实验性大鼠隐睾中eNOS的表达与生精细胞凋亡

①目的 研究内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)的表达与实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的关系.②方法 通过手术建立单侧大鼠隐睾模型,术后第7天采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法及RT-PCR检测隐睾及对侧睾丸eNOS基因表达的变化.③结果 术后第7天隐睾侧重量明显减轻,生精细胞凋亡指数较对侧睾丸明显增加;RT-PCR显示隐睾中eNOS mRNA的表达较对侧睾丸增强;免疫组化显示对侧睾丸生精上皮内未见eNOS表达,隐睾侧睾丸生精上皮中有eNOS表达.④结论 隐睾生精细胞凋亡明显增加,eNOS参与介导生精细胞凋亡.     

热应激对大鼠睾丸iNOS表达的影响及其意义

目的 研究热应激对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响及其意义。方法42d龄SD雄性健康大鼠12只建立单侧隐睾作为热应激处理的模型,术后第7d处死大鼠留取双侧睾丸,采用RT—PCR及免疫组化SABC法分别检测生精细胞iNOSmRNA和蛋白表达的变化,TUNEL法检测生精细胞凋亡。结果热应激处理后生精上皮内可见iNOS强阳性表达,而对侧睾丸生精上皮内无iNOS表达;热应激处理后睾丸iNOSmRNA也较对侧睾丸增强,生精细胞凋亡指数明显高于对侧睾丸,差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论热应激导致生精上皮内iNOS表达增强,生精细胞凋亡增加,iNOS参与介导生精细胞凋亡。     

大鼠气管发生的形态学观察

本实验对胚胎第15天至出生后30天的大鼠气管上皮的发生过程进行了观察。证实胚胎第15天的气管上皮为假复层上皮,细胞表面有少量微绒毛;胚胎第17天,气管上皮出现典型的杯状细胞;胚胎第19天出现纤毛细胞;出生5天以后,上皮细胞增殖、聚集并内陷,形成气管腺。杯状细胞的粘液颗粒主要是中性粘多糖,气管腺的粘液颗粒为酸性粘多糖和中性粘多糖。实验结果表明:在胚胎期和生后早期,粘液纤毛运送系主要由纤毛细胞和杯状细胞等组成,出生5天以后,粘液纤毛运送系统主要由纤毛细胞和气管腺组成。     

实验性隐睾术后大白鼠生精上皮的反应性变化——一,光镜下形态学观察

本文报道人工隐睾术后雄性成年大白鼠生精上皮的组织学变化。术后1—10天,曲细精管界膜呈波纹状收缩、增厚和断裂。支持细胞发生空泡样变。各级生精细胞的增生、分化失调、排列紊乱、游离和逐渐退化,出现双核和多核细胞。术后15—30天,上皮中只剩支持细胞和精原细胞,其它生精细胞逐渐消失。术后40—70天,形态学变化处于相对稳定状态。本文提出了实验性隐睾术后,引起生精上皮的原发性和继发性变化,生精上皮各种细胞对腹温的敏感性和耐受性的差异,初步讨论了多核细胞形成机理及生物学意义。     

低强度电磁场对大鼠生精上皮超微结构的影响

目的观察低强度电磁场对大鼠睾丸生精上皮超微结构的影响。方法20只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组和实验组,实验组暴露于0.1mT电磁场中,12周后处死动物迅速取出睾丸,锋利预冷刀片切开,取1 mm×1 mm×2 mm的组织于戊二醛磷酸缓冲液固定,超薄切片,透射电镜观察睾丸生精上皮超微结构变化。结果与对照组比较,实验组大鼠电镜下生精细胞排列出现紊乱,精原细胞内细胞器变性多见;支持细胞线粒体空泡化,嵴消失,内质网肿胀。结论低强度电磁场可导致大鼠睾丸生精上皮超微结构损伤。     

