粉尘螨抗原对支气管哮喘患者外周血单个核细胞T-bet和GATA-3及FOXP3 mRNA表达水平的影响

目的 对支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMC)经粉尘螨刺激前、后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平及相互关系进行研究.方法 选择25例哮喘患者和15名健康人为研究对象,每例受试者又分为变应原刺激组和未经变应原刺激的自体对照组,采用半定量-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组受试者PBMC培养后T-bet mRNA、GATA-3mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平.结果 哮喘患者PBMC中FOXP3、T-bet的表达水平分别为0.3±0.4、0.42±0.24,与健康人(0.4±0.3、0.39±0.37)比较差异无统计学意义(t值分别为0.78、0.38,P均＞0.05),哮喘患者GATA-3(1.0±0.3)的表达与健康人(0.8±0.3)比较差异有统计学意义(t=2.27,P＜0.05);健康人PBMC经变应原刺激后FOXP3的表达(0.72±0.61)与未经变应原刺激的自体对照组(0.27±0.21)比较差异有统计学意义(t=3.12,P＜0.01);而T-bet、GATA-3的表达分别为0.3±0.4、0.9±1.0,与未经变应原刺激的自体对照组(0.3±0.6、0.8±0.6)比较差异无统计学意义(t值分别为0.27、0.77,P均＞0.05);哮喘患者PBMC经变应原刺激后T-bet、GATA-3的表达分别为0.49±0.42、2.1±1.7,与未经变应原刺激的自体对照组(0.16±0.06、0.6±0.3)比较差异有统计学意义(t值分别为3.72、5.15,P均＜0.01);但哮喘患者PBMC中经变应原刺激后FOXP3的表达为0.5±0.4,与未经变应原刺激的自体对照组(0.4±0.4)比较差异无统计学意义(t=1.60,P＞0.05);经变应原刺激后哮喘患者PBMC中△T-bet、△GATA-3、△FOXP3的表达分别为0.33±0.39、1.58±1.44、0.11±0.32,与健康人(0.03±0.40、0.11±0.53、0.43±0.66)比较差异有统计学意义(t值分别为2.30、3.79、2.08,P分别＜0.05、＜0.01、＜0.05);哮喘患者△FOXP3与△GATA-3、△T-bet表达水平呈负相关(r值分别为-0.62、-0.46,P分别＜0.01、＜0.05).结论 哮喘患者经变应原刺激后,既存在Th2特定转录因子GATA-3的优势表达,也存在Th1特定转录因子T-bet的优势表达,同时还存在调节性T淋巴细胞(Treg)特定转录因子FOXP3的表达低下.     

IgA肾病外周血单个核细胞T-betGATA-3ROR-γt和Foxp3mRNA的表达及其意义研究

目的 在mRNA水平探讨IgA肾病患者外周血Th1、Th2、Th17和Treg细胞免疫失衡及其与IgA肾病(IgAN)牛津分型的相关性。方法 以2010年11月至2011年11月在大连医科大学附属第一医院肾内科经肾活检病理确诊的原发性IgAN患者为研究对象,应用实时荧光定量PCR检测IgAN患者(20例)和健康对照组(10名)外周血单个核细胞的特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt、Foxp3的mRNA表达水平。结果 与对照组比较,IgAN组ROR-γt表达明显升高(P<0.05)、Foxp3表达明显下降(P<0.05),且ROR-γt/Foxp3比值明显升高(P<0.05);而T-bet、GATA-3的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。按IgAN牛津分型病理指标分组结果比较显示,M1组T-bet表达及T-bet/GATA-3的比值较M0组明显升高(P<0.05)。进一步相关分析显示,IgAN组T-bet表达与系膜增殖积分呈显著正相关(r=0.541,P<0.01)。S1组T-bet表达显著升高(P<0.01),ROR-γt表达无明显差异(P>0.05),T-bet/ROR-γt比值明显升高(P<0.05);而GATA-3、Foxp3无变化(P>0.05)。结论 IgAN患者外周血单个核细胞在mRNA水平出现了偏向Th17极化,而Treg的应答被抑制。IgAN系膜增殖程度与Th1极化呈正相关,而肾小球节段硬化的Th1/Th17的比值明显升高。     

