靶向MMP-2基因的RNA干扰质粒表达载体的构建

目的 构建基质金属蛋白酶2(MMP-2)特异的RNA干扰(RNAi)质粒载体,用于探讨抑制MMP-2基因表达在抗胰腺癌侵袭转移中的意义.方法 根据GenBank中提供的MMP-2基因序列,设计能存体内转录小发央结构RNA(shRNA)的cDNA序列,合成该序列并将其连接到pGCsi-U6/Neo/GFP质粒,构建受控于人U6启动子的质粒表达载体.结果 PCR鉴定和测序鉴定显示构建的重组质粒pGCsi-MMP-2含有目的 基因序列.结论 靶向MMP-2基因的RNAi质粒表达载体被成功构建.     

信号转导和转录激活因子基因表达的抑制及其对HepG_2细胞增殖的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默信号转导和转录激活因子(STAT3)基因对肝癌HepG2细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(SiRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人肝癌细胞HepG2细胞。通过半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测STAT3基因mRNA和蛋白水平的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染后细胞增殖的变化。结果成功构建了pGeneSil 1-shRNA-STAT3重组质粒,并转染HepG2肝癌细胞;半定量RT-PCR、Western blot结果显示,重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在mRNA及蛋白水平上显著低于对照组;MTT实验结果显示,重组质粒转染组细胞的增殖明显受到抑制。结论pGeneSil 1.0-shRNA-STAT3转染HepG2肝癌细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制肝癌细胞的生长及增殖。     

siRNA介导的hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞凋亡的影响

目的　应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异地抑制端粒保护蛋白hPOT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞凋亡的影响。方法利用先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsRNA)的3种重组siRNA表达质粒,由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT PCR和电泳迁移率变化分析法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过流式细胞术、Hoechst荧光染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果　不同hPOT1特异性序列的3种的重组质粒转染HeLa细胞4 8h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平降低,细胞凋亡水平明显增加。结论　siRNA表达载体介导的RNAi能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达下调导致HeLa细胞凋亡     

STK15基因RNA干扰真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞侵袭的影响

目的 构建STK15基因特异的RNA干扰（RNAi）真核表达质粒,将其转染人结肠癌细胞SW480后,观察对STK15基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞侵袭能力的影响.方法 设计并合成能表达小发夹结构RNA （shRNA）的DNA序列,退火后与载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建重组表达载体pGPU6/GFP/NeoSTK15 shRNA,转化DH5α菌株后挑选阳性克隆,提取质粒进行序列测定.脂质体介导重组质粒转染人结肠癌SW480细胞,于转染后24h和48 h通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法分别在mRNA和蛋白水平检测STK15基因的表达,并通过细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭能力.结果 测序证实插入pGPU6/GFP/Neo载体的DNA序列、方向和位点均正确.与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15 shRNA质粒转染细胞24h和48 h后,STK15基因的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,且呈现时间依赖性,STK15 mRNA水平分别下调80％和98％,蛋白水平分别下调40％和80％.与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15shRNA质粒转染细胞的侵袭能力分别下降约67％和89％.结论 成功构建了针对STK15基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制STK15基因的表达和细胞的侵袭能力,为进一步研究STK15基因功能以及探讨结肠癌治疗的新途径奠定了基础.     

S100A11过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响

目的探讨钙囊素(S100A11)过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响。方法构建S100A11过表达载体质粒pcDNA3.1-S100A11,并转染人胰腺癌细胞PANC-1细胞。Western blot检测转染效果;CCK-8检测转染后PANC-1细胞增殖活力;流式细胞术检测PANC-1细胞的凋亡和细胞周期的变化。结果 S100A11蛋白表达量与pcDNA3.1-S100A11的转染量成正相关。过表达S100A11基因可明显提高PANC-1细胞增殖速度,降低凋亡细胞比例,并使PANC-1细胞S期细胞比例增加,G1期细胞减少(P<0.05)。结论S100A11过表达能调控PANC-1细胞周期,并促进PANC-1细胞的增殖。     

反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响

目的 应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响.方法 构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株.采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及 Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果 成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h最为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P＜0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M 期细胞数量分布减少.而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变.结论 成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因.     

