AAV载体介导的人β_2-AR、EGFP基因导入心肌细胞的研究

目的 :观察腺相关病毒 (ａｄｅｎｏ -ａｓｓｏｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ,简称ＡＡＶ)载体介导的人β2 肾上腺素能受体 (简称β2 -ＡＲ)基因和增强型绿色荧光蛋白基因 (简称ＥＧＦＰ)对心肌细胞的转染及其表达。方法 :构建以串联方式携带 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ基因的ＡＡＶ载体 ,转染大鼠的心肌细胞 ,检测心肌细胞 β2 -ＡＲ、ＥＧＦＰ的表达及ｃＡＭＰ的含量。结果 :Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示转染的心肌细胞表达人 β2 -ＡＲｍＲＮＡ ;Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人β2 -ＡＲ ;并在荧光显微镜下可观察到心肌细胞表达…     

血管细胞粘附分子在急性缺血冠脉综合征中的变化及其意义

目的 :探讨急性心肌梗塞 (ＡＭＩ)和不稳定性心绞痛 (ＵＡＰ)发病过程中血清可溶性血管细胞粘附分子(ｓＶＣＡＭ - 1 )浓度的变化及其意义。方法 :选择急性心肌梗塞患者 1 2例 ,不稳定心绞痛患者 1 6例 ,健康对照者 1 0例 ,用ＥＬＩＳＡ法测定其发病 2 4ｈ内及发病后 1周血清中可溶性血管细胞粘附分子的含量。结果 :急性心肌梗塞和不稳定性心绞痛患者发病 2 4ｈ内血清ｓＶＣＡＭ - 1显著高于健康对照组 (Ｐ <0 0 1 ) ,发病后 1周ｓＶＣＡＭ - 1含量虽较前下降 ,但仍高于对照组 (Ｐ <0 0 5) ;而急性心肌梗塞与不稳定性心绞痛患者之间无显著…     

血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的 :血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣｓ)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (ＡＳ)的早期、中期或ＡＳ进展期或血管事件的发病机制中起着关键性作用。方法 :采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测ＶＳＭＣｓ的迁移效应 ;以ＭＴＴ法、[3Ｈ]-Ｔｄｒ掺入法、[3Ｈ]-脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应 ;将培养的ＶＳＭＣｓ分为 5组 ;2 %胎牛血清 ( 2 %ＦＣＳ)组、ＡｎｇⅡ组 (其浓度为 1 0 - 1 0 ～ 1 0 - 6ｍｏｌ/Ｌ)、Ｌｏｓａｒｔａｎ组 (其浓度为 1 0 - 7～ 1 0 - 5ｍｏｌ/Ｌ)、ＭＣＰ - 1ｍｃＡｂ组 (终浓度为 1 0 μｇ/ｍＬ)和阳性对照…     

维生素E对冷适应大鼠红细胞膜钠-钾-ATP酶活性及丙二醛含量的影响

目的：研究膳食维生素Ｅ（ＶＥ）增强冷适应的机理。方法：用ＳＤ大鼠为研究对象，分别饲以高ＶＥ饲料（２３０ｍｇ／ｋｇ．饲料）和低ＶＥ饲料（３０ｍｇ／ｋｇ．饲料）。观察大鼠红细胞膜钠－钾－ＡＴＰ酶（Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化。结果：冷适应大鼠红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），高ＶＥ摄入大鼠红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性明显高于低ＶＥ摄入组大鼠（Ｐ＜０．０５）；高ＶＥ摄入组大鼠红细胞膜ＭＤＡ含量明显低于低ＶＥ摄入组大鼠（Ｐ＜０．０５）；膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性和ＭＤＡ含量间呈明显负相关。结论：膳食ＶＥ可以提高冷适应大鼠红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性，降低膜ＭＤＡ含量     

黄芪总皂甙对CVB_3感染心肌细胞cTnI、SERCA活性及mRNA表达的影响

目的 :探讨黄芪提取物 -黄芪总皂甙对柯萨奇Ｂ3(ＣＶＢ3)感染的培养ＳＤ乳鼠心肌细胞损伤模型的保护作用 ,对病毒引起的肌浆网钙泵 (Ｓａｒｃｏ/ＥｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍＣａ2 ＡＴＰａｓｅ,ＳＥＲＣＡ)活力及其ｍＲＮＡ表达变化的影响。方法 :将培养ＳＤ乳鼠心肌细胞分为正常组、模型组及黄芪组 ,模型组及黄芪组以柯萨奇Ｂ3亲心肌病毒株 (ＣＶＢ3ｍ,ＴＣＩＤ50 为 1 0 5 .83)感染心肌细胞。 72～ 96ｈ后 ,观察各组细胞病变作用 (ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆ ｆｅｃｔ,ＣＰＥ) ,检测其培养上清心肌肌钙蛋白Ｉ(ｃＴｎＩ)含…     