生后不同发育阶段大鼠睾丸生精小管和间质细胞形态学的变化

目的通过对生后不同年龄SD大鼠睾丸生精小管、间质细胞的组织形态学观察,探讨生后不同发育阶段睾丸生精细胞和间质细胞的发育及变化规律。方法取10天、20天、30天、4月、12月、24月龄雄性大鼠睾丸,常规石蜡包埋、切片、HE染色,镜下观察不同发育阶段生精小管和间质细胞的变化,并进行定量组织学分析。结果⑴生后10天睾丸生精小管细而稀疏,小管中仅见精原细胞和支持细胞,可见单个和成群存在的间质细胞,20天小管中出现初级精母细胞,间质细胞消失,30天龄出现精子细胞,间质细胞再度出现;⑵4月龄生精小管密集、小管外直径和细胞层数均明显增加（P（0.05）并达最大值,上皮内生精活跃,间质内见有大量嗜酸性的间质细胞;⑶12月龄生精细胞层数减少并出现空泡变性,上皮变薄,间质细胞数量减少,体积变小,成纤维细胞增多,界膜增厚;⑷24月龄生精小管明显稀疏,上皮层数降低（P（0.05）,生精细胞和间质细胞均明显减少,内空泡增多,支持细胞也出现空泡变。结论生后10~30天生精小管内尚无精子形成,处于幼年期,除20天龄外,间质内均可见较多的间质细胞;4月龄的青年期生精小管内生精能力和激素分泌能力达高峰,处于生殖旺盛的性成熟阶段;12月龄的中年期睾丸出现衰老性变化,至24月龄老年期生精能力和激素奇泌能力均明显降低.     

小鼠生后睾丸生精细胞的凋亡及P53的表达变化

目的:观察小鼠生后生精细胞的凋亡变化规律以及凋亡相关基因P53的表达变化.方法:用生后0、1、4、7、10、13、2o、30、50天的昆明小鼠,取其睾丸,Bouin液固定后,用TUNEL法检测其生精细胞凋亡率;用免疫组织化学的方法检测凋亡相关基因P53的表达变化.结果:生后4天的小鼠生精细胞开始出现凋亡,10～20天达高峰,以后渐减少.P53的表达从生后7天的小鼠睾丸生精细胞出现阳性,20天时达高峰,以后渐减少.结论:小鼠睾丸在发育过程中有大量细胞凋亡,在其生后10～20天为高峰期.P53的表达较凋亡出现稍晚,但变化规律与凋亡近似.     

p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达

目的 探讨p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达及其在隐睾所致生精障碍过程中的可能作用.方法 本实验将30只健康雄性SD大鼠随机分为隐睾组和假手术组,建立单侧隐睾模型.术后7天脱颈椎处死大鼠,留取各组大鼠双侧睾丸称湿重,常规组织学切片观察各组睾丸生精上皮形态,免疫组化分别检测p53、p63蛋白表达的变化.结果 术后第7天,与正常侧睾丸相比,隐睾侧睾丸重量明显减轻,生精小管内生精细胞排列紊乱,生精细胞与精子的数量减少,可见较多多核巨细胞;免疫组化显示p53在各组睾丸的生精小管的各级生精细胞的胞质中均有表达,尤其是在精母细胞胞质中,但在隐睾中表达最强;p63在假手术组表达较少且较弱,而在隐睾组中表达较多且较强.结论 隐睾能导致睾丸内p53、p63表达增高,从而促进生精细胞凋亡增加.     

X-线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮内Ghrelin表达的研究

目的 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达变化的意义.方法 采用辐射剂量1.0 GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16 h、2 w和4 w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测Ghrelin的表达及变化.结果 正常小鼠睾丸Ghrelin表达主要集中在睾丸间质的间质细胞,生精上皮呈阴性反应,照射后Ghrelin间质细胞为阴性,而生精上皮内出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,支持细胞未见阳性反应.但随照射时间延长,Ghrelin表达逐渐减少.结论 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达的变化,表明Ghrelin及其受体GHS-R系统在小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程中具有一定的调节作用.     

