多重聚合酶链反应快速鉴别葡萄球菌及mecA基因检测

目的：建立快速鉴定葡萄球菌及检测mecA基因的多重聚合酶链反应（PCR）诊断方法。方法：以葡萄球菌16SrRNA、金黄色葡萄球菌的nuc基因以及耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因合成3对引物，采用多重PCR扩增法，快速鉴定葡萄球菌，同时判断MRS菌株。结果：107株葡萄球菌的16SrRNA基因扩增片段全部为阳性．与常规鉴定结果符合率为100％；nuc基因阳性48株。阴性59株，与金黄色葡萄球菌核酸酶试验一致；以PBP2a乳胶凝集试验结果为金标准，苯唑西林（含2％NaClMHA）及头孢西丁纸片扩散法的敏感性为98．7％和100％，特异性分别为75．0％和82．1％：PCR扩增法的敏感性和特异性均为100％。结论：多重PCR法能快速准确地从临床分离菌株中鉴别葡萄球菌，并可同步对mecA基因进行准确检测。     

耐甲氧西林金葡菌的头孢西丁检测法与耐药性分析

目的评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的效果．了解MRSA的耐药状况。方法用头孢西丁及苯唑西林纸片扩散法、mecA基因聚合酶链反应（PCR）检测MRSA．并以mecA基因PCR法为参考方法与头孢西丁及苯唑西林纸片扩散法检测MRSA进行比较分析。按CLSI（原NCCLS）规定的标准测定MRSA对青霉素等10种抗生素的耐药率（KB法）。结果95株金葡菌（SA）中mecA基因阳性株42株。头孢西丁纸片法筛选出40株MRSA，其中39株mecA基因阳性，方法特异性为97．5％，灵敏度92．9％；苯唑西林纸片法筛选出44株MRSA，其中36株mecA基因阳性．方法特异性为81．8％．灵敏度85．7％。MRSA对青霉素、苯唑西林100％耐药，对万古霉素全部敏感．对红霉素、头孢唑林、克林霉素、氨苄西林／舒巴坦、头孢呋辛、左氧氟沙星、奈替米星呈不同程度耐药。结论头孢西丁纸片扩散法检测MRSA特异性和灵敏度优于苯唑西林纸片扩散法。MRSA具有多重耐药性．须加强其对抗生素的耐药性监测。     

耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的检测

为检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因,准确和快速鉴定临床分离的MRS,将临床分离的161株葡萄球菌应用PCR扩增法鉴定MRS的mecA基因,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果表明,161株葡萄球菌用苯唑西林纸片扩散法和mecA基因法检测MRS,4株菌有差异,mecA基因法鉴定阴性耐苯唑西林纸片扩散法鉴定为耐药株;3株纸片扩散为临界耐药,mecA基因法鉴定阳性,两种方法的符合率是97．52％。结论：mecA基因检测技术可以准确、快速判定MRS,特别是在鉴定纸片扩散法临界耐药株具有优势。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的苯唑西林、头孢西丁最低抑菌浓度与青霉素结合蛋白2a的相关性

为分析金黄色葡萄球菌(S·aureus,SA)的青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的产生与头孢西丁、苯唑西林最低抑菌浓度(MIC)相关性,收集102株临床分离株,采用MIC法分别检测SA对头孢西丁、苯唑西林的耐药性,并与耐甲氧西林SA(MRSA)胶乳凝集法对比分析。结果表明,头孢西丁MIC≥32μg/ml71例(69·6%),其中乳胶凝集试验阳性70例(98·6%);苯唑西林MIC≥4μg/ml80例(78·4%),乳胶凝集试验阳性70例(87·5%)。头孢西丁阳性的PBP2a检出率明显高于苯唑西林(98·6%比87·5%,P<0·05)。结论:头孢西丁MIC≥32μg/ml或产生PBP2a的SA均能正确地表达为MRSA;苯唑西林MIC≥4μg/ml解释标准对SA评价MRSA正确性较低。     

苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法现行耐药折点判断凝固酶阴性葡萄球菌甲氧西林耐药性的评价

