针刺对快速老化小鼠海马神经干细胞增殖、分化的影响

目的研究针刺疗法对快速老化小鼠（SAMP8）海马神经干细胞（NSCs）增殖、分化的影响。 方法将24只SAMP8小鼠随机分为模型组与针刺组,12只抗快速老化模型小鼠（SAMR1）作为正常对照组(正常组),针刺组选百会穴进行针刺治疗,每天治疗1次,7 d为1个疗程,共治疗3个疗程。处死前1周开始给予小鼠腹腔注射5-溴-2′-脱氧尿苷（BrdU）,50 mg/kg体重,每日1次。动物处死后取海马组织,用免疫荧光双标方法检测NSCs的增殖、分化。 结果各组小鼠海马区都存在BrdU/nestin阳性细胞表达,与正常组比较,模型组小鼠阳性细胞数减少,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,针刺组小鼠阳性细胞数增多,差异有统计学意义（P<0.05）。各组小鼠海马区都存在NSCs分化的新生神经细胞阳性表达,与模型组比较,针刺组NSCs向成熟神经元及未成熟神经元的分化不明显（P&rt;0.05）。针刺能使SAMP8增多的成熟星形胶质细胞表达下降,减少的未成熟星形胶质细胞表达增多,但针刺组与模型组比较,差异均无统计学意义（P&rt;0.05）。与正常组比较,模型组少突胶质细胞明显增多（P<0.05）;针刺能抑制少突胶质细胞的表达,针刺组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论针刺治疗能促进SAMP8海马NSCs增殖,抑制其向少突胶质细胞分化,但对向神经元、未成熟星形胶质细胞分化的影响不明显。     

快速老化与正常老化小鼠脑内神经干细胞增殖的差异

背景:在老化过程中,脑内环境改变可引起脑内神经干细胞增殖能力改变.脑内神经干细胞与衰老和退行性神经病变疾病密切相关,增殖能力与年龄存在负相关,但以快速老化小鼠为衰老模型的相关研究未见报道.目的:比较快速老化与正常老化小鼠嗅球、海马、皮质神经干细胞增殖的差异.方法:分别取6只快速老化小鼠(SAMP8)和6只正常老化小鼠(SAMR1)的嗅球、海马、皮质组织,在固定、冰冻切片后,运用Ki-67/Nestin免疫荧光双标检测3个脑区的神经干细胞增殖情况.免疫荧光双标在荧光显微镜下通过Leica Qwin v3采图,在40倍物镜和10倍目镜下采图,每一张切片随机选取5 个相邻视野,通过Image-pro-Plus软件完成图像分析.结果与结论:正常老化小鼠和快速老化小鼠均有神经干细胞增殖现象,但二者存在差异,其差异主要表现在海马和嗅球两个脑区(P < 0.05).提示快速老化可能会导致海马、嗅球神经干细胞增殖能力降低.     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景:神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的:观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法:从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论:从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

神经干细胞移植对帕金森病模型小鼠行为的影响

目的 评价神经干细胞移植对帕金森病(PD)模型小鼠行为缺陷的改善作用。方法 采用自发运动、Morris水迷宫和转杆实验对小鼠的行为进行评价。结果 与对照组相比，PD模型小鼠的自发运动次数明显减少，水迷宫寻台潜伏期延长，转杆时问缩短。经单侧和双侧纹状体神经干细胞移植后2周、4周和8周，PD模型小鼠的自发运动次数明显增加，水迷宫寻台时间显著缩短，转杆时间延长。结论 神经干细胞移植能够有效改善PD模型小鼠的行为缺陷。     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞的定向分化

背景：有研究表明脑源性神经营养因子可以维持神经元的存活、影响神经元的迁移,在体外可以促进神经干细胞的存活和分化。目的：探讨脑源性神经营养因子对低血糖幼鼠海马神经干细胞定向分化的作用。方法：取新生1d低血糖模型大鼠脑海马组织进行原代、传代及单细胞克隆培养。培养的细胞一部分进行神经干细胞鉴定,另一部分依据培养液中脑源性神经营养因子质量浓度的不同将单克隆细胞分为0,100,200μg/L组,取第4代细胞进行诱导分化,行神经元特异性烯醇化酶免疫荧光染色,计数阳性细胞比例。结果与结论：单克隆培养后3组细胞均呈巢蛋白阳性,诱导分化后细胞呈行神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性;100,200μg/L组神经干细胞生长较快,且分化为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例较高（P〈0.05）,但两组神经干细胞之间差异无显著性意义（P〉0.05）。提示脑源性神经营养因子促进低血糖幼鼠海马神经干细胞向神经元定向分化。     

