自由基清除剂在肝损伤治疗中的应用

肝细胞损伤可能是多种因素相互作用的结果,而自由基的毒性作用近来尤为重视,主要包括损伤细胞DNA、破坏核苷酸辅酶、干扰巯基酶、共价结合和脂质过氧化作用等,故自由基清除剂在肝病治疗中具有重要的作用。四氯化碳(CCl_4)所致肝细胞的损伤主要通过对肝细胞微粒体细胞色素氧化酶(P-450)代谢为两个活跃的自由基-Cl和CCl_3O_2,产生氯烷化作用和脂质过氧化作用,破坏细胞膜性结构阻断蛋白合成、分泌和其它肝功能,而直接的毒性作用是由CCl_3O_2产生的脂质过氧化作用,导致肝细胞膜的破坏,这也是CCl_4在体内代谢的主要途径。用高氧压治疗CCl_4中毒的原理就是与O_2竞争对细胞色素P-450的结合,抑制脂质     

白藜芦醇对氧化应激环境中HUVECs细胞衰老、增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨白藜芦醇(RSV)在氧化应激环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老、增殖及凋亡的影响,并对相关机制进行探索。方法利用β-半乳糖苷酶染色HUVECs衰老的细胞并记录阳性细胞数,观察过氧化氢(H_2O_2)单独处理以及联合RSV后,细胞衰老情况的变化;采用长时程动态活细胞成像及分析系统检测H_2O_2单独处理以及联合RSV后细胞增殖能力的变化并绘制生长曲线;利用流式细胞技术检测H_2O_2单独及联合RSV对HUVECs细胞周期及细胞凋亡情况的影响;采用Western印迹检测相关蛋白表达情况。结果 HUVECs经H_2O_2处理后,相比于H_2O_2组,RSV组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例明显减低,细胞增殖能力增强,二者差异显著(P0.05);相比于RSV组,H_2O_2组细胞周期多被阻滞在G1期,且细胞增殖相关蛋白(p-AKT和pERK)表达减少,而衰老相关蛋白p53、 p21、 p16、 p-Rb表达明显增多;而RSV可拮抗H_2O_2对HUVECs的作用,使HUVECs凋亡细胞数显著减少,Survivin蛋白表达明显增多(P0.05)。结论 RSV可抑制氧化应激环境中HUVECs细胞的衰老及凋亡、促进细胞增殖,对HUVECs细胞具有保护作用,其机制与RSV改变相关蛋白表达有关。     

抗氧化酶抑制剂对人肝L02细胞自噬的影响

目的通过观察抗氧化酶抑制剂对人肝L02细胞内氧化还原体系的干涉作用,探究超氧阴离子(O■)、过氧化氢(H_2O_2)和羟自由基(OH·)对细胞自噬发生的影响。方法体外培养L02细胞,分别或联合给予超氧化物歧化酶(SOD)抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸(DETC)、过氧化氢酶(CAT)抑制剂氨基三唑(ATZ)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)抑制剂青霉胺(PEN),培养12 h。采用试剂盒检测细胞内SOD、CAT和GPx的酶活力,O■和OH·的产生能力,H_2O_2和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞相对活性;采用免疫印迹技术检测自噬标志蛋白表达变化,包括微管相关蛋白1轻链(LC)3、自噬启动蛋白Beclin-1和自噬特异性底物P62;Pearson法分析各项检测指标的相关性。结果在抗氧化酶抑制剂的干预下,L02细胞内各种抗氧化酶活力均对应性下降,细胞内H_2O_2和GSH含量、产生O■和OH·能力的变化与相应的抗氧化酶活力相关,自噬标志蛋白LC3、Beclin-1和P62的表达量与细胞产生O■的能力相关(均P<0.05)。结论细胞内氧化还原系统中O■可能是促进细胞自噬发生的关键分子,而H_2O_2及其进一步产生的OH·与细胞自噬发生的关系密切。     

鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B对H2O2诱导的海马神经元损伤的作用及可能机制

目的探讨鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B(NB)对H_2O_2诱导的海马神经元细胞损伤的作用及可能机制。方法将对数生长期的HT22海马神经细胞分为正常对照组、H_2O_2处理组、NB干预组(H_2O_2+NB)、单独NB组和阳性药物对照组(H_2O_2+NAC)。其中H_2O_2组为加入终浓度为300μmol/L的H_2O_2与细胞共孵育24 h;H_2O_2+NB组和H_2O_2+NAC组是于H_2O_2处理前2 h分别给予100μmol/L的NB或5 mmol/L的NAC共孵育24 h。为明确磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/血红素氧合酶1(PI3K/Akt/HO-1)途径是否参与了NB的神经保护作用,对细胞给予PI3K抑制剂Ly294002预处理30 min,再加入NB及H_2O_2共孵育24 h。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,生化试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)及细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax,及相关信号通路蛋白p-Akt和HO-1水平。采用SPSS 19.0软件进行统计分析,组间比较采用方差分析或Tukey′s检验。结果 (1)细胞活性。与空白对照组比较,H_2O_2组细胞存活率明显下降,细胞上清LDH含量显著增加,细胞形态出现明显皱缩、空泡变性及细胞减少。给予NB或NAC干预可显著增加细胞活性、减少LDH释放,细胞形态的破坏得到明显改善。(2)氧化损伤指标。与正常对照组比较,H_2O_2组细胞MDA水平显著增加,SOD及GSH活性显著降低;与H_2O_2组比较,加入NB或NAC的细胞MDA漏出量显著降低,SOD、GSH活性显著升高。(3)细胞凋亡情况。流式细胞术结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显增高,加入NB及NAC处理后,与H_2O_2组比较,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2处理组Bcl-2表达显著下降,Bax水平显著升高;与H_2O_2处理组比较,给予NB或阳性药物NAC处理的细胞Bcl-2显著升高,Bax水平显著下降。(4)相关信号通路蛋白表达。Western blotting显示,与正常对照组比较,H_2O_2组p-Akt、HO-1水平升高;与H_2O_2组相比,NB+H_2O_2组p-Akt、HO-1水平显著升高(P0.05)。上述所有指标在正常对照组与NB组细胞间比较差异均无统计学意义(P0.05)。另外,加入Ly294002组的细胞p-AKT及HO-1表达水平均较H_2O_2+NB组显著降低。结论 NB可通过抗氧化、抗凋亡减轻H_2O_2诱导的神经元损伤,发挥神经保护作用,其机制可能是激活PI3K/Akt/HO-1信号通路。     

葛根总黄酮上调磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B保护内皮细胞损伤

目的探讨葛根总黄酮(PR)对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤保护作用及其可能机制。方法分离培养大鼠主动脉内皮细胞。MTT法检测细胞活力,免疫印迹检测PR对PI3K和AKT蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况并进行细胞自噬荧光分析。组间比较采用单因素方差分析。结果与PR+H_2O_2组相比,PR+H_2O_2+LY294002组的A_(570nm)值显著降低[(2.07±0.08)vs(1.69±0.04),0.05]。与对照组相比,H_2O_2组25.47%)和PR+H_2O_2组(13.26%)的细胞凋亡率均显著增加(P0.05);而与H_2O_2组相比,PR+H_2O_2组的细胞凋亡率亦显著降低(25.47%vs 13.26%;P0.05)。与对照组相比,H_2O_2组和PR+H_2O_2组的自噬荧光强度均显著增高(P0.05),PR+H_2O_2组的自噬荧光强度显著低于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2+PR组的PI3K和AKT蛋白表达显著高于对照组(P0.05),PR+H_2O_2+LY294002组的PI3K和AKT蛋白表达显著低于H_2O_2+PR组(P0.05)。结论PR可通过抑制细胞过度自噬和凋亡,促进内皮细胞存活,对H_2O_2诱导的内皮细胞损伤有保护作用,且其作用机制可能与调控PI3K/AKT表达上调相关。     

miR-92a对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡以及MAPK-ERK通路的影响

目的探讨下调miR-92a表达对过氧化氢(H_2O_2)诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞分为空白对照组(Blank)、H_2O_2模型组、阴性对照组(NC)、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组。Blank组不经任何特殊处理。NC组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞进行转染,q RT-PCR法验证转染效率。另H_2O_2模型组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor+H_2O_2组细胞经H_2O_2诱导6 h,流式细胞术法检测细胞凋亡率。采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量。Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路蛋白磷酸化情况。结果成功建立miR-92a inhibitor转染细胞模型。经H_2O_2处理6 h后,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组H9C2细胞的凋亡率、ROS产生量、MDA和LDH释放量均低于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组,而细胞培养上清中SOD水平高于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组(P0.05)。Western blot法检测,与H_2O_2模型组相比,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组细胞Bcl-2蛋白表达量上调,Bax、Caspase-3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、p-ERK蛋白表达量降低(P0.05)。H_2O_2对H9C2细胞AKT和ERK蛋白表达量无影响(P0.05)。结论下调miR-92a表达可抑制H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡,其可能的作用机制与降低ROS释放量、调控Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白以及MAPK-ERK信号通路有关。     

