急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。     

急性髓细胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表达及意义

目的探讨急性髓细胞白血病（AML）病人骨髓细胞中geminin和cdt1基因表达水平及其与AML发病和预后关系。方法采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应（SYBR-RT-PCR）技术,检测47例不同病程AML病人（包括25例初治者,16例完全缓解者,6例未缓解或复发者）骨髓细胞中geminin和cdt1 mRNA的表达,并对25例初治病人进行6个月随访。结果初治、未缓解或复发AML病人geminin和cdt1表达较对照组及完全缓解组高,差异有显著性（H=4.95、3.22,Z=2.67~4.95,P〈0.01）;完全缓解组geminin和cdt1表达水平与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1的表达呈明显正相关（r=0.59,P〈0.01）;且初治组、完全缓解组及未缓解或复发组两者的表达均呈明显正相关（r=0.49~0.87,P〈0.05）。25例AML初治病人随访6个月,死亡6例,存活19例,死亡组geminin表达高于存活组,差异有统计学意义（t=2.16,P〈0.05）,而两组cdt1表达差异无显著性（t=0.61,P〉0.05）。结论 AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1表达可能与AML的病程有关;geminin在初治病人中的高表达可能是AML病人的不良预后因子。     

急性髓系白血病TFPI-2基因表达及启动子甲基化的研究

本研究检测了组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其甲基化状态,探讨其与AML发生、发展及危险度分层的关系.分离33例初治、19例完全缓解、12例复发/难治AML患者及15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）骨髓单个核细胞,采用实时定量PCR （RT-PCR）检测TFPI-2 mRNA在其中的表达水平,采用甲基化特异性PCR （MSP）检测启动子CpG岛甲基化状态.结果表明,初治组、完全缓解组及复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平均低于对照组（P＜0.05）,复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平明显低于初治组（P =0.006）,与完全缓解组相比,初治组TFPI-2 mRNA表达水平也显著降低（P=0.030）;64例AML患者TFPI-2基因启动子甲基化频率为64.63％ （42/64）,其中初治组、完全缓解组和复发/难治组患者中TFPI-2基因启动子甲基化频率分别为66.67％（22/33）、52.63％ （10/19）和83.33％ （10/12） （P＞ 0.05）;甲基化AML患者与非甲基化AML患者骨髓单个核细胞中TFPI-2 mRNA的相对表达量分别为0.165（0.005-2.099）和0.597（0.011-2.787） （P ＜0.05）,在对照组骨髓单个核细胞中未检测到TFPI-2基因启动子的甲基化;初治组经2个疗程化疗后,完全缓解组（CR）骨髓单个核细胞TFPI-2 mRNA表达量显著高于未完全缓解组（PR＋ NR） （P=0.031）.结论：在AML中TFPI-2基因表达下调或沉默与启动子甲基化有关,TFPI-2基因表达水平及启动子甲基化状态可以作为AML分层及病情进展的指标.     

抑癌基因pten在骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病的表达

为了研究pten基因在骨髓增生异常综合征（MDS）、急性髓系白血病（AML）患者中的表达及其意义，采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫印迹杂交（Western blot）方法检测Jurkat细胞株、35例MDS、45例AML及20例正常人骨髓有核细胞中pten mRNA及其蛋白的表达。结果表明：pten mRNA在阴性对照Jurkat细胞株不表达。MDS组的阳性表达率（77．1％）低于正常对照组（90．0％），但差异无统计学意义（P〉0．05）；AML组阳性表达率（60．0％）低于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；MDS—RAEB组阳性表达率（70．0％）低于MDS—RCMD组（86．7％），初发／复发AML组阳性表达率（53．3％）低于完全缓解AML组（73．3％），但差异均无统计学意义（p〉0．05）。对各组pten mRNA相对表达量分析发现，MDS及AML组均明显低于正常对照组（P〈0．005）；MDS-RAEB组低于MDS-RCMD组（P〈0．05）；初诊／复发的AML组明显低于完全缓解的AML组（P〈0．001）；MDS组与AML组相比，差异无统计学意义（p〉0．05）。PTEN蛋白表达阳性率在MDS组（65．7％）及AML组（54．8％）均低于正常对照组（90％）（P〈0．05）；MDS—RCMD组（80．O％）与MDS—RAEB组（55．0％）相比，阳性表达率均无统计学意义（P〉O．05），但初诊／复发的AML组（44．4％）与完全缓解的AML组（73．3％）相比，差异有统计学意义（p〈0．05）。结论：pten mRNA在MDS、AML中表达完全缺失并不多见，但表达强度较正常人明显减弱。PTEN蛋白在MDS、AML中阳性表达率低于正常人，且与mRNA表达水平不一致。pten基因的表达异常参与了MDS及AML的发病。     