肝癌患者外周血淋巴细胞转录因子的表达及意义

目的研究原发性肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的Th1-、Th2-特异性转录因子(TF)T-bet、GATA mRNA表达水平及意义。方法选取23例初次诊断为肝癌并需外科手术治疗的患者为肝癌组,体检中心健康者21例为对照组。采集所有受试者空腹外周静脉血标本,用含有淋巴细胞分离液的淋巴细胞分离管分离外周静脉血淋巴细胞。采用荧光实时定量PCR(RTq PCR)测定PBMC的T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平。结果肝癌组PBMC的T-bet mRNA水平显著低于对照组(P<0.01);肝癌组GATA-3 mRNA水平显著高于对照组(P=0.024)。肝癌组PBMC T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值较对照组显著降低(P=0.031)。结论原发肝癌患者PMBC T-bet表达降低、GATA-3表达增加,T-bet/GATA-3比值显著降低,且GATA-3表达显著,显示在转录水平存在Th2细胞漂移。     

过敏性哮喘患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA的表达变化

目的：探讨特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA在过敏性哮喘患者外周血中的表达变化。方法：选择30例慢性持续期的屋尘螨过敏性哮喘患者,其中轻度哮喘17例、中重度哮喘13例,14名正常人作为对照。通过荧光实时定量PCR方法检测3组患者外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3mRNA的表达。结果：轻度和中重度哮喘患者的GATA-3 mRNA表达均显著高于正常人（均P〈0.01）。中重度哮喘患者的RORγt mRNA表达明显高于正常人和轻度哮喘患者（均P〈0.01）。T-bet和FoxP3 mRNA表达在3组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：过敏性哮喘中GATA-3表达增加,中重度哮喘中RORγt表达增加,GATA-3和RORγt在哮喘发病中起着重要的作用。     

肝泡型包虫病特异microRNA的筛选及初步研究

目的肝泡型包虫病由多房棘球蚴感染造成,通过对肝泡型包虫病患者组织和血浆中差异表达的miRNA进行筛查,寻找肝泡型包虫病新的生物标志物。方法纳入2016年6月—2018年5月在青海大学附属医院确诊的肝泡型包虫病患者,选取2例肝泡型包虫病患者的病灶边缘组织和3例临近病灶边缘的正常组织,以及3例肝泡型包虫病患者和3例健康对照者的血浆样本,使用Agilent Human miRNA芯片检测组织和血浆的miRNA表达谱,根据差异倍数(FC>1.2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的miRNA,根据差异miRNA的靶基因预测结果,结合文献报道,选择与肝脏疾病相关的血浆miRNA和组织miRNA进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。计量资料2组间比较采用t检验,相关性分析采用Spearman相关分析。结果肝泡型包虫病患者中的microRNA表达谱与健康人相比有显著不同,qRT-PCR验证发现6个microRNA中有3个miRNA(hsa-miR-4644,hsa-miR-136-5p,hsa-miR-483-3p)在肝泡型包虫病患者中显著差异表达(P<0.05)。其中hsa-miR-4644和hsa-miR-483-3p在肝泡型包虫病患者中显著上调表达(P值均<0.05),hsa-miR-136-5p显著下调表达(P<0.05)。通过TargetScan,PITA,microRNAorg数据库对差异miRNA进行靶基因预测,对三个数据库预测到的靶基因取交集,共有137个基因和miRNA之间有靶向关系。差异的hsa-miR-483-3p靶向调控参与人体免疫反应及与肝脏疾病有关的基因(IL-17A,IL-5,CD40LG,TAP2,TNF)。通过GO与KEGG分析发现,hsa-miR-483-3p的靶基因在免疫缺陷(Primary immunodeficiency)信号通路,IL-17信号通路,TNF信号通路中起重要作用。结论肝泡型包虫病有独特的microRNA表达谱,其中hsa-miR-483-3p可作为肝泡型包虫病的一种新的生物学标志物,其调控的靶基因主要参与Primary immunodeficiency信号通路,IL-17信号通路,TNF信号通路。但这些miRNA与肝泡型包虫病之间的调控关系有待进一步验证。     

