肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心法和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS病人血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清,102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的确是HFRS病毒特异性抗体。对ELISA的某些试验条件作了讨论,并认为,McAb-ELISA在帮助临床早期诊断及血清流行病学调查等方面均有实用价值。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。     

酶标单克隆抗体检测肾综合征出血热病毒抗原ELISA法的初步研究

本文用辣根过氧物酶标记了肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体,建立了ELISA双单克隆抗体夹心法,对该法在HFRS病毒抗原检测及单克隆抗体特异性分析中的应用作了探讨。结果表明,本法具有良好的特异性和重复性。用本法对Vero—E_6细胞培养上清中的HFRS病毒抗原进行了检测。在正常Vero—E_6细胞感染HFRS病毒后,第8天即出现HFRS病毒3H_4抗原可疑阳性;至第14天可测出抗3H_4的HFRS病毒抗原,阳性率达5/9;第16—18天,阳性率达9/9。抗体特异性分析表明,在所用的8种单克隆抗体中,3H_4、3H_7、3D_(10)三种单克隆抗体具有相同或极为相近的抗体特异性。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

肾综合征出血热病毒宫内感染的临床研究

目的 研究肾综合征出血热(HFRS)病毒宫内感染情况及其对婴儿的影响。方法 对妊娠期感染HFRS病毒者，于其分娩时留取母血和脐带血进行抗—HFRS IgG检测，同时对顺产新生儿采取静脉血进行抗—HFRS IgM检测，并应用血凝抑制试验(HI)对HFRS病毒进行分型，另外对顺产的新生儿进行全面查体和定期随访观察。结果 母血抗—HFRS IgG均阳性，死胎的27例脐带血抗—HFRS IgG阳性23例，孕妇痊愈后自然分娩的12例中脐带血和静脉血有2例抗—HFRS IgG阳性，而抗—HFRS IgM阴性。并发现14例顺产新生儿生长发育全部正常。结论 HFRS病毒存在宫内感染，并易致死胎，但对顺产婴儿未发现致畸作用。     

逆转录-聚合酶链反应对肾综合征出血热早期的诊断

为了选择更为敏感,特异,快速的肾综合征出血热（HFRS）的诊断方法。我们建立了碘化钠—异流氰酸胍—氯仿法提取汉坦病毒（HV）核酸（RNA）用于逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同病型HFRS患者一周内血清中HV－RNA且与酶联免疫吸附法（ELISA）检测HFRS-IgM进行比较。45例HFRS患者血清中HV－RNA阳性率为82．2％,其中轻、中、重型阳性中分别为75％,78.5％,86.9％。HFRS-IgM阳性率55．5％,其中轻、中、重型阳性率分别为37.5％,50.0％,65/2％。RI-PCR法检出率高于ELISA法,差别有显著性。RT-PCR法和ELISA法均可以用于HFRS的早明诊断。但前者更为敏感。     

流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异性抗体和细胞因子中的应用

目的:建立流式微球载体技术(FMA)检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清抗HFRS 病毒特异性抗体IgM和IgG及细胞因子含量的新方法.方法:选择28例临床确诊的HFRS患者及20例健康人血清标本,FMA定量检测抗HFRS 病毒IgM和IgG;定量检测细胞因子IL-6和TNF-α.检测结果与ELISA法进行比较.结果:FMA检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为92.85%和71.43%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(532.62±397.19) ng/L和(392.68±177.68) ng/L,明显高于健康对照组(38.77±20.32)ng/L (P<0.01)和(15.91±6.91) ng/L(P<0.01).ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为71.43% 和50.00%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(256.46±102.51) ng/L和(45.63±5.32) ng/L,高于健康对照组(53.8±19.21) ng/L(P<0.01)和(5.81±3.58) ng/L(P<0.01).结论:建立了FMA法对HFRS患者的特异性抗体和IL-6和TNF-α的检测,其灵敏度明显优于ELISA法,为HFRS的临床诊断和病理机制研究提供了新的方法.     

细胞因子及特异性抗体的检测在肾综合征出血热诊断中的意义

探讨检测血清细胞因子及肾综合征出血热(HFRS) 病毒特异性抗体IgM和IgG的含量在HFRS发病机制及诊断中的意义.选择24例HFRS患者及30例健康人血清标本,采用生物素-亲和素-酶免疫技术检测IL-2、IL-6和TNF-α,ELISA方法检测血清HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG,并对其进行统计学分析. 结果显示, ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为75.00 % 和50.00 %,健康对照组的抗体阳性率为零;HFRS患者血清IL-2、IL-6、TNF-α的含量分别为10.88±2.31pg/mL、256.46±102.51pg/mL和45.63±5.32pg/mL,高于健康对照组0.59±0.24pg/mL(P＜0.01)、53.8±19.21 pg/mL(P＜0.01)和5.81±3.58 pg/mL(P＜0.01). 结论 :HFRS患者血清IL-2、IL-6和TNF-α及血清特异性抗体IgM和IgG的含量较健康人明显升高,检测这些指标对该病发病机理、诊断及预后评价有一定意义.     

