miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF—BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞（VSMC）的作用及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR—NC组、PDGF—BB＋miR-145组及PDGF—BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT—PCR方法检测PCNA、c—Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1／2和P—ERK1／2的表达、JNK和P—JNK的表达以及p38MAPK和P—p38MAPK的表达。结果miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VsMc增殖相关基因PCNA、c—Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF—BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。     

软脉灵药物血清抑制PDGF诱导的平滑肌细胞迁移研究

目的观察软脉灵药物血清对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响。方法采用体外组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;应用灌胃法制备SD大鼠的软脉灵药物血清;应用改良Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验;用FITC-鬼笔环肽标记F—actin,并在激光共聚焦显微镜下观察PDGF诱导的VSMCs骨架形态的变化。结果含软脉灵药物血清可显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移,呈现一定的浓度依赖性,10％药物浓度时抑制作用最明显,抑制率为61．42％（P〈0．01）。PDGF（10ng／mL）刺激后细胞即发生伸展,应力纤维增多,可见伪足形成;加入含软脉灵药物血清后可见到伪足及张力纤维减少,而且随着软脉灵浓度的升高,可见到伪足及张力纤维显著减少。结论软脉灵药物血清能显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移和应力纤维形成。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖迁移及温经活血中药的干预作用

目的：观察温经活血中药对AngⅡ诱导VSMC增殖和迁移的抑制作用及其对相关因子的影响。方法：用组织贴块法培养兔VSMC，以AngⅡ作为诱导因素，复制VSMC增殖迁移模型。用温经活血中药血清进行干预。应用MTT法测定VSMC增殖活性，用免疫细胞化学检测方法测定细胞增殖核抗原（PCNA）及血小板源性生长因子（PDGF-BB）。结果：AngⅡ作用后细胞增殖活性和迁移距离明显增加。而中药组则降低。AngⅡ组PCNA阳性细胞数和吸光度明显高于空白对照组、PDGF—BB呈强阳性表达，中药组则均显著降低。结论：温经活血中药可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖和迁移、抑制PCNA和PDGF—BB的蛋白表达。     

消斑通脉合剂对血管平滑肌细胞增殖和P21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方消斑通脉合荆药物血清对血小板源性生长因子（PDGF—BB）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖与细胞周期分布的影响及相关作用机制。方法：体外培养VSMCs,PDGF—BB刺激VsMCs,采用MTr法检测药物血清对VSMCs增殖的影响;流式细胞仪分析各组细胞周期分布情况;应用Western印迹法检测药物血清对VSMcs中P21waf1/cip1蛋白的表达变化。结果：MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有显著差异（P〈0．05）;流式细胞仪分析结果显示与模型组比较,低剂量与高剂量组明显提高G0／G1期百分率（P〈0．01）、减少s期百分率（P〈0．01）,低剂量与高剂量组比较有显著差异（P〈0．05）;Western印迹法显示与模型组比较,高剂量与低剂量可明显提高VSMCs中P21waf1/cip1蛋白表达（P〈0．01）,低剂量与高剂量比较有统计学差异（P〈0．01）。结论：中药复方消斑通脉合剂药物血清通过促进VSMCs中P21waf1/cip1。蛋白表达,阻滞VsMcs细胞周期进程,起到抑制VsMcs增殖作用。     

丹参不同组分对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]探讨丹参的水溶性有效成分 (总丹酚酸 )和脂溶性有效成分 (总丹参酮)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 ,以寻找药物的作用靶点。[方法]分离大鼠主动脉中层平滑肌 ,贴壁法培养平滑肌细胞 ,无血清培养基培养静止后 ,以5 %胎牛血清(FCS)刺激VSMC增殖 ,分别加入不同浓度的总丹参酮或丹酚酸 ,以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响 ;以Bradford法检测细胞总蛋白 ;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比丹参酮使VSMC增殖活性下降(P<0.05) ,细胞总蛋白合成降低 (P<0.05) ,并呈浓度依赖性,而丹酚酸组与对照组相比无显著性差异 ;此外流式细胞术检测结果显示丹参酮使VSMCG0/G1 期比例升高 ,S期比例下降 ,而丹酚酸组与对照组相比仍无显著性差异。[结论]丹参的脂溶性有效成分总丹参酮具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用 ,而丹酚酸对VSMC不具有以上作用     

