CCK-8对TNF-α诱导大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响。方法采用ELISA观察TNF-α作用下CCK-8对RSC-364细胞MMP-3、-9、-1及TIMP-1分泌的影响,比较MMP-3、-9、-1和TIMP-1比值变化,用RT-PCR观察CCK-8对TNF-α作用下RSC-364细胞MMP-3、-9 mRNA表达的影响。结果静息和CCK-8单独孵育细胞后未检测到MMP-3和MMP-9,产生少量MMP-1和TIMP-1,表达MMP-3和MMP-9 mRNA甚微,CCK-8有抑制TNF-α诱导细胞MMP-3、-9、-1分泌和MMP-3、-9 mRNA表达的作用,并且降低TNF-α所致的MMPs/TIMP-1比值的上升。结论 CCK-8下调MMPs基因表达,减少MMPs分泌,使MMPs与TIMP-1比值下降,从而降低MMPs活性,表明CCK-8能调节滑膜细胞分泌功能,提示CCK-8在类风湿关节炎发病过程中可能具有调控作用。     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-2与TIMP-2表达的影响

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其组织抑制剂2（TIMP-2）表达的影响。方法单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型。用原位杂交法检测肾小球MMP-2及TIMP-2 mRNA表达，流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质TGFβ1，MMP-2，TIMP-2,IV型胶原及层粘连蛋白表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达降低而TIMP-2 mRNA及蛋白表达升高，TGFβ1，IV型胶原及层粘连蛋白表达亦增加，肾功能恶化；葛根素用药组较糖尿病组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达升高，而TGFβ1，TIMP-2，IV型胶原及层粘连蛋白表达减少，肾功能改善。结论葛根素对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-2及TIMP-2表达，从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白对单核巨噬细胞源泡沫细胞基质金属蛋白酶-9的调控作用

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核巨噬细胞源泡沫细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和活性的影响,以及此过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的调控作用。方法体外原代培养人单核细胞来源的巨噬细胞,传至2～6代用于实验。依不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用24h,以及ox-LDL40mg/L作用1、12、24h分组,另设LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸(PolyI)干预组。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定LOX-1和MMP-9mRNA表达,酶谱法分析MMP-9的活性。结果 ox-LDL作用后,LOX-1和MMP-9mRNA表达升高,MMP-9的分泌及活性升高(P<0.05),且诱导作用呈浓度-时间依赖性;多聚肌苷酸抑制后,MMP-9mRNA表达及活性明显下降(P<0.05)。结论 LOX-1作为ox-LDL的特异性受体,介导ox-LDL诱导的上调单核巨噬细胞LOX-1、MMP-9表达及活性的作用。     

ACE-siRNA对人脐静脉内皮细胞MMP-9/TIMP-1及ET-1/NO表达的影响

目的：观察血管紧张素转化酶-小分子干扰RNA( ACE-siRNA)对原代培养人脐静脉内皮细胞( HU-VECs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、一氧化氮(NO)、血管收缩因子内皮素-1(ET-1)表达的影响。方法培养原代HUVECs,脂质体转染ACE-siRNA入细胞,观察其对ACE mRNA和蛋白表达的影响。内皮细胞分为正常对照组,血管紧张素2刺激组( AngⅡ组)及AngⅡ刺激联合ACE-siRNA转染组( AngⅡ+siRNA组),采用半定量反转录聚合酶链反应( RT-PCR)法检测各组MMP-9及TIMP-1 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹( West-ern blot)法检测各组MMP-9及TIMP蛋白表达;硝酸还原酶法检测NO浓度,酶联免疫吸附试验检测ET-1浓度。结果ACE-siRNA转染后48 h有效抑制ACE mRNA和蛋白表达(P<0．05)。与正常对照组比较,AngⅡ组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度增加,NO浓度降低(P<0．05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+siRNA组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度下降,NO表达增加(P<0．05)。结论特异性ACE-siRNA可有效沉默ACE表达,增加NO释放,减少ET-1表达,下调MMP-9/TIMP-1比例。     

