宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒52型感染及整合状态分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染及其整合状况在宫颈病变中的意义.方法 应用HPV L1 通用引物MY09/11 和HPV52 E6 型特异性引物进行多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测宫颈脱落细胞标本中HPV 总感染及HPV52 感...     

五种布鲁氏菌核酸检测试剂盒检测性能的评价北大核心CSCD

目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。     

宫颈癌盆腔淋巴结HPV DNA检测的临床意义

以宫颈癌盆腔淋巴结中高危型人乳头状瘤病毒16/18(HPV16/18)特异性引物通过PCR方法,检测27例宫颈癌477枚盆腔淋巴结中HPV16/18 DNA.27例宫颈癌原发灶HPV16/18 DNA检出21例,21例HPV16/18阳性原发灶的369枚淋巴结阳性率为13.82%.淋巴结HPV DNA阳性率在不同年龄、肿瘤直径、细胞分化程度、病理类型、肌层浸润深度、有无淋巴结转移和不同淋巴结清扫数的宫颈癌差异有显著性意义.认为在无转移淋巴结检测到HPV基因,对宫颈癌微小转移具有提示意义,有助于发现普通病理学难以检测到的早期隐匿性转移.     

对312例女性性病门诊患者进行HPV DNA分型检测研究

目的研究分析312例女性性病门诊患者人类乳头瘤病毒(HPV)DNA分型检测的结果。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR),对312例女性性病门诊患者进行HPV DNA分型检测。结果女性性病门诊患者的可见疣状物与分泌物中,HPV检出率分别为83.8%和38.1%,两者差异有统计学意义。111例可见疣状物中,HPV单型感染16型、18型、6/11型分别为4例、5例、57例,多重型别复合感染16+18型、16+6/11型、18+6/11、16+18/11型分别为0例、16例、8例和3例。201例分泌物中[就诊原因包括患其他性病、配偶患尖锐湿疣(CA)、配偶患其他性病、CA治疗后复查、不洁性行为史自检]HPV单型感染16型、18型、6/11型分别为15例、12例、43例,多重型别复合感染16+18型、16+6/11型、18+6/11型、16+18+6/11型分别为2例、5例、1例、0例。结论女性性病门诊患者的疣状物和分泌物中,均有较高的HPV DNA检出率,虽然以低危的6/11型为主,但均可检出最常见的高危型的HPV感染。应大力加强对此类人群进行HPV DNA常规检测。     

FQ-PCR方法检测女性尖锐湿疣（CA）患者HPV的基因分型

目的 探讨女性尖锐湿疣(CA)患者感染人类乳头瘤病毒(HPV)的基因类型和分布.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测256例CA患者疣体组织或分泌物中的HPV类型.结果 HPV6、11型阳性率为93%(238/256),HPV16、18型阳性率为15.2%(39/256),HPV6、11型和HPV16、18同时阳性为10.9%(28/256).定量检测病毒载量最高为1.0×108 copies/ml,最低为2.2×104 copies/ml.结论 本地区尖锐湿疣患者感染以HPV6、11低危型为主,少数为HPV16、18高危型;荧光PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及检测时间短等特点,能够及时准确的为HPV患者临床治疗及预后判断提供可靠的依据.     

基于PCR的金葡菌准确检测方法的建立及应用

目的建立基于PCR的金葡菌准确检测方法。方法选择nuc基因的一段保守序列并设计引物。采用PCR扩增技术对117株金葡菌的nuc保守区域进行扩增,然后采用焦磷酸测序对PCR产物进行特异性检测。同时采用传统细菌分离培养法和PCR扩增nuc基因法对16份生鸡肉样品进行金葡菌检测。结果建立的检测方法可准确鉴定117株金葡菌,准确率100%。在16份生鸡肉样品检测中,PCR法检出6份金葡菌阳性样品,阳性率为37.5%;传统细菌分离培养法检出5份阳性样品,阳性率为31.3%。结论建立的基于PCR的检测方法灵敏度高、稳定性好、特异性强,可适用于金葡菌的准确检测。     