丹蒌片及血府逐瘀颗粒抗大鼠动脉粥样硬化作用及机制研究

目的观察丹蒌片及血府逐瘀颗粒对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型大鼠血脂、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的影响,探讨其抗AS的可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、他汀组、丹蒌组、血府组,每组8只。正常组大鼠喂食基础饲料12周,余4组均采用高糖高脂饮食加维生素D3腹腔注射方法复制AS模型。模型组、他汀组、丹蒌组、血府组分别给予生理盐水、阿托伐他汀混悬液(0.18mg/mL)、丹蒌片混悬液(45mg/mL)、血府逐瘀颗粒混悬液(1g/mL)灌胃干预8周。采用ELISA法检测血清TC、TG、LDLC、HDL-C、PDGF水平,HE染色观察胸主动脉病理学改变,Western blot法检测大鼠胸主动脉血管内ERK1/2、pERK1/2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、PDGF,血管ERK1/2及pERK1/2蛋白表达水平升高(P0.05)。HE染色可见血管内膜明显不规则增厚,内皮下泡沫细胞聚集,脂质沉着,中膜VSMC排列紊乱,形成典型AS斑块。与模型组比较,各给药组TC、PDGF水平降低(P0.05,P0.01),他汀组及丹蒌组TG、LDL-C水平降低(P0.01,P0.05),他汀组、丹蒌组及血府组血管ERK1/2及pERK1/2蛋白表达降低(P0.01)。HE染色可见各给药组亦形成典型AS斑块,但内膜增生明显减轻,钙化灶面积明显减小。结论丹蒌片及血府逐瘀颗粒均能减小斑块面积,减轻大鼠AS病变程度,延缓AS病情进展,其作用机制可能是通过降低血清血脂水平,减少PDGF释放,抑制ERK信号通路活化及VSMC增殖。     

通冠胶囊对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的采用血清药理方法观察通冠胶囊对体外培养的兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法给SD大鼠灌胃通冠胶囊水煎剂,每日1次,连续9d,制备含药血清;培养并传代兔的VSMC,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察通冠胶囊含药血清对VSMC增殖的影响。结果通冠胶囊含药血清组测得的MTT值小于对照组,两者之间差异有显著性。结论通冠胶囊可以明显抑制VSMC增殖。     

川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖的分子机制研究

目的:观察川芎嗪注射液对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中增殖相关基因表达变化的影响,为探讨川芎嗪活血化瘀作用的分子机制提供实验依据。方法:采用贴块法培养VSMC,建立PDGF诱导的细胞增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的影响。采用Western blotting方法分别检测各组细胞中增殖相关基因AP-1及PCNA的表达变化及川芎嗪对它们的影响。结果:川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,与刺激组相比,川芎嗪可显著抑制增殖相关基因AP-1及PCNA的表达。结论:川芎嗪可能是通过抑制增殖相关基因的表达而发挥抗血管内膜增生的作用。     

雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞c-myc和血小板源性生长因子的mRNA的影响

目的 :观察雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)中原癌基因 (c myc)和血小板源性生长因子 (PDGF)的mRNA表达水平的影响。方法 :分别将所培养的第 5～ 1 0代VSMC同步化培养 2 4h后 ,加入 2 0 %胎牛血清 (FCS)和不同剂量的雷公藤红素 (0 1、0 2和0 3mg/L) ,共同孵育 6h和 1 2h后 ,分别提取VSMC胞浆总RNA ,通过地高辛标记探针 ,采用斑点杂交方法检测c myc和PDGF的mRNA表达。 结果 :经雷公藤红素作用后 ,VSMC的c myc和PDGF的mRNA表达较对照组明显降低 ,c mycmRNA表达水平的降低具有一定的药物剂量依赖性关系。结论 :雷公藤红素可能是通过抑制VSMC的c myc和PDGF的mRNA的表达 ,而引起抑制VSMC的过度增殖。     