辛伐他汀对高糖致人腹膜间皮细胞Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1分泌与表达的影响

目的研究辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)在高糖刺激下主要细胞外基质Ⅰ型胶原,及其降解酶系基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)分泌与表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;待细胞同步后,经2.5%高糖和不同浓度的辛伐他汀干预48 h。半定量RT-PCR检测细胞内Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1 mRNA表达情况;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1的蛋白质水平。结果辛伐他汀显著下调高糖致HPMCsⅠ型胶原和TIMP-1表达,且在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系(P<0.01);同时,高剂量的辛伐他汀能显著增加高糖环境下MMP-1蛋白质含量(P<0.01),并上调MMP-1 mRNA表达(P<0.01)。结论辛伐他汀能减少HPMCs高糖刺激下Ⅰ型胶原的合成,并通过调节MMP-1/TIMP-1的平衡,促进Ⅰ型胶原降解,从而减少细胞外基质的沉积。     

EPA、DHA对脂多糖刺激大鼠系膜细胞表达MMPs、TIMPs及TGF-β1的影响

目的观察二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)对脂多糖(LPS)刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1、TIMP-2以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法大鼠GMC与EPA、DHA(10,100μmol/L)作用48 h后,采用实时定量PCR方法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达,明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9活性,ELISA法测定TGF-β1含量。结果 EPA、DHA可以影响MMP、TIMP的表达,改善LPS诱导的MMP活力的降低,降低TGF-β1分泌。结论EPA、DHA可以通过改善MMP、TIMP失衡、减少TGF-β1分泌等机制,对损伤的GMC起保护作用。     

白藜芦醇对中波紫外线致人角质形成细胞损伤的防护作用

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对中波紫外线(UVB)照射体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的损伤的保护作用。方法:体外培养HaCaT细胞,MTT法检测不同浓度Res对HaCaT细胞增殖活性的影响。UVB照射及Res处理24 h后,采用RT-PCR方法测定细胞中MMP-1,MMP-9和TIMP-1mRNA的相对含量。结果:UVB 30 mJ.cm-2照射后,HaCaT细胞产生的MMP-9 mRNA含量显著增加(P<0.05),TIMP-1 mRNA明显减少(P<0.05);UVB 90 mJ.cm-2照射HaCaT细胞后其MMP-1 mRNA增加(P<0.05)。与UVB照射组相比较,0.5 mmol.L-1Res能显著抑制UVB诱导的HaCaT细胞产生的MMP-1,MMP-9 mRNA含量增加以及UVB对TIMP-1 mRNA的抑制作用(P<0.05)。结论:Res可以显著抑制UVB照射诱导的HaCaT细胞产生的MMP-1,MMP-9及TIMP-1 mRNA含量的变化,对皮肤光老化可有一定的防护作用。     

糖尿病肾病大鼠MMP-9/TIMP-1的表达及钙拮抗剂对其表达的影响

目的观察糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1的表达状况,以及钙离子拮抗剂硝苯地平对其表达的影响,探讨MMP-9、TIMP-1在DN发生、发展过程中的作用,以及钙离子拮抗剂硝苯地平对肾脏保护作用的机制。方法大鼠随机分为3组:健康对照(N)组、DN组和硝苯地平治疗(T)组,每组10只。采用链脲佐菌素诱发DN大鼠模型,治疗组以硝苯地平控释片15mg(kg·d)干预治疗,治疗2周和4周,检测大鼠平均动脉压(MAP)、尿蛋白量(24h)、Scr水平;RT-PCR检测MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果与N组比较,DN组大鼠MAP、尿蛋白量、Scr水平均显著上升[分别为(141.1±8.7)比(99.8±3.8)mmHg、(78.87±17.62)比(6.30±1.91)mg/24h、(203.88±18.08)比(84.98±10.09)μmmo/L,P均<0.05];肾组织MMP-9、TIMP-1mRNA表达均显著增强(P<0.05),且MMP-9/TIMP-1的比值明显下降(P<0.05)。与DN组比较,T组MAP[(102.6±4.4)mmHg]、尿蛋白量(24h)[(58.35±10.48)mg]、Scr水平[(165.81±15.86)μmmo/L]均显著下降(P均<0.05);肾组织MMP-9、TIMP-1mRNA表达也显著增强(分别P<0.05和P<0.01),MMP-9/TIMP-1比值显著升高(P<0.05)。结论 DN大鼠肾组织MMP-9及TIMP-1的表达增高,MMP-9/TIMP-1比值下降。硝苯地平可能是通过影响MMP-9及TIMP-1的表达而实现对肾脏的保护作用。     

