痰液中多基因检测在肺癌诊断中的价值

目的：探讨P53,K－ras,P15,P16基因在肺癌组织及相应痰液中的改变情况及其联合检测早期诊断肺癌的价值。方法：应用PCR－SSCP－银染法检测59例肺癌和14例肺良性疾病患者活检组织及相应痰液中P53基因第5－8外显子突变情况;应用PCR－RFLP法对25例肺腺癌和14例肺良性疾病组织及及相应痰液中K－ras基因突变进行了检测;并应用PCR法检测了所有肺癌和良性疾病组织及相应痰液中P15、P16基因纯合缺失情况。结果：肺癌组织中P53,P15、P16基因改变频率分别为37．3％,11．9％,23．8％。而良性病变组织中仅1例出现P16基因缺失。肺癌组织和相应痰液中P53,K-ras,P15,P16等基因的突变基本一致,P＞0．05。对上述基因突变与吸烟关系的分析显示,吸烟者出现P53基因和K-ras基因突变的频率明显高于非吸烟者,P＜0．01。我们还对4种肿瘤相关基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值进行了评估,表明4种基因联合检测敏感度为78％,明显高于单一基因（以阳性率最高的P53为例）的敏感度37.3%。结论：P53基因K－ras基因和P15,P16基因在肺癌组织中突变率相对较高;多基因联合检测在肺癌早期诊断中的价值明显优于单基因的检测;痰液多基因的联合检测可能有助于肺癌的早期诊断。     

53例胃癌前病变粘膜组织K—ras基因突变情况分析

目的：探讨胃癌前病变组织K－ras基因突变情况,揭示K－ras基因突变与胃癌发生的关系。方法：应用聚合酶链反应（PCR）与单链构多态性分析（SSCP）对53例经病理切片诊断为胃癌前病变粘膜组织和10例正常胃粘膜组织进行K－ras基因突变分析。结果：53例胃癌前病变粘膜组织中,K－ras基因发生突变40例,占75．5％;男女间突变率比较差异无显著性（P＞0．05）;而10例正常胃粘膜组织无K－ras基因突变发生。结论：K－ras基因突变是胃癌前病变中常见的分子事件,用PCR－SSCP法检测胃粘膜组织K－ras基因的突变情况将有助于了解胃癌发生的生物学行为,对早期诊断有一定的帮助。     

血浆P16基因突变对非小细胞肺癌发生和发展及预后的意义

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆P16基因突变对NSCLC发生、发展争预后估计的意义。方法应用聚合酶链反应（PCR）扩增P16基因第2外显子，并用单链构象多态性分析（SSCP）产物突变情况，再与各生物参数进行相关研究。结果10例健康人血浆中没有测到P16基因第2外显子突变；32例NSCLC患者血浆中有14例（43．75％）测到这种突变，其中，鳞癌、腺癌及腺鳞癌中突变率分别为57．1％（8／14），37．5％（6／16）和0（0／2），鳞癌中P16基因的突变率明显高于腺癌和腺鳞癌（P〈0，05）。TNM分期Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期NSCLC患者血浆P16基因突变率分别为25．0％（1／4），33．3％（3／9），50．0％（5／10）争55．5％（5／9），Ⅲ，Ⅳ期明显高于Ⅰ，Ⅱ期（P〈0．05）。结论血浆循环核酸P16基因突变在NSCLC中有较高的检出率，并与肿瘤的临床分期和病理类型有关，血浆P16基因突变对NSCLC的诊断以及转移的预测具有重要价值。     