基于T-bet和GATA-3表达研究特异性免疫治疗对过敏性哮喘患者治疗机制

目的 探讨屋尘螨特异性免疫治疗 (SIT)过程中,转录因子 T-bet 和 GATA-3在外周血单个核细胞 (PBMCs)中的表达变化,分析该治疗方案的作用机制.方法 纳入2015年1月至12月我院收治的过敏性哮喘患者89例,进行回顾性分析,根据治疗方案及转归划分为4组:接受SIT治疗,且显效患者纳为观察 A组,共22例;接受 SIT治疗,且未达显效标准者纳为观察 B组,共12例;未接受 SIT治疗,且显效患者纳为对照 A 组,共15例;未接受 SIT 治疗,且未达显效标准者纳为对照B组,共40例.检测对比4组治疗前、治疗12个月时 PBMCs 中 T-bet和 GATA-3 mRNA 表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结果 观察 A 组、对照 A 组在治疗后 GATA-3 mRNA、Th2细胞比率明显下降,T-bet mRNA/GATA-3 mRNA、Th1/Th2明显上升,观察 A 组在治疗后 T-bet mRNA、Th1细胞比率明显升高.观察B组在治疗后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、Th1细胞比率、Th2细胞比率明显升高,上述差异均有统计学意义 (P <0.05).②各时点所有患者 T-bet mRNA/GATA-3 mRNA与Th1/Th2均呈显著正相关 (治疗前r=0.811,P=0.004;治疗后r=0.801,P =0.000).检测对比4组治疗前、治疗12个月时PBMCs中T-bet和GATA-3 mRNA表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结论 仅采用常规疗法,有助于抑制哮喘患者 GATA-3 mRNA 过表达,协同采用特异性免疫治疗则能同时促进T-bet mRNA表达,发挥双向治疗作用,从而提升疗效.     

急性肝功能衰竭大鼠模型中程序性死亡-1及其配体的表达

目的 探讨程序性死亡-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)在急性肝功能衰竭大鼠模型中的表达变化及其在肝脏急性炎性损伤中的作用.方法 SD大鼠分为2组:正常组6只,模型组30只,以D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导急性肝功能衰竭大鼠模型.造模后分别在12、24、48、72和120 h取大鼠血及肝脏标本,采用RT-PCR法检测肝组织中PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA的表达.计量资料组间比较用t检验,相关性检验用Pearson直线相关分析.结果 造模后12 h,大鼠血ALT、AST明显升高,分别为(217.3±33.7)U/L和(397.2±101.3)U/L,显著高于正常组的(30.5±3.1)U/L和(78.6±4.2)U/L,差异有统计学意义(t=-8.921,-6.121,均P＜0.01),至48 h达高峰.造模后12 h,模型组大鼠PD-1 mRNA表达(0.385±0.074)高于正常组(0.097±0.009),差异有统计学意义(t=-7.725,P＜0.01),48 h达高峰(0.927±0.132),72 h则明显下降.PD-L1mRNA在正常大鼠肝组织中表达很少,模型组PD-L1 mRNA水平逐渐升高,48 h达高峰(0.593±0.105)(t=-10.076,P＜0.01).造模后大鼠PD-1、PD-L1表达水平与血清ALT水平呈正相关(r=0.807,0.792,P＜0.01).结论 PD-1/PD-L1表达在急性肝功能衰竭大鼠肝脏炎性损伤中可能起重要作用.     