慢性低氧对大鼠肺血管左旋精氨酸/一氧化氮途径的影响

目的 :探讨慢性低氧对大鼠肺血管左旋精氨酸 /一氧化氮 (Ｌ -Ａｒｇ/ＮＯ)途径的影响。方法 :健康雄性ＳＤ大鼠 40只 ,体重 2 0 0～ 2 50ｇ,随机分为对照 (Ｃ)组与低氧 (Ｈ)组 ,每组 2 0只。将低氧组大鼠置于常压低氧舱内 ,舱内充入氮气使氧浓度维持在 1 0 %± 0 5% ,ＣＯ2 浓度低于 3% ,每天 8ｈ ,每周 6ｄ ,连续 4周。对照组大鼠除吸入空气外 ,其它饲养条件与低氧组相同。实验 4周后 ,给大鼠戊巴比妥钠 ( 35ｍＬ/ｋｇ)腹腔麻醉后 ,采用右心导管法测量大鼠肺动脉压力 ,分别称取右室 (ＲＶ)和左室加室间隔 (ＬＶ Ｓ)的重量 ,以ＲＶ/ＬＶ …     

血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究

目的 :研究血管平滑肌细胞 (ＶＳＭＣｓ)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (ＡＳ)的早期、中期或ＡＳ进展期或血管事件的发病机制中的作用。方法 :采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测ＶＳＭＣｓ的迁移效应 ;以ＭＴＴ法、3 Ｈ ＴｄＲ掺入法、3 Ｈ 脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应 ;将培养的ＶＳＭＣｓ分为 5组 :2 %胎牛血清 (2 %ＦＣＳ)组、ＡｎｇⅡ组(其浓度为 10 -10 ～ 10 -6Ｍｏｌ/Ｌ)、Ｌｏｓａｒｔａｎ组 (其浓度为10 -7～ 10 -5Ｍｏｌ/Ｌ)、ＭＣＰ 1ｍｃＡｂ组 (终浓度为 10 μｇ/ｍｌ)和阳性对照组 (含 5 %的酵母多糖…     

血小板源生长因子对培养内皮细胞移行的影响及其与血管内皮细 …

一、材料与方法1 材料与试剂 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)株(ＥＣＶ30 4)由武汉大学菌种保存中心提供。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＤＭＥＭ/Ｆ12 、胎牛血清 (ＦＢＳ)及青霉素 链霉素均为美国Ｇｉｂｃｏ公司产品。血管内皮细胞生长因子 (ＶＥＧＦ)抗血清为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＳＡＢＣ试剂盒抗血清及二氨基联苯胺(ＤＡＢ)由博士德公司提供。2 血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)对培养ＨＵＶＥＣ移行的影响 :参照Ｇａｊｄｕｓｅｋ等[1] 介绍的方法 ,并加以改进。选用生长良好的ＨＵＶＥＣ悬液 ,调整细胞密度为 2× 10 4 个 /…     

Goldblatt大鼠心肌组织和血浆醛固酮变化 及其Valsartan对左室肥厚和心功能的影响

目的 :以肾性高血压大鼠 (Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ,2Ｋ1Ｃ)为模型 ,采用超声心动测定大鼠的左室结构 ,放免法测定血浆及心肌组织中血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )和醛固酮 (ＡＬＤ) ,观察ＡｎｇⅡ受体拮抗剂Ｖａｌｓａｒｔａｎ对心肌肥厚和心功能的保护作用。方法 :34只ＳＤ大鼠 ,分为Ｖａｌｓａｒｔａｎ治疗组 (Ｖ组 ,ｎ =1 3) ,非Ｖａｌｓａｒｔａｎ治疗组 (ＮＶ组 ,ｎ =1 1 )和假手术组 (Ｓ组 ,ｎ =1 0 ) ,Ｖ组和ＮＶ组在左肾动脉置入内径为 0 3ｍｍ的银夹 ( 2Ｋ1Ｃ) ,Ｓ组未放置银夹。术后 2周 ,Ｖ组给予Ｖａｌｓａｒｔａｎ 30ｍｇ/ｋｇ·ｄ- 1 …     