急性白血病病人XIAP表达及其临床意义

目的探讨急性白血病（AL）病人X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术检测了46例不同类型、不同阶段AL病人白血病细胞中XIAP的表达情况,以11例健康人作为对照。结果 AL病人白血病细胞XIAP表达水平比对照组明显增高（t=13.96,P〈0.01）。初治组、缓解组和复发组AL病人白血病细胞XIAP表达水平均明显高于对照组（F=204.27,q=8.88～32.69,P〈0.01）,其中缓解组明显低于初治组和复发组（q=12.44、26.02,P〈0.01）,复发组明显高于初治组（q=17.55,P〈0.01）。结论 XIAP表达可能参与了AL的发生和发展过程,XIAP高表达的病人完全缓解率低,预后不良。XIAP高表达可能是导致白血病细胞对化疗药物不敏感的原因之一,XIAP有望成为白血病基因治疗的新靶点。     

定量检测WT1基因表达水平在急性髓系白血病微量残留病监测中的意义

目的评价定量检测WT1基因表达水平在监测急性髓系白血病（AML）微量残留病（MRD）中的意义．方法采用实时定量RT-PCR（RQ-PCR）技术分别测定了15名正常人骨髓及72例AML患者治疗前后123份骨髓标本WT1基冈mRNA表达水平，同时对62份患者标本定量检测了AML1-ETO融合基因mRNA表达水平，对跟踪观察的8例患者50份标本同时监测了WT1及AML1-ETO基因mRNA水平变化。WT1及AML1-ETO基因表达水平用内参照基因ABL归一化。结果WT1、AML1-ETO及ABLRQ-PCR的标准曲线相关系数均〉0．99，日内差及日间差均〈4％。正常骨髓WT1mRNA中位水平为0．008（0．001～0．019）。67例初治AML患者中61例（91．0％）WT1mRNA表达高于正常水平，其中37例（55．2％）高于正常100倍以上。各型AML中M4EO及M3患者WT1mRNA水平最高，明显高于其他亚型，M1及M5型最低。WT1与AML1-ETOmRNA水平明显正相关（r=0．88，P〈0．001），4例血液学持续缓解患者中3例WT1mRNA水平始终在正常范同内波动。4例发生血液学复发的患者中3例复发前1个月WT1mRNA的水平分别超出正常上限的31.4，11.4及4.0倍。结论RQ-PCR定量检测WT1mRNA水平可用于监测大多数AML患者MRD，但是敏感度不如AML1-ETO融合基因，WT1mRNA水平持续增高或明显异常预示复发。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl-1和Bcr/Abl基因表达