丹蒌片对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的疗效研究

目的观察丹蒌片对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（AS）的作用。方法32只雄性ApoE-/-小鼠随机分为空白组、模型组、他汀组、丹蒌组，每组8只。空白组喂饲基础饲料，余各组采用高糖高脂饲料连续喂饲12周制备AS模型。模型组、他汀组及丹蒌组于第5周时分别给予生理盐水、阿托伐他汀混悬液（1.5 mg/mL）、丹蒌片混悬液（0.34 mg/mL）连续灌胃干预8周。干预结束后，ELISA检测血清血脂、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）及IL-6含量；油红“O”染色观察主动脉内膜斑块；HE染色观察小鼠主动脉内膜厚度及斑块面积；透射电镜观察血管平滑肌细胞（VSMC）结构。结果与空白组比较，模型组血清TC、TG、LDL-C、IL-6、ET水平、内膜厚度、面积及内/中膜厚度面积比升高（P<0.05， P<0.01），HDL-C、NO水平下降（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，他汀组和丹蒌组血清TC、TG、LDL-C、ET水平、内膜厚度、面积及内/中膜厚度面积比下降（P<0.05，P<0.01），NO水平升高（P<0.05，P<0.01），丹蒌组血清IL-6水平下降（P<0.01）。模型组油红“O”染色AS区域脂肪呈鲜红色，形成广泛而典型的AS成熟斑块，透射电镜下可见VSMC胞浆内有较多的吞噬大量脂质形成的空泡，细胞间胶原纤维增生明显，呈典型合成型改变，他汀组和丹蒌组AS脂肪区域面积减少，主动脉合成型VSMC减少。结论丹蒌片可显著降低血清血脂、炎症因子水平，保护血管内皮功能，抑制VSMC异常增殖，从而延缓AS的发生发展。     

血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组,血府逐瘀胶囊含药血清组,血塞通胶囊含药血清组,3组分别＋LPA组,卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05）,S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05,P〈0．01）;S期指数升高（P〈0．01,P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用,血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

怀牛膝总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞内bFGF和ICAM-1表达的影响

目的：探讨怀牛膝总皂苷（ABS）对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）内细胞因子的影响,阐明其抗动脉粥样硬化的机制。方法：采用氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导平滑肌细胞增殖的方法,以GAPDH作内标,RT-PCR检测相关细胞因子的表达量,评价ABS对细胞内碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和细胞间黏附分子（ICAM-1）mRNA表达量的影响。结果：OX-LDL浓度为30mg／L促进VSMC增殖最强;ABS（50、100、150mg／L）显著抑制OX-LDL诱导VsMc内bFGF、ICAM-1基因表达,作用呈浓度依赖性。结论：ABS能抑制在OX-LDL作用下VSMC内细胞因子的表达,说明其具有抗动脉粥样硬化的作用。     

肾气丸对2型糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素及C肽的影响

目的:探讨金匮肾气丸对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)及C肽(C-P)的影响。方法:40只SD大鼠采用高脂高糖饲料喂养3周,小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠,随机分为模型组、二甲双胍组、肾气丸高剂量组、肾气丸低剂量组。另设正常组10只,饲以普通饲料。给药6周后处死大鼠,末次给药后禁食12h,检测FBG、FINS及C-P。结果:与正常组比较,模型组FBG、FINS水平明显增高(P0.01);肾气丸能降低模型大鼠空腹FBG、FINS水平(P0.05,P0.01),提高血清C-P含量(P0.05),并存在量效关系。结论:金匮肾气丸治疗糖尿病的机理可能与其具有改善胰岛β细胞的功能有关。     

三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:观察三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞增殖效应的影响,分析该作用与细胞外信号调节激酶ERK信号通路的关系。方法:采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同分组对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果:空白血清+LPA组较空白血清组OD值升高(P<0.05),S期指数升高(P<0.01);三七总皂苷含药血清+LPA组与卡托普利含药血清+LPA组比较OD值降低(P<0.05),S期指数无差异;三七总皂苷含药血清+LPA+PD98059组较空白血清组OD值降低(P<0.05),S期指数无差异。结论:三七总皂苷对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,且作用强于卡托普利,其作用机制可能与抑制LPA对ERK信号通路的激活,从而抑制DNA合成,阻止细胞进入S期有关。     