移植的神经干细胞在帕金森病模型小鼠脑内的存活与分化

目的 观察移植的神经干细胞在帕金森病(PD)模型小鼠脑内的存活与分化。方法 C57BL／6小鼠皮下注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)造成PD模型。用5-溴尿嘧啶(BrdU)标记的神经干细胞分别移植到模型鼠的一侧或两侧纹状体。用酪氨酸羟化酶免疫荧光评价MPTP对黑质多巴胺能神经元的毒性。用免疫组织化学和激光共聚焦鉴定移植的神经干细胞在体内的存活与分化。结果 MPTP使黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞显著减少；在细胞移植的纹状体内发现有明显散在分布的BrdU阳性细胞，表明移植的神经干细胞已经存活；激光共聚焦显示部分BrdU阳性细胞已分化为酪氨酸羟化酶阳性细胞。结论 移植的神经干细胞能在PD模型小鼠纹状体存活，并可分化出特定的多巴胺能神经元。     

神经干细胞诱导分化的研究进展

1992年 ,Reynolds和Richards最先从成鼠的纹状体和海马中分离出能够不断增殖并具有分化潜能的细胞群落 ,提出了神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)的概念。此后 10年间 ,神经干细胞的研究成为当今生命科学的研究热点之一 ,从神经干细胞的分离、体外培养 ,到移植治疗神经系统疾病 ,都取得了较大发展。1神经干细胞的生物学特性干细胞是具有多潜能性的细胞 ,所谓多潜能性是指具有分化成有限细胞类型和构建组织的能力。神经干细胞的主要特征包括 :①自我更新 ;②可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞 ;③通过不对称分裂产生除自身以外的…     

脑溢安对大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的：应用血清药理学方法研究脑溢安对体外培养促神经干细胞的分化作用，旨在进步阐明脑溢安的脑保护机制。方法：从新生3d大鼠海马中分离神经干细胞，按不同培养方法进行分组，加神经干细胞基础培养液为空白组。于神经干细胞基础培养液中加50mL／L脑溢安血清为实验组。于神经干细胞基础培养液中加50mL／L正常血清为对照组。加入含50mL／L脑溢安血清的培养基中培养。在培养的第2天和第7天，用免疫细胞化学法计数Nestin，NF-200，GFAP，04四类免疫阳性细胞的变化。结果：在培养的第2天，空白组Nestin阳性细胞最多，占数细胞总数的96．1％是实验组和对照组的8～11倍，其次是胶原纤维酸性蛋白细胞(glialfibrillery acidic protein，GFAP)、04细胞，NF-200细胞最少，仅占细胞总数的3．83％；实验组以NF-200阳性细胞最多，占细胞总数的42．83％，分别为空白组11．3倍和对照组的1．2倍，其次是GFAP细胞，但较对照组少。培养的第7天，空白组仍以Nestin阳性细胞为最多，其他三类细胞与第2天比较无明显差异；实验组仍以NF-200为最多，占细胞总数的43．85％，其次是GFAP，04细胞，Nestin细胞最少。培养7d后，实验组细胞的凋亡率(4．85％)与对照组(15．32％)比较差异有显著性意义(x^2=6．04，P&;lt;0．05)。结论：脑溢安具有促进神经干细胞向神经元方向分化及促进神经细胞存活的作用。     

星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响

目的:研究表明,星形胶质细胞产生一系列可溶性因子和膜相关因子,对中枢神经系统的发育和功能的成熟起了重要的作用。将星形胶质细胞和神经干细胞在互不接触的情况下进行共培养,探讨星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响。方法:实验于2005-03/2006-02在广西医科大学实验中心完成。①实验材料:生后0～2d新生SD大鼠由广西医科大学实验动物中心提供。②实验方法:分离培养新生大鼠海马神经干细胞。采用化学法、差速贴壁法和振荡法分离纯化新生大鼠脑组织星形胶质细胞,以胶质纤维酸性蛋白标记星形胶质细胞,应用免疫细胞化学染色法进行细胞纯度鉴定。将星形胶质细胞和神经干细胞在互不接触的情况下进行共培养:共培养组是将培养瓶中的星形胶质细胞用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,加入完全培养液,待细胞均匀长满后,换神经干细胞基础培养液,孵育24h后,将涂有多聚赖氨酸的盖玻片放入6孔板中,将传代1个月的神经干细胞球种到盖玻片上,同时更换神经干细胞基础培养液继续培养。对照组是单纯接种神经干细胞球于置有多聚赖氨酸涂布盖玻片的6孔培养板内。③实验评估:采用免疫细胞化学染色法观察神经干细胞分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白和酪氨酸羟化酶表达。结果:纯化的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记阳性,细胞纯度达95%。星形胶质细胞与神经干细胞共培养时,神经干细胞贴壁分化加快,神经元特异性烯醇化酶阳性细胞及酪氨酸羟化酶阳性细胞明显多于对照组(P<0.05)。结论:星形胶质细胞可诱导神经干细胞向神经元细胞,包括多巴胺神经元细胞分化,提示星形胶质细胞支持神经元发生,可能是星形胶质细胞及其分泌的因子维持并延长了神经元存活,降低了凋亡比率所致。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80％新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0．2％的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。     