调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达

目的探究调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达情况。方法收集2013年10月-2014年10月在新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫外科住院的多房棘球蚴病(AE)患者、细粒棘球蚴病(CE)患者及其他非感染性肝病手术患者的肝脏病变组织样品,制备切片,HE染色和免疫组织化学法观察肝脏组织中Foxp3的表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)检测Foxp3的蛋白相对表达量。Trizol法提取肝脏组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测Foxp3、IL-8的mRNA相对表达水平。采用Spearman相关分析对AE组患者肝脏组织中的Foxp3与IL-8的相关性进行分析。组间两两比较采用t检验。结果共收集16例AE患者、23例CE患者和8例肝血管瘤手术患者的肝脏病变组织样品。HE染色后,镜下可见,AE患者肝脏组织角皮层和生发层均不完整,CE患者肝脏组织有较厚的板层状角皮层结构,肝血管瘤患者肝脏组织完整。免疫组织化学检测结果显示,AE患者肝脏组织中有大量表达Foxp3的阳性细胞,CE患者肝脏组织中有少量阳性细胞,肝血管瘤患者肝脏组织中无阳性细胞。Western blotting结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织的Foxp3蛋白灰度值分别为0.977±0.082、0.728±0.094和0.290±0.084;AE患者、CE患者的蛋白灰度值分别与肝血管瘤患者两两比较,差异均具有统计学意义(P0.05);AE患者与CE患者间差异无统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的Foxp3 mRNA相对表达水平分别为0.013±0.003、0.007±0.002和0.004±0.001;AE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平与肝血管瘤患者比较,差异有统计学意义(P0.05);CE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平分别与AE患者、肝血管瘤患者两两比较,差异无统计学意义(P0.05)。AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的IL-8 mRNA相对表达水平分别为0.402±0.068、0.005±0.019和0.002±0.001;三者两两比较,差异均有统计学意义(P0.01)。Spearman相关分析结果显示,AE患者肝脏组织中的Foxp3与IL-8在mRNA相对表达水平上呈正相关(r=0.802,P0.01)。结论 AE患者肝组织中的Foxp3 mRNA和IL-8 mRNA均高于CE患者,提示AE在一定程度上刺激机体分泌大量IL-8,并与Foxp3共同作用病患部位,形成严重的炎症反应。     

支气管哮喘大鼠转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症的关系

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)转录因子T-bet/GATA-3表达量比值的变化及其与气道炎症的关系。方法24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组,每组12只。用动物肺功能仪测定大鼠气道反应性;用苏木精-伊红染色观察气道病理改变;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织中IL-4、IL-5、IFNγ-、T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平;用免疫印迹(W estern b lot)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/m l)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3 710.83±197.49)cm H2O.m l-1.s-1,对照组分别为(1.51±0.18)、(2.15±0.36)、(6.08±1.06)、(37.17±6.12)cm H2O.m l-1.s-1,两组不同激素剂量比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞数,管壁面积/支气管管腔内周长(WA/P i)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/P i)哮喘组分别为(26.0±1.6)个/mm2、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,对照组分别为(2.9±1.2)个/mm2、(8.8±1.8)个/mm2、6.4±0.8、2.7±0.5,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ含量哮喘组为(23.4±0.7)pg/m l、(24.8±0.5)pg/m l和(21.7±1.1)pg/m l,对照组为(9.3±0.3)pg/m l、(12.5±0.3)pg/m l、(65.8±2.1)pg/m l,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中IL-4、IL-5和IFN-γmRNA表达水平哮喘组分别为2.260±0.210、0.510±0.100、0.100±0.020,对照组分别为0.060±0.020、0.160±0.020、0.850±0.260,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中T-bet/GATA-3 mRNA表达量比值对照组为0.73±0.32,哮喘组为0.06±0.09,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值哮喘组为0.09±0.04,对照组为0.75±0.25,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组大鼠T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与20、40、80μg/m l氯化乙酰胆碱激发时的呼气阻力呈负相关(r分别=-0.959、-0.919、-0.943,P均<0.01);与EOS数、淋巴细胞数呈负相关(r=-0.832、-0.831,P均<0.01);与WA/P i、ASM/P i呈负相关(r=-0.837、-0.863,P均<0.01);与BALF中IL-4和IL-5含量呈负相关(r=-0.921、-0.920,P均<0.01);与IFN-γ含量呈正相关(r=0.934,P<0.01);与肺组织中IL-4、IL-5mRNA表达水平呈负相关(r=-0.964、-0.931,P均<0.01);与IFN-γmRNA表达呈正相关(r=0.983,P<0.01)。结论转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症密切相关,能客观反应哮喘免疫失衡,很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。     

