ATP敏感钾通道在脓毒症中的作用

脓毒症具有患病率高．病死率高、治疗费用高等特点．迄今为止仍是危重症亟需解决的重大难题。其病理生理特点也未完全阐明。尽管如此,但近年来在改善脓毒症休克和多脏器衰竭的生存率方面仍取得了一些新进展。ATP敏感的钾通道（KATP）就是其中之一。KATP是心血管应激反应中起关键作用的离子通道．在脓毒症的发生发展中至关重要。目前认为．过度激活血管KATP会导致脓毒症体克时的低血压和血管对儿茶酚胺的低反应性。据此,有许多研究者提倡通过阻断血管上的KATP来治疗脓毒症。然而．在脉管系统外。该通道开放又可减轻细胞损伤。因此,在总体上如何把握KATP在脓毒症中的作用．仍有待探讨。本文拟对KATP通道在脓毒症中的作用作一综述。     

氯胺酮对离体大鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响

目的观察氯胺酮对离体大鼠心室肌细胞内向整流钾电流(I_(k1))的影响。方法酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录 I_(k1),观察100μmol/L 氯胺酮在不同钳制电压下以及不同浓度(50～5000μmol/L)氯胺酮在-120mV 钳制电压下对大鼠心室肌细胞 I_(k1)的影响。结果 100 μmol/L 氯胺酮抑制 I_(k1),但不改变 I_(k1)翻转电压以及电流-电压曲线的形状；I_(k1)灌流液冲洗后,I_(k1)能够完全恢复。保持电压-40mV、钳制电压-120mV 下5～5000μmol/L 氯胺酮呈浓度依赖性抑制 I_(k1)其 IC_(50)为(162.3±8.4)μmol/L。结论氯胺酮呈浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞 I_(k1),可能延长动作电位时程导致心率变慢。     

利多卡因对气管平滑肌舒张作用的研究

利多卡因是临床上常用的局部麻醉药和抗室性心律失常药物;除此之外,利多卡因还具有较强的扩张气道、抑制气道炎症、降低气道高反应性的作用。此方面的研究最早可追溯到上世纪60年代,利多卡因在围术期预防和处理支气管痉挛中所占的地位已得到充分肯定,现将近10余年来利多卡因对气道平滑肌影响的主要研究成果综述如下。     

氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的影响

目的观察氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法酶消化法急性分离Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定IK。加用不同浓度(10、30、100、300、1000μmol/L)氯胺酮后,计算IK抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择30 μmol/L氯胺酮作IK 稳态激活(及失活)曲线。结果10、30、100、300、1 000μmol/L氯胺酮对IK的抑制率分别为(10±4)%、(19±4)%、(31±5)%、(50±7)%、(54±8)%。IC50为(100±18)μmol/L,Hill系数为1.33±0.48。激活曲线的半数最大激活膜电位(V1/2)(1.82±0.20)mV上升到(9.30±1.03)mV(n=8,P<0.05),K从(20.4±2.3)mV移动到(16.6±4.2)mV(P>0.05);失活曲线的V1/2从(-29±4)mV下降到(-73±6) mV(P<0.01),K从(26±6)mV上升到(53±11)mV(P<0.01)。30 μmol/L氯胺酮使IK的稳态激活曲线向去极化方向明显移动;使IK的稳态失活曲线向超极化方向明显移动。结论氯胺酮对IK通道有抑制作用,氯胺酮的对中枢神经系统的作用可能与IK抑制有关。     

格列苯脲对丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定致兔离体气管平滑肌舒张作用的影响

目的：观察丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定对乙酰胆碱预处理的离体气管条的作用，并探讨该作用与ATP敏感性钾通道的关系。方法：采用离体气管条模型，首先观察丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定对乙酰胆碱预处理气管条肌张力的变化；然后用格列苯脲孵育，观察丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定对肌张力的影响。结果：丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定都可以舒张气管平滑肌，而用格列苯脲孵育后，可以部分阻断上述各药舒张气管平滑肌的效应（P＜0．01）。结论：丙泊酚、氯胺酮、依托咪酯及咪唑安定对离体气管平滑肌的舒张作用与ATP敏感性钾通道有关。     