食管癌组织中人乳头瘤病毒16型整合状态的检测

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与我国食管癌发生的相关性.方法 应用HPV16 E6型特异性引物,检测食管癌手术切除组织中HPV16感染状况.对所得HPV16阳性标本,应用HPV16 E2和E6引物进行实时荧光PCR扩增,检测HPV16 E2与E6的含量,通过E2与E6的比率,确定HPV整合状态;用β-actin引物进行荧光PCR扩增,检测每一样品中β-actin含量,通过HPV16E6与β-actin之比,计算HPV16的病毒载量.结果 55例食管癌患者手术切除组织中32例HPV16阳性;在32例HPV16E6阳性标本中,检测到6.3％(2/32)为纯游离型、84.3％(27/32)为游离/整合的混合型、9.4％(3/32)为完全整合型,提示病毒DNA与宿主基因组整合很普遍;这些标本的病毒载量大约在0.066～ 65.2拷贝/细胞之间.结论 HPV16阳性食管癌组织样品中,病毒DNA与宿主基因整合很普遍,HPV感染可能是食管癌发生的重要病原因子.     

尖锐湿疣患者皮损中人乳头瘤病毒检测与临床复发关系的研究

目的探讨杭州地区尖锐湿疣患者中人乳头瘤病毒(HPV)感染的型别,以及不同病毒型别和病毒载量与复发的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测了289例患者皮损中的HPV,并作临床跟踪观察3个月,记录复发次数。结果289例患者中仅HPV6/11型感染214例,占74.04%;37例为HPV6/11和HPV 16/18混合感染,占12.80%:仅HPV16/18阳性者16例,占5.54%;HPV6/11和16/18均阴性者22例,占7.61%。53例HPV16/18阳性感染者中,男18例,阳性率为13.14%;女35例,阳性率为23.03%,差异有统计学意义(χ2=4.6979,P<0.05)。HPV16/18型感染组与HPV6/11型感染组的3个月复发率差异无统计学意义(P>0.05),但复发次数高于HPV6/11感染组(P<0.05)。不同HPV6/11型病毒载量组之间的3个月复发率和复发次数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论尖锐湿疣患者的HPV感染型别以6/11型为主,女性患者中高危型HPV16/18型的感染率明显高于男性。不同HPV型别与复发率无关,但高危型HPV感染者复发次数增加。不同HPV6/11型病毒载量与尖锐湿疣的临床复发无关。     

通用引物巢式PCR法对哈萨克族食管鳞癌HPV感染的检测

目的:应用通用引物巢式PCR技术检测新疆哈萨克族食管鳞癌人乳头瘤病毒(HPV)的感染率,并探讨HPV与新疆哈萨克族食管鳞癌的关系.方法:提取新疆哈萨克族食管鳞癌及正常食管组织的DNA,应用通用引物HPV MY09/11及HPV G5+/6+进行巢式PCR,检测新疆哈萨克族食管鳞癌中HPV的感染率.结果:巢式PCR法扩增后检测到食管鳞癌中HPV感染率为66.67%,正常对照组为12.12%,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论:本实验结果表明HPV可能是新疆哈萨克族食管癌发生的一个重要病因学因素,结合通用引物巢式PCR法可以更加方便可靠的检测HPV-DNA.     