基质金属蛋白抑制因子-1 mRNA在饮水砷暴露肝损伤小鼠肝组织中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA在饮水砷暴露肝损伤小鼠肝组织中的表达及意义.方法 50只雄性小鼠被随机分成对照组、亚砷酸钠组(iAs3+组,300 mg/L)、砷酸钠组(iAs5+组,300 mg/L).10个月后处死小鼠,肝功能检查血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、球蛋白(GLB);部分肝组织进行HE染色;Trizol-酚-氯仿一步法提取小鼠肝组织总RNA,紫外分光光度法测定总RNA及纯度,实时荧光定量PCR法测定肝组织中TIMP-1 mRNA的表达,以18S基因作为质控.结果 ALT在对照组(36.67±3.51)、iAs3+组(61.46±13.85)和iAs5+组(43.31±4.21)组间比较差异有统计学意义(F=6.559,P＜0.05);iAs3+组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),iAs5+组与对照组、iAs3+组比较差异无统计学意义(P＞0.05);AST在对照组(135.00±20.42)、iAs3+组(510.86±59.01)和iAs5+组(258.93±22.40)组间比较差异有统计学意义(F=83.327,P＜0.05);GLB在对照组(20.86±0.61)、iAs3+组(26.94±3.73)和iAs5+组(24.59±5.27)组间比较差异无统计学意义(F=2.800,P＞0.05).肝组织病理检查显示,肝组织中有明显的肝细胞坏死和再生,TIMP-1 mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=17.337,P＜0.05).结论 TIMP-1基因在水砷暴露肝损伤小鼠肝组织损伤、肝纤维化形成过程中可能起重要作用.     

整合素β1在肝泡型包虫病患者肝脏中的表达及其与临床病理特征的相关性北大核心CSCD

目的检测肝泡型包虫病(AE)患者肝组织中整合素β1(Integrinβ1)的表达水平,并探讨其与患者临床病理特征的相关性。方法取73例AE患者肝脏组织样品及8例正常肝脏样品做石蜡组织切片,采用免疫组织化学染色法检测Integrinβ1的表达情况,分析Integrinβ1的表达水平与Child-pugh分级、PNM分型、血管新生等临床病理特征的相关性。结果AE患者病灶近旁及远端肝组织integrinβ1表达显著高于正常肝组织(P<0.01)。相关性分析显示Integrinβ1表达与AE患者PNM分型及新生血管数(Integrinβ1高表达组23.7±10.78,低表达组16.09±7.35)呈正相关(P<0.05),且随着AE病灶范围(P分期)的加重,Integrinβ1呈高表达(P1,0%;P2,13.6%;P3,75.0%;P4,50%)(P<0.01),而与患者年龄、性别、Child-Pugh分级等无显著相关性(均P>0.05)。结论肝泡型包虫病患者的肝组织高表达Integrinβ1,提示Integrinβ1可能参与AE病灶浸润过程,为阐明AE的致病机制和寻找新的药物靶标奠定了基础。     

胰腺癌组织中血管内皮生长因子mRNA与尿激酶型纤溶酶原激活物mRNA定量表达的临床意义分析

目的探讨胰腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)mRNA定量表达的临床意义。方法自2008年1月至2011年12月于本科行胰头癌根治术的患者中筛选出经病理证实为导管腺癌的30例患者的完整资料,采用荧光定量PCR(qPCR)检测其胰腺癌组织及6例正常胰腺组织中VEGF mRNA、uPA mRNA定量表达,分析其与临床病理因素之间的关系。结果 VEGF mRNA、uPA mRNA的表达与胰腺癌的组织分化程度、神经侵犯有关。VEGF mRNA在淋巴结转移阳性组中的定量表达高于淋巴结转移阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=20.007,P=0.000);uPA mRNA在直径≤2 cm的肿瘤组织中定量水平小于直径2 cm的肿瘤组织,两组比较差异有统计学意义(t=7.539,P=0.000)。uPA mRNA在伴有十二指肠侵犯组中的定量表达高于无十二指肠侵犯组,两组比较差异有统计学意义(t=-2.089,P=0.037)。uPA mRNA在Ⅲ期肿瘤组织中的定量表达高于Ⅰ、Ⅱ期肿瘤组织中的定量表达,两组比较差异有统计学意义(t=-9.450,P=0.000)。VEGF mRNA与uPA mRNA的表达存在正相关(r=0.334,P=0.000)。结论 VEGF mRNA、uPA mRNA在胰腺癌组织中过度表达可为肿瘤细胞的侵润创造条件。     