异丙酚对人心房肌细胞ATP敏感性钾电流的影响

目的 探讨不同浓度的异丙酚对人离体心房肌细胞 ATP 敏感性钾电流(I_KATP)的影响及电生理改变。方法取房缺或室缺修补术病人的右心耳组织，置于100%氧饱和无钙心肌细胞冷保护液中，并在30min 内送至实验室。将标本剪成1mm~3小块，用二步酶解法分离出单一心房肌细胞。用膜片钳全细胞记录方法，观察不同浓度异丙酚(0.003、0.03和0.3mmol·L~(-1))对心房肌单一细胞I_KATP的影响。结果 在电极内液含 ATP(0.3mmol·L~(-1))条件下，记录到一束外向 K~＋电流。该电流可被K_ATP 通道特异阻滞药格列苯脲(10μmol·L~(-1))抑制，表明此电流为 I_KATP。异丙酚使 I_KATP 外流增加，且浓度与电流激活率呈线性回归(r~2=0.9999，P<0.05)。结论 异丙酚通过浓度依赖方式激活心房肌细胞 I_(KATP)，对人心房肌具有抑制作用。     

咪唑安定对气管平滑肌舒张作用的研究

咪唑安定对气管平滑肌有直接舒张作用，作用机制主要和抑制电压依赖性钙通道，降低细胞内钙离子浓度有关；对PKC信号转导系统也有一定的抑制作用；咪唑安定雾化吸入有引起支气管痉挛的可能。     

氯胺酮对离体大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的研究氯胺酮对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录Ito,观察50μmol/L氯胺酮对Ito电流-电压曲线以及不同浓度氯胺酮对Ito的影响,并研究氯胺酮对Ito通道动力学的影响。结果钳制电压-40mV,刺激电压 70mV条件下,临床相关浓度的氯胺酮50μmol/L使Ito的电流峰值降低23·4%(P<0·01),冲洗后,Ito能够完全恢复。5、10、50、100、500、1000、5000μmol/L的氯胺酮抑制Ito呈浓度依赖性,电流抑制率分别为(13·8±9·7)%、(17·5±6·7)%、(23·4±8·8)%、(31·5±6·7)%、(63·3±5·5)%、(79·7±2·7)%、(88·9±4·4)%,其半数有效浓度(IC50)为299μmol/L。100μmol/L的氯胺酮对激活曲线没有影响;使Ito的失活曲线明显右移,半数失活电压(V1/2)在给药前后数值分别为(-28·27±0·20)mV和(-25·34±0·27)mV(P<0·01),斜率因子(k)值分别为(3·23±0·46)mV和(3·40±0·55)mV(P>0·05)。结论氯胺酮可明显阻滞大鼠心室肌的Ito,这是氯胺酮延长大鼠心室肌动作电位的机理之一,同时氯胺酮使Ito的失活曲线右移。     

异丙酚对兔缺血缺氧性心室肌细胞ATP敏感性钾通道电流的影响

异丙酚具有抗缺血再灌注损伤的作用,但机制尚不清楚,本研究采用膜片钳技术观察异丙酚对缺血缺氧心室肌细胞K_(ATP)通道电流(ATP sensitiv potassium current,I_(KATP))的影响,以探讨异丙酚对缺血缺氧心肌作用的机制。     

异丙酚对人动脉平滑肌细胞膜大电导钙激活钾通道的影响

异丙酚引起低血压的电生理机制有两种可能，一种可能是抑制交感神经肌接头活动，降低血浆儿茶酚胺的浓度，从而降低血管外周阻力；另一种可能是对内皮的影响和对血管平滑肌细胞的直接作用，Wanersted等在器官水平上证实了异丙酚扩张血管可能与大电导钙激活钾通道（BKCa）有关。本研究拟观察不同浓度异丙酚对人肠系膜动脉血管平滑肌细胞膜BKCa的影响，从分子水平探讨其扩张血管的机制。     