疟疾蚊媒监测多重PCR方法的建立

目的 建立疟疾消除后高效的蚊媒监测多重PCR方法。方法 设计疟原虫属、人血、中华按蚊和蚊通用4对特异性引物,与通用引物（5′-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3′）连接后,形成4对嵌合特异性引物。常规PCR确定各引物对的最佳退火温度和引物工作浓度,多重PCR优化4对引物混合后的最佳反应条件,引入模拟风险感染阳性蚊虫样品,建立敏感的多重PCR反应体系。检测4种疟疾（间日疟、卵形疟、恶性疟、三日疟）患者全血样品的原虫密度梯度稀释样品的各基因扩增情况,评估检测灵敏度。用溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、田鼠巴贝虫、杜氏利什曼原虫、刚地弓形虫、日本血吸虫尾蚴、卫氏并殖吸虫、蛔虫、牛带绦虫、猪带绦虫等11种其他寄生虫虫体DNA或感染样品评价该方法的检测特异性。用畜圈周围采集的野生中华按蚊样品,评价所建PCR方法的应用效果。结果优化后的多重PCR反应体系各组分含量（体积比）为：DNA模板10%、引物Mix10%、三蒸水30%, Taq酶预混液50%。引物Mix中,蚊通用、按蚊、人血和疟原虫引物的用量配比为1∶1.75∶3∶5。反应体系的最佳循环条件为：95℃5 min; 94℃...     

人乳头瘤病毒16亚型LAMP检测法的建立

目的本研究旨在建立一种简单、快速、灵敏的检测方法,使环介导等温扩增技术(LAMP)应用于HPV16亚型的检测。方法根据Gen Bank登录的HPV16亚型序列(FJ610152)中E7基因序列设计了多套特异引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对HPV16亚型的LAMP引物进行筛选并对反应体系和反应条件进行检测和实时监控以检测其特异性和敏感性。反应结束后加入SYBR Green I染料肉眼判定并与仪器检测结果进行比对。结果建立的LAMP方法在61℃下可对HPV16核酸进行高效扩增,反应结束后加入染料肉眼判定结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性(最低检出限量为3.0×103 copies/μL)。LAMP法与HPV分型试剂盒对35份样品的检测结果一致。结论本研究建立的可视化LAMP方法操作简便,适用于HPV16的快速检测。     

鼠疫菌pYC质粒标识基因在动物及蚤检测中的应用

目的评价云南鼠疫菌pYC质粒标识基因的特异性及在鼠疫监测中的应用。方法应用pYC质粒标识基因引物yd1，yd2并以鼠疫菌特异性基因pla，fra作为对照进行PCR实验，观察实验室感染标本和现场样品的检出情况。结果共检测实验感染动物脏器8份，均为阳性。检测现场收集的黄胸鼠脏器22份，阳性6份，阳性率27.27%。检测感染的蚤类67份，阳性13份，阳性率19.40%，试验引物yd1，yd2与对照引物pla，fraPCR检测结果其特异性和敏感性均一致。结论将yd1，yd2引物，联合pla，fra引物，建立鼠疫PCR快速诊断方法，应用于云南、广西、贵州判断鼠疫菌、监测鼠疫信息，具有重要的实际意义。     

基于实时荧光环介导等温扩增的HPV16及HPV18检测体系的建立

目的建立用于人乳头瘤病毒HPV16及HPV18快速检测的实时荧光环介导等温扩增技术。方法运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V5,针对HPV16、18基因保守序列设计扩增引物,在反应前加入核酸染料SYBR GreenⅠ并对LAMP反应体系中内引物、Mg2+、dNTPs进行优化,优化结果通过实时荧光扩增曲线确定;然后对优化的HPV16、18 LAMP反应体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。结果建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16及HPV18的特异性为100%,与qPCR方法的符合率为100%。该体系检测HPV16及HPV18质粒的灵敏度为10拷贝/μl。结论建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16、18简便、快速,灵敏度高,可用于HPV感染的早期筛查。     

人乳头瘤病毒快速检测分型方法的临床应用

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)免疫层析技术快速检测分型方法的临床应用价值。方法采用免疫层析技术快速检测法对人乳头瘤病毒进行检测分型,采用基因检测技术PCR检测法作对照。结果对386例标本进行HPV常见亚型6、11型和16、18型检测,快速检测法与对照PCR检测法均105例阳性,阳性率均为27.20%,两种方法的阳性率一致(P>0.05)。对HPV亚型总的分型检测,快速检测法检出阳性105例,阳性率为27.20%;对照PCR检测法检出HPV阳性142例,阳性率为36.78%,两种方法的阳性率差异有统计学意义(χ2=8.15,P<0.05)。结论免疫层析快速检测分型方法用于HPV常见亚型6、11型(低危型)和16、18型(高危型)检测,具有操作简便,检测速度快,准确率高,医疗成本较低等特点,值得基层医院推广应用。     