日本血吸虫感染小鼠肝髓样细胞触发受体-1的表达及其功能

目的观察日本血吸虫感染小鼠肝组织髓样细胞触发受体-1 (TREM-1)的动态表达,分析TREM-1与巨噬细胞M1极化的相关性。方法 34只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和感染组(24只),对照组小鼠不作任何处理,取肝组织;感染组每鼠经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴(15±2)条,感染后第3、6、 9和12周,各取6只小鼠的肝组织。实时荧光定量PCR检测对照组、各时间点感染组小鼠肝组织中TREM-1和白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA的相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测各鼠肝组织中TREM-1和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白相对表达水平;制备各鼠肝组织冰冻切片,免疫荧光染色技术检测肝组织巨噬细胞中TREM-1的表达情况。合成TREM-1 siRNA和阴性siRNA (NC siRNA),分别转染RAW264.7巨噬细胞,培养6 h后分为TREM-1 siRNA、 NC siRNA、 TREM-1 siRNA+日本血吸虫成虫抗原(SWA)和NC siRNA+SWA组,后两组加入终浓度为20μg/ml的SWA作用48 h,收集细胞,Western blotting检测细胞中TREM-1和i NOS蛋白的相对表达水平。多组之间TREM-1、 IL-1βmRNA相对转录水平,TREM-1和i NOS蛋白相对表达水平的比较使用单因素方差分析,两组之间的比较采用独立样本t检验。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1 mRNA相对转录水平分别为14.28±6.26、183.41±37.37、 68.17±16.19和106.91±45.70 (F=6.668, P 0.01),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.881, P 0.01); IL-1βmRNA的相对转录水平分别为8.16±1.91、 56.12±10.68、 24.41±3.54和24.28±2.98 (F=16.943, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-3.740, P 0.05; t=-5.159、-6.606和-7.799, P 0.01)。Western blotting检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.24±0.38、 1.50±0.13、 1.13±0.28和1.17±0.60 (F=1.547, P 0.05),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-6.011, P 0.01); i NOS蛋白相对表达水平分别为5.27±3.66、 23.27±14.72、 10.16±4.97和2.69±1.65 (F=9.384, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-2.893、-3.716、-4.537和-2.571, P 0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组小鼠肝组织中TREM-1 (绿色)和F4/80 (红色)的表达较少,感染组小鼠肝组织肉芽肿周围TREM-1和F4/80的表达增加,TREM-1和F4/80共定位的细胞(黄色)增多。Western blotting检测结果显示,NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、 TREM-1 siRNA+SWA组TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.35±0.13、 0.58±0.09和1.09±0.03 (F=46.689, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.716、 7.858, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组比较差异有统计学意义(t=9.000, P 0.01)。NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、TREM-1 siRNA+SWA组i NOS蛋白相对表达水平分别为3.69±1.04、 0.77±0.12和2.74±0.86 (F=12.714, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.451、3.254, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组差异无统计学意义(t=3.913, P 0.05)。结论日本血吸虫感染小鼠肝组织中TREM-1表达显著上调,抑制TREM-1的表达能够抑制SWA作用的巨噬细胞i NOS的表达。     

趋化因子Fractalkine在急性肝功能衰竭大鼠模型中的变化及意义

目的 探讨不规则趋化因子Fraetalkine(FKN,CX3CLl)在急性肝功能衰竭大鼠模型中的变化及其在肝脏炎性损伤中的作用.方法 SD大鼠分为健康对照组6只,模型组36只.D氨基半乳糖(D-Gal)诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,造模后分别在12、24、48、72、120和168 h等6个时间点取大鼠血及肝脏标本,RT-PCR法检测肝组织中FKN mRNA、核因子(NF)-kB mRNA的变化.计量资料组间比较用t检验,相关性检验用Pearson直线相关分析.结果 造模后12 h,大鼠血ALT、AST值明显升高,分别为(208.3±43.5)U/L和(375.25:117.3)U/L,显著高于正常组的(31.8±2.9)U/L和(90.8±3.1)U/L,差异有统计学意义(t值分别为-9.912和-5.935,P＜0.01),72 h达高峰.造模后12 h,FKN mRNA为0.086±0.009,高于正常组的0.044±0.009,差异有统计学意义(t=-7.999,P＜0.01),72 h达高峰,为0.333±0.033,120 h则明显下降.NF-kB在正常大鼠肝组织中有少量表达,模型组随着时间推移,NF-kB水平逐渐升高,72 h达高峰,为0.583±0.101(t=-12.607,P＜0.01).FKN与NF-kB呈正相关(r=0.760,P＜0.01).结论 FKN在急性肝功能衰竭大鼠中的表达是肝损伤的重要因素,有可能为急性肝功能衰竭的治疗提供一个新的切入点.     