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）病人Mcl-1基因和Bcr/Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了41例CML病人（包括慢性期15例、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例）骨髓标本Mcl-1基因、Bcr/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果 CML各组Mcl-1和Bcr/Abl mRNA的表达水平差异均有显著性（χ2=19.12～36.08,P〈0.05）。伊马替尼治疗组与正常对照组Mcl-1 mRNA的表达明显低于其他各组（Z=2.547～3.254,P〈0.05）;加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl-1 mRNA的表达水平差异无显著性（Z=0.481～1.922,P〉0.05）,但均明显高于慢性期（Z=2.650～3.465,P〈0.05）。Bcr/Abl mRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性（Z=0.480～1.196,P〉0.05）。CML病人Mcl-1与Bcr/AblmRNA的表达水平呈正相关（r=0.68,P〈0.05）。结论 Mcl-1和Bcr/Abl与CML的病情密切相关,参与CML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。     

PTEN及BCL-2在急性髓系白血病中的表达及意义

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的基因(PTEN)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法:采用Real-time PCR和Western blot法检测80例AML(包括56例初治患者,16例缓解患者,8例复发患者)及30例非血液病患者骨髓中PTEN及BCL-2的mRNA及蛋白表达水平,并分析二者与临床病理参数的关系。结果:初治和复发组患者骨髓细胞PTEN mRNA及蛋白表达水平均显著低于对照组及缓解组(P0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组及缓解组(P0.01)。PTEN与BCL-2 mRNA表达水平与AML患者年龄,性别及白细胞计数无相关性(P0.05)。AML患者中PTEN与BCL-2蛋白及mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.432,r=-0.569)。结论:PTEN及BCL-2参与AML的发生发展,并对AML的化疗效果起着指示作用。     

急性髓系白血病患者胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达及其意义

目的:探讨急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)的基因表达和外周血中的IGFBP3水平及其临床意义。方法:将2014年3月至2016年3月期间178例AML病人按照病情分为初治组,缓解组和复发组;并选取同时期的骨髓象正常的非恶性血液病患者作为对照组,利用ELISA检测各组外周血中的IGFBP3水平,利用实时荧光定量PCR方法检测骨髓单个核细胞中IGFBP3的基因表达水平。结果:IGFBP3基因在初治组和复发组病人骨髓单个核细胞中的表达水平明显的低于对照组(P0.05),而缓解组与对照组,初治组与复发组之间无显著的差异(P0.05);IGFBP3蛋白在初治组和复发组病人外周血中的水平明显的低于对照组(P0.05),而缓解组与对照组,初治组与复发组之间无显著的差异(P0.05);IGFBP3在外周血和骨髓单个核细胞中的表达水平无显著的相关性。结论:AML病人骨髓单个核细胞中的IGFBP3基因表达以及外周血中的IGFBP可能对AM L的发生、发展起到了一定的作用,其还可以在一定程度上对病情以及治疗效果做出评估。     

P-糖蛋白与乳腺癌耐药蛋白基因在急性髓系白血病中表达的意义

目的:探讨多药耐药蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因在急性髓系白血病(AML)中的表达以及它们的相关性。方法:本研究应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,以β-actin作为内对照,检测41例AML患者及20例非恶性血液病对照组的骨髓白细胞的BCRP mRNA表达;应用流式细胞仪(FCM)采用直接免疫荧光标记法对41例AML患者及20例正常对照的骨髓单个核细胞(BMMNC)进行P-gp检测。结果:(1)AML中P-gp总阳性率与正常对照组无显著性差异(P>0.05);BCRP基因总阳性率明显高于正常对照组(P<0.05)。(2)AML中P-gp难治/复发组阳性率明显高于初治组(P<0.05);AML中BCRP基因难治/复发组阳性率与初治组无显著差异(P>0.05)。(3)P-gp 组完全缓解(CR)率和BCRP 组CR率明显低于P-gp-组和BCRP-组(P<0.05)。P-gp 组和BCRP 组早期复发率明显高于P-gp-组和BCRP-组(P<0.05)。(4)P-gp /BCRP 组CR率明显低于P-gp-/BCRP-组(P<0.01);P-gp /BCRP 组早期复发率明显高于P-gp-/BCRP-组(P<0.05)。(5)P-gp和BCRP基因在初治组和难治/复发组表达不相关(P>0.05)。结论:(1)P-gp和BCRP基因均与临床耐药密切相关。(2)P-gp和BCRP基因高表达均提示预后不良。联合检测P-gp和BCRP基因对评价AML的预后有较大意义。(3)P-gp和BCRP基因表达无相关性。     