110例尖锐湿疣患者FQ-PCR检测结果分析

目的 探讨尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)感染分型及其意义. 方法 采用荧光定量PCR技术(FQ-PCR)检测男女尖锐湿疣患者HPV感染分型. 结果 男性患者44例,检出阳性37例(84.09%),分型结果以HPV6/11型为主(91.89%);女性患者外阴标本33例,检出阳性26例(78.78%),分型结果以HPV6/11型为主(53.84%);宫颈标本33例,检出阳性19例(57.57%),分型结果以HPV6/11型为主(57.89%). 结论 HPV6/11型是尖锐湿疣发病的主要型别,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)可作为尖锐湿疣诊断的指标.     

环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测HPV16及HPV58方法的建立北大核心CSCD

目的将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种快速、可视化的HPV16、HPV58检测方法。方法运用LAMP在线引物设计软件,针对HPV16E6基因及HPV58L1基因保守区域设计引物及探针。采用生物素标记LF,荧光基团FAM和淬灭基团BHQ-1标记探针,LFD进行目视检测,建立HPV16和HPV58的LAMP-LFD检测方法,并对其特异性、灵敏度及临床实用性进行验证。将临床样品使用该方法的检测结果与实时LAMP扩增及qPCR结果相比较,计算符合率。结果优化的LAMP最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为50min。LFD检测仅需5min,故完成检测耗时仅55min;建立的LAMP-LFD方法能特异性检出HPV16、HPV58,其他5种常见高危型HPV呈阴性反应;该方法针对HPV16和HPV58的检测灵敏度均为100拷贝/μl,50份临床样品检测结果与实时LAMP和qPCR检测的符合率达100%。结论建立的HPV16、HPV58LAMP-LFD检测体系快速、简便,可视化。该方法对设备的要求低,仅需恒温孵育器即可完成,结果易观察,适用于现场HPV检测,以及经济落后和资源匮乏地区的HPV筛查。     

环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测HPV16及HPV58方法的建立

目的将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种快速、可视化的HPV16、HPV58检测方法。方法运用LAMP在线引物设计软件,针对HPV16E6基因及HPV58L1基因保守区域设计引物及探针。采用生物素标记LF,荧光基团FAM和淬灭基团BHQ-1标记探针,LFD进行目视检测,建立HPV16和HPV58的LAMP-LFD检测方法,并对其特异性、灵敏度及临床实用性进行验证。将临床样品使用该方法的检测结果与实时LAMP扩增及qPCR结果相比较,计算符合率。结果优化的LAMP最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为50min。LFD检测仅需5min,故完成检测耗时仅55min;建立的LAMP-LFD方法能特异性检出HPV16、HPV58,其他5种常见高危型HPV呈阴性反应;该方法针对HPV16和HPV58的检测灵敏度均为100拷贝/μl,50份临床样品检测结果与实时LAMP和qPCR检测的符合率达100%。结论建立的HPV16、HPV58LAMP-LFD检测体系快速、简便,可视化。该方法对设备的要求低,仅需恒温孵育器即可完成,结果易观察,适用于现场HPV检测,以及经济落后和资源匮乏地区的HPV筛查。     