超声弹性成像技术在肝泡型包虫病诊断中的应用价值分析

目的为了提高临床对肝泡型包虫病的检出率,分析采用超声弹性成像技术的价值和意义。方法根据随机数字表的方法从2014年7月至2017年7月我院就诊的肝占位性病变患者中选取80例作为研究对象,入组患者均常规接受普通超声和超声弹性成像检查,记录入组患者病灶的大小以及弹性评分,比较诊断结果与手术或病理结果的差异。结果研究表明,入组的80例肝占位性病变患者中原发性肝癌、肝血管瘤、肝囊肿以及肝泡型包虫病分别为28例、22例、20例和10例,与普通超声检测相比超声弹性成像检测的肝泡型包虫病、原发性肝癌的病灶面积、周长以及体积明显增加,且二者比较差异有统计学意义(P0.05);肝泡型包虫病与原发性肝癌的超声弹性成像评分相比明显降低,与肝血管瘤相比则显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论对可疑肝泡型包虫病患者进行超声弹性成像技术检查,有助于明确病灶硬度,提高检出准确性,效果显著,值得临床推广和应用。     

淋巴细胞趋化因子受体mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的探讨淋巴细胞趋化因子受体(XCR1)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,及其与疾病的相关性。方法收集93例确诊的SLE患者和30名健康对照组,收集PBMC,提取RNA。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测研究对象XCR1mRNA表达水平。结果!"XCR1mRNA在PBMC中表达水平,患者组(1.57±0.84)与正常对照组(0.19±0.14),两者差异无统计学意义(P>0.05)。活动期(2.09±1.38)与对照组比较,两者差异有统计学意义(t=2.392,P=0.02);活动期与非活动期(0.31±0.24)比较,差异有统计学意义(t=3.091,P=0.003);非活动期与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。"#SLE患者组XCR1mRNA水平与疾病活动度评分(SLEDAI)关系:SLE患者组PBMC中XCR1mRNA表达水平与SLEDAI作直线相关性分析,XCR1mRNA水平与SLEDAI(r=0.540,t=5.445,P=0.000)呈正相关。"$SLE患者PBMC中XCR1mRNA表达与临床表现及实验室检查相关性:SLE抗SSA抗体阳性患者(17/68,1.4±1.2)比阴性患者(51/68,3.5±4.9),其XCR1mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(t=2.78,P=0.007)。结论XCR1mRNA表达水平在PBMC中活动期SLE患者比非活动期及对照组增高,与疾病的活动性(SLEDAI)正相关,非活动期与对照组差异无统计学意义。SLE抗SSA抗体阳性患者比阴性患者,其XCR1mRNA表达水平降低,两组均较健康对照组增高。提示XCR1参与疾病的发展,与疾病的活动性相关,XCR1可能参与抗SSA抗体的形成过程,造成组织损伤。     

硫化氢对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)的影响.方法:选择硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,将32只♀SD大鼠分为3组:正常组(N组)8只、肝纤维化组(hepatic fibrosis,HF组)13只、NaHS干预组(S组)11只,采用四氯化碳复合因素法复制肝纤维化模型,S组自造模第6周始给予NaHS56μmol/(kg·d)腹腔注射12d,N组和HF组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射.干预结束后,宰杀大鼠留取肝脏行肝组织病理切片HE染色评价肝纤维化分期,行Masson染色观察胶原纤维沉积情况,应用RT-PCR法检测肝脏中COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达,采用SP免疫组织化学法检测肝脏COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达.结果:HF组与N组相比,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ及其mRNA表达升高(均P=0.000),与肝纤维化分期结果一致(P=0.000);S组与HF组相比,COL-Ⅰ和COL-Ⅲ表达降低(均P=0.000);COL-ⅠmRNA表达降低(P=0.009),同时COL-ⅢmRNA表达亦降低(P=0.003),肝纤维化分期下降(P=0.047).结论:H2S具有降低肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用,能够延缓肝纤维化的发生发展.     

