端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

反义T-STAR基因转染降低肺腺癌A549细胞端粒酶活性

目的通过反义技术抑制肺腺癌A549细胞T-STAR (testes-signal transduction and activator of RNA)基因内源性表达,观察对细胞端粒酶活性的影响.方法用阳性脂质体法将T-STAR反义基因转染入A549细胞,用RT-PCR及Western blot方法检测转染细胞内源性T-STAR基因mRNA和蛋白表达水平,并用PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性改变.结果反义基因可在mRNA及蛋白水平有效抑制肺腺癌A549 T-STAR基因的表达,同时明显降低细胞端粒酶活性.结论肺腺癌A549细胞T-STAR基因表达的抑制可能下调端粒酶活性.     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

反义hTERT可促进肺癌细胞A549凋亡

河 北医科大学第三医院呼吸内科主任田凤军和加强医疗科王智勇采用反义人端粒酶逆转录酶(bTERT),探讨了对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增生的抑制作用,以寻找以端粒酶为靶点的基因治疗方法。通过将端粒酶hTERT的cDNA反向插入逆转录病毒载体中,转染包装细胞后获得反义     

MMP-7反义寡核苷酸抑制肺腺癌A549细胞体外增殖活性的实验研究

目的 观察基质溶解素(matrilysin,MMP-7)反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞体外增殖活性的影响. 方法采用硫代磷酸修饰的MMP-7反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN),通过脂质体导入肺腺癌A549细胞后免疫组化法检测A549细胞MMP-7表达,MTT法检测A549细胞增殖,FCM检测A549细胞周期.结果 相差显微镜下观察A549细胞转染ASODN后细胞体积变小,数目减少.MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制A549细胞的增殖,抑制作用在48 h最强.免疫组化SABC法检测提示转染ASODN后A549细胞MMP-7蛋白表达水平明显降低.FCM检测显示MMP-7 ASODN可以抑制A549由G0/G1期进入S期.结论 MMP-7 ASODN可以特异性地抑制肺腺癌A549细胞株MMP-7蛋白的表达,调控细胞周期,抑制细胞增殖.     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的：研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论：hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

PBCA纳米粒介导反义寡核苷酸转染对肺腺癌细胞hTERT的影响

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NPs,NPs)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)载体转染肺腺癌A549细胞,观察其对该细胞hTERT mRNA表达的影响。方法以NPs携带ASODN转染A549细胞后,用流式细胞仪检测细胞周期;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞hTERT mRNA表达的改变。结果转染后,与空白对照组和正义寡核苷酸(SODN)组相比,ASODN组G0/G1期细胞增加,S期细胞明显减少(P<0.01),hTERT mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论hTERT ASODN能有效改变A549细胞的细胞周期,下调hTERTmRNA表达,对肺腺癌细胞生长有抑制作用。     

肉桂酸对A549细胞分化及端粒酶活性的影响

目的：探讨肉桂酸对人肺腺癌A549细胞诱导分化及对端粒酶活性的影响。方法：应用1mmol／L，3mmol／L肉桂酸(CINN)分别处理A549细胞，并设空白对照，观察体外细胞增殖情况，细胞分裂指数，流式细胞仪测定细胞周期，以TRAP-银染技术的非放射性方法检测端粒酶活性。结果：CINN作用后的A549细胞，细胞增殖明显受到抑制；细胞分裂指数减少；细胞周期出现向G1／G0期移行的特征性动力学改变；相应的端粒酶活性下降，甚至活性丧失。结论：肉桂酸能诱导A549细胞的分化和降低端粒酶活性。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To research whether the antisense oligodeoxynucleotide (ASODN) of RNA component of human telomerase (hTR) can increase the susceptibility of K562 cells to cisplatin. METHODS: K562 cells were treated with phosphorothoate ASODN complementary to the template region of hTR in vivo. The changing of telomerase activity was assayed by TRAP-PCR-ELISA and apoptosis by DNA gel electrophoresis, Annexin V, flow cytometry. RESULTS: There was a marked decrease in telomerase activity in ASODN treated cells as compared with that in control and sense oligodeoxynucleotide (SODN)-treated cells; but no difference between the latter two groups. Agarose gel electrophoresis of genomic DNA from K562 cells treated with ASODN and cisplatin combination for 72 h showed typical DNA ladder; neither did DNA ladder from K562 cells treated with SODN plus cisplatin nor cisplatin alone. Apoptosis rates of K562 cells treated with ASODN for 24 h and then with cisplatin for 72 h were significantly increased. There were statistically significant difference in the percentage of apoptotic cells between hTR ASODN plus cisplatin and SODN plus cisplatin or cisplatin alone group. CONCLUSION: ASODN complementary to the template region of hTR can significantly suppress the telomerase activity and enhance cisplatin-induced apoptosis of K562 cells in vivo.     

端粒酶hTERT基因反义核酸对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响

目的 探讨hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测膀胱癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)作用于T24细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低膀胱癌细胞T24端粒酶活性.     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;Annexin V PI双染后流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果经ASODN作用后,K562细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用K562细胞24 h,再加入顺铂作用72 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带,而正义寡核苷酸(SODN)与顺铂联合作用组及单用顺铂组均未见到明显的DNA梯形条带。ASODN作用K562细胞24 h,再加入5 μmol/L 顺铂作用48、72 h的凋亡细胞百分率(18.3%和31.6%)分别与SODN联合顺铂作用组(9.6%和10.5%)、单用顺铂组(7.1%和9.4%)比较,差异有显著性(P<0.01)。结论以hTR模板区为靶点,ASODN能抑制端粒酶活性并促进顺铂诱导K562细胞的凋亡。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。