脑室注射α-helical CRH对大鼠LPS性发热 及中隔区AVP含量的影响

目的和方法 :促肾上腺皮质激素释放激素 (ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ ,ＣＲＨ)是一种重要的中枢发热介质。为进一步观察ＣＲＨ在大鼠ＬＰＳ性发热中的作用 ,本研究观察了第三脑室注射ＣＲＨ受体拮抗剂α-ｈｅｌｉｃａｌＣＲＨ( 9- 41 )对ＳＤ大鼠ＬＰＳ性发热及脑中隔区精氨酸加压素 (ａｒｇｉｎｉｎｅｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ ,ＡＶＰ)含量的影响。结果 :第三脑室注射 30 0ｎｇ的ＬＰＳ引起大鼠结肠温度双相性升高 ,其 3 5ｈ发热反应指数 (ｔｈｅｒｍａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｄｅｘ ,ＴＲＩ3.5)明显高于…     

高海拔地区MI患者HRV分析

目的 :心率变异性 (ＨＲＶ)的检测与分析是反映自主神经对心脏调控的一项有价值的指标。本文按心肌梗塞 (ＭＩ)诊断标准选择ＭＩ病例 (ｎ =2 2 )与健康成年人 (ｎ =2 0 )进行ＨＲＶ对比分析 ,旨在探讨高海拔地区 (西宁海拔 2 2 60ｍ)ＭＩ患者ＨＲＶ的特点及临床意义。方法 :采用美国ＤＭＳＨｏｌｔｗｉｎ 6.0型Ｈｏｌｔｅｒ分析系统对患者做 2 4ｈＥＣＧ记录 ,回放计算机自动检测出 2 4ｈ的窦性心率进行ＨＲＶ的时域及频域分析。结果 :1 ＭＩ组 2 4ｈ全部正常Ｒ -Ｒ间期平均值的标准差 (ＳＤＮＮ)为 ( 82 59± 1 4 56)ｍｓ、2 4ｈ内每 5ｍ…     

体外快速筛选和鉴别Coxsackievirus B3有毒株和无毒株方法

由于缺乏有效的体外鉴别柯萨奇病毒Ｂ3 (ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ3 ,ＣＶＢ3 )致病性的方法 ,长期以来接种乳鼠体内观察心肌病变。本研究所用的ＨｅＬａ细胞和人脐静脉内皮细胞均从中国典型物培养保藏中心 (武汉 )购买。标准病毒株ＣＶＢ3 /0 (非致病株 )由Ｂｅｃｋ教授 (ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｏｒｔｈ ｅｒｎＣｏｌｏｒａｄｏ,ＵＳＡ)惠赠 ,ＣＶＢ3ｍ(致病株 )由钟学宽教授 (哈尔滨医科大学 )惠赠 ,ＣＶＢ2 、ＣＶＢ6,脊髓灰质炎病毒由同济医科大学病毒室提供。阳性质粒 :Ｐｓｖｃｖｂ3 5 9(携带ＣＶＢ3 致病株全基因组 )和Ｐ…     

丁型肝炎病毒感染树肝组织中Fas和ICE表达的初步研究

我们采用免疫组化技术检测感染丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ )树肝组织中ＨＤＡｇ、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达 ,并应用免疫组化双重染色分析病毒抗原、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达之间的关系。1　材料和方法1 1　标本来源　 30份感染ＨＤＶ树肝组织 ,取自本科建立的感染ＨＤＶ树经免疫组化和原位杂交证实ＨＤＶ在肝细胞中稳定复制、表达 ,且伴ＡＬＴ升高。1 2　ＨＤＡｇ检测　采用ＳＰ法 ,ＳＰ检测试剂盒购自情士德生物工程有限公司 ,ＨＤＶ多克隆抗体由本室用ＨＤＶＡｇ合成肽免疫家兔制备而成 ,工作浓度 1∶12 0 ,ＨＤＶＲＮＡ原位杂交检测试剂盒购自华西…     

转化生长因子β1、β2在膀胱移行细胞癌中的表达

一、材料和方法1 材料 :收集我院 1991～ 1998年手术切除的膀胱移行细胞癌存档蜡块 6 6份进行研究。病理分级按ＷＨＯ分级标准 :Ⅰ级 2 0份 ,Ⅱ级 32份 ,Ⅲ级 14份。另取 9例正常膀胱粘膜作对照。2 方法 :将存档肿瘤及正常膀胱粘膜石蜡包埋块 ,以 5μｍ厚连续切片 3张 ,分别作ＨＥ染色以核实诊断及转化生长因子 (ＴＧＦ) β1、β 2免疫组织化学染色 (ＳＰ法 )。ＴＧＦβ1、β 2ＩｇＧ(兔抗人 )以及ＳＰ试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司 ,以ＰＢＳ液代替一抗设立阴性对照。3 结果判定 :光镜分析 ,Ａ (按切片中细胞显色有无及深浅评分 )…     