儿童急性髓系白血病WT1基因的实时荧光定量RT-PCR检测及其临床意义

本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法检测儿童急性髓系白血病WT1基因(AML)mRNA的表达并探讨其临床意义。采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法,检测30例初治AML患儿、12例缓解期患儿(30份)、18例复发患儿,30例细胞形态学正常人的骨髓标本中的WT1基因的表达水平,并动态检测20例初治患儿WT1基因的表达。以ABL为内参照,采用2-△△ct法计算其相对表达量。结果表明:①初治AML患儿WT1基因的表达高于正常对照组和缓解组(p<0.001);缓解AML患儿WT1基因的表达与正常对照组的差异无统计学意义(p>0.05);复发AML患儿WT1基因的表达与初治组的差异无统计学意义(p>0.05);②动态监测儿童AML20例显示,初治时W T1高表达,完全缓解后W T1表达水平下降,复发时W T1表达水平明显升高。20例中5例在临床复发前3-7个月表达水平开始上升。③动态检测的20例患儿初治时W T1阳性组和阴性组完全缓解率(CR)、3年总生存率(O S)无显著差异(p>0.05),治疗后第22-30天的W T1阳性组3年O S显著低于阴性组(p<0.05)。结论:SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效,灵敏度高,特异性好的方法。WT1基因在儿童急性AML中表现为促癌基因的作用,WT1基因表达水平的变化有助于疗效评价,微小残留病的检测和预后判断。     

Btk及NFκB在急性髓系白血病细胞中的表达及其意义

摘要本研究检测Btk及NFκB在急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞中的表达,评价其在AML发生、发展中的作用。选取14例AML初诊及治疗达完全缓解患者的骨髓单个核细胞标本,检测Btk、NFκB在mRNA及蛋白质水平的表达。结果表明：在mRNA及蛋白质水平,AML患者细胞中均有Btk、NFκB的表达。Btk、NFκB蛋白在初发AML患者白血病细胞中表达高,达完全缓解后,其表达下降或检测不到（P〈0．05）。结论：Btk、NFκB在AML的发生、发展中可能起重要作用,它们有可能作为AML的潜在治疗靶点及用于预后预测。     

Tempol对紫外线照射所致HaCaT细胞损伤保护作用

目的观察氮氧化物4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶（Tempol）对中波紫外线（UVB）照射所致人角质形成细胞（HaCaT细胞）损伤的保护作用,并探讨其发生机制。方法在HaCaT细胞培养系统中加入不同浓度的Tempol进行培养,12h后洗掉培养液中的Tempol,用30mJ／cm^2 UVB照射细胞后,重新加入培养液继续培养24h。用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡率。RT—PCR方法测定FoxO3a和BubR1基因的表达。结果UVB照射组与正常对照组相比,细胞增殖活性明显降低（F=27．71,q=13．57,P〈0．05）,FoxO3amRNA的表达明显增强（F=13．93,q=9．79,P〈0．05）,BubR1mRNA的表达明显减弱（F=29．69,q=14．54,p〈0．05）,凋亡率明显增高（x^2=93．69,P〈0．05）;与UVB照射组相比,不同浓度的Tempol可以恢复UVB照射细胞的增殖能力（q=3．24～13．60,P〈0．05）,降低照射细胞的凋亡率（x^2=12．02～101．02,P〈0．05）,下调FoxO3amRNA的表达（q=2．92～9．95,P〈0．05）,上调BubR1mRNA的表达（q=2．97～14．61,P〈0．05）。结论Tempol可以保护HaCaT细胞免受uVB照射造成的损伤。     