三氧化二砷预防家兔血管损伤后再狭窄及其机理的研究

目的 探讨应用三氧化二砷(As_2O_3)预防血管损伤后再狭窄的效果及其作用机制。方法 观察As_2O_3对培养兔血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。32只新西兰白兔随机分为2,4周实验组和对照组,应用10％As_2O_3 2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)或等量生理盐水腹腔注射后3 d,球囊损伤左颈总动脉。处死动物取血管作形态学和免疫组化检测,检查肝脏、肾脏组织学。结果 细胞形态学和凋亡DNA片段电泳证实,As_2O_3诱导培养VSMC凋亡,与药物浓度和作用时间呈依赖性。与对照组相比,2周实验组血管内膜增殖面积显著减少(P<0.05),4周实验组内膜面积无明显差异;但2周和4周实验组的管腔面积均有明显增大(均P<0.05)。免疫组化检测发现,与对照组相比,实验组2,4周Bcl-2蛋白表达下调(均P<0.05),bax蛋白表达上调(分别P<0.01,P<0.05),这与相应时间段的血管内膜增生受抑制,血管腔面积扩大相一致。结论 As_2O_2能有效地预防实验性血管损伤后再狭窄,与抑制bcl-2基因和活化bax基因而诱导细胞凋亡有关。     

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。     

miR-23b通过MAPK信号通路对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究microRNA(miR)-23b对H_2O_2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H_2O_2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-) p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性。结果转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0. 05)。转染后经H_2O_2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H_2O_2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0. 05)。MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论上调miR-23b可减少H_2O_2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H_2O_2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关。     

葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨葛根素调控p38信号通路对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的影响。方法葛根素处理大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组(细胞无特殊处理)、H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2干预细胞)和葛根素+H_2O_2组(250μmol/L葛根素和200μmol/L H_2O_2干预细胞),SB203580作为p38信号通路抑制剂,各组细胞处理24 h,通过流式细胞仪检测各组凋亡率;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(酶切caspase3)、p53、p-p38的蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率显著升高,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著升高(P0.05);与H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2组凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05);与葛根素+H_2O_2组比较,葛根素+H_2O_2+SB203580组细胞凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论葛根素可通过抑制p38信号通路及下调酶切caspase3和p53表达降低H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡。     

右美托咪定对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定对过氧化氢(H_2O_2)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 PC12细胞随机分为正常对照组,H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2),右美托咪定低、中、高浓度组(50、100、200μmol/L右美托咪定+200μmol/L H_2O_2),培养48 h,分别检测细胞活力、凋亡情况、天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Caspase9活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化水平。结果与H_2O_2组比较,右美托咪定低、中、高浓度组细胞活力显著提高,细胞早期及晚期凋亡率显著降低,LDH释放量显著减少,MDA含量显著降低,SOD、CAT及GSH-Px活性显著升高,Caspase3、9活性显著降低,Bcl-2及p-ERK1/2表达量显著上调,Bax表达量显著下调(均P<0.01)。结论右美托咪定能通过抗氧化及抗细胞凋亡进而抑制H_2O_2引起的PC12细胞损伤。     