慢性心肌缺血大鼠膈肌舒缩功能和结构变化及其机制的研究

目的和方法 :实验采用冠状动脉分支结扎法 ,建立慢性心肌缺血大鼠模型 ,十四周后测定其血流动力学变化 ,并用离体肌条等长收缩试验分析了其膈肌收缩性变化。结果 :心肌缺血组大鼠左室舒张未压(ＬＶＥＤＰ)高于假手术组 (Ｐ <0 0 5) ,而心室收缩末压 (ＬＶＥＳＰ)低于假手术组 ,与假手术组相比其膈肌收缩峰值Ｐｔｔ下降 ,收缩时间ＣＴ和半舒张时间ＲＴ/2均延长 ;用参麦注射液两周后 ,膈肌收缩峰值明显上升 (Ｐ<0 0 5)。用ｍｙｏｓｉｎＡＴＰ酶钙 -钴显色进行膈肌纤维染色分类分析 ,发现心肌缺血组大鼠膈肌纤维中Ⅰ类纤维比例与假手术组相比…     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨ＮＦκＢ以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对ＴＮＦ α加ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ基因表达的作用及其机制。方法 :通过免疫组化染色ＡＢＣ法用抗内皮细胞抗体ＣＤ31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Ｇｒｉｅｓｓ法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映ＮＯ的生成。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结合ＲＴ ＰＣＲ分析ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平。ＥＭＳＡ法测定细胞核内ＮＦκＢ的结合活性。结果 :ＴＮＦα(10 0Ｕ/ｍｌ)加ＬＰＳ(1ｕｇ/ｍｌ)处理内皮细胞 2ｈ后ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平明显上升 (Ｐ <0 .0 5 ) ,2 4ｈ后能明显增加…     

维生素E对冷适应大鼠红细胞膜钠—钾—ATP酶活性及丙二醛含量 …

目的；研究膳食维生素Ｅ（ＶＥ）增强冷适应的机理。方法：用ＳＤ大鼠为研究对象，分别饲以高ＶＥ饲料（２３０ｍｇ／ｋｇ，饲料）和低ＶＥ饲料（３０ｍｇ／ｋｇ，饲料），观察大鼠红细胞膜钠－钾－ＡＴＰ酶（Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化。结果：冷适应在鼠红细胞Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ活性明显高于对照组，高ＶＥ摄入大鼠红细胞膜Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ活性明显高于低于ＶＥ摄入且大鼠；高ＶＥ摄入     

深圳地区小儿肠道病毒感染的核酸检测分析

为了解深圳地区肠道病毒 (ＥＶ)的感染流行情况和病毒分型特征 ,我们采用检测ＥＶ的套式逆转录聚合酶链反应(ＲＴ ｎＰＣＲ)方法进行ＥＶ感染检测 ,并对临床分离株 5′端非编码区 ( 5′ＵＴＲ)基因序列进行分子进化树分析。采用ＴＲＩＺＯＬ ＬＳＲｅａｇｅｎｔ试剂从疑诊ＥＶ感染儿童大便、咽拭子和脑脊液中提取ＥＶ ＲＮＡ ,根椐ＥＶ 5′ＵＴＲ保守的基因序列设计两对特异性引物 ,引物序列分别为ＥＶＰ1 60 :5′ＣＡＡＧＣＡＣＴ(ＴＡ)ＴＴ(ＣＡ)ＣＣＣＣＧＧ3′,ＥＶＰ2 50 :5′ＴＡＣＴＴＧＡ(ＧＡ)ＣＣ ＴＡＧＴＡ3′,ＥＶＰ50 0 :5′…     

一株HIV1变异株的发现

我们在进行序列分析过程中发现一株不同于以往国内外报道的新型ＨＩＶ1的变异毒株。现报道如下 :1　材料和方法1.1　前病毒ＤＮＡ的提取　某ＨＩＶ1感染者 30 0 μｌＥＤＴＡ抗凝血 ,使用Ｐｒｏｍｅｇａ公司的ＤＮＡ提取试剂盒 (ＷｉｚａｒｄＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ)提取ＨＩＶ1前病毒ＤＮＡ。1.2　ＨＩＶｅｎｖ基因ｃ2 -ｖ3区的套式ＰＣＲ扩增　以所提的ＨＩＶ1前病毒ＤＮＡ为模板 ,利用一对外侧引物ＥＰ1,ＥＰ2 (序列为 ,ＥＰ1:5′ -ＧＧＣＡＧＴＣＴＡＧＣＡ ＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧ - 3′ ;ＥＰ2 :5′ -ＣＣ…