PENA方法的建立及与ELISA IgM检测CMV的比较

目的　介绍一种敏感、稳定、快速、简便的实验室检测CMV的方法 ,同时探讨该种新方法与ELISA检测CMV方法的优、缺点。方法　对 5 5 2例病人应用间接荧光免疫法测定细胞核中的特异病毒早期抗体 (PENA)和ELISA法测定IgM抗体。结果　PENA方法 :强阳性 88例 ,阳性率 15 4 9% ,弱阳性 2 73例 ,阳性率 5 9 4 6 % ;ELISA -IgM方法 :阳性 34例 ,阳性率6 16 %。结论　PENA方法操作简便 ,与ELISA方法相比较 ,可对CMV感染进行早期测定及诊断 ,并可区分既往感染和即时感染 ,具有敏感性和稳定性 ,是测定小儿CMV感染的一种较好的方法     

一起新生儿柯萨奇病毒B组引起的暴发流行

对1993年9月至10月沈阳某妇婴医院发生的一起新生儿集体感染,用间接免疫荧光法检测了36例患儿血清中的柯萨奇B组病毒的特异性IgM抗体,28例阳性,阳性率为77.8％。病毒分离结果为:12例患儿咽拭子中1例阳性;9例患儿便标本中4例阳性;4例患儿骨髓标本中3例阳性。同时,3例死亡患儿的9份解剖标本(包括心肌、心血、心包积液、脑组织和肠组织)全部病毒分离阳性。其中2例死亡患儿的心肌分离株经中和试验鉴定为柯萨奇病毒B组3型。同时对部分(9例)患儿母亲和全部(20例)有关医护人员进行的柯萨奇B组病毒IgM抗体检测结果为,2例患儿母亲阳性。对1993年10月30日至1994年5月31日期间1616例临产孕妇的柯萨奇B组病毒IgM抗体检测中,65例阳性,阳性率为4.02％。其中1993年10月30日至11月17日期间的146例被检孕妇中,12例阳性,阳性率为8.22％。表明,1993年9～10月期间沈阳市有柯萨奇病毒流行。     

神经疾病患者外周血BDV核蛋白抗体的检测

目的探讨贵州省博尔纳病病毒(BDV)的感染状况及其与神经系统疾病发生的相关性。方法建立检测外周血博尔纳病病毒的免疫印迹(Western blot,WB)方法,收集病毒性脑炎(VE)患者62例,帕金森病(PD)患者32例,格林-巴利综合征(GBS)患者19例,多发性硬化(MS)患者7例,以及体检中心健康人120例外周血标本中博尔纳病病毒核蛋白(P40)抗体,并对所检出的阳性标本进行确认。结果病例组阳性结果 8例(6.7%),其中病毒性脑炎患者4例,帕金森病患者2例,格林巴利综合征1例,多发性硬化1例。在所检测出的8例阳性标本中,病毒性脑炎患者阳性率为6.45%(4/62),帕金森病患者阳性率为6.25%(2/32),格林-巴利综合征患者阳性率为5.26%(1/19),多发性硬化患者阳性率为14.29%(1/7)。健康体检者对照组外周血中未检出阳性病例(0%)。神经系统疾病患者明显高于健康体检者(P=0.003,<0.05),有显著统计学差异,具有统计学意义。结论贵州省人群中存在博尔纳病病毒的感染,博尔纳病病毒的感染可能与神经系统疾病(脑炎等)的发生有更大的关系。     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝实验的改良

HFRS是一种烈性病毒性传染病,早期诊断及治疗对病人的预后尤为重要。然而目前常用的HFRS诊断方法如 ELISA,IFAT,尽管特异性和敏感性较好,但其技术要求和设备要求较高,很难普及到基层医疗单位。我们曾建立了检测HFRS病毒抗体的自身血凝实验方法（autologous erythcyte agglutination,AGEN)[1］,但该法比较费时,而且需在血凝板上进行。本文对此方法进行了改良,使血凝反应能在玻片上5 min内完成。现将方法和结果报道如下。     

