免疫分析法（EIA）检测胸腔积液CEA水平，并对测定结果进行统计学处理。结果：端粒酶活性测定诊断恶性胸腔积液的敏感性为87．1％（27／31），特异性90．6％（29／32）。CEA诊断恶性胸腔积液的敏感性为77．4％（24／31），特异性87．5％（28／32）。结论：端粒酶活性的测定，在良恶性胸腔积液的鉴别诊断中具有重要价值，但存在假阴性和假阳性，若与胸腔积液CEA联合检测，对良恶性胸腔积液的鉴别诊断意义更大。     

非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义

目的：检测非小细胞肺癌患者CK19mRNA和LUNXmRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性．方法：选择初治的非小细胞肺癌（NSCLC）患者62例，以肺部良性疾病10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19mRNA和LUNXmRNA的表达。结果：肺癌和良性病变肺组织RT—PCR检测结果显示CK19mRNA和LUNXmRNA表达阳性率为100％：62例NSCLC患者骨髓标本FQ—RT—PCR检测结果显示，NSCLC患者中骨髓CK19mRNA表达阳性率45．2％（28／62），明显高于肺良性病变组10％（1／10）（P=0．037），NSCLC组骨髓LUNXmRNA表达阳性率38．7％（24／62）明显高于肺良性病变组0％（0／10）（P=0．017）；骨髓CK19mRNA表达阳性率随病理分期升高，接近统计学意义（P=0．06），而与病理类型、肿瘤分化程度无关；骨髓LUNXmRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），而与病理类型、肿瘤分化程度无关：骨髓CK19mRNA和LUNXmRNA表达明显相关（P〈0．001）结论：CK19mRNA和LUNXmRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗、     

LunX和CK19基因定量表达在肺癌诊断及疗效观察中的应用研究

目的：探讨采用荧光定量RT—PCR检测肺癌患者外周血LunX和CK19基因的表达，以及在肺癌诊断和疗效观察中的应用价值。方法：建立定量检测LunX和CK19 mRNA的荧光定量RT—PCR技术，检测在肺癌患者外周血的表达及治疗前后的表达水平的比较。结果：外周血标本中治疗前病例、治疗后病例和肺部良性病例LunX mRNA的表达分别为83．87％（26／31）、46．67％（7／15）和10％（1／10）。治疗前肺癌组和肺部良性病例组LunX mRNA的表达差异有统计学意义，X^2=15．2，P〈0．001；肺癌治疗前后LunX mRNA的表达也有统计学意义，X^2=4．9，P〈0．05。正常对照10例和非肺癌的肿瘤患者4例LunX mRNA的表达均为阴性，与LunX基因相比较，CK19基因灵敏度相近，但特异性较差。结论：荧光定量RT—PCR检测LunX基因的表达可以作为肺癌诊断及治疗前后疗效考核的重要参考指标，应用价值优于CK19基因。     

实时荧光定量RT-PCR检测胃癌腹腔冲洗液CK20、CEA mRNA

目的研究实时荧光定量RT-PCR方法定量检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK20、CEA mRNA的表达,并探讨其临床意义.方法通过实时定量荧光RT-PCR方法,对56例胃癌患者术中腹腔冲洗液中定量检测CK20、CEA mRNA的表达.结果浆膜受侵患者CEA mRNA的表达率61.5%(16/26),明显高于未及浆膜者30.0%(9/30)(P＜0.05).浆膜受侵患者CK20 mRNA的表达率46.2%(12/26)与未及浆膜者56.7%(17/30)(P>0.05)差异无显著性.结论实时定量荧光RT-PCR检测CEA mRNA可作为胃癌腹腔脱落癌细胞的诊断或腹膜转移的预测,指导术中干预治疗.     