目的 评价苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法现行耐药折点在判断凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）甲氧西林耐药性中的准确性。方法 苯唑西林（1μg）和头孢西丁（30μg）纸片扩散法测定149株临床分离的CNS对甲氧西林的耐药性，量取两种纸片的抑菌环直径。对苯唑西林组分别以≤14mm、≤15mm、≤16mm、≤17mm（CLSI／NCCLS2004标准）为耐药折点，对头孢西丁组分别以≤21mm、22mm、≤23mm、≤24mm（CLSI／NCCLS2004年标准）为耐药折点，与mecA基因检测结果比较，评价两种纸片扩散法在各折点对耐甲氧西林CNS判断的敏感性和特异性。结果 与mecA基因检测结果比较，苯唑西林纸片扩散法在不同的耐药折点判断耐甲氧西林表皮葡萄球菌的敏感性分别为52．3％、75．0％、90．9％、100％，特异性都为100％，判断耐甲氧西林非表皮葡萄球菌CNS的敏感性分别为66．7％、79．0％、90．1％、97．5％，特异性分别为100％、100％、100％、94．4％；头孢西丁纸片扩散法在不同耐药折点判断耐甲氧西林表皮葡萄球菌的敏感性分别为45．5％、70．1％、90．9％、100％，特异性都为100％，判断耐甲氧西林非表皮葡萄球菌CNS的敏感性分别为83．6％、91．8％、97．3％、100％，特异性都为100％。结论 苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林CNS的现行耐药折点标准在判断表皮葡萄球菌和非表皮葡萄球菌CNS的甲氧西林耐药性中都有很高的敏感性和特异性，适用于CNS对甲氧西林耐药性的判断。对于非表皮葡萄球菌CNS，头孢西丁纸片扩散法较苯唑西林纸片扩散法结果更可靠。     

41株金黄色葡萄球菌耐药性分析及PVL基因检测

目的了解临床分离金葡菌对常用抗生素的耐药性和杀白细胞毒素(PVL)基因携带情况。方法采用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),K-B法检测临床分离的41株金葡菌对常用抗生素的敏感性,PCR法检测mecA基因和PVL基因携带情况。结果 41株金葡菌中MRSA占51.2%,MRSA对克林霉素、红霉素、氨基糖苷类和喹诺酮类耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),MRSA和MSSA对复方新诺明敏感率分别为90.5%和95%,未发现对万古霉素、替考拉林和利奈唑胺耐药株。21株MRSA mecA基因均阳性,41株金葡菌中共检出2株携带PVL基因,MRSA与MSSA各占1株,均分离自骨科病房。结论该院临床分离MRSA耐药率高,应规范临床用药,加强MRSA耐药性监测,加强PVL基因的检测,防止此类菌株的播散。     

MRSA表面标志物PBP2a的检出与苯唑西林MIC的相关性分析

目的研究MRSA表面标志物PBP2a与苯唑西林MIC的相关性。方法收集62株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过乳胶凝集试验和全自动细菌分析仪分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和苯唑西林MIC值。结果62株金葡中32株PBP2a检测阳性,30株PBP2a检测阴性。苯唑西林MIC≥4μg/ml31株,苯唑西林MIC≤2μg/ml31株。在苯唑西林MIC≥4μg/ml的31株MRSA中30株PBP2a检测均为阳性。结论金黄色葡萄球菌耐苯唑西林的耐药水平与PBA2a的检出有较好的相关性。     

3种鉴定耐甲氧西林葡萄球菌方法的比较

目的比较琼脂稀释、纸片及基因检测法鉴定甲氧西林耐药葡萄球菌的方法。方法按2004年美国临床实验室标准化委员会推荐的头孢西丁纸片扩散(K-B)法、琼脂二倍稀释(MIC)法,从中筛选出表型耐甲氧西林葡萄球菌(MRS),再将受试的葡萄球菌进行多重聚合酶链反应的体外扩增检测mecA基因。结果从临床分离的180株葡萄球菌中,mecA基因阳性葡萄球菌98株,其中金黄色葡萄球菌(SA)mecA基因阳性26株,阳性率为36.1%;凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)mecA基因阳性72株,阳性率为66.7%,mecA阳性的MRS只对万古霉素、替考拉宁敏感。结论mecA基因的PCR检测能够尽早准确诊断,便于及时治疗MRS造成的感染。     

79株临床分离MRSA的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的:了解天津某医院临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药状况及葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型.方法:应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测mecA基因,多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型.应用微量肉汤法及K-B纸片扩散法测试MRSA对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、环丙沙星、莫西沙星、头孢唑林、氯霉素、林可霉素、庆大霉素、头孢曲松、红霉素、利福平、盐酸四环素、万古霉素、替考拉宁、复方磺胺甲恶唑、利奈唑胺、替加环素18种抗生素药物敏感性.大环内酯、林可霉素、链阳霉素B类抗生素诱导耐药的检测采用克林霉素-红霉素双纸片诱导试验(D试验).结果:SCCmec分型显示79株受试MRSA均为SCCmecⅢ型菌株.79株MRSA临床株对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,对氯霉素、复方磺胺甲嗯唑耐药率相对较低,分别为3.80%、10.13%,对糖肽类抗生素和利奈唑胺、替加环素均敏感.7株红霉素耐药、林可霉素敏感MRSA D试验阳性.结论:天津某医院临床分离MRSA SCCmec基因型均为Ⅲ型,且具有多重耐药的特征,红霉素耐药、林可霉素敏感株存在诱导耐药现象.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验室诊断方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是携带mecA基因的金黄色葡萄球菌或苯唑西林最小抑菌浓度(MIC)≥4 mg/L的金黄色葡萄球菌。大部分MRSA菌株携带mecA基因,但少数MRSA不携带mecA基因,存在其他的耐药机制,如青     

147株金黄色葡萄球菌临床分离及耐药分析

目的监测本地区儿童感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)情况,掌握儿童感染金黄色葡萄球菌(SAU)耐药情况,指导临床合理应用抗生素,为提高治疗效果提供依据。方法对各类感染标本分离的147株金黄色葡萄球菌应用VITEK-32微生物全自动分析系统进行鉴定,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验;采用头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA菌株,同时进行D-试验研究红霉素诱导克林霉素耐药情况。使用WHONET5.4软件对原始数据进行分析和统计学处理。结果小儿金黄色葡萄球菌感染标本主要来自于痰液,共分离到金黄色葡萄球菌121株,占阳性菌株的82.3%(121/147),其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)42株。头孢西丁纸片扩散法结果显示147株金黄色葡萄球菌检出MRSA 47株(31.9%)。药物敏感试验结果显示147株金黄色葡萄球菌对青霉素全部耐药,而对万古霉素全部敏感,对苯唑西林、头孢唑啉、红霉素、克林霉素敏感率分别为64.6%、98.0%、44.2%、52.4%。药敏结果显示SAU存在多重耐药情况,有10株对红霉素和克林霉素同时耐药;D-试验结果显示诱导试验阳性率为54.5%。结论本文多数分离出金黄色葡萄球菌(SAU)菌株标本取自于呼吸道感染的痰液。通过药敏分析发现SAU对青霉素耐药率为100%,提示该种药物已不适合应用本地区SAU感染患儿的治疗。147株金黄色葡萄球菌中存在多重耐药情况并检出MRSA 47株(31.9%),提示本地区儿童感染SAU,特别是MRSA耐药形势不容乐观,仍需加强对MRSA的日常监测工作。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价

目的探讨研究头孢西丁(FOX K-B)法对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的检测价值。方法选取132株葡萄球菌,分别通过苯唑西林(OXA)琼脂平板筛选试验法、FOX K-B法以及OXA K-B法对MRS加以检测,将OXA琼脂平板筛选法的检测结果 作为标准,对比分析FOX与OXA K-B法的敏感性与特异性。结果 本组132株葡萄球菌中,74株金黄色葡萄球菌通过OXA琼脂平板筛选检测确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为30株;58株葡萄球菌属于凝固酶阴性,其中48株检测确定为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)。参考以上标准,FOX K-B法对MRSA检测的特异性、敏感性均达到100%,但OXA K-B法检测的特异性为90.91%(40/44),敏感性为93.33%(28/30)。FOX K-B法对MRCNS检测的特异性、敏感性均达到100%,但OXA K-B法检测的特异性为40.0%(4/10),敏感性为95.83%(46/48)。结论 FOX K-B发检测MRS的敏感性与特异性极高,具有极高的应用价值。     

2007-2009年金黄色葡萄球菌对万古霉素MIC值变化的研究

目的 逐年分析金黄色葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺的MIC值变化,评估是否存在万古霉素MIC漂移.方法 收集我院2007-2009年临床分离的金黄色葡萄球菌菌株,头孢西丁纸片法确认MRSA,琼脂稀释法测定MRSA与MSSA菌株对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺及头孢西丁的最低抑菌浓度(MIC),计算MIC50,MIC90,MIC几何均值,敏感率及耐药率.结果 共收集金黄色葡萄球菌菌株184株,这3年的MRSA检出率分别为38.8%、46.7%和53.3%,呈逐年增高的趋势(P<0.005).万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺对所有菌株均敏感.MRSA对万古霉素MIC几何均值为1.052、1.06和1.069μg/mL,呈逐年上升趋势(P<0.001),MIC≥1μg/mL菌株比例为68.4%、82.9%和91.6%,呈逐年增高的趋势(P<0.005).利奈唑胺对MRSA菌株几何均值为1.037、1.02和1.266μg/mL,无渐进性上升趋势(P>0.05).替考拉宁对MRSA菌株几何均值为0.747、0.714和0.971μg/mL,无渐进性上升趋势(P>0.05).MRSA对万古霉素的MIC几何均值高于MSSA组,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 我院2007-2009年临床分离株MRSA检出率逐年增高,MRSA对万古霉素的MIC几何均值高于MSSA菌株,MRSA的MIC几何均值渐年上升,MIC≥1μg/mL菌株比例逐年增高,存在万古霉素MIC漂移趋势.     

2006—2011年60株血感染的金黄色葡萄球菌毒素及耐药基因分析

【摘要】目的 了解2006-2011年临床分离的60株血感染金黄色葡萄球菌的耐药情况及毒素基因和耐药基因的流行情况。方法 VITEK 2-compact全自动细菌鉴定仪及配套鉴定卡、药敏卡对细菌进行鉴定及药敏试验;头孢西丁纸片扩散法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）;应用聚合酶链反应（PCR）检测mecA、耐消毒剂基因（qacA）、杀白细胞素基因(pvl)、肠毒素基因（sea、seb、sec1、sed、see）及中毒休克综合征毒素-1基因( tst)。结果 60株金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高（91.7%）,其次为红霉素（65.0%）、克林霉素（65.0%）、庆大霉素（40.0%）。未发现万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药菌株。其中携带耐药基因mecA 13株（21.7%）、qacA 3株（5.0%）、检出毒素基因pvl 4株（6.7%）、肠毒素基因sea 20株（33.3%）、seb 3株（5.0%）、sec 9株（15.0%）及sed 7株（11.7%）,未检出see 及tst。结论 血感染的金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、克林霉素、庆大霉素耐药率高,同时携带多种毒素及耐药基因,临床应加强毒素及耐药基因检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药研究

目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的多重耐药情况。方法收集经头孢西丁纸片扩散试验和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集实验分离出的51株MRSA,用β-内酰胺酶实验、D试验、Kirby-Bauer法检测MRSA产β-内酰胺酶以及对红霉素、克林霉素、4种氟喹诺酮类药物（氧氟沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、加替沙星）和万古霉素耐药性。结果51株MRSA头孢西丁纸片抑菌圈直径介于6～20mm,产β-内酰胺酶率为84.3%,对红霉素、克林霉素、氟喹诺酮类、万古霉素耐药率分别为98.0%、86.3%、88.2%、0,红霉素诱导克林霉素耐药率为50.0%（3/6）。结论MRSA呈多重耐药,轻度感染可根据药敏结果选万古霉素与氟喹诺酮类？生素联合用药。     

金黄色葡萄球菌110株临床分布及耐药性分析

目的 了解临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)菌株的临床分布情况及其对常用抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供依据.方法 对临床分离的110株SA菌株采用纸片扩散法(K-B法)检测12种抗菌药物的敏感性,并对药敏结果进行统计分析.结果 110株SA中,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)59株,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)51株,MRSA的分离率为46.4％,MRSA对常用抗菌药物的耐药率明显高于MSSA(P＜0.05),未发现耐万古霉素的SA.结论 SA对多种抗菌药物的敏感率均较低,尤其是MRSA耐药株更为严重,临床应根据药敏结果合理选用抗菌药物.     

黄芩苷/黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗药性的逆转作用研究

目的:研究黄芩苷/黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗药性的逆转作用,并初步探索其逆转机制。方法:以平皿法测定黄芩苷/黄芩素与苯唑西林对MRSA的协同抗菌效力;以分光光度法测定黄芩苷/黄芩素协同苯唑西林对MRSA生长密度的抑制作用;以青霉素结合蛋白(PBP2a)胶乳凝集试剂盒检测黄芩苷/黄芩素对PBP2a生成的抑制效力。结果:黄芩苷/黄芩素联合苯唑西林对临床分离的MRSA有显著的协同抗菌作用,16μg·mL-1的黄芩素即可显著逆转MRSA对苯唑西林的高度耐药;黄芩苷/黄芩素对MRSA产生PBP2a有显著抑制作用。结论:黄芩苷/黄芩素可通过抑制MRSA产生PBP2a来逆转其对苯唑西林的高度耐药,这一现象从理论上为临床治疗MRSA感染提供了新的方法和思路。