加温灭活卡介苗(BCG)对动物睾丸抑精作用的影响

本文采用健康成年雄性家兔,在其双侧睾丸内注入加温灭活BCG后,分别取材观察,发现第七天起睾丸的生精作用停止,间质组织中有大量免疫活性细胞浸润。第80天时,睾丸结构渐趋恢复,接着在另侧保留睾丸内再次注入灭活BCG时,睾丸重新出现上述生精障碍。表明BCG经加温灭活后,仍具有抑精效应,并可重复使用。     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

小鼠生后睾丸发育的形态学与组织化学研究

对小鼠生后的发育进行了研究。形态学研究证明其发育可分为３个阶段：第１阶段为静止期（生后第１周），曲细精管为单层细胞构成的实心团。第２阶段为增殖、分化期（生后第２～４周），曲细精管上皮由单层变为复层，管壁由精原细胞、精母细胞、精子细胞及少量精子构成，附睾内出现少量精子。第３阶段为性成熟期（生后第５周之后），此期曲细精管内和附睾内都含有大量精子。组织化学研究发现第１周碱性磷酸酶（ＡＬＰ）与氨基肽酶（ＡＰ），定位于曲细精管上皮细胞呈中等阳性；第２周上皮细胞内阳性减弱；第３周后上皮细胞内为阴性，而小管周围出现一层强阳性反应结构。通过本研究证明精子形成与性成熟是两个概念，并发现ＡＬＰ及ＡＰ与睾丸的发育有密切关系。     

84001对睾丸、附睾超微结构的影响——扫描电镜及透射电镜观察(84001抗精作用研究之三)

应用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)相对观察的方法,对给予84001浸膏25天后小鼠的睾丸、附睾进行了超微结构的分析。结果发现部分曲细精管受损,其上皮排列紊乱、层次减少,精子细胞发生退变,变态期精子细胞顶体形成异常,胞质结构异形等;精母细胞偶有受累但较轻微;精原细胞、支持细胞、间质细胞及附睾上皮在形态上无明显改变。本文对以上超微结构变化的性质及其意义进行了讨论。     

苦瓜浸膏局部应用对小鼠生育力的影响

采用苦瓜浸膏对昆明系雄性成年小白鼠进行阴囊涂擦,结果发现:部分睾丸曲细精管上皮排列紊乱,层次减少。精于细胞内出现较大的空泡,线粒体肿胀,变态期精子顶体膜增厚、皱缩。精子数量减少,活力下降及畸变率增高。说明苦瓜浸膏局部应用,可阻抗精子的阶段发育,达到男性抗生育力目的。     

Damage of the mouse testis by tritiated water and 137Cs-gamma-rays

Tritiated water at 23.2, 46.3 or 92.5 MBq/animal and 137Cs-gamma-rays at 9.5 Gy (equivalent 370 MBq) or lower doses were administered to 6-week old male C3H/HeNCrj and C57BL/6NCrj mice, as well as F1 Crj: B6C3F1 (C3H x C57BL) progeny. Each set of six to ten animals were autopsied 30 days after the first irradiation. Testis weights were decreased dose dependently, relative values being highest in the C3H and lowest in the C57BL case, with B6C3F1 intermediate. Vacuolization in seminiferous tubules appeared in the 23.2 MBq group and increased with the dose. Focal pyknosis and karyomegaly were found at 46.3 MBq, while primary and secondary spermatocytes and spermatids disappeared with 92.5 MBq. Only a few spermatogonia and Sertoli cells remained after exposure to 9.5 Gy 137Cs-gamma-rays. Sizes of seminiferous tubules were decreased dose dependently, with no strain differences. When male B6C3F1 mice were irradiated with Cs-gamma-rays at 0.119 (equivalent 4.63 MBq tritiated water) or 2.38 Gy (equivalent 92.5 MBq tritiated water), body weights and size of the seminiferous tubules were decreased at both doses, and the larger dose also caused reduction of testis weight and abnormal sperm. However, all changes except for the alteration in weights had disappeared 1 month after the final irradiation. It is considered that the size of seminiferous tubules may be a good parameter for radiation damage in the testis.     