MMP－9及TIMP－1在功能失调性子宫出血中的作用

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)与功能失调性子宫出血(功血)的关系。方法:应用RT-PCR技术检测MMP-9及TIMP-1mRNA的表达量。结果:功血复杂性、单纯性增生组子宫内膜组织中MMP-9mRNA的表达均显著高于正常对照组,而二者TIMP-1mRNA的表达量则明显低于正常组(P<0.01)。结论:MMP-9和TIMP-1的变化证实了子宫内膜局部微环境的改变与功血的发生密切相关。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤组织中MMP-2、9/TIMP-1、2mRNA表达比值的变化及意义

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(MIRI)组织中基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)和组织金属蛋白酶抑制因子-1、2(TIMP-1、2)基因mRNA表达的变化规律及其临床意义。方法建立大鼠MIRI模型,采用HE、RTPCR、免疫组化、酶谱分析等方法,检测MIRI不同时相中MMP-2、9和TIMP-1、2 mRNA表达变化。结果在MIRI过程中MMP-2、9的mRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势,二者在MIRI 8 h时表达量达高峰,与对照组(sham组)相比具有非常显著性差异(P<0.01)。TIMP-1、2的mRNA相对表达量在整个再灌注过程中增高,与sham组相比有显著性差异(P<0.05),而蛋白水平的相对表达量与sham组相比无统计学差异(P>0.05)。MMP-2、9/TIMP-1、2 mRNA表达比值趋于失衡。酶活性MMP-2在MIRI 4 h达高峰(16832.67±727.40),MMP-9在MIRI 12 h达高峰(6534.85±421.50),与sham组和MIRI 30 min组相比,二者均有非常显著性差异(P<0.01)。结论 MMP-2、9/TIMP-1、2mRNA表达比值失衡是MIRI的重要指标之一。     

Trichloroethanol up-regulates matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in HaCaT cells

Occupational trichloroethylene (TCE) exposure could induce generalized skin hypersensitivity reactions complicated with severe liver dysfunctions. Active extracellular matrix degradation and remodeling are involved in the skin hypersensitivity reaction induced by chemical exposure. In the present study, we have compared the effects of in vitro exposure to trichloroethanol (TCOH) and trichloroacetic acid (TCA) of a keratinocyte cell line (HaCaT). The modulation of matrix metalloproteinases (MMPs) was selected as marker of sensitization. HaCaT cells were treated with different concentrations of TCOH or TCA up to 6 days. The gelatinolyic activities of MMP-2 and MMP-9 were detected by gelatin-zymography. MMP-2, tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-2, MMP-9 and TIMP-1 mRNAs were analyzed by real-time PCR and MMP-9 and TIMP-1 proteins were tested by Western blotting. A dose–effect relationship between TCOH treatment and MMP-9 activity, mRNA and protein expression levels was found in HaCaT cells. TCOH also induced up-regulation of TIMP-1 mRNA and protein. We found no such effects in HaCaT cells treated with TCA. Moreover, previously published literatures on patch tests suggested that TCOH could induce moderately positive reactions at low concentrations in hypersensitivity patients caused by occupational TCE exposure. In summary, these observations indicated that TCOH might play an important role in TCE-induced skin hypersensitivity.     