血清CA19-9与粪便K-ras、p53突变在胰腺癌诊断中的价值

目的：评价血清肿瘤标志物CA19—9和粪便K—ras以及p53基因突变对早期胰腺癌的诊断价值。方法：收集2006年9月～2009年3月在我院确诊的新发胰腺癌患者56例,胰腺良性疾病患者90例,进行血清肿瘤标志物CA19—9和粪便K—ras以及p53基因突变的检测,根据血清CA19—9的水平及粪便K—ras、p53基因突变率,进行临床分析。结果：血清CA19—9水平、粪便K—ras、p53突变率3项早期及中晚期胰腺癌组与胰腺良性疾病患者组比较,均有显著性差异（P〈0．05）;早期与中晚期胰腺癌组比较,均无显著性差异（P〉0．05）。CA19—9检测（〉37KU／L为阳性）诊断胰腺癌的敏感性为80．4％（45／56）,特异性为73．3％（66／90）。粪便K—Fas对胰腺癌诊断的敏感性为87．5％（49／56）,特异性为50．0％（45／90）。粪便p53对胰腺癌诊断的敏感性为82．1％（46／56）,特异性为70．0％（63／90）。结论：早期胰腺癌组血清CA19—9水平有81．8％的病例升高,粪便K—ras以及p53基因突变率分别为81．8％、77．3％,血清CA19—9水平对早期胰腺癌有较高的诊断价值,联合粪便K—ras以及p53基因突变的检测,可以显著提高早期胰腺癌的诊断效率。     

检测胰液和粪便中K-ras和p53基因突变对胰腺癌早期诊断的价值

目的 通过检测胰液、粪便癌基因K－ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法 1994年至2000年5月住院和门诊患者共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应－限制片段长度多态性（PCR－RFLP）方法检测胰液、粪便K－ras突变,PCR－SSCP方法检测p53突变。结果 胰腺癌患者胰液K－ras突变率为87．8％（36／41）,胰腺良性病变为23．5％（4／17）。粪便K－ras扩增成功率为90．0％（235／261）。胰腺癌患者粪便K－ras突变率为88．0％（66／75）,胰腺良性病变为51．1％（24／47）,正常人粪便K－ras突变率为19．6％（9／46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47．4％（18／38）,胰腺良性疾病为12．5％（2／16）。胰腺癌粪便p53突变率为37．1％（23／62）,慢性胰腺炎为19．1％（4／21）。结论 胰腺癌患者胰液K－ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K－ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19－9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

家族性腺瘤性息肉病肠粘膜、腺瘤及癌组织的基因蛋白检测与意义

研究家族性腺癌性息肉病（FAP）癌变过程中P21－H－ras、EGFR和P53的变化与意义。方法：用ABC免疫组化方法检测并比较以上三种指标在41例FAP患者的正常肠粘膜、腺瘤和癌组织标本中表达情况。结果：P21－H－ras、EGFR及P53在正常肠粘膜中阳性表达率分别为0、4．7％与0，在腺癌中为29．3％、35．4％与20．8％，癌组织中为47．4％、60．6％与52．6％，癌与腺癌的阳性率都显著高于正常肠粘膜（P＜0．05）；P21－H－ras、EGFR在癌组织中的阳性率高于腺瘤，但差别不显著（P＞0．05），P53在癌的阳性率显著高于腺癌（P＜0．05）。癌组织有2个以上指标阳性者占55．6％，3个都阳性者占27．3％；腺瘤中分别为13．2％与4．4％，差别显著（P＜0．05）。结论：提示P21－H－ras、EGFR、P53基因都参与FAP癌变，P21－H－ras基因、EGFR可能作用于早期，P53基因则作用于晚期。检测P21－H－ras、EGFR、P53对早期诊断FAP癌变有一定意义。     

结直肠癌K-ras基因状态及P21 ras蛋白表达的意义

目的 探讨结直肠癌K-ras基因状态和P21 ras蛋白表达及其与临床病理特征的关系.方法 分别应用免疫组化Envision二步法检测160例结直肠癌组织芯片中P21 ras蛋白表达及PCR扩增、DNA直接测序法检测癌组织中K-ras基因12、13和61密码子的突变状态.结果 P21 ras蛋白阳性表达率为48.1％ (77/160),淋巴结转移阳性组P21 ras蛋白阳性表达率(61.9％)显著高于无淋巴结转移组(39.2％),差异有统计学意义(P＜0.05).K-ras基因突变56例,突变率为35％,突变位点均位于12、13密码子,61密码子未发现突变.突变类型包括:GGT→GTT(17例)、GGT→GAT(12例)、GGT→AGT(15例)、GGT→TGT(8例)、GGC→GAC(4例).淋巴结转移阳性组和Dukes'分期为C+D期的K-ras基因突变率分别为47.6％和39.5％,明显高于无淋巴结转移组(26.8％)和Dukes'分期为A+B期组(20.5％),差异有统计学意义(P＜0.05).其中K-ras基因突变型组P21ras蛋白阳性表达率(91.1％)明显高于K-ras基因野生型组(25.0％),差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示,P21 ras蛋白表达与K-ras基因12密码子突变呈正相关(r=0.63,P＜0.05).结论 K-ras基因突变和P21 ras蛋白的过表达可能与结直肠癌淋巴结转移相关,P21 ras蛋白表达与K-ras基因12密码子突变具有一定相关性;K-ras基因突变与高的肿瘤分期有关.检测K-ras基因突变对评价结直肠癌患者临床病理特征、个体化治疗及预后有指导意义.     