益肺活血颗粒对血小板衍生生长因子诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及转化生长因子活性的影响

目的 观察益肺活血颗粒(Yifei Huoxue Granule, YFHXG)对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB）刺激大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的抑制作用及对转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β）活性的影响。     

消斑通脉合剂对血管平滑肌细胞P21表达的影响

目的：观察中药复方消斑通脉合剂药物血清对体外培养的VSMCs增殖的作用。方法：体外培养VSMCs,取对数生长期细胞用作实验,MTT法检测不同浓度药物血清对体外培养的VSMCs增殖活力,免疫组织化学方法检测各组药物血清对VSMCs中P21表达的影响。结果：MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有统计学差异（P〈0.05）,免疫组化显示药物血清可明显促进VSMCs中P21表达,高剂量与低剂量比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：中药复方消斑通脉合剂药物血清通过促进VSMCs中P21表达抑制VSMCs增殖。     

导黄补血丸对缺铁性贫血和饮食失调致贫血的实验研究

目的:通过复制缺铁性贫血和饮食失调致贫血的动物模型,观察导黄补血丸治疗贫血的作用,为临床验方的推广以及临床用药提供依据。方法:选取断乳大鼠,给予低铁饲料结合定期少量放血的方法建立缺铁性贫血大鼠模型,检测血中红细胞、血红蛋白,取血清测定血清铁以及血清总铁结合力;采取隔日禁食(不禁水)的方法,复制饮食失调致小鼠贫血的模型,检测血中红细胞、血红蛋白。结果:导黄补血丸能够升高缺铁性贫血小鼠的血红蛋白和血清铁的含量,降低血清总铁结合力,增加血清铁饱和度;导黄补血丸能够升高饮食失调致贫血小鼠的红细胞和血红蛋白含量。结论:导黄补血丸对缺铁性贫血和饮食失调导致的贫血具有较好的治疗作用。     

大黄虫丸拆方对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究大黄[庶虫]虫丸拆方对动脉粥样硬化（AS）模型家兔胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖与凋亡的影响。方法采用免疫性内皮损伤合并高脂饲料喂养的方法建立家兔AS模型,通过SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）在VSMC中的表达,缺口末端标记法（TUNEL）观察VSMC的凋亡情况。结果与模型对照组比较,大黄[庶虫]虫丸拆方各功效组分均可使AS模型家兔胸主动脉VSMC中PCNA阳性细胞显著减少（P〈0．01）,而凋亡阳性细胞数显著增加（P〈0．01）。结论大黄[庶虫]虫丸各功效组分通过抑制VSMC增殖、诱导其凋亡,从而调节VSMC增殖和凋亡之间的平衡,发挥抗AS作用,其中拆方1号是主要组分。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

大黄(庶虫)虫丸对动脉粥样硬化模型家兔血管平滑肌细胞的影响

目的:从血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡、血管壁胶原合成等方面探讨大黄虫丸(熟大黄,土鳖虫,水蛭,黄芩等)抗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法:采用免疫损伤合并高脂食饵的方法复制家兔早期AS模型,检测指标包括血管壁超微结构观察,血管壁羟脯氨酸含量测定;用免疫组化和TUNEL法分别测定血管壁VSMC的增殖和凋亡。结果:大黄虫丸使AS家兔血管壁中膜层厚度变小,VSMC排列趋于正常,减轻线粒体肿胀和粗面内质网扩张,减少细胞器的增多,使VSMC表型转化减轻,成纤维细胞和胶原纤维明显减少。大黄虫丸也能降低血管壁羟脯氨酸含量,降低PCNA染色阳性细胞数,升高TUNEL染色阳性细胞数。结论:大黄虫丸可抑制血管壁胶原的合成,抑制VSMC的增殖并促进其凋亡,进而逆转血管重塑,这可能是其抗AS的机制之一。