玉林市862例女性宫颈人类乳头状瘤病毒感染状况分析

目的 探讨玉林市妇女宫颈人类乳头状瘤病毒(HPV)感染状况,为预防HPV感染和宫颈癌防治提供理论依据.方法 采用香港凯普生物科技有限公司生产的专用采样刷取宫颈脱落细胞对玉林市862例妇女进行HPV检测,并对HPV-DNA亚型情况进行分析.结果 862份宫颈标本中共检出HPV感染165例,阳性率为19.14%.其中19～30岁组HPV感染率为19.44%;31～45岁组HPV感染率为18.60%;46～70岁组HPV感染率为20.45%,各年龄组的HPV感染差异无统计学意义(P>0.05).HPV的分型状况:18种为亚型(214例次),高危亚型占73.36%.高危亚型检出12个亚型(包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、58、59、68)157例次,HPV高危亚型首位是HPV16占高危亚型的27.39%,依次为HPV52占26.11%,HPV58占14.01%,HPV18占10.83%,HPV31占3.18%.低危型HPV检出6种亚型(包括HPV11、43、53、6、66、CP8304)57例次,占26.63%.结论 高危型HPV感染是诱发宫颈癌的病因学因素,筛查、控制HPV感染能有效降低宫颈癌的发病率.     

检测日本血吸虫感染性钉螺PCR方法的建立

目的 建立灵敏、特异的检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法。 方法 根据日本血吸虫18S小亚基单位核糖体核酸（18S-rRNA）基因设计1对引物，建立检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法。测定PCR产物的DNA序列，稀释血吸虫毛蚴DNA进行PCR方法的灵敏性试验，扩增单尾尾蚴感染的钉螺DNA进行交叉反应试验，并根据不同稀释度的感染性钉螺DNA的扩增结果来验证PCR的群体检测效果。 结果 PCR扩增日本血吸虫感染性钉螺，得到了与靶DNA片段位置相同的产物，测序片段长度为469 bp，与靶DNA相同且序列一致，并将序列登录GenBank(注册号：DQ442999)。扩增阴性钉螺无产物出现。灵敏性试验提示，PCR可检出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为40 pg/μl；交叉反应试验显示，PCR方法不能扩增出单尾尾蚴感染钉螺的DNA；群体检测试验表明，PCR可检出感染性钉螺提取的DNA最高稀释度为1∶640。 结论 初步建立的检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法灵敏、特异且具有良好的群体检测效果。     

宫颈癌患者人乳头瘤病毒多重感染病原学特征分析

目的分析宫颈癌患者人乳头瘤病毒多重感染病原学特征,指导临床感染防治。方法收集243例宫颈癌患者临床资料,收集宫颈细胞液标本提取DNA并PCR扩增,检测HPV感染情况。采用HPV基因分型检测试剂盒对HPV分型,结果进行统计学分析。结果 243例宫颈癌患者HPV感染数为175例,感染率72.02%。其中,HPV单一感染患者148例,感染率为60.91%,HPV多重感染患者27例,感染率为11.11%。多重感染患者类型包括HPV 16+HPV 18感染患者11例,HPV 16+HPV 68感染患者4例,HPV 16+HPV 58感染患者2例,HPV 16+HPV 39感染患者2例,构成比分别为40.74%、14.81%、7.41%和7.41%;HPV 16+HPV 56、HPV 16+HPV 45、HPV 16+HPV53、HPV 16+HPV 31、HPV 58+HPV 43、HPV 58+HPV 68、HPV 16+HPV 18+HPV 39、HPV 16+HPV 45+HPV 68均为1例,构成比均为3.70%。不同年龄HPV多重感染患者,差异有统计学意义(χ2=6.9644,P=0.0083);不同民族HPV多重感染患者,差异无统计学意义(χ2=0.0329,P=0.8560);不同分期HPV多重感染患者,差异无统计学意义(χ2=0.1320,P=0.7164);不同病理分型HPV多重感染患者,差异无统计学意义(χ2=1.7312,P=0.1883);不同组织分化HPV多重感染患者,差异无统计学意义(χ2=0.1331,P=0.7152);不同淋巴结转移情况HPV多重感染患者,差异无统计学意义(χ2=0.1359,P=0.7123)。结论 HPV 16亚型是宫颈癌患者HPV多重感染中的优势类型,且HPV 16和其他亚群的多重感染在宫颈癌发生发展中存在协同作用。