辛伐他汀对急性冠脉综合征患者血清基质金属蛋白酶-9及其组织抑制因子-1的影响

目的观察辛伐他汀对急性冠脉综合征（ACS）患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）的影响。方法选择ACS患者4JD例（ACS组）、稳定性心绞痛（SAP）患者34例（SAP组）、健康体检者25例（对照组）,采用酶联免疫吸附法测定其血清可溶性TIMP-1及MMP-9水平,辛伐他汀治疗后复查TIMP-1及MMP-9水平变化。结果ACS组血清MMP-9水平（930±127）μg/L高于SAP组的（619±114）μg／L及对照组的（417±105）μg／L（均P〈0．05）,而TIMP-1水平（73±14）μg／L显著低于SAP组的（121±17）μg/L及对照组的（151±24）μg／L（均P〈0．05）;辛伐他汀治疗4周后ACS组血清MMPO水平为（641±123）μg／L、TIMP-1水平为（114±18）μg/L,与治疗前比较差异均有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）,SAP组治疗后MMP-9水平为（546±122）μg/L,与治疗前比较差异具有统计学意义（P〈0．05）,而TIMP-1水平无明显改变（P〉0．05）。结论MMP-9及TIMP-1可能与ACS发病密切相关,监测其血清水平对ACS的治疗有重要的指导意义。     

Aspirin inhibits MMP-2 and MMP-9 expressions and activities through upregulation of PPARalpha/gamma and TIMP gene expressions in ox-LDL-stimulated macrophages derived from human monocytes

Recently, aspirin has been shown to alleviate matrix metalloproteinase (MMP) expression, but the underlying mechanism is still unclear. In this study, the effects of aspirin on oxidative low-density lipoprotein (ox-LDL)-stimulated human monocyte-derived macrophages were examined. Following treatment of cells with aspirin, MMP-2 and MMP-9 expression and release were significantly reduced. Moreover, expression of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) alpha and gamma was markedly enhanced. The effect of PPAR inhibitors on MMP levels in aspirin-treated cells was examined. RT-PCR and ELISA assays showed that inhibition of MMP-9 levels by aspirin was notably alleviated by PPAR antagonists. Interestingly, expression of nuclear factor (NF)- kappaB was also decreased by aspirin. RT-PCR study also indicated that aspirin could upregulate the expression of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP)-1 and TIMP-2. In all of these studies, lower dosage (50 or 100 microg/ml) exerted the best effect. These results demonstrate that aspirin could inhibit MMP-2 and MMP-9 expression through upregulation of PPARalpha/gamma expression in ox-LDL-stimulated macrophages, and could potentially inhibit MMP-2 and MMP-9 activity by induction of TIMP-1 and TIMP-2 expression. This finding may demonstrate a novel pharmacological effect of aspirin protecting against atherosclerotic plaque rupture.     

葛根素下调基质金属蛋白酶-16表达影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的：探讨葛根素通过下调基质金属蛋白酶-16（matrix metalloproteinase-16,MMP-16）表达抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡行为的调控及其机制。方法：qPCR检测不同浓度的葛根素对乳腺癌细胞的活性影响情况;分析葛根素对乳腺癌细胞增殖行为的影响情况;流式细胞术实验检测葛根素对乳腺癌细胞周期的影响;Western blotting实验检测葛根素对乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶-16表达情况的影响。结果：1 μmol·L^-1的葛根素对乳腺癌细胞的活力的抑制作用最佳;随着时间的进展,葛根素对乳腺癌细胞的增殖能力的直接抑制作用,可以在一定程度上干扰乳腺癌细胞的生长进程;葛根素对乳腺癌细胞的凋亡行为有一定的促进作用;合适浓度葛根素对乳腺癌细胞中MMP-16蛋白有直接的干扰作用。结论：葛根素通过下调基质金属蛋白酶-16表达抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡行为。     