p53基因突变与贲门癌的关系及其临床病理意义

目的 研究p53基因突变在贲门癌中的作用及其临床病理意义。方法 银染聚合酶链反应－单链构像多态性分析法（PCR－SSCP）检测贲门癌新鲜冰冻组织中p53基因5－8外显子点突变情况。结果 PCR－SSCP检测p53基因5－8外显子点突变率为52．6％（20／38）,以第8外显子出现突变的频率最高。其中有淋巴结转移者的p53基因突变率（70．6％）较无淋巴结转移者的突变率（38．1％）高（P＜0．05）,除此以外,p53基因突变率与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度及组织类型等均无明显相关性（P＞0．05）。结论 p53基因突变是贲门癌常见的分子事件,并可能是导致贲门癌野生型p53功能丧失的重要遗传改变,p53基因突变与贲门癌淋巴结转移之间有相关性,提示检测p53基因突变对估计该肿瘤的预后可能有所帮助。     

应用ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测

目的探讨ADx—ARMS法对大肠癌组织中K—ras基因突变的检测情况。方法选择首都医科大学附属北京世纪坛医院2012年4～8月的大肠癌石蜡标本40例。应用ADx—ARMS法检测大肠癌石蜡标本中的K—ras基因7个热点突变,分析与年龄、性别、组织学分型以及病理分化程度的关系。结果40例大肠癌样本中共发现K—ras基因突变14例,突变率约为35．0％。K—ras基因突变与年龄及组织学分型无关（P〉0．05）,与患者性别（P〈0．05）及腺癌分化程度（P〈0．01）有关。结论ADx—ARMS法检测大肠癌组织中K—ras基因突变效果满意,值得临床应用。     

散发性大肠癌K—ras基因点突变研究及其临床病理意义

目的观察散性大肠癌K—ras基因12、13密码子点突变情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法对2005～2009年问浙江省肿瘤医院确诊的140例大肠痛进行回顾性分析,并提取石蜡标本中癌组织DNA,经PCR扩增后应用焦磷酸测序技术检测K—ras基因第12、13密码子点突变情况。结果K—ras基因突变率397％（55／140）,12密码子突变率78．2％（43／55）,13密码子突变率21．8％（12／55）。共发现7种突变类型,包括12密码子（GGT→AT、GGT→AGT、GGT→TGT、GGT-→GTT、GGT→CGT、GGT→GCT）和13密码子（GGC→GAC）,以12密码子（CGT→GAT）最常见,占突变总数41．8％（23／55）。K—ras基因突变与性别、年龄、大体类型、瘤体、原发部位、病理亚型、组织学分级、浸润深度、转移、Duke’S分期、脉管侵犯均无相关性（P〉0．05）;第12与13密码子突变在原发部位、淋巴结转移上差异有统计学意义（P〈0．05）。结论散发性大肠癌中K—ras基因突变率为39．7％,12密码子（GGT→GAT）突变是最常见类型。特定位点的突变与一些临床病理参数密切相关,其中12密码子突变在结肠癌中的发生率高,并易出现淋巴结转移。通过K—ras基因检测有助于指导临床开展大肠癌个体化治疗。     

外周血p53基因SNP检测与大肠癌早期诊断的关系

目的分析大肠癌发生过程中p53基因突变的作用,评估外周血p53基因突变分析作为大肠癌高危对象筛查指标的实际应用价值。方法用LDR-PCR技术对100例大肠癌家系成员和100例健康人（对照组）的外周血p53基因第5-8外显子进行单核苷酸多态性（SNP）检测。结果大肠癌家系成员和对照组的外周血p53基因的突变率为分别为24％和0,差异有显著性（P〈0．05）。结论p53基因突变在大肠癌的发生过程中起重要作用,外周血p53基因SNP突变分析可望成为大肠癌高危对象的早期诊断手段。     