CEA mRNA 、CEA和CA19-9检测在良、恶性胸水诊断中的应用

目的：研究检测癌胚抗原信使核糖核酸（CEA mRNA）、癌胚抗原（CEA）和糖链蛋白抗原19－9（CA19－9）水平在诊断与鉴别诊断良、恶性胸水中的应用价值。方法：恶性胸水组76人，良性胸水组58例，采集胸水，应用反转录套式聚合酶链反应（RT－NP－PCR）技术检测CEA mRNA，磁分离酶免疫技术（MAIA）检测CEA和CA19－9。结果：CEA mRNA、CEA和CA19－9的阳性率，恶性胸水组分别为78.9%（60／76）、52.6%（40／76）和55.3%（42／76），良笥胸水组分别为8.6%（5／58）、5.2%(3/58)和3.4%（2／58），良、恶性胸水组各 示阳性结果的差异均具有显著性（P＜0.001）。检测CEA mRNA、CEA和CA19－9水平诊断恶性胸水的特异性分别为91.4%、94.8%和96.6%，敏感性分别为78.9%、52.6%和55.3%。三个指标联检的特异性为90.8%、敏感性为82.8%。结论：CEA mRNA、CEA和CA19－9在恶性胸水中有较高的阳性率，其中以CEA mRNA指标的阳性率最高，应用CEA mRNA、CEA和CA19－9指标诊断与鉴别诊断良、恶性胸水具有较高的实用价值，三者联检可以进一步提高敏感性。     

联合检测EGFR、CEA对恶性胸腔积液的诊断价值

目的:评价联合检测胸腔积液患者的胸水细胞块表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因拷贝数,以及胸水、血清CEA水平对良恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法:应用荧光原位杂交技术（Fish法）检测恶性胸腔积液（n=35）、良性胸腔积液（n=30)组患者胸水细胞块EGFR基因拷贝数水平。采用电化学发光全自动生化分析仪检测胸水及血清中CEA水平,根据受试者工作特性曲线（ROC）选取最佳灵敏性和特异性的点作为临界值,评价CEA及联合检测EGFR基因拷贝数对良恶性胸腔积液的诊断价值。结果:35例恶性胸腔积液完成Fish检测。恶性胸腔积液中15例阴性,20例阳性,阳性率为57.1％。其中13例为EGFR基因高度多体性,7例为EGFR基因扩增。肺腺癌16例中,EGFR基因高度多体性、扩增14例,肺腺癌扩增率为87.5％;肺鳞癌14例中,EGFR基因簇状扩增3例(21.4％),点状扩增3例(21.4％),无扩增8例(57.1％),肺鳞癌扩增率为42.9％。腺癌Fish阳性率(87.5％)高于鳞癌(42.9％）,P<0．01。30例良性胸腔积液中有1例脓胸患者EGFR Fish检测阳性,阳性率为3.3%,余检测结果均阴性。恶性胸腔积液患者胸水及血清CEA分别为（220.9±71.65）ng/ml、(18.11±11.38）ng/ml,显著高于良性胸腔积液组（2.31±1.29)ng/ml、(1.67±1.06）ng/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。其中,恶性胸腔积液胸水CEA明显高于血清CEA,而良性胸腔积液组中,胸水CEA与血清CEA无明显差异。肺腺癌所致胸水及血清CEA分别为（441.02±102.65)ng/ml、(32.87±28.66）ng/ml,鳞癌所致胸水及血清CEA分别为（28.75±21.39）ng/ml、（5.99±5.32）ng/ml,腺癌显著高于鳞癌,差异有统计学意义（P<0.01）。比较胸水EGFR、CEA对良恶性胸腔积液诊断的效能,两者之间无明显差异（P=0.453＞0.05）。Spearman相关性分析胸水EGFR同CEA之间存在显著正相关。结论:EGFR在恶性胸腔积液的形成中起重要作用,通过Fish技术检测胸水细胞块EGFR基因拷贝数可行,其敏感性为57.1%。对肺腺癌导致恶性胸腔积液的诊断敏感性为87.5%。CEA（临界值5.0ng/ml）在恶性胸腔积液及血清中显著高于良性,其中胸水CEA检测诊断敏感性为65.7%,而在腺癌中为87.5%,其在胸水及血清中的比值＞1.5有助于恶性胸腔积液的诊断。EGFR基因突变阳性与肿瘤标记物CEA阳性表达呈正相关,尤见于肺腺癌患者,两者联合检测可提高诊断性试验的准确性。     