乌司他丁对过氧化氢诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用

背景:肠上皮细胞间紧密连接的破坏及其所致的肠黏膜屏障功能受损在一系列胃肠道疾病的发生、发展中起重要作用。目的:探讨乌司他丁对过氧化氢(H_2O_2)诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法:以Caco-2细胞体外培养制备肠单层上皮屏障模型,将其分为空白对照组(不予干预)、H_2O_2组(500μmol/L H_2O_2)和低浓度(500 U/mL)、高浓度(3 000 U/mL)乌司他丁治疗组并予相应处理。检测丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性,以跨上皮细胞电阻(TEER)和荧光素钠透过率评估上皮屏障功能,蛋白质印迹法和免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达和定位,透射电镜观察紧密连接超微结构。结果:与空白对照组相比,H_2O_2组Caco-2细胞单层上皮MDA水平、荧光素钠透过率明显升高,SOD活性、TEER、ZO-1和occludin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。透射电镜观察和免疫荧光法检测显示H_2O_2组细胞刷状缘受损,细胞间连接模糊,ZO-1、occludin蛋白分布断续不完整,荧光强度低。乌司他丁治疗组上述指标均较H_2O_2组显著改善(P0.05),高浓度组改善更为明显。结论:乌司他丁对H_2O_2诱导的肠单层上皮屏障损伤有一定保护作用,其机制可能与其抗氧化活性以及调节紧密连接蛋白表达和分布有关。     

氧化砷抗胰腺癌作用及其机制的实验研究

目的:探讨氧化砷(As_2O_3)体外体内抗胰腺癌作用及其可能机制。方法:应用MTT比色法、流式细胞仪、裸鼠肾包膜下移植瘤抑制试验和细胞形态学方法进行检测。结果:As_2O_3抑制胰腺癌细胞生长并具有时间与浓度依赖性,6天组抑制50％细胞生长的药物浓度(IC_(50))为0.625～1.25μg/ml。癌细胞在As_2O_3作用下,G0/G1期细胞比例、凋亡指数(AI)增高,增殖指数(PI)下降,AI/PI比例增大。As_2O_3能显著抑制肾包膜下胰腺癌移植瘤生长。电镜检查证实As_2O_3诱导的胰腺癌细胞具有凋亡与分化特征。结论:As_2O_3抗胰腺癌细胞作用主要通过诱导细胞凋亡与分化而得到体现。     

齐墩果酸对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究齐墩果酸(OA)对H_2O_2诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMCs,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+OA组、阻断剂组。采用Hoechst 33342染色和Annexin V/FITC染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中磷酸化Akt蛋白表达变化。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+OA组细胞凋亡率明显降低,p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.05);与H_2O_2+OA组比较,阻断剂组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05)。荧光显微镜显示,对照组细胞核呈蓝色,H_2O_2组细胞核呈致密浓染,H_2O_2+OA组细胞核呈蓝染,有少量细胞核致密浓染,阻断剂组细胞核呈致密浓染。结论 OA能减轻H_2O_2导致的VSMCs凋亡,其机制可能与激活细胞内磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号通路引起下游促生存基因的表达有关。     

赖氨酰氧化酶在肺动脉高压中的相关性研究

肺动脉高压(pulmonary hypertension, PH)是一种严重的心血管疾病,发病机制非常复杂,其中包括血管收缩、细胞增殖、血小板聚集等多种因素。赖氨酰氧化酶蛋白家族(Lysyl Oxidase Family, LOS)是一类铜依赖的胺氧化酶,以细胞外蛋白,尤其是弹性蛋白及胶原蛋白为底物,可以催化外源性赖氨酸和内源性赖氨酸的氧化反应。近年来的研究表明,赖氨酰氧化酶在PH的发病机制中也发挥着重要的作用。本文就LOS在PH中的相关研究进行综述,指出LOS可能是PH预后不良的生物标志物。     