NLRP3、IL-1βmRNA表达水平与酒精性肝硬化发病相关性及作用机制分析

目的对NLRP3、IL-1βmRNA的表达水平与酒精性肝硬化(ALC)发病的相关性和作用机制进行探讨。方法选取我院2016年7月至2018年5月收治的酒精性肝炎(AH)患者74例、ALC患者30例,选取同期由肝移植手术时获得的正常肝组织样本作为对照,所有样本均为男性,进行血浆样本留样,进行NLRP3、IL-1βmRNA表达水平的检测。结果各组间样本的NLRP3和IL-1βmRNA表达量均差异有统计学意义,其中AH组和ALC组间随着肝组织的纤维化,炎性指标IL-1βmRNA的表达水平呈现下降趋势,NLRP3炎性小体的表达水平呈现上升趋势(NLRP3:t=2.0086,P=0.0001;IL-1βmRNA:t=2.0086,P=0.0018),结果差异有统计学意义。结论检测NLRP3、IL-1βmRNA表达水平有助于了解ALC的病变肝组织炎症活动度、肝损伤程度及纤维化程度,对临床诊断具有一定的指导意义。     

泡球蚴感染青藏高原野生田鼠动物模型的建立

目的探索青藏高原野生田鼠是否可以作为泡球蚴感染的动物模型。方法将60只实验野生田鼠分为A组(皮下注射接种感染组)、B组(开腹肝穿刺注射感染组)、C组(经皮肝穿刺感染组),每组20只。感染3个月后观察各组大鼠的感染率、病死率。造模成功田鼠处死后分别从病灶浸润带、灶旁+50%病灶、病灶中心、液化部分、病灶边缘、病灶70%来进行HE染色,显微镜下观察包虫病灶的病理结构。从感染病灶中提取原头节,进行体外培养。计数资料比较采用χ~2检验。结果 A、B、C组田鼠泡球蚴感染的成功率分别为60%、80%、70%,3组比较差异无统计学意义(χ~2=4.138,P=0.126)。A、B、C组田鼠泡球蚴感染的病死率分别为5%、20%、15%,3组比较差异无统计学意义(χ~2=5.201,P=0.107)。将造模成功的田鼠病灶切片,从浸润带(灶旁2~3 mm)、灶旁+50%病灶、病灶中心(无液化部分)、液化部分、病灶边缘(不含正常组织)、病灶70%来进行HE染色,镜下可见被红染囊泡的角质层较薄、不连续,囊泡外可观察到大量炎性细胞浸润,所有切片中均未发现原头节。随后将病灶组织体外培养并染色,可发现大量存活原头节,不着色且有活动性。结论本研究证实高原野生田鼠作为青藏高原特有的物种,可以作为泡球蚴感染的动物模型,皮下接种感染泡球蚴是一种较合适的造模方法。     

整合素β1在肝泡型包虫病患者肝脏中的表达及其与临床病理特征的相关性

目的检测肝泡型包虫病(AE)患者肝组织中整合素β1(Integrinβ1)的表达水平,并探讨其与患者临床病理特征的相关性。方法取73例AE患者肝脏组织样品及8例正常肝脏样品做石蜡组织切片,采用免疫组织化学染色法检测Integrinβ1的表达情况,分析Integrinβ1的表达水平与Child-pugh分级、PNM分型、血管新生等临床病理特征的相关性。结果 AE患者病灶近旁及远端肝组织integrinβ1表达显著高于正常肝组织(P0.01)。相关性分析显示Integrinβ1表达与AE患者PNM分型及新生血管数(Integrinβ1高表达组23.7±10.78,低表达组16.09±7.35)呈正相关(P0.05),且随着AE病灶范围(P分期)的加重,Integrinβ1呈高表达(P_1,0%;P_2,13.6%;P_3,75.0%;P_4,50%)(P0.01),而与患者年龄、性别、Child-Pugh分级等无显著相关性(均P0.05)。结论肝泡型包虫病患者的肝组织高表达Integrinβ1,提示Integrinβ1可能参与AE病灶浸润过程,为阐明AE的致病机制和寻找新的药物靶标奠定了基础。