丙泊酚和硫喷妥钠对大鼠心肌细胞钾通道电流的影响

目的 观察丙泊酚和硫喷妥钠对大鼠心肌细胞延迟整流钾电流和内向整流钾电流的影响,探讨这两种静脉全麻药对心脏功能的影响与两种不同通道电流的关系。方法 急性分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察丙泊酚和硫喷妥钠对大鼠心肌细胞钾通道电流的影响。结果 诱导峰浓度的丙泊酚(50μmol/L)、硫喷妥钠(100μmol/L)使延迟整流钾电流降低10.3％和24.4％(P<0.01)。5倍诱导峰浓度的丙泊酚和硫喷妥钠使延迟整流钾电流进一步降低,较基础值下降了17.9％和45.7％(P<0.01)。1和5倍诱导峰浓度的硫喷妥钠使内向整流钾电流较基础值下降了43.8％和66.5％(P<0.01),但两种浓度的丙泊酚并不影响内向整流钾电流的幅度。结论 丙泊酸和硫喷妥钠呈浓度依赖地抑制延迟整流钾电流,可部分拮抗对钙电流的抑制作用。硫喷妥钠对内向整流钾电流有明显抑制作用,可能与其易化肾上腺素的致心律失常作用有关。两药对细胞表面不同离子通道的作用具有选择性。     

瑞芬太尼对离体兔气管平滑肌张力的影响

气管平滑肌张力升高是气道高反应性的特征性病理生理变化，不同的阿片类药对气管平滑肌张力的影响各异，瑞芬太尼为新型的超短效将异性“阿片受体激活剂，镇痛作用较强，起效迅速、代谢快、长时间输注后体内无蓄积，在临床麻醉中应用日益广泛。本研究拟观察瑞芬太尼对离体兔气管平滑肌张力的影响，为临床应用瑞芬太尼提供参考。     

氯胺酮预先给药对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞超氧阴离子生成和细胞内钙离子浓度的影响

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的组成成分,侵入机体后,在LPS结合蛋白介导下,与巨噬细胞膜上的CD14结合,通过NF-κB信号转导途径促进细胞因子释放和超氧阴离子(O2-·)生成,诱发炎性反应[1].     

异丙酚、硫喷妥钠对大鼠心肌细胞钙、钾通道电流的影响

目的 研究异丙酚、硫喷妥钠对大鼠心肌细胞钙、钾通道电流的影响。方法 急性分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度异丙酚、硫喷妥钠对大鼠心肌细胞L型钙通道电流(I_(Ca))、延迟整流钾通道电流(IK)的作用。结果 随浓度增加,异丙酚和硫喷妥钠对I_(Ca)的抑制作用逐渐增强,与浓度呈正相关,相关系数分别为0.98、0.97(P<0.01),异丙酚、硫喷妥钠的IC_(50)分别为138.8±9.5、102.4±2.0μmol·L~(-1)。50μmol·L~(-1)异丙酚、100μmol·L~(-1)硫喷妥钠并不影响钙通道激活曲线的形态,但使钙通道稳态失活曲线向超极化方向分别移动3、7mV(P<0.05)。50μmol·L~(-1)异丙酚、100μmol·L~(-1)硫喷妥钠使IK降低10％和24％(P<0.01),250μmol·L~(-1)异丙酚、500μmol·L~1硫喷妥钠使IK进一步降低,较基础值下降了18％和46％(P<0.01)。结论 异丙酚、硫喷妥钠呈浓度依赖地抑制大鼠心肌细胞L型I_(Ca),其抑制作用主要与加快钙通道的失活有关,两药对IK也有抑制作用。     