1466例浆膜腔积液细胞学分析

目的：检查和分析浆膜腔积液中恶性细胞，讨论其临床诊断价值。方法：临床抽取浆膜腔积液立即送检，离b，行HE染色，镜检。结果：1466例浆膜腔积液中，胸腔积液为973例（66．4％），腹水373例（25．4％），心包积液1二I）例（8．2％）。其中细胞学圄赡耻酬蝴楠274例，阳性率为18．7％。恶性积液中，腺癌231例（84．3％），鳞癌9例（1．6％），恶性淋巴瘤7例（1．3％），未分化癌4例（0．7％），恶性间皮瘤4例（0．7％）。结论：浆膜腔积液的细胞学检查对疾病的诊断治疗及预后有重要的指导意义。     

荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的研究

目的 通过检测大肠癌病人外周血清中癌胚抗原(CEA),外周血及淋巴结中癌胚抗原信使核糖核酸(CEA mRNA)的相对表达量,建立外周血中定量检测CEA mRNA的方法,并探讨CEA mRNA检测在结直肠癌诊断中的临床意义。方法 采用逆转录-荧光定量PCR技术检测大肠癌病人外周血及淋巴结中CEA mRNA的相对表达量,并用电化学发光法检测外周血中的CEA。结果 50例大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率为84%,与正常对照组(20人无1例阳性)比较,差异有统计学意义(P＜0.01);CEA 阳性率为22%与CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义(P＜0.01)。淋巴结CEA mRNA表达阳性率32.3%,与外周血中CEA mRNA表达阳性率相比两者差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 建立了SYBRGREEN 荧光定量PCR检测大肠癌患者CEA mRNA表达的方法,大肠癌患者手术前外周血CEA mRNA表达阳性率较高,且显著高于外周血中CEA含量以及淋巴结中CEA mRNA表达阳性率,可用于大肠癌患者的术前诊断。     

两种方法检测myc基因表达水平在乳腺癌诊断中的应用

目的：比较荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）对乳腺癌相关基因一核内原癌基因（c—mvc）的检测灵敏度和特异性，探讨其在乳腺癌诊断中的应用。方法：采用荧光定量聚合酶链反应，并以β2-微球蛋白为内对照，检测乳腺癌和良性乳腺疾病等不同病种患者139例及健康志愿者40例外周血中mycmRNA水平，同时采用逆转录聚合酶链反应进行对比研究。结果：若以myc／β2-微球蛋白高于正常对照组x＋2s为阳性，78例乳腺癌患者myc mRNA基因表达阳性数为32，阳性率41．0％，良性乳腺疾病组和其它肿瘤组阳性数为0。mvc mRNA在乳腺癌组表达高于良性乳腺疾病组和其它病种组（P〈0．01），在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义（P〉0．05）。132-微球蛋白在四组间差异无显著性意义（P〉O．05）。FQ—PCR对乳腺癌诊断的灵敏度和特异性为41．0％，82．2％，RT—PCR则分别为32．1％，75．2％，FQ—PCR均显著高于RT—PCR法。结论：FQ—PCR检测myc对乳腺癌诊断灵敏度和特异性较高，具有高精确性、高效率和污染小等特点，而且标本来源容易，FQ—PCR对myc的检测可有效辅助诊断乳腺癌。     

细胞角蛋白19片断与癌胚抗原联合检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的：探讨角蛋白19片断(CYFRRA21．1)与癌胚抗原(CEA)的联合检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：采用放射免疫分析法对40例恶性胸腔积液组、32例良性胸腔积液组，分别测定其血清及胸液中CYFRA21．1和CEA浓度。结果：恶性胸腔积液组血清及胸液CYFRA21．1和CEA浓度均显著高于良性胸腔积液组。结论：联合检测CYFRA21-与CEA有利于良恶性胸液的鉴别诊断。     