原发性高血压患者颈动脉内膜中层厚度与基质金属蛋白酶的相关性

目的探讨原发性高血压(EH)患者血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及其组织抑制因子1(TIMP-1)的浓度变化和颈动脉内膜中层厚度(IMT)的相关性。方法选取EH患者70例分为A组(40例,IMT≥0.9mm)和B组(30例,IMT<0.9mm);健康体检者为正常对照(C组,36例)。采用超声多普勒测量颈动脉IMT并计算斑块积分;ELISA法检测血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1浓度并计算MMP-2、MMP-9与TIMP-1比值。结果 A组血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1浓度均显著高于B、C组(P<0.01),而MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值却均显著低于B、C组(P<0.01);A、B组血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1浓度与IMT及斑块积分呈显著正相关(P<0.01),而MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值与IMT及斑块积分却呈显著负相关(P<0.05)。结论 EH患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1与颈动脉粥样硬化的发生和发展有关。     

MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1联合检测对宫颈癌浸润转移潜能的预测价值

目的 分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9及其抑制因子2（TIMP-2）和TIMP-1联合检测对宫颈癌浸润转移潜能的预测价值.方法 选取经病理证实的宫颈浸润癌患者112例（ICC组）、宫颈上皮内瘤样病变患者56例（CIN组）;同时,选取正常宫颈组织标本30例为对照组.采用SABC法行免疫组织化学检测MMP-2、MMP-9 、TIMP-2和TIMP-1的表达情况.比较3组相关因子阳性表达率的差异,并分析ICC组各因子阳性表达率与临床病理参数的关系.结果 ICC组MMP-2和MMP-9的阳性表达率显著高于CIN组和对照组,TIMP-2和TIMP-1的阳性表达率显著低于CIN组和对照组（P＜0.05）.ICC组中,MMP-2、MMP-9、TIMP-2和TIMP-1的阳性表达率与国际妇产科联盟（FIGO）分期、组织学分级、分化程度、脉管浸润和淋巴结转移有关（P＜0.05）.结论 MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1可能与宫颈癌的发生、发展有关,其可作为评估宫颈癌侵袭转移潜能的重要指标.     

普伐他汀对急性冠状动脉综合征患者血清组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶-9水平的影响

目的观察普伐他汀对急性冠状动脉综合征（ACS）患者血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织抑制因子-1（TIMP-1）水平的影响。方法选择ACS患者30例，稳定性心绞痛（SAP）患者30例，正常健康体检者28例，采用ELISA法测定其血清可溶性TIMP-1及MMP-9浓度，经普伐他汀治疗后复查TIMP-1及MMP-9的变化。结果ACS组血清MMP-9显著高于SAP组及对照组（均P〈0．05），而TIMP-1显著低于SAP组及对照组（均P〈0．05）．SAP组MMP-9显著高于对照组（P〈0．05），SAP组TIMP-1与对照组之间无差异（P〉0．05）；普伐他汀治疗4周后ACS患者血清MMP-9水平下降，TIMP-1水平上升，与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05），SAP组MMP-9与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05），而TIMP-1无明显改变（P〉0．05）。结论ACS患者MMP-9升高及TIMP-1下降，可能与其发病机制相关．普伐他汀能降低ACS患者MMP-9并升高TIMP-1，对于ACS的临床治疗有着重要的意义。     

Altered matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in embryos from diabetic rats during early organogenesis

Maternal diabetes increases the risks for embryo malformations. Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9 are two relevant MMPs for embryo development. Here, we addressed whether changes in these MMPs and in tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) and TIMP-2 are altered in embryos and decidua from type 1 diabetic rats during early organogenesis. Our results demonstrate MMP-2 and MMP-9 overactivities and overexpression, together with increases in lipid peroxidation and nitric oxide production in embryos and decidua from diabetic animals. There is a concomitant increase in the inhibitory activity of TIMP-1 and TIMP-2 in embryos and decidua, and an increase in protein expression of embryonic TIMP-1 and TIMP-2. In situ zymography demonstrated MMPs overactivities despite increased TIMPs in embryos and decidua in maternal diabetes during early organogenesis. This study reveals that maternal diabetes leads to profound alterations in MMPs/TIMPs balance during embryo organogenesis, the gestational period during which most malformations are induced.