经输精管向附睾内注射甲酸棉酚的抗生育研究

对72只Wistar大鼠经输精管向附睾内注射甲酸棉酚,观察附睾中精子数量、形态、移动距离和附睾、睾丸的组织学改变。结果:注射12h后精子移动距离缩短,24h后精子计数下降,组织学观察见附睾管呈无精状态,睾丸曲细精管各级生精细胞出现变性等损伤性改变,精母细胞脱落入曲细精管管腔,注射甲酸棉酚后2～40d内交配的雌鼠全部不孕。     

大鼠精索内注射长效普鲁卡因后对睾丸和附睾影响的实验研究

在120只雄性成年大鼠精索内注入长效普鲁卡因,10天以后显示睾丸内曲精小管有明显变化,精子发生受到严重干扰,主要表现为大多数初级精母细胞和精子细胞发生变性、脱落;但曲精小管内的精原细胞和支持细胞保持不变,间质组织中的间质细胞和小血管结构正常。附睾无明显变化。注药90天以后,受损坏的曲精小管可恢复正常。本文对上述实验结果和可能性机理作了进一步分析和讨论。     

正常小鼠睾丸的酶组织化学及氯化镍对其影响

用6O只LACA纯系成年雄性小鼠的睾丸,研究一组酶的代谢特点和分布规律及不同剂量氯化镍对其各种酶活性的影响。结果表明I型黄递酶主要见于间质细胞和晚期精子细胞;琥珀酸脱氢酶和细胞色素氧化酶见于晚期精子细胞;非特异性酯酶见于间质细胞;而5’-核(艹廿)酸酶主要见于围腔小室细胞。一次性腹腔注射不同剂量的氯化镍对睾丸酶活性未见显著影响。     

内皮祖细胞对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)移植对睾丸扭转复位后生精功能的影响.方法 获取大鼠骨髓源性EPC,采用携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-eGFP)转染EPC.将大鼠分3组,每组各6只.假手术组:左侧睾丸未扭转;缺血再灌注损伤(IRI)组:睾丸扭转复位后经股静脉注射1 ml生理盐水;EPC组:睾丸扭转复位后注射1 ml EPC悬液(EPC数为1.0×106个).另外对3只睾丸扭转复位后大鼠进行Ad-eGFP转染后的EPC移植.术后5 d,观察移植EPC的归巢特征,并检测各组睾丸组织病理变化以及凋亡细胞/生精小管情况.结果 重复感染倍数(MOI)=50时,Ad-eGFP对EPC的转染效率>73.7%.Ad-eGFP EPC移植后5 d,可在左侧睾丸组织中发现绿色荧光细胞.假手术组生精细胞结构正常,凋亡细胞/生精小管为0.09±0.02.IRI组生精细胞稀少,凋亡细胞/生精小管为2.82 ±0.81.EPC组生精上皮较IRI组显著增厚,EPC组凋亡细胞/生精小管为0.32±0.09,低于IRI组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EPC移植可改善睾丸扭转导致的生精功能障碍,对生精细胞产生保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of transplanted endothelial progenitor cells (EPCs) on the spermatogenic functions in testicular detorsion. Methods Bone-marrow-derived EPCs were obtained from rats and transfected by enhanced green fluorescent protein adenovirus (Ad-eGFP). The rats were divided into 3 groups (n=6 each). In the sham group, left testis was not twisted. In the ischemia reperfusion injury (IRI) group, 1 ml saline was injected into the femoral vein of each rat after testicular detorsion. In the EPCs group, 1 ml EPCs suspension (1.0×106 EPCs) was injected into each rat after testicular detorsion. The Ad-eGFP transfected EPCs were injected into the 3 additional rats of testicular torsion-detorsion. At Day 5 post-transplantation, the characteristics of transplanted EPCs homing were detected. And the pathological changes and apoptotic cells/seminiferous tubules in left testis were examined. ResultsWhen the value of multiplication of infection (MOI) was at 50, the transfection rate of EPCs by Ad-eGFP exceeded 73.7%. At Day 5 post-treatment, the cells exhibiting green fluorescence were detected in left testis. The germ cells in rats of the sham group were normal. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.09±0.02. The germ cells in rats of the IRI group were much fewer. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 2.82±0.81. As compared with the IRI group, seminiferous epithelium was thicker in the EPCs group. And the ratio of apoptotic cells to seminiferous tubules was 0.32±0.09 in the EPCs group. It was much smaller than that in the IRI group. There was significant difference (P<0.01). Conclusion The transplantation of EPCs is effective for treating the spermatogenic dysfunctions caused by testicular torsion so as to greatly enhance the spermatogenic functions.