不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道在其中的作用

目的 探讨不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道(mito-KATP通道)在其中的作用.方法 新生(出生＜24 h)SD大鼠,雌雄不拘,体重5～6 g,原代培养海马神经元,接种于培养孔或培养皿中,采用随机数字表法,将其随机分为7组,每组48孔和12皿,正常对照组(C组):不予任何处理;缺氧复氧组(HR组):缺氧4 h复氧24 h;6%七氟醚预处理组(S1 组)、4%七氟醚预处理组(S2 组)、2%七氟醚预处理组(S3 组):分别经6%、4%、2%七氟醚预处理后行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L预处理组(5-HD组):经mito-KATP通道阻断剂5-羟葵酸(终浓度100 μmol/L)预处理后进行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L+6%七氟醚预处理组(5-HD+S组):同时行5-羟葵酸和6%七氟醚预处理后进行缺氧复氧.各组以上处理结束后,测定神经元活力、凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.结果 与C组比较,其余6组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2和Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与HR组比较,S1组～S3组海马神经元活力增强,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P＜0.01),5-HD组和5-HD+S组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S1组比较,S2组、S3组和5-HD+S组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与S2组比较,S3组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可抑制大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡,从而减轻神经元损伤,且呈浓度依赖性,机制可能与开放神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of preconditioning with different concentrations of sevoflurane on hypoxia-reoxygenation(H/R)-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and the role of mitochondrial KATP(mito-KATP)channels.Methods Primary cultured hippocampal neurons isolated from newborn SD rats(＜24h)of both sexes,weighing 5-6 g,were randomly divided into 7 groups with 48 wells and 12 dishes in each one:control group(C group),H/R group,preconditioning with 6%,4%and 2% sevoflurane groups(S1-3 groups),5-hydroxydecanoate(5-HD,mito-KATP channel blocker)100 μmol/L preconditioning group(5-HD group)and preconditioning with 5-HD 100 μmol/L+6% sevoflurane group(5-HD+S group).The neurons were exposed to 4 h hypoxia followed by 24 h reoxygenation. In S1-3 groups, preconditioning was performed with 6% , 4% and 2% sevoflurane respectively before H/R. In 5-HD group, preconditioning was performed with 5-HD (final concentration 100 μmol/L) before H/R. In 5-HD + S group, preconditioning was performed with 5-HD 100 μmol/L and 6% sevoflurane before H/R. The neuronal viability, apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were determined after 24 h reoxygenation.Results The neuronal viability was significantly lower,while the apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were significantly higher in the other 6 groups than in group C(P＜0.01).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly higher,while the apoptosis rate and Bax expression were lower in S1-3 groups than in group H/R. There was no significant difference in the parameters mentioned above between 5-HD and 5-HD + S groups(P＞0.05).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly lower, while the apoptosis rate and Bax expression were higher in S2, S3 and 5-HD + S groups than in group S1, and in group S3 than in group S2(P＜0.0l) .Conclusion Sevoflurane preconditioning can inhibit H/R-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and reduce the injury to neurons in a concentration-dependent manner, and the underlying mechanism may be related to activation of mito-KATP channels, up-regulation of Bcl-2 expression and down-regulation of Bax expression.     

二氮嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

线粒体ATP敏感钾通道(m itoKATP通道)开放剂二氮嗪(diazoxide)在缺血前、或缺血早期给药可减轻心肌缺血再灌注损伤,而在缺血后期或再灌注期给药则无保护作用[1]。脑内m itoKATP通道蛋白的含量是心肌的7倍[2],故开放m itoKATP通道可能更有效地减轻脑缺血再灌注损伤,多种离体或整体动物试验表明di-azoxide预处理有显著的神经保护作用[3,4]。在脑缺血期间或再灌注期间给予diazoxide能否缩小脑梗塞体积还未见报道。既往评价脑梗塞体积采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色后照相、图像分析的方法,不能做到完全定量。新近TTC染色、有机溶剂抽…     

雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞细胞周期和周期相关蛋白的影响

目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。方法应用流式细胞仪检测不同浓度E2在有或无血清刺激下对传代VSMC细胞周期及其相关蛋白Cy-clinD1和CDK4表达的影响。结果在有血清的条件下,E2(1、10、100nmol/L)促进VSMC从G1期向S过渡,其S期细胞比率分别为(31.89±9.14)%、(35.90±4.59)%、(30.77±1.20)%,显著高于对照细胞(21.63±1.80)%(P<0.05),并伴随CyclinD1和CDK4蛋白表达量的显著增高;而在无血清的环境中,高浓度(10、100nmol/L)E2则抑制VSMC增殖,其S期细胞比率分别为(9.93±1.43)%、(8.76±1.80)%,显著低于对照细胞(16.58±3.04)%(P<0.05),且伴随Cy-clinD1和CDK4蛋白表达量降低。结论E2在有或无血清条件下分别对VSMC增殖起促进或阻滞作用,其机制可能是通过影响CyclinD1和CDK4蛋白的表达而作用于VSMCG1期。