基质细胞衍生因子 1 对内源性神经干细胞的趋化迁移作用简

背景：目前研究表明,基质细胞衍生因子1在参与趋化迁移内源性神经干细胞中起着非常重要的作用,但其具体迁移机制尚不明确。目的：观察外源性基质细胞衍生因子1对大鼠内源性神经干细胞的趋化迁移作用及海马区神经干细胞的激活增殖情况。方法：通过向SD大鼠海马区上大脑皮质内注射外源性基质细胞衍生因子1（注射量为5μL,质量浓度为500μg/L）建立动物模型,于3,7,14,21 d后灌注取脑,通过石蜡切片免疫组织化学检测大鼠皮质内注射区及海马区nestin阳性细胞表达情况,并设实验对照组与空白对照组。结果与结论：石蜡切片免疫组织化学显示：实验组注射区周围及海马区nestin表达阳性细胞的数量随时间推移逐渐增多,3,7 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞少量表达,14 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞进一步增多,并向注射区形成明显的迁移趋势,21 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞更多。实验对照组及空白实验组未见上述表现。结果表明外源性基质细胞衍生因子1可能诱导海马区神经干细胞的增殖分化,参与内源性神经干细胞的趋化迁移过程。     

神经细胞黏附分子NB-3在调节胚胎来源神经干细胞分化和迁移中的作用

目的:探讨NB3基因在调节小鼠探讨神经干细胞分化和迁移中的作用。方法:分离培养来源于E14.5dNB3缺失和野生型小鼠海马的神经前体细胞,通过免疫荧光染色方法检测NB3缺失对神经干细胞(NSCs)诱导分化后神经元分化和迁移的影响。结果:①NB3在体外培养的神经干细胞中表达,并和干细胞的标记分子Nestin共定位;②NB3基因缺失后对神经干细胞的体外增殖能力无明显影响,但在用1%胎牛血清诱导分化后,NB3缺失的神经干细胞产生更多的神经元;③与对照组相比,从NB3基因缺失的神经干细胞分化而来的神经元表现为相互聚集而不向神经球外迁移。结论:NB3在神经元的再生和迁移中具有一定的调节作用。     

外源性神经节苷脂对神经干细胞增殖分化的作用

目的：探讨外源性神经节苷脂（GM1）对从大鼠分离培养的神经干细胞（NSCs）增殖及分化的作用。方法：①利用无血清培养技术从胎鼠大脑皮质和海马分离培养原代细胞，加血清诱导其分化。（④在NSCs培养基和DMEM／F12培养基中加入不同浓度的GM1，观察GM1对NSCs增殖和分化的作用。结果：①与不含GM1的NSCs培养基相比，在NSCs培养基中加入低浓度的GM1，NSCs的生长无明显改变，随着GM1浓度的增加，NSCs克隆球体积逐渐减小，细胞逐渐死亡；②在DMEM／F12培养基中单独加GM1而不加血清，NSCs克隆球均未见继续生长，也未见分化，而是迅速的死亡。结论：①在NSCs培养基中，低浓度（12．5μg／m1）GM1对NSCs的增殖无明显影响，但较高浓度的GM1对NSCs的增殖有抑制作用。②DMEM／F12培养基中单独加GM1，而不加血清和其他生长因子，既不能诱导NSCs分化，也不利于NSCs的继续生长。     

Targeted neural differentiation of murine mesenchymal stem cells by a protocol simulating the inflammatory site of neural injury