Ras和p16基因在肝癌组织中的表达与临床意义

目的：观察基因ras和p16在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌术后复发及预后中的作用。方法：应用免疫组化S－P法，检测53例手术切除肝癌组织和12例正常肝组织的ras和p16表达及与肝癌临床病理指标、术后复发及预后的关系。结果：（1）ras在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为66．0％和34．0％，ras表达与肿瘤大小、有无肝内转移密切相关（P均＜0．05）。ras阳性、阴性表达病例3年复发率分别为68．8％、38．9％，3年生存率分别为37．1％、66．7％（P＜0．05）。（2）p16在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率各为47．2％、100．0％，p16表达与有无肝内转移、组织分化密切相关（P均＜0．05）。p16阳性、阴性表达病例3年复发率分别为48．0％、67．9％，其3年生存率分别为64．0％、32．1％（P均＜0．05）。（3）ras和p16在肝癌中的表达密切相关（P＜0．01），p16阳性ras阴性与p16阴性ras阳性表达病 列3年复发率分别为35．7％、79．2％，3年生存率分别为71．4％、29．2％，差异有极显著性（P＜0．01）。结论：联合检测p16和ras的表达可作为判断肝癌术后复发及预后的有效指标，多基因分析比单基因分析更有价值。     

联合检测胃粘膜组织P53、P16、K—ras对胃癌的诊断价值

目的 :探讨胃癌组织P53、P1 6 、K ras基因的协同突变情况 ,揭示P53、P1 6 、K ras基因突变与胃癌发生的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)与单链构象多态性分析法 (SSCP)对 6 0例经病理切片诊断为胃癌组织和 2 0例正常胃粘膜组织进行P53、P1 6 、K ras基因突变分析。结果 :6 0例胃癌粘膜组织中 ,P53基因发生突变 5 3例 ,占 88 3% ;P1 6 基因发生突变 49例 ,占 81 7% ;K ras基因发生突变 5 6例 ,占 93 3% ;男女间突变率比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而 2 0例正常胃粘膜组织无P53、P1 6 、K ras基因突变发生。结论 :P53、P1 6 、K ras基因突变是胃癌中常见的分子事件 ,用PCR—SSCP法联合检测胃粘膜组织P53、P1 6 、K ras基因的突变情况将有助于诊断胃癌 ,为临床提供更为可靠的检验资料     

肺癌患者纤维支气管镜活检标本K-ras基因突变的检测及其临床意义

目的: 探讨检测纤维支气管镜活检标本K-ras基因突变对肺癌诊断的临床意义。方法： 采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-single strand conformational polymorphism, PCR-SSCP） 银染技术,检测52例肺癌患者和9例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本中K-ras基因第12,13和61位密码子的突变率,并对K-ras基因突变与临床病理参数进行相关分析。结果： 52例肺癌患者活检标本中,12例检测出K-ras基因点突变,突变率为23.1%,9例肺良性疾病患者活检标本中未检测出K-ras基因点突变。K-ras基因突变与肺癌病理组织类型相关,在腺癌中达43.8%,但与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤细胞分化程度及临床分期无关。 结论：检测纤支镜活检标本K ras基因突变有可能作为肺癌早期诊断的一个参考指标。肺癌; 纤维支气管镜; K-ras基因; 突变     

Detecting K- ras and p53 gene mutation from stool and pancreatic juice for diagnosis of early pancreatic cancer

目的：通过检测胰液、粪便癌基因K-ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法：1994年至2000年5月住院和门诊患共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应-限制片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测胰液、粪便K-ras突变,PCR-SSCP方法检测p53突变。结果：胰腺癌患胰液K-ras突变率为87.8％（36/41）,胰腺良性病变为23.5％（4/17）。粪便K-ras扩增成功率为90.0％（235/261）。胰腺癌患粪便K-ras突变率为88.0％（66/75）,胰腺良性病变为51.1％（24/47）,正常人粪便K-ras突变率为19.6％（9/46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47.4％（18/38）,胰腺良性疾病为12.5％（2/16）。胰腺癌粪便p53突变率为37.1％（23/62）,慢性胰腺炎为19.1％（4/21）。结论：胰腺癌患胰液K-ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K-ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19-9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