微斑免疫酶技术在检测肾综合征出血热病毒及其特异抗体中的应用

本文报道一种简便且快速的方法—微斑免疫酶技术(MPIPA),检测Vero-E6细胞培养的肾综合征出血热(HFRS)病毒及其特异抗体,并与免疫荧光技术(IFA),酶联免疫吸附技术(ELISA)进行比较。结果,本法用于检测HFRS患者血清IgG抗体和抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb),其敏感性介于ELISA和IFA之间;用于检测Vero—E6细胞培养的病毒,阳性结果比IFA和细胞病变(CPE)出现早。MPIPA具有简单,快速、敏感性高、特异性好,结果易判定诸优点,便于基层医疗单位推广应用,适合于临床HFRS血清标本的检测和血清流行病学调查。     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

烟台地区肾综合征出血热患者血清抗体检测和汉坦病毒序列测定

目的 了解烟台地区肾综合征出血热(HFRS)患者血清中IgG、IgM抗体水平，确定引起该地区HFRS流行的汉坦病毒的型别分布。方法 收集临床HFRS急性期和恢复期患者血清；用EMSA检测IgG、IgM抗体；用交叉空斑减少中和试验检测中和抗体；采用Trizol法提取患者血清中HFRS病毒RNA，用套式PCR产物做TA试验，测定核苷酸序列。结果 HFRS患者血清IgM阳性率为82．2％(88／107)，IgG阳性率为85．7％(66／77)。该地区两城市38份HFRS患者血清中，有32份属家鼠型病毒(SE0)感染，另6份未能定型；另一城市16份HFRS患者血清中，有15份属姬鼠型病毒感染，1份未定型。该地区HFRS病毒与SE0的同源性达90％以上。结论 引起烟台地区HFRS流行的汉坦病毒，属于以SE0为主的混合型病毒。     

免疫酶斑点法检测汉坦病毒抗原的研究

目的 建立一种新的诊断肾综合征出血热(HFRS)的实验手段。方法 采用R22株、陈株和湖北株3种汉坦病毒接种家兔，制备兔抗汉坦病毒多克隆抗体(抗HTV-IgG)。然后采用混合的3种抗体进行免疫酶斑点法实验(IEDA)，检测患者血清和尿液中的汉坦病毒抗原。同时采用间接免疫荧光法(IFA)检测患者血清中抗汉坦病毒-IgM作对照。结果 经用相关分析，IEDA与IFA检测的结果高度相关。血中汉坦病毒抗原检出率为73．68％，尿中为65．00％。发病5d内，血中检出率为94．34％，尿中检出率为83．33％。5病日内的早期诊断率前者明显高于后者。结论 IEDA与IFA相比，阳性率比后者有较大提高，特别是5病日内的早期阳性率的提高明显，值得用于临床HFRS的早期诊断。     

MbAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

为了防治肾综合征出血热(HFRS)需要建立一种在试管内检测特异的保护性抗体的方法。本文采用抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和粗制HFRS病毒血凝素抗原,建立了一种McAb-ELISA间接夹心法。经取代试验,抗体阻断试验都表明有高度特异性。以本法曾检测了63例临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时平行地与血凝抑制试验比     

半套式逆转录聚合酶链反应技术诊断中枢神经系统肠道病毒感染

肠道病毒 (ＥＶ)感染常见 ,所致疾病轻重不一 ,可表现为无症状感染或严重的脑膜炎、脑炎和心肌炎等。长期以来缺乏有效的病原学诊断方法。组织培养分离病毒费时 ,阳性率低 ,且病合 1至 2周得到结果时已无益于临床诊断和治疗。聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法能快速、特异地检测出脑膜炎病人脑脊液 (ＣＳＦ)中ＥＶＲＮＡ ,但感染初期及回顾性研究的临床标本中病毒滴度较低 ,扩增结果多为阴性 ,病毒培养也常常失败。我们采用二步扩增半套式ＰＣＲ方法检测无菌性脑膜炎病人脑脊液 (ＣＳＦ)和血清标本中肠道病毒ＲＮＡ ,发现该方法较常规一步ＰＣＲ敏…     

ELISA检测孕妇血清巨细胞病毒特异性IgG及新生儿脐带血清特异性IgM

用ELISA法检测长春地区390名孕妇血清巨细胞病毒(CMV)特异性IgG,阳性率为92.42%(366/396);用同种方法检测186名新生儿脐血清MCV特异性IgM抗体,阳性率为2.65%(4/186).4名新生儿为先天性巨细胞病毒感染,其中1名临床诊断为巨细胞包涵体病(CID).余者无症状.4名先天性巨细胞病毒感染的新生儿的母亲血清学检查亦为阳性.