急性髓系白血病FANCG基因表达的研究

本研究探讨FANCG基因表达与成人散发性急性髓系白血病（AML）的相关性。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测54例AML初诊患者、46例AML完全缓解（CR）患者及36例对照样本骨髓中单个核细胞FANCG基因表达的情况,以β-Actin基因作为内参,根据相对定量公式2^-△△C_T计算AML初诊患者与对照样本、AML初诊患者与AMLCR患者、AMLCR患者与对照样本FANCG基因表达差异的倍数。结果表明,AML初诊组FANCGmRNA的相对表达量为0．56±0．27,AMLCR组为0．75±0．54,对照组为0．85±0．45;AML初诊组FANCGmRNA的表达量较对照组和AMLCR组明显降低（P〈0．05）;AMLCR组FANCGmRNA的表达量与对照组比较无统计学差异。结论：FANCG基因在初诊AML患者中表达降低,AMLCR患者的FANCG基因表达与对照组无明显差异,提示FANCG基因可能与AML的发病有相关性,同时在判断AML的化疗疗效方面具有一定的临床参考价值。     

血清铁蛋白在恶性血液病诊断与治疗中的价值

目的探讨血清铁蛋白（SF）检测在恶性血液病诊断与治疗中的价值。方法选择128例恶性血液病患者作为观察组,其中：急性髓性白血病（AML）35例（AML组）、急性淋巴细胞性白血病（ALL）21例（ALL组）、慢性髓性白血病（CML）28例（CML组）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）18例（CLL组）、骨髓增生异常综合征（MDS）26例（MDS组）;同时选择60例健康者作为对照组。检测对照组及观察组治疗前后SF水平。结果 AML组、ALL组、CML组、CLL组、MDS组治疗前及治疗完全缓解后SF水平均较对照组显著升高（P〈0.01）,完全缓解持续1年后SF水平与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;AML组、ALL组、CML组、CLL组、MDS组治疗完全缓解及持续缓解1年后SF水平较治疗前均显著下降（P〈0.01）。结论恶性血液病患者体内存在明显的铁代谢紊乱,血清铁蛋白检测可作为白血病和MDS患者初治期、缓解期及预后的观察指标。     

凋亡抑制基因aven在急性髓系白血病的表达及其临床意义

本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因avertmRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞avenmRNA的表达水平,分析avenmRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数,血小板计数、血红蛋白和LDH水平、外周血和骨髓的原始细胞比例、FAB分型、患者的疗效和复发的关系,21名正常人的外周血作为对照。结果表明：69例初诊AML患者avenmRNA表达水平的中位值为37．2（11．72—178．93）％,正常人外周血白细胞aven mRNA表达水平中位值为28．81（10．81-50．98）％,AML患者avenmRNA表达水平明显高于正常人（p=0．006）。avenmRNA的表达水平与患者的年龄具有明显的相关性（r=0．25,P=0．039）,以AML患者中位年龄（44岁）为界分为2组,年龄大于／等于44岁组aven mRNA表达水平[中位值50．08％,（18．88—152．02）％]明显高于年龄小于44岁组[中位值32．41％,（11．72—178．93）％],（P=0．018）。aven mRNA的表达水平与患者Hb水平和FAB分型具有明显的相关性（r=0．29,P=0．019;r=0．253,P=0．036）。2个化疗疗程后avenmRNA表达水平低于中位值组的完全缓解率（25／30,83．33％）高于avenmRNA表达水平高于中位值组（21／30,70％）,但差别无统计学意义（P=0．22）。复发患者avenmRNA的表达水平与无复发者相比无明显升高（P=0．076）。结论：初诊AML患者凋亡抑制基因avenmRNA的表达水平明显升高,可能与AML的发病有关,但尚未发现基因avcilmRNA的表达情况与疾病的疗效和复发之间的关系。