Damaged neural tissue is regenerated by neural stem cells (NSCs), which represent a rare and difficult‐to‐culture cell population. Therefore, alternative sources of stem cells are being tested to replace a shortage of NSCs. Here we show that mouse adipose tissue‐derived mesenchymal stem cells (MSCs) can be effectively differentiated into cells expressing neuronal cell markers. The differentiation protocol, simulating the inflammatory site of neural injury, involved brain tissue extract, fibroblast growth factor, epidermal growth factor, supernatant from activated splenocytes and electrical stimulation under physiological conditions. MSCs differentiated using this protocol displayed neuronal cell morphology and expressed genes for neuronal cell markers, such as neurofilament light (Nf‐L), medium (Nf‐M) and heavy (Nf‐H) polypeptides, synaptophysin (SYP), neural cell adhesion molecule (NCAM), glutamic acid decarboxylase (GAD), neuron‐specific nuclear protein (NeuN), βIII‐tubulin (Tubb3) and microtubule‐associated protein 2 (Mtap2), which are absent (Nf‐L, Nf‐H, SYP, GAD, NeuN and Mtap2) or only slightly expressed (NCAM, Tubb3 and Nf‐M) in undifferentiated cells. The differentiation was further enhanced when the cells were cultured on nanofibre scaffolds. The neural differentiation of MSCs, which was detected at the level of gene expression, was confirmed by positive immunostaining for Nf‐L protein. The results thus show that the simulation of conditions in an injured neural tissue and inflammatory environment, supplemented with electrical stimulation under physiological conditions and cultivation of cells on a three‐dimensional (3D) nanofibre scaffold, form an effective protocol for the differentiation of MSCs into cells with neuronal markers. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

MicroRNA‐132 directs human periodontal ligament‐derived neural crest stem cell neural differentiation

Neurogenesis is the basis of stem cell tissue engineering and regenerative medicine for central nervous system (CNS) disorders. We have established differentiation protocols to direct human periodontal ligament‐derived stem cells (PDLSCs) into neuronal lineage, and we recently isolated the neural crest subpopulation from PDLSCs, which are pluripotent in nature. Here, we report the neural differentiation potential of these periodontal ligament‐derived neural crest stem cells (NCSCs) as well as its microRNA (miRNA) regulatory mechanism and function in NCSC neural differentiation. NCSCs, treated with basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor‐based differentiation medium for 24 days, expressed neuronal and glial markers (βIII‐tubulin, neurofilament, NeuN, neuron‐specific enolase, GFAP, and S100) and exhibited glutamate‐induced calcium responses. The global miRNA expression profiling identified 60 upregulated and 19 downregulated human miRNAs after neural differentiation, and the gene ontology analysis of the miRNA target genes confirmed the neuronal differentiation‐related biological functions. In addition, overexpression of miR‐132 in NCSCs promoted the expression of neuronal markers and downregulated ZEB2 protein expression. Our results suggested that the pluripotent NCSCs from human periodontal ligament can be directed into neural lineage, which demonstrate its potential in tissue engineering and regenerative medicine for CNS disorders.     

无血清神经球培养下神经干细胞的生长与分化

背景：体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提。目的：建立大鼠神经干细胞的分离、培养、纯化方法,进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法：利用无血清悬浮神经球方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,进行形态学观察,用免疫细胞化学方法检测神经干细胞及其分化细胞的标志物,流式细胞仪检测细胞标志物及其比例。结果与结论：无血清悬浮神经球培养下大鼠神经干细胞生长稳定,操作简单,可大量分离、纯化、扩增神经干细胞,所获细胞具有神经干细胞的一股生物学特性,流式细胞仪检测第3代神经干细胞巢蛋白达91．5％,并具有多向分化潜能,免疫化学染色及流式细胞仪示神经干细胞可分化形成神经元,神经胶质细胞和少突胶质细胞。     

诱导骨髓间充质干细胞成肌分化时GDF-8表达的变化

目的探讨大鼠骨髓间充质千细胞（BMSCs）在体外诱导成肌分化时转化生长因子-8（GDF-8）表达的变化。方法原代培养后扩增的第5代BMSCs以5-氮胞苷（5-Azc）进行成肌诱导分化,用免疫荧光、逆转录定量聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹（Western Blot）检测GDF-8的表达。结果体外诱导BMSCs成肌分化时免疫荧光检测发现,在不同时间点于绝大多数细胞的胞浆内都有明显的GDF-8表达,而没有用5-Azc处理的BMSCs则无表达,RT—PCR和Western Blot的检测也支持免疫组织化学的结果。结论在促使BMSCs向肌细胞分化的同时,细胞内同时也有抑制成肌分化的负性调节因子GDF-8的表达。