枸杞多糖通过核因子κB信号通路对过氧化氢诱导的神经细胞损伤保护作用的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导神经细胞PC12损伤的保护作用及分子机制。方法 PC12细胞分为正常对照组(Con)、H_2O_2诱导模型组(H_2O_2)、H_2O_2+75 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 75)、H_2O_2+150 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 150)、H_2O_2+300 mg/L LBP组(H_2O_2+LBP 300)、H_2O_2+300 mg/L LBP+丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)组(H_2O_2+LBP 300+PMA)。CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,比色法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。结果与Con组比较,H_2O_2组细胞存活率降低[(100.00±5.25)%vs(53.37±2.57)%,P0.05]、ROS水平升高[(20.05±2.14)%vs(46.24±3.27)%,P0.05],MDA水平升高[(8.17±0.41)vs(20.06±1.06)mmol/L,P0.05],SOD活性降低[(19.39±1.17)vs(8.42±0.53)U/ml,P0.05],凋亡率升高[(4.82±1.01)%vs(33.62±3.18)%,P0.05]。与H_2O_2组比较,不同浓度LBP能缓解H_2O_2诱导的氧化损伤,减少细胞凋亡,而NF-κB信号通路激活剂PMA可逆转LBP对PC12细胞损伤保护作用。结论 LBP通过抑制NF-κB信号通路活化,对H_2O_2诱导的神经细胞损伤有保护作用。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究黄芪多糖(APS)对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为:空白对照组、H_2O_2组、APS(20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L)+H_2O_2组,每组设10个复孔;给药干预24 h后,MTT法检测细胞存活率,通过流式细胞术(Flow Cytometry)检测细胞凋亡状况并计算凋亡率;测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量,培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]含量,Western blot法检测细胞中NF-κB、caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,RT-PCR法检测AKT m RNA、bcl-2 m RNA、Bax m RNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值。结果与H_2O_2组比较,APS(40μmol/L、80μmol/L)+H_2O_2组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低;细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,细胞中caspase-3、NF-κB蛋白表达量显著降低,AKT m RNA和bcl-2 m RNA表达显著上调,Bax m RNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 APS可能通过改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤、降低NF-κB、caspase-3蛋白表达、上调抗凋亡基因表达并下调促凋亡基因表达、提高bcl-2/Bax表达比值,从而对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡起抑制作用。     

睾酮通过减少氧化应激干预血管内皮细胞衰老

目的观察睾酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法用SA-βgal细胞化学检测法观察不同浓度睾酮及雄激素受体拮抗剂、雌激素受体拮抗剂对H_2O_2诱导的HUVECs衰老的干预作用,用2,7二氯氢化荧光素二酯(H2DCF-DA)染色检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,用免疫印迹分析(Western印迹)法检测细胞中去磷酸化Rb蛋白水平。结果睾酮在3.0×10~(-9)、3.0×10~(-8)、3.0×10~(-7)mol/L等3种浓度下均具有延缓H_2O_2诱导的HUVECs的SA-βgal阳性率明显增加的趋势;与3.0×10~(-8)mol/L睾酮干预组相比,予10~(-6)mol/L ICI182,780预处理,HUVECs的SA-βgal阳性率明显增加,ROS水平增加,去磷酸化Rb蛋白水平明显增加。结论睾酮对H_2O_2诱导的HUVECs衰老的影响与其剂量有关;生理浓度睾酮具有延缓H_2O_2诱导的HUVECs衰老的趋势,其作用可能是通过转化为雌激素,作用于雌激素受体,减少氧化应激和调节去磷酸化Rb蛋白产生。     

老年矽肺结核患者血清铜蓝蛋白含量测定及分析

血清铜蓝蛋白 ( Ceruloplasmin,CP)又称铜氧化酶 ,是血清蛋白质固有成分之一 ,在某些疾病中其含量可以增多或减少。文献报道肺结核病人血清中铜蓝蛋白含量可以增高[1 ] ,我们检测了老年矽肺结核病人血清铜蓝蛋白含量 ,并与老年肺结核病人和健康老年人做了对照 ,现将结果报告如下。1　临床资料1.1　病例选择1老年健康对照组 :健康老年人 3 0名 ,男 2 8名 ,女 2名。平均年龄 62 .4岁。2老年肺结核组 :5 6例。男 5 3例 ,女 3例。平均年龄 61.7岁。其中痰涂片抗酸染色阳性 2 2例 ,痰涂片抗酸染色阴性 3 4例。3老年矽肺结核组 :86例。均男性 ,…     

肝豆状核变性的病因及治疗进展

肝豆状核变性（ＷＤ）是常染色体遗传的铜代谢障碍疾病,人群中携带者频率约为０．０１１,基因频率为０．００５６,发病率约３／１０万人口。本病属少数可以治疗的神经遗传病之一,早期（尤其是症状前）诊断和及时、确切的治疗常可获得与健康人一样的生活和寿命。肝豆状核变性的病因与发病机理一、铜代谢合成障碍：血清铜蓝蛋白减少是ＷＤ的主要原因,Ｂｉｃｈｔｒｒｉｃｈ根据铜蓝蛋白电泳发现,正常成人是由先构成的未分化的铜蓝蛋白Ｄ在肝脏内经肽酶部分转化为铜蓝蛋白Ｃ,然后由８０％铜蓝蛋白Ｃ与２０％铜蓝蛋白Ｄ构成铜蓝蛋白;ＷＤ…