PCR-SSCP法检测生殖细胞肿瘤P~(53)基因突变的初步研究

为探讨P53基因突变与恶性生殖细胞肿瘤发生、发展的关系，采用PCR－SSCP法对无性细胞瘤和内肤窦病的石腊包埋组织P53基因5～8外显子突变情况进行了检测，发现无性细胞瘤和内胚窦瘤组织中P53基因5～8外显子总突变率为52．3％；在不同临床分期中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期突变分别为0、3、6、2例，各期间差异无显著性（P＞0．05）。研究初步结果是P53基因5～8外显子突变与恶性生殖细胞肿瘤的发生、发展有关，与肿瘤临床分期无关。     

非霍奇金淋巴瘤中p16基因突变情况研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin’s Lymphoma，NHL）中p16基因外显子1、2突变情况。方法采用PCR-SSCP法对40例NHL进行p16基因第1、2外显子的点突变研究。结果p16基因第1、2外显子总突变率为32．5％（13／40）。其中第2外显子的突变率最高为25％（10／40），其次为第1外显子的突变率为7．5％（3／40）；其中惰性、侵袭性组、高侵袭组突变率分别为25．0％（1／4）、31．25％（10／32）和50．0％（2／4）（P〉0．05）；T/NK细胞和B细胞突变率分别为38．46％（5／13）和29．63％（8／27）（P〉0．05）。结论NHL中存在较高p16基因突变率，提示其突变可能参与了NHL的发生发展。侵袭组、高侵袭组p16基因突变倾向于高发。     

脱落细胞癌基因检测在肺癌诊断中的意义

目的 用分子生物学检测手段寻求敏感的肺癌诊断新方法。方法 应用多聚合酶链反应（PCR）及聚合酶链式反应－单链构型多态（PCR－SSCP）银染技术，检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患肺泡灌洗液和（或）胸水细胞的p53、p16及K-ras基因的突变情况，将检测结果与组织学、脱落细胞形态学诊断结果进行对比分析。结果 肺癌患肺泡灌洗液和（或）胸水脱落细胞形态学检测敏感性为57％，阴性预计值（NPV）为60％；p53阳性表达的敏感性为68％，NPV为61％；p16阳性表达的敏感性为46％；NPV为52％，K-ras阳性表达的敏感性为36％，NPV为83％；p53,p16及K-ras阳性表达的敏感性为82％，NPV为74％；p53，p16及K－ras分子生物学和脱落细胞形态学联合检测：敏感性提高至93％（P＜0．05），NPV为87％（P＜0．05）。24例脱落细胞形态学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例（67％）。在56例肺癌中，其中有22例同时收取肺泡灌洗液细胞的胸水细胞，结果为细胞病理学检测敏感性由57％提高到68％，细胞病理学检测加分子生物学检测敏感性由93％提高到95％。结论 脱落细胞癌基因的分子生物学检测可增加脱落细胞形态学检测的敏感性，提高脱落细胞形态学的诊断价值。     

乳腺癌变过程中的P53基因点突变

目的：探讨乳腺癌变、发展与P53基因点突变的关系。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）方法对87例癌前状态、癌症初期、癌症后期及正常乳腺组织的P53基因5－8外显子点突变进行检测。结果：3例癌前状态、8例癌症初期和14例癌症后期者发生点突变（突变率分别为15．8％、34．8％和63．6％）,三者（亦即乳腺癌变、发展过程）P53基因突变率（统计学结果）呈明显渐进性。结论：P53基因突变是乳腺癌的早期、多发事件,是引起乳腺癌变、发展的因素和标志之一。     

乳腺癌血浆循环核酸p53基因突变的意义

目的 探讨血浆循环核酸p53基因突变检测的可行性，研究乳腺癌患者循环核酸p53基因突变对于乳腺癌发生、发展和预后估计的临床意义。方法 应用聚合酶链反应（PCR）扩增p53基因外显子5－8，并用变性高效液相色谱技术（DHPLC）分析产物突变情况，再与各生物学参数进行了相关研究。结果 33例患者中14例（42．4％）p53基因突变，且突变率与组织分化级别、ER阴性显著相关（P＜0．05），与临床分期和淋巴结及远处转移情况无关。结论 DHPLC可作为一种快速简便的基因突变检测手段，p53基因突变在乳腺癌循环核酸中有较高的检出率并预示肿瘤的恶性程度，血浆基因突变有望成为简便的预后参考指标。