鼻咽癌患者血浆EBVDNA水平和VCA—IgA检测的临床意义

目的：探讨鼻咽癌患者血浆EBVDNA水平和VCA—IgA联合检测对鼻咽癌早期诊断的临床价值。方法：用荧光定量PCR方法检测血浆EBVDNA水平，常规免疫酶法检测VCA—IgA抗体滴度。结果：68例鼻咽癌患者中，EBVDNA阳性率95．59％，中位拷贝数93× 10^4 copies／ml，VCA—IgA抗体阳性率92．65％，抗体滴度≥1：20；其他头颈肿瘤36例中，EBVDVA阳性率5．56％，中位拷贝数为0copies／ml，VCA—IgA抗体阳率36．11％，阳性滴度均≤1：20；健康对照组EBVDNA阳性率为35．56％，其滴度除3例≥1：40外，余均≤1：20。鼻咽癌患者中EBVDNA和VCA—IgA抗体阳性率显著高于对照组。结论：进-步证实EBV与鼻咽癌有密切关系；EBVDNA水平和VCA—IgA抗体滴度联合检测，有助于鼻咽癌的早期辅助诊断。     

DNA倍体联合肿瘤标志物检测在胸腔积液诊断中的应用

目的探讨DNA倍体分析联合肿瘤标志物在良、恶性胸腔积液诊断中的价值。方法将108例胸腔积液分为恶性组（68例）和良性组（40例）。除常规细胞学检查外,以流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测患者胸腔积液中的DNA倍体,采用化学发光法测定胸腔积液中CEA、CA199、NSE、CYFRA211、SCC、CA125等肿瘤标志物含量。比较DNA倍体联合肿瘤标志物诊断与细胞学诊断的优劣。结果DNA倍体诊断恶性胸腔积液的敏感性、特异性分别为70．6％、95．0％,Youden’s指数为0．656,敏感度稍高于细胞学诊断的65．1％,差异无统计学意义（P〉0．05）。除NSE外,其他5种肿瘤标志物在恶性胸腔积液中浓度均高于良性,差异有统计学意义（P〈0．05）。CYFRA211、CEA、CAl99、CAl25、SCC、NSE的AUC分别为：0．893,0．828,0．759,0．691,0．524及0．490;COV分别为：149．2ng／mL,53．6ng／mL,78．2IU／mL,1559．0IU／mL,48．72ng／mL及78．3ng／mL;敏感性分别为：44．1％,44．1％,35．3％,29．4％,13．2％,5．9％,特异性均为100％。4种肿瘤标志物联合检测＋DNA倍体检测的敏感性为88．2％（60／68）,特异性95％,显著高于细胞学诊断。结论DNA倍体联合CEA、CA199、CYFRA211和CA125检测诊断恶性胸腔积液有较高敏感性,具有定量、快速、价廉、易标准化的特点,且操作简单。     

胃癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达及其临床意义分析

目的：探讨胃癌患者外周血癌胚抗原（CEA）mRNA表达及其与相关病理因素、近期疗效、预后的关系。方法：应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测58例胃癌患者化疗前、后20例健康对照者外周血癌胚抗原CEAmRNA表达；同时采用化学发光法测定胃癌患者血清CEA水平。患者随访2年。结果：胃癌患者外周血CEAmRNA阳性率为56．89％（33／58），显著高于健康对照组，二者差异有统计学意义（P〈0．001）；胃癌患者外周血CEAmRNA表达与肿瘤浸润深度（P=0．035）、淋巴结转移（P=0．042）、远处转移（P=0．006）和血清CEA水平相关（P=0．001）；多因素Logistic回归分析表明：淋巴结转移和血清CEA水平是影响胃癌患者外周血CEAmRNA表达的独立因素；血清CEA阳性率31．03％（18／58），胃癌患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于CEA蛋白水平（Χ^2=7．873，P=0．005），TaqMan定量RT—PCR与化学发光法检测CEA的符合率为88．89％（化学发光法检测阳性的病例TaqMan定量RT—PCR检测阳性率）；化疗后CEAmRNA阳性率略有下降，但不显著。近期疗效无效的患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者（Χ^2=9．992，P=0．002）。平均随访2年后，CEAmRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别是33．33％和77．27％，差异具有显著性（P=0．002）。结论：外周血CEAmRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志；定期监测胃癌患者外周血CEAmRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。肿瘤浸润深度和血清CEA蛋白水平与外周血肿瘤细胞微转移相关。CEAmRNA的检测优于蛋白水平的检测，有助于胃癌的早期诊断。