过表达亮氨酸拉链假定肿瘤抑制基因 1对胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的 探究过表达亮氨酸拉链假定肿瘤抑制基因1(LZTS1)对胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响.方法 将PANC-1细胞按照随机数字表法分为四组,对照组(常规培养)、NC组(转染阴性对照)、pcDNA-LZTS1-1组(转染pcDNA 3.0 LZTS1-1质粒)、pcDNA-LZTS1-2组(转染pcDNA 3.0 LZTS1-2质粒).蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染效果;噻唑蓝(MTT)观察PANC-1细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭、迁移.结果 与对照组相比,pcDNA-LZTS1-1组和pcDNA-LZTS1-2组PANC-1细胞中LZTS1蛋白水平[(2.835±0.301),(4.125±0.385)比(1.000±0.085)]显著增加,其中pcDNA-LZTS1-2组增加显著;过表达LZTS1抑制PANC-1细胞增殖、侵袭[(56.369±6.432)个比(117.258±12.152)个]、迁移[(120.145±14.210)个比(233.258±25.148)个],诱导其凋亡[(23.252±2.152)％比(6.589±0.645)％].结论 过表达LZTS1显著抑制PANC-1细胞增殖、侵袭、迁移,促进其凋亡.     

腺病毒载体介导shRNA抑制生存素对PC-3细胞的影响

目的 运用RNA干扰(RNAi)技术抑制雄激素非依赖前列腺癌细胞株(PC-3)中生存素的表达,检测生存素抑制对PC-3细胞的影响.方法 构建负载生存素短发夹RNA(shRNA)且携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,体外转染PC-3细胞.MTT法监测细胞增殖活性,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR和Western blot分别对生存素mRNA及其蛋白表达进行测定.结果 负载生存素shRNA重组腺病毒构建成功;转染96h后,PC-3细胞增殖受到抑制,并可诱导出PC-3细胞凋亡,凋亡率达到(14.43±0.57)%,生存素mRNA及其蛋白的表达强度分别降低了(72.23±1.11)%和(71.75±2.64)%,与阴性对照组及空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 腺病毒载体介导的生存素shRNA可有效地抑制PC-3细胞中生存素的表达,RNAi结合腺病毒载体系统抑制生存素表达有望成为治疗雄激素非依赖前列腺癌的有效方式之一.     

短发夹RNA对前列腺癌细胞中PIM-1基因沉默效应的研究

目的:探讨脂质体介导的短发夹RNA(shRNA)对前列腺癌细胞中PIM-1基因表达的影响.方法:构建3种针对PIM-1 mRNA不同靶点的shRNA重组质粒表达载体,并转染前列腺癌PC-3细胞.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Westernblot)检测转染后细胞中PIM-1 mRNA及蛋白的表达情况.结果:转染48 h后,3种PIM-1基因靶向性shRNA表达质粒均可抑制PC-3细胞中PIM-1 mRNA和蛋白的表达,其中靶向PIM-1 mRNA第707-725位和1080-1098位序列的重组质粒干扰效果更显著.结论:本研究所构建的PIM-1 shRNA表达质粒可在体外高效特异地抑制前列腺癌细胞中PIM-1的表达,为下一步研究奠定了基础.     

RNA干扰ezrin基因真核生物表达载体的构建及鉴定

目的 构建用于RNA干扰(RNAi)的小发夹RNAshRNA表达载体并检测其对ezrin基因的沉默效果.方法 以ezrin为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,设计和构建重组体,根据GeneBank数据库提供的ezrin核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,设计2条小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,克隆到空载体pGenesil-1中,转化DH5a菌株,提取质粒,予以酶切和测序鉴定;重组质粒转染786-0肾癌细胞株,运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行筛选鉴定.结果 酶切及测序鉴定表明成功地构建重组质粒shRNA-ezrinl、shRNA-ezrin2;荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,肾癌细胞中shRNA-ezrinl、shRNA-ezrin2 mRNA相对表达量分别为(0.3376±0.0166)及(0.4661±0.0266),shRNA-ezrinl与shRNA-ezrin2相对表达量差异有统计学意义(P＜0.01),根据基相对表达量算出shRNA-ezrinl,shRNA-ezrin2 ezrin-mRNA的表达量抑制率分别为66.33％及53.29％.转染重组质粒后显著抑制786-0细胞中ezrin mRNA和蛋白表达,其中shRNA-ezrinl的抑制效率最高.结论 成功构建ezrin基因的shRNA表达载体,并筛选出抑制率较高的重组质粒载体shRNA-ezrinl,为进一步研究ezrin基因沉默对肾癌786-0细胞株生物